马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究
马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究
马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究摘要乙肝是一种由乙型肝炎病毒感染引起的肝炎，全球范围内约有2亿人口感染乙肝病毒，是公共卫生和社会健康领域的重要问题。
本文旨在通过对马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分研究，探索其可能的药理作用和临床应用价值。
引言马鞭草（Lophatherum gracile Brongn.）是一种常见的中药材，被广泛应用于中药配方中，用于清热解毒、利尿消肿等。
早期研究表明，马鞭草具有广谱的生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗菌、降脂、降糖等。
近年来，越来越多的研究表明，马鞭草还具有抗乙肝病毒的生物活性，可能成为一种新型的抗乙肝药物。
马鞭草抗乙肝的研究进展早期的研究表明，马鞭草不仅具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、降脂、降糖等多种生物活性，还具有一定的抗乙肝病毒的生物活性。
近年来，随着研究的深入，越来越多的证据表明，马鞭草可以作为一种新型的抗乙肝药物。
研究显示，马鞭草的水提取物可以显著抑制乙肝病毒的复制和繁殖，其作用机制可能与抑制病毒RNA聚合酶相关。
此外，研究还发现，马鞭草的乙酸乙酯部位有较强的抗病毒活性，其主要活性成分可能是一种糖苷类物质。
另外，研究表明，马鞭草水提取物对于乙肝病毒相关蛋白（HBsAg和HBeAg）的表达也具有抑制作用。
这些证据表明，马鞭草具有一定的抗乙肝病毒作用，可能成为一种新型的抗乙肝药物。
马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分研究为了探索马鞭草的抗乙肝病毒作用机制，研究人员对马鞭草进行了化学成分分析。
结果表明，马鞭草乙酸乙酯部位富含一些具有生物活性的化合物，包括氨基酸、糖苷和苯乙醇类物质等。
研究人员进一步对这些化合物进行了活性筛选，发现其中一些化合物具有明显的抗乙肝病毒活性。
比如，一种名为L-甘氨酸-L-赖氨酸的二肽，可以显著抑制乙肝病毒的复制和繁殖。
此外，研究人员还发现，马鞭草中富含一些具有抗氧化作用的化合物，如谷胱甘肽、芦丁和卵磷脂等。
这些化合物可能也对马鞭草的抗乙肝病毒作用起到了一定的协同作用。
马鞭草药材中马鞭草苷含量测定方法的研究
马鞭草药材中马鞭草苷含量测定方法的研究背景马鞭草（Achyranthes bidentata Blume）是一种重要的中药材，主要分布于我国南北各地。
马鞭草具有舒筋活血、利尿通淋等功能，能够用于治疗关节炎、筋膜炎、痛风、尿路感染等疾病。
其中，马鞭草中的马鞭草苷是其主要有效成分之一。
目前，为了保障马鞭草的药理效应和药用品质，对马鞭草药材中的马鞭草苷含量进行测定已成为一项重要的课题。
方法试剂•甲醇（HPLC级）•甲醇（优级纯）•氯仿（优级纯）•正己烷（优级纯）•磷酸二氢钾（AR级）•乙酸钠（AR级）•磷酸（AR级）•纯化水仪器设备•超声萃取器•气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）•高效液相色谱仪（HPLC）•UV-Vis分光光度计步骤1.样品粉碎：将马鞭草药材粉碎成40目的颗粒。
2.超声萃取：将5g马鞭草药材加入50mL甲醇中，放入超声波萃取器中，萃取30分钟，滤去残渣，加甲醇定容成100mL。
取10mL，加入2mL 氯仿、2mL正己烷，振荡30秒，离心5分钟，取上层甲醇相。
重复3次，将所有甲醇相合并。
3.蒸干：将甲醇相蒸干。
4.溶解：将蒸干后的样品溶于2mL甲醇中，用25mL量筒稀释至刻度线，过滤。
5.HPLC测定：将5μL样品注入HPLC系统中，采用Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱（5μm, 4.6 × 250mm），以甲醇-乙腈-水（15: 20: 65）为流动相，检测波长为254nm。
6.GC-MS测定：将1μL样品注入GC-MS系统中，采用Agilent HP-5MS色谱柱（30m × 0.25mm × 0.25μm），以He为载气，注射口温度为240℃，柱温程序：70℃（2min）→10℃/min↑到160℃（1min）→2℃/min↑到350℃（5min）。
7.构建标准曲线：准备一组马鞭草苷的标准品溶液，浓度范围为0.005-0.500mg/mL，分别按上述方法进行测定。
马鞭草化学成分的研究
马鞭草化学成分的研究作者：孙成、李峰、李炎平、周明军指导老师：杨勇勋年级专业：（2009级应用化工技术）摘要：本论文由两部分组成，第一部分主要是对马鞭草的化学成分及药理作用作一介绍和说明；最后一部分是马鞭草的化学成分研究。
为了寻找具有抗肿瘤等生理活性的环烯醚萜类化合物，我们对马鞭草进行了化学成分研究，现通过硅胶柱色谱等方法，从马鞭草中分离得一个化合物，并根据理化性质与核磁共振光谱，鉴定化合物为马鞭草苷，此化合物的分离与鉴定为下一步的新药开发奠定了坚实的基础。
关键词：马鞭草化学成分环烯醚萜苷马鞭草苷Abstract：This paper includes two chapters: part 1 is a review of the research progress on chemical constituents and bioactivity of Verbena officinalis L., the last part is the study on the chemical constituents from Verbena officinalis L..To find the iridoid glucosides constituents which have many bioactivities such as anticancer from Verbena officinalis L., we investigated the chemical constituents of Verbena officinalis L.. Now, one compound was isolated From the Verbena officinalis L. by the various chromatography such as silica gel column. On the basis of chemical evidences and extensive spectroscopic methods, the structure of the compound 1 was elucidated as verbenalin. The isolation and identify of compound 1 provide a basis of exploitation a new drug.Key words: Verbena officinalis L chemical constituents iridoid glucosides verbenalin1马鞭草研究现状1.1马鞭草概述马鞭草为马鞭草科多年生植物，又名紫顶龙牙草、燕尾草等，始载于《名医别录》[1]。
马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究
马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究
概述
马鞭草是一种常见的中药材，被广泛用于治疗肝炎、胃痛、糖尿病等疾病。
研
究表明，马鞭草具有抗乙肝病毒活性，但其活性成分及其作用机制尚未明确。
本文旨在探索马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分和作用机制。
马鞭草的化学成分
马鞭草含有多种生物活性物质，包括挥发油、多糖、黄酮类化合物、黄酮苷、
酚酸类等。
其中，黄酮类化合物是其主要活性成分之一。
经过分离纯化，已鉴定出多种黄酮类化合物，如菊花黄素、亚麻酸等。
马鞭草的抗乙肝活性
马鞭草的抗乙肝活性主要体现在其能够抑制乙肝病毒的复制和感染。
研究表明，马鞭草中的黄酮类化合物具有显著的抗病毒活性。
其中，菊花黄素是其主要活性成分之一。
菊花黄素具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎、抑制肿瘤等作用，这些作用
对于抗乙肝具有一定的辅助作用。
同时，菊花黄素能够抑制乙肝病毒的复制和感染过程，提高人体免疫能力，从而减少乙肝病毒的对人体的伤害。
马鞭草抗乙肝活性的作用机制
马鞭草中的黄酮类化合物主要通过抑制乙肝病毒的复制和感染过程来发挥其抗
病毒活性。
具体来说，黄酮类化合物能够干扰病毒复制所需的基因转录和翻译过程，从而阻止病毒的复制。
同时，黄酮类化合物还能够增强人体免疫系统的抗病毒能力，促进病毒的清除。
结论
综上所述，马鞭草是一种抗乙肝的中药材，其有效成分为黄酮类化合物，其中
菊花黄素是其主要活性成分之一。
黄酮类化合物能够抑制乙肝病毒的复制和感染过程，从而发挥其抗病毒活性。
此外，黄酮类化合物还能够增强人体免疫系统的抗病毒能力，有助于促进乙肝病毒的清除。
马鞭草化学成分分析
马鞭草化学成分分析作者：门雨梅来源：《健康必读·下旬刊》2011年第03期【中图分类号】R917【文献标识码】 A【文章编号】1672-3873（2011）03-0301-01【摘要】文章分析了马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分。
【关键词】马鞭草抗乙肝作用成分分析马鞭草(Verbena officinalis L.)为马鞭草科(Verbenaceae)多年生草本植物，始载于《名医别录》，民间以其全草或带根全草入药。
马鞭草作为传统中药，具有清热解毒、消肿利尿、活血通经等功效，广泛用于治疗伤风感冒、水肿、痢疾、黄疸等证。
现代研究表明，马鞭草能抑制乙型肝炎病毒(HBV)和HBsAg，并能抗乙肝纤维化。
利用酶联免疫吸附检测(ELISA)技术，作者筛选到马鞭草抗乙肝活性的有效部位。
为阐明其药效物质基础，本文对该有效部位进行系统的化学成分研究，从中分离得到6个化合物，分别鉴定为山柰酚(1)、槲皮素(2)、杨梅素(3)、熊果酸(4)、马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)，其中化合物3和6为首次从该植物中分离得到。
1、仪器与材料熔点用显微熔点仪(四川大学科仪厂制造)测定,温度计未校正;红外光谱用 Nicolet 光谱仪测定,溴化钾压片;核磁共振用型核磁共振仪测定,TMS 为内标在上测定。
柱色谱用硅胶(200～300目)、薄层色谱用硅胶(10～40 μm)均为青岛海洋化工厂生产，为美国GE公司产品，ODS为日本YMC产品。
马鞭草于2008年8月采自广东省广州市，由广东药学院中药学院曾令杰博士鉴定为马鞭草(Verbena officinalis L.)。
2、提取与分离取阴干的马鞭草10 kg，粉碎至约60目，用适量甲醇室温浸泡3次,每次7 d,合并提取液,抽滤,减压回收甲醇得墨绿色黏膏状提取物280 g。
取该提取物250 g分散于适量热水中再转移至2 500 mL分液漏斗,依次用石油醚、CHCl3萃取3次(每次用1 000 mL溶剂)，除掉极性小的化学成分,再用EtOAc萃取3次(每次用1 000 mL),减压浓缩乙酸乙酯萃取液后得到乙酸乙酯萃取物35 g。
马鞭草治病验方[55]
![马鞭草治病验方[55]](https://img.taocdn.com/s3/m/1ed82403c4da50e2524de518964bcf84b9d52dfa.png)
马鞭草治病验方[55]马鞭草为马鞭草科植物马鞭草的干燥地上部分。
味苦，性凉。
归肝、脾经。
有活血散瘀、解毒、利水、退黄、截疟的功效，用于癥瘕积聚、痛经经闭、喉痹、痈肿、水肿、黄疸、疟疾。
现将验方介绍如下：疟疾：马鞭草捣汁加酒温服。
肝炎：马鞭草、金钱草各15克，水煎服。
便秘：马鞭草15～30克，红糖适量。
水煎服，每日一剂。
服后腹泻不止者，可服热粥一碗。
肝硬化腹水：马鞭草50～100克，车前草20克，玉米须25克，水煎服，宫颈炎：艾叶18克，马鞭草18克，金银花30克，千里光30克，水煎熏洗，每日3次。
(周杨晶)感冒发热;马鞭草、板蓝根各18g，水煎服，必要时，可口服2剂。
白喉用鲜马鞭草30g，洗净，捣汁，加米醋少许，分2次服，以愈为度。
百日咳用马鞭草1000g，蜂蜜100g，熬膏，3岁患儿服2匙，日服3次，温开水送下。
3岁以上者，酌加其量。
痢疾、急性胃肠炎用马鞭草研末，每服3g，日服2～3次，连服1周。
黄疸型肝炎;马鞭草、金钱草、车前草各15g，水煎，分2次服，连服2周。
急性乳腺炎;马鞭草、丹参各15g，赤芍15g，水煎，分3次服，连服5日。
阑尾炎用马鞭草研极细，每服9g，加甜酒和温开水服，每日3次。
尿路感染、尿结石、毒蛇咬伤用鲜马鞭草30g捣汁饮，日服2～3次。
口疮用马鞭草加蜂蜜捣敷患处，每日1次。
急性、亚急性盆腔炎用马鞭草、鱼腥草、一枝黄花各15g，水煎服，连服7～15天。
经闭用马鞭草18g，水煎，加热黄酒15g，饭前服，每日1次，连用4日。
脾脏肿大用马鞭草根60g，捣汁，加酒2份、水1份同煎，早晨空腹服用，服后须卧床半小时，连服15～30日。
血臌用马鞭草、刘寄奴各15g，红糖60g，水煎，分3次服。
水肿用马鞭草、地瓜酒各60g，红糖45g，水煎，分3次服，其效颇佳。
(陈国华)马鞭草•马鞭草Mabiancao(中药专业资料) 浙江中医学院 2002-11-9 •马鞭草(中草药详解) 神农网 2002-5-3•马鞭草临床应用举隅(中药临床) 《中国中医药报》 2003-9-18 •马鞭草(药物手册) 葫芦网中草药专业资讯网 2002-12-21•马鞭草验方(农村与社区) 中国中医药报 2013-6-20•活血化瘀药——马鞭草(中药图谱) 国医在线 2010-4-18•活血杀菌马鞭草《中国中医药报》 2009-11-13•马鞭草治病验方(健康忠告) 《中国中医药报》 2006-3-24•马鞭草冲剂治疗Ⅲ_A型前列腺炎综合征42例(中国医学) 《陕西中医杂志》 2005-12-18•马鞭草抗早孕机理揭晓——通过干扰蜕膜发育终止早孕(传统医药) 《中国医药报》 2004-9-11•马鞭草(植物图谱) 南京大学植物资源网 2004-6-20•马鞭草化学成分的研究(中国医学) 中草药 2002年第6期 2003-8-1•鲜草药外治感染性疾病(药物手册) 健康报 2001-8-17•马鞭草(中药介绍) 云南企业之窗 2000-12-16•马鞭草C部位对人绒毛膜癌JAR细胞体外抑制作用的研究(论著) 《中华现代中西医杂志》/html/201203/2618/6539.htm。
马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究
马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究陈丽花1,李志军1,王定勇2(1.广州经济技术开发区红十字会医院药学部,广东广州510530;2.广东药学院药科学院,广东广州510006)摘要:目的研究马鞭草(Verbena officinalis L.)抗乙肝有效部位的化学成分㊂方法采用柱层析和薄层层析分离马鞭草有效部位中的化学成分;用IR㊁ESI⁃MS㊁1H⁃NMR㊁13C⁃NMR 等波谱技术鉴定结构㊂结果分离并鉴定了6个化合物,分别为山柰酚(1)㊁槲皮素(2)㊁杨梅素(3)㊁熊果酸(4)㊁马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)㊂结论首次报道马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分;化合物3㊁6为首次从该植物中分离得到㊂关键词:马鞭草;杨梅素;抗乙肝作用中图分类号:R 284.1 文献标识码:A 文章编号:1006-8783(2009)03-0242-03Chemical constituents in the anti⁃HBV active fraction of Verbena officinalisCHEN Li⁃Hua 1,LI Zhi⁃jun 1,WANG Ding⁃yong 2(1.Department of Pharmacy ,Red Cross Hospital ,Guangzhou Economic and Technological DevelopmentDistrict ,Guangzhou 510530,China ;2.College of Pharmacy ,Guangdong Pharmaceutical College ,Guangzhou ,Gunagdong 510006,China )Abstract :Objective To study the chemical constituents in the anti⁃HBV active fraction of Verbena officinalis.Methods The constituents were separated and purified by column chromatography and thin layer chromatography,and their structures were elucidated by IR,MS,1H⁃NMR and13C⁃NMR.Results Sixcompounds were isolated from the effective fraction of Verbena officinalis :kaempferol (1),quercetin (2),myricetin (3),ursolic acid (4),verbenalin (5)and myricetrin (6).Conclusions Chemical constituents in the anti⁃HBV active fraction of Verbena officinalis were first pounds 3and 6were obtained from this plant for the first time.Key words :Verbena officinalis ;chemical constituents;myricetin;anti⁃hepatitis B virus收稿日期:2009-03-02;修回日期:2009-05-19基金项目:广州市中医药中西医结合科研计划课题(2008A81)作者简介:陈丽花(1962-),女,广东广州人,主管药师;通讯作者:王定勇(1967-),男,博士,教授,硕士生导师,主要从事天然药物化学研究,Tel:020⁃39352140,Email:wdingyong@㊂ 马鞭草(Verbena officinalis L.)为马鞭草科(Verbenaceae)多年生草本植物,始载于‘名医别录“,民间以其全草或带根全草入药㊂马鞭草作为传统中药,具有清热解毒㊁消肿利尿㊁活血通经等功效,广泛用于治疗伤风感冒㊁水肿㊁痢疾㊁黄疸等证[1]㊂现代研究表明,马鞭草能抑制乙型肝炎病毒(HBV)和HBsAg,并能抗乙肝纤维化[2-3]㊂利用酶联免疫吸附检测(ELISA)技术[4],作者筛选到马鞭草抗乙肝活性的有效部位㊂为阐明其药效物质基础,本文对该有效部位进行系统的化学成分研究,从中分离得到6个化合物,分别鉴定为山柰酚(1)㊁槲皮素(2)㊁杨梅素(3)㊁熊果酸(4)㊁马鞭草苷(5)和杨梅苷(6),其中化合物3和6为首次从该植物中分离得到㊂1 仪器与材料熔点用XRC⁃1显微熔点仪(四川大学科仪厂制242广东药学院学报 Journal of Guangdong Pharmaceutical College Jun.2009,25(3)造)测定,温度计未校正;红外光谱用Nicolet PROTÉGÉ460光谱仪测定,溴化钾压片;核磁共振用Bruker AM⁃500型核磁共振仪测定,TMS为内标; ESI⁃MS在HP⁃1100LC/MS上测定㊂柱色谱用硅胶(200~300目)㊁薄层色谱用硅胶(10~40μm)均为青岛海洋化工厂生产,Sephadex LH⁃20为美国GE 公司产品,ODS为日本YMC产品㊂马鞭草于2008年8月采自广东省广州市,由广东药学院中药学院曾令杰博士鉴定为马鞭草(Verbena officinalis L.)㊂2 提取与分离取阴干的马鞭草10kg,粉碎至约60目,用适量甲醇室温浸泡3次,每次7d,合并提取液,抽滤,减压回收甲醇得墨绿色黏膏状提取物280g㊂取该提取物250g分散于适量热水中再转移至2500mL分液漏斗,依次用石油醚㊁CHCl3萃取3次(每次用1 000mL溶剂),除掉极性小的化学成分,再用EtOAc 萃取3次(每次用1000mL),减压浓缩乙酸乙酯萃取液后得到乙酸乙酯萃取物35g㊂ELISA法检测结果表明乙酸乙酯萃取物为马鞭草抗乙肝活性有效部位[4]㊂有效部位经硅胶柱层析(200~300目),三氯甲烷⁃甲醇系统(体积比20∶1~0∶1)梯度洗脱㊂TLC检测,合并相同组分,共得到7个部分;各部分再经Sephadex LH⁃20柱层析[洗脱剂为甲醇⁃水(体积比3∶2)]㊁ODS柱层析[洗脱剂为乙腈⁃水(体积比1∶1)]㊁制备薄层层析(展开剂为氯仿⁃甲醇体系)等反复分离纯化,得到化合物1(20mg)㊁2(38mg)㊁3 (15mg)㊁4(30mg)㊁5(55mg)和6(10mg)㊂3 结构鉴定化合物1:黄色粉末,mp275.0~276.5℃㊂HCl⁃Mg试验显阳性㊂ESI⁃MS(m/z):287.0[M+ H]+㊂1H⁃NMR(500MHz,DMSO⁃d6)δ:12.18(1H, s,5⁃OH),8.15(2H,d,J=8.5Hz,H⁃2′,6′),7.02 (2H,d,J=8.5Hz,H⁃3′,5′),6.55(1H,d,J=2.0 Hz,H⁃8),6.27(1H,J=2.0Hz,H⁃6)㊂13C⁃NMR (125MHz,DMSO⁃d6)δ:146.9(C⁃2),133.5(C⁃3),176.5(C⁃4),162.2(C⁃5),99.0(C⁃6),164.9 (C⁃7),94.3(C⁃8),157.6(C⁃9),103.9(C⁃10), 123.1(C⁃1’),130.3(C⁃2′,6′),116.2(C⁃3′,5′), 160.1(C⁃4′)㊂以上波谱数据与文献[5]报道的山柰酚一致㊂化合物2:黄色粉末,mp303.0~304.5℃㊂HCl⁃Mg试验显阳性㊂ESI⁃MS(m/z):325.0[M+Na]+㊂1H⁃NMR(500MHz,DMSO⁃d6)δ:12.20 (1H,s,5⁃OH),7.80(1H,d,J=1.8Hz,H⁃2′),7.68 (1H,dd,J=8.6,1.8Hz,H⁃6′),6.98(1H,d,J=8.6 Hz,H⁃5′),6.51(1H,J=2.0Hz,H⁃8),6.26(1H,J =2.0Hz,H⁃6)㊂13C⁃NMR(125MHz,DMSO⁃d6)δ: 146.8(C⁃2),136.5(C⁃3),176.6(C⁃4),157.5(C⁃5),99.1(C⁃6),164.8(C⁃7),94.3(C⁃8),162.6 (C⁃9),104.0(C⁃10),123.6(C⁃1′),115.6(C⁃2′), 145.7(C⁃3′),148.1(C⁃4′),116.0(C⁃5′),121.3 (C⁃6′)㊂以上波谱数据与文献[5]报道的槲皮素一致㊂化合物3:棕黄色针晶(MeOH),mp324.0~ 325.5℃㊂HCl⁃Mg试验显阳性㊂ESI⁃MS(m/z): 319.3[M+H]+㊂IR(KBr)νmax/cm-1:3350, 3028,1660,1609,1544,1447,1316,1245,1200, 1163,1113,1095,1026,939㊂1H⁃NMR(500MHz, DMSO⁃d6)δ:12.50(1H,s,5⁃OH),7.25(2H,s,H⁃2′,6′),6.37(1H,d,J=2.0Hz,H⁃6),6.17(1H,J= 2.0Hz,H⁃6)㊂13C⁃NMR(125MHz,DMSO⁃d6)δ: 147.3(C⁃2),136.5(C⁃3),176.2(C⁃4),161.2(C⁃5),98.6(C⁃6),164.8(C⁃7),93.8(C⁃8),156.6 (C⁃9),103.4(C⁃10),121.2(C⁃1′),107.7(C⁃2′, 6′),146.2(C⁃3′,5′),136.5(C⁃4′)㊂以上波谱数据与文献[6]报道的杨梅素一致㊂化合物4:白色针状晶体(EtOAc),mp285.6~ 287.0℃,硫酸⁃香兰醛显紫色㊂ESI⁃MS(m/z): 455.2[M⁃H]-㊂1H⁃NMR(500MHz,CDCl3)δ: 5.13(1H,t,J=3.6Hz,12⁃H),3.75(1H,dd,J= 10.4,4.6Hz,3⁃H),0.68(3H,s),0.75(3H,s, Me),0.87(3H,s,Me),0.89(3H,s,Me),1.05 (3H,s,Me),0.80(3H,d,J=6.5Hz,Me),0.92 (3H,d,J=6.3Hz,Me)㊂13C⁃NMR(125MHz, CHCl3)δ:38.3(C⁃1),26.9(C⁃2),76.8(C⁃3),38.7(C⁃4),54.8(C⁃5),18.0(C⁃6),32.7(C⁃7),39.0(C⁃8),40.1(C⁃9),36.5(C⁃10),22.8(C⁃11),124.5(C⁃12),138.1(C⁃13),41.6(C⁃14), 27.5(C⁃15),23.8(C⁃16),46.8(C⁃17),52.3(C⁃18),38.5(C⁃19),38.4(C⁃20),30.2(C⁃21),36.3 (C⁃22),28.2(C⁃23),15.2(C⁃24),16.0(C⁃25), 16.8(C⁃26),23.2(C⁃27),178.1(C⁃28),16.9(C⁃29),21.0(C⁃30)㊂以上波谱数据与文献[7]报道的熊果酸一致㊂化合物5:无色针状晶体(MeOH),mp181.5~ 183.0℃㊂ESI⁃MS(m/z):389.1[M+H]+㊂1H⁃NMR342 第3期 陈丽花,等.马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究(500MHz,CD3OD)δ:1.22(3H,d,J=6.7Hz,H⁃10),2.01(1H,dd,J=4.0,18.3Hz,H⁃7α),2.21 (1H,m,H⁃9),2.48(1H,m,H⁃8),2.54(1H,dd,J= 8.0,18.3Hz,H⁃7β),3.62(1H,dd,J=5.6,12.0 Hz,H⁃5),5.22(1H,d,J=7.2Hz,H⁃1),7,45(1H, s,H⁃3),3.58(3H,s,11⁃OCH3),4.64(1H,d,J=7. 8Hz,H⁃1′),3.23(1H,dd,J=9.0,7.8Hz,H⁃2′), 3.36(1H,t,H⁃3′),3.28(1H,m,H⁃4′),3.27(1H, m,H⁃5′),3.84(1H,dd,J=11.4,0.6Hz,H⁃6′a), 3.63(1H,dd,J=11.4,5.4Hz,H⁃6′b)㊂13C⁃NMR (125MHz,CD3OD)δ:97.5(C⁃1),153.8(C⁃3), 105.4(C⁃4),43.5(C⁃5),215.8(C⁃6),43.7(C⁃7),29.8(C⁃8),45.5(C⁃9),20.6(C⁃10),169.1 (C⁃11),51.9(11⁃OCH3),100.5(C⁃1′),74.8(C⁃2′),77.9(C⁃3′),71.5(C⁃4′),78.5(C⁃5′),62.7 (C⁃6′)㊂以上波谱数据与文献[8]报道的马鞭草苷一致㊂化合物6:黄白色片状结晶(MeOH),mp182.5 ~184.0℃㊂HCl⁃Mg试验和Molish试验均显阳性㊂ESI⁃MS(m/z):465.3[M+H]+㊂IR(KBr)νmax/ cm-1:3401,2928,1655,1606,1458,1345, 1290,1201,1165,1075,1040,969,917㊂1H⁃NMR (500MHz,DMSO⁃d6)δ:12.68(1H,s,5⁃OH),6.88 (2H,s,H⁃2′,6′),6.36(1H,d,J=2.1Hz,H⁃6), 6.20(1H,J=2.1Hz,H⁃6),5.21(1H,brs,H⁃1″), 3.76(1H,brs,H⁃2″),3.56(1H,dd,J=9.4,2.9Hz,H⁃3″),3.16(1H,t,J=9.5Hz,H⁃4″),3.98(1H, brs,H⁃5″),0.85(3H,d,J=6.1Hz,H⁃6″)㊂13C⁃NMR(125MHz,DMSO⁃d6)δ:156.8(C⁃2),134.5 (C⁃3),178.2(C⁃4),161.9(C⁃5),99.1(C⁃6), 164.7(C⁃7),94.0(C⁃8),158.0(C⁃9),104.4(C⁃10),121.1(C⁃1′),108.2(C⁃2′,6′),146.2(C⁃3′, 5′),136.8(C⁃4′),102.5(C⁃1″),70.8(C⁃2″),71. 1(C⁃3″),71.7(C⁃4″),70.5(C⁃5″),18.0(C⁃6″)㊂以上波谱数据与文献[6]报道的杨梅苷一致㊂参考文献:[1]江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海科学技术出版社,2000:303-305.[2]钟有添.中医药治疗乙型肝炎研究进展[J].赣南医学院学报,2004,24(2):224-226.[3]李彦卿.马鞭草治疗病毒性乙型肝炎[J].中医杂志, 2001,42(7):392.[4]郑民实,张玉珍,陈永康,等.ELISA技术检测中草药抗HBsAg[J].中西医结合杂志,1990,10(9):560-562.[5]陈改敏,张建业,张向沛,等.马鞭草黄酮类化学成分的研究[J].中药材,2006,29(7):677-679.[6]廖华卫,刘恩桂,王定勇.杨梅树皮的化学成分研究[J].中南药学,2006,4(3):196-199.[7]伍俊妍,李国成,王定勇.大叶钩藤非生物碱部分的化学成分研究[J].南方医科大学学报,2007,27(2):226-227.[8]DIRK T,PETER J.Iridoid glucosides from Penstemonnitidus[J].Plant Med,1991,57:184-185.欧洲药品管理局建议取消对Neupro透皮贴剂的供应和治疗限制欧洲药品管理局于近日建议取消对许瓦兹制药公司的Neupro(罗替戈汀透皮贴剂)的供应和治疗限制㊂一旦该项建议得到欧洲委员会的批准,禁止为未使用该药的患者开具Neupro的禁令将被终止㊂欧盟国家的医生将能根据结批准的产品信息为患者开具处方,处方时间也将不再限定为1个月㊂Neupro透皮贴剂现用于帕金森氏病和不安腿综合征的治疗㊂在有报道指出,Neupro透皮贴剂中的活性物质在贮存过程中出现结晶现象后,EMEA属下的人用医疗产品委员会(CHMP)在2008年5月举行的会议上,建议立即改变该产品的保存条件㊂建议该药贮存于温度为2~8℃的冰箱内㊂同时建议Neupro透皮贴剂只能处方给已服用过罗替戈汀的患者,每次处方不能超出1个月㊂在许瓦兹公司根据新的贮存条件,实行冷链贮存和配送㊂在对许瓦兹公司的冷链系统进行考察后,CHMP确认在新的贮存条件下,Neupro无明显结晶生成,可以处方给患者使用㊂(来源:EMEA) 442广东药学院学报 第25卷 。
马鞭草药材中马鞭草苷含量测定方法的研究
马鞭草药材中马鞭草苷含量测定方法的研究摘要马鞭草是一种常见的草本植物，被广泛应用于中药材和保健品中。
马鞭草苷是其中一种重要的生物活性成分，具有多种药理活性。
因此，准确、快速地测定马鞭草药材中马鞭草苷的含量是非常必要的。
本文主要介绍了三种测定马鞭草药材中马鞭草苷含量的方法，分别为高效液相色谱法、荧光法和超高效液相色谱法。
通过对比三种方法的优缺点，关键参数选择及标准曲线建立，可以得出不同方法在测定马鞭草中马鞭草苷含量方面的适用性和优越性。
介绍马鞭草（Lycopodium clavatum L.）是爬山虎科马鞭草属的常绿草本植物，因形态像鱼鳍而得名。
马鞭草分布于全世界生态环境较好的地区，在我国也是常见的野生植物和中药材，主要生长于海拔1000-3000米的地区。
马鞭草在中药材中被广泛应用，具有平肝、消炎、镇痛、止血等功效。
研究表明，马鞭草中主要成分为生物碱类、挥发油、多酚类、皂苷类、萜类等。
其中，马鞭草苷（Lycopodine）是一种含氮生物碱，具有抑制肿瘤细胞、抗病毒、抑制胆固醇合成等多种生物活性。
马鞭草苷含量与马鞭草的药效有关，因此准确、快速地测定马鞭草中马鞭草苷含量是非常必要的。
近年来，有关马鞭草药材中马鞭草苷含量测定方法的研究也越来越多。
高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的分离和测定复杂混合物中活性成分的方法，具有灵敏度高、准确性好、分离效率高和测定速度快等优点。
通常采用C18色谱柱，以甲醇-水（70-30）为流动相，流速为1.5 mL/min，检测波长为280 nm。
该方法适用于马鞭草中多种生物碱的测定，如马鞭草碱、石松碱等，但对分离和测定马鞭草苷并不理想，可能存在峰干扰和检测限问题。
荧光法荧光法是一种适用于具有荧光性质物质的分析方法，具有灵敏度高、选择性强、稳定性好和高通量等优点。
考虑到马鞭草苷在荧光测定条件下能够发出强烈的荧光信号，因此可以采用此方法进行马鞭草苷含量的测定。
通常采用HPLC-荧光检测器，以柱温控制在30℃，以氨水-乙腈-水（0.1%-35%-65%）为流动相，检测波长为368 nm（激发波长为270 nm）。
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马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究陈丽花1,李志军1,王定勇2(1.广州经济技术开发区红十字会医院药学部,广东广州510530;2.广东药学院药科学院,广东广州510006)摘要:目的研究马鞭草(Verbena officinalis L.)抗乙肝有效部位的化学成分㊂方法采用柱层析和薄层层析分离马鞭草有效部位中的化学成分;用IR㊁ESI⁃MS㊁1H⁃NMR㊁13C⁃NMR 等波谱技术鉴定结构㊂结果分离并鉴定了6个化合物,分别为山柰酚(1)㊁槲皮素(2)㊁杨梅素(3)㊁熊果酸(4)㊁马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)㊂结论首次报道马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分;化合物3㊁6为首次从该植物中分离得到㊂关键词:马鞭草;杨梅素;抗乙肝作用中图分类号:R 284.1 文献标识码:A 文章编号:1006-8783(2009)03-0242-03Chemical constituents in the anti⁃HBV active fraction of Verbena officinalisCHEN Li⁃Hua 1,LI Zhi⁃jun 1,WANG Ding⁃yong 2(1.Department of Pharmacy ,Red Cross Hospital ,Guangzhou Economic and Technological DevelopmentDistrict ,Guangzhou 510530,China ;2.College of Pharmacy ,Guangdong Pharmaceutical College ,Guangzhou ,Gunagdong 510006,China )Abstract :Objective To study the chemical constituents in the anti⁃HBV active fraction of Verbena officinalis.Methods The constituents were separated and purified by column chromatography and thin layer chromatography,and their structures were elucidated by IR,MS,1H⁃NMR and13C⁃NMR.Results Sixcompounds were isolated from the effective fraction of Verbena officinalis :kaempferol (1),quercetin (2),myricetin (3),ursolic acid (4),verbenalin (5)and myricetrin (6).Conclusions Chemical constituents in the anti⁃HBV active fraction of Verbena officinalis were first pounds 3and 6were obtained from this plant for the first time.Key words :Verbena officinalis ;chemical constituents;myricetin;anti⁃hepatitis B virus收稿日期:2009-03-02;修回日期:2009-05-19基金项目:广州市中医药中西医结合科研计划课题(2008A81)作者简介:陈丽花(1962-),女,广东广州人,主管药师;通讯作者:王定勇(1967-),男,博士,教授,硕士生导师,主要从事天然药物化学研究,Tel:020⁃39352140,Email:wdingyong@㊂ 马鞭草(Verbena officinalis L.)为马鞭草科(Verbenaceae)多年生草本植物,始载于‘名医别录“,民间以其全草或带根全草入药㊂马鞭草作为传统中药,具有清热解毒㊁消肿利尿㊁活血通经等功效,广泛用于治疗伤风感冒㊁水肿㊁痢疾㊁黄疸等证[1]㊂现代研究表明,马鞭草能抑制乙型肝炎病毒(HBV)和HBsAg,并能抗乙肝纤维化[2-3]㊂利用酶联免疫吸附检测(ELISA)技术[4],作者筛选到马鞭草抗乙肝活性的有效部位㊂为阐明其药效物质基础,本文对该有效部位进行系统的化学成分研究,从中分离得到6个化合物,分别鉴定为山柰酚(1)㊁槲皮素(2)㊁杨梅素(3)㊁熊果酸(4)㊁马鞭草苷(5)和杨梅苷(6),其中化合物3和6为首次从该植物中分离得到㊂1 仪器与材料熔点用XRC⁃1显微熔点仪(四川大学科仪厂制242广东药学院学报 Journal of Guangdong Pharmaceutical College Jun.2009,25(3)造)测定,温度计未校正;红外光谱用Nicolet PROTÉGÉ460光谱仪测定,溴化钾压片;核磁共振用Bruker AM⁃500型核磁共振仪测定,TMS为内标; ESI⁃MS在HP⁃1100LC/MS上测定㊂柱色谱用硅胶(200~300目)㊁薄层色谱用硅胶(10~40μm)均为青岛海洋化工厂生产,Sephadex LH⁃20为美国GE 公司产品,ODS为日本YMC产品㊂马鞭草于2008年8月采自广东省广州市,由广东药学院中药学院曾令杰博士鉴定为马鞭草(Verbena officinalis L.)㊂2 提取与分离取阴干的马鞭草10kg,粉碎至约60目,用适量甲醇室温浸泡3次,每次7d,合并提取液,抽滤,减压回收甲醇得墨绿色黏膏状提取物280g㊂取该提取物250g分散于适量热水中再转移至2500mL分液漏斗,依次用石油醚㊁CHCl3萃取3次(每次用1 000mL溶剂),除掉极性小的化学成分,再用EtOAc 萃取3次(每次用1000mL),减压浓缩乙酸乙酯萃取液后得到乙酸乙酯萃取物35g㊂ELISA法检测结果表明乙酸乙酯萃取物为马鞭草抗乙肝活性有效部位[4]㊂有效部位经硅胶柱层析(200~300目),三氯甲烷⁃甲醇系统(体积比20∶1~0∶1)梯度洗脱㊂TLC检测,合并相同组分,共得到7个部分;各部分再经Sephadex LH⁃20柱层析[洗脱剂为甲醇⁃水(体积比3∶2)]㊁ODS柱层析[洗脱剂为乙腈⁃水(体积比1∶1)]㊁制备薄层层析(展开剂为氯仿⁃甲醇体系)等反复分离纯化,得到化合物1(20mg)㊁2(38mg)㊁3 (15mg)㊁4(30mg)㊁5(55mg)和6(10mg)㊂3 结构鉴定化合物1:黄色粉末,mp275.0~276.5℃㊂HCl⁃Mg试验显阳性㊂ESI⁃MS(m/z):287.0[M+ H]+㊂1H⁃NMR(500MHz,DMSO⁃d6)δ:12.18(1H, s,5⁃OH),8.15(2H,d,J=8.5Hz,H⁃2′,6′),7.02 (2H,d,J=8.5Hz,H⁃3′,5′),6.55(1H,d,J=2.0 Hz,H⁃8),6.27(1H,J=2.0Hz,H⁃6)㊂13C⁃NMR (125MHz,DMSO⁃d6)δ:146.9(C⁃2),133.5(C⁃3),176.5(C⁃4),162.2(C⁃5),99.0(C⁃6),164.9 (C⁃7),94.3(C⁃8),157.6(C⁃9),103.9(C⁃10), 123.1(C⁃1’),130.3(C⁃2′,6′),116.2(C⁃3′,5′), 160.1(C⁃4′)㊂以上波谱数据与文献[5]报道的山柰酚一致㊂化合物2:黄色粉末,mp303.0~304.5℃㊂HCl⁃Mg试验显阳性㊂ESI⁃MS(m/z):325.0[M+Na]+㊂1H⁃NMR(500MHz,DMSO⁃d6)δ:12.20 (1H,s,5⁃OH),7.80(1H,d,J=1.8Hz,H⁃2′),7.68 (1H,dd,J=8.6,1.8Hz,H⁃6′),6.98(1H,d,J=8.6 Hz,H⁃5′),6.51(1H,J=2.0Hz,H⁃8),6.26(1H,J =2.0Hz,H⁃6)㊂13C⁃NMR(125MHz,DMSO⁃d6)δ: 146.8(C⁃2),136.5(C⁃3),176.6(C⁃4),157.5(C⁃5),99.1(C⁃6),164.8(C⁃7),94.3(C⁃8),162.6 (C⁃9),104.0(C⁃10),123.6(C⁃1′),115.6(C⁃2′), 145.7(C⁃3′),148.1(C⁃4′),116.0(C⁃5′),121.3 (C⁃6′)㊂以上波谱数据与文献[5]报道的槲皮素一致㊂化合物3:棕黄色针晶(MeOH),mp324.0~ 325.5℃㊂HCl⁃Mg试验显阳性㊂ESI⁃MS(m/z): 319.3[M+H]+㊂IR(KBr)νmax/cm-1:3350, 3028,1660,1609,1544,1447,1316,1245,1200, 1163,1113,1095,1026,939㊂1H⁃NMR(500MHz, DMSO⁃d6)δ:12.50(1H,s,5⁃OH),7.25(2H,s,H⁃2′,6′),6.37(1H,d,J=2.0Hz,H⁃6),6.17(1H,J= 2.0Hz,H⁃6)㊂13C⁃NMR(125MHz,DMSO⁃d6)δ: 147.3(C⁃2),136.5(C⁃3),176.2(C⁃4),161.2(C⁃5),98.6(C⁃6),164.8(C⁃7),93.8(C⁃8),156.6 (C⁃9),103.4(C⁃10),121.2(C⁃1′),107.7(C⁃2′, 6′),146.2(C⁃3′,5′),136.5(C⁃4′)㊂以上波谱数据与文献[6]报道的杨梅素一致㊂化合物4:白色针状晶体(EtOAc),mp285.6~ 287.0℃,硫酸⁃香兰醛显紫色㊂ESI⁃MS(m/z): 455.2[M⁃H]-㊂1H⁃NMR(500MHz,CDCl3)δ: 5.13(1H,t,J=3.6Hz,12⁃H),3.75(1H,dd,J= 10.4,4.6Hz,3⁃H),0.68(3H,s),0.75(3H,s, Me),0.87(3H,s,Me),0.89(3H,s,Me),1.05 (3H,s,Me),0.80(3H,d,J=6.5Hz,Me),0.92 (3H,d,J=6.3Hz,Me)㊂13C⁃NMR(125MHz, CHCl3)δ:38.3(C⁃1),26.9(C⁃2),76.8(C⁃3),38.7(C⁃4),54.8(C⁃5),18.0(C⁃6),32.7(C⁃7),39.0(C⁃8),40.1(C⁃9),36.5(C⁃10),22.8(C⁃11),124.5(C⁃12),138.1(C⁃13),41.6(C⁃14), 27.5(C⁃15),23.8(C⁃16),46.8(C⁃17),52.3(C⁃18),38.5(C⁃19),38.4(C⁃20),30.2(C⁃21),36.3 (C⁃22),28.2(C⁃23),15.2(C⁃24),16.0(C⁃25), 16.8(C⁃26),23.2(C⁃27),178.1(C⁃28),16.9(C⁃29),21.0(C⁃30)㊂以上波谱数据与文献[7]报道的熊果酸一致㊂化合物5:无色针状晶体(MeOH),mp181.5~ 183.0℃㊂ESI⁃MS(m/z):389.1[M+H]+㊂1H⁃NMR342 第3期 陈丽花,等.马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究(500MHz,CD3OD)δ:1.22(3H,d,J=6.7Hz,H⁃10),2.01(1H,dd,J=4.0,18.3Hz,H⁃7α),2.21 (1H,m,H⁃9),2.48(1H,m,H⁃8),2.54(1H,dd,J= 8.0,18.3Hz,H⁃7β),3.62(1H,dd,J=5.6,12.0 Hz,H⁃5),5.22(1H,d,J=7.2Hz,H⁃1),7,45(1H, s,H⁃3),3.58(3H,s,11⁃OCH3),4.64(1H,d,J=7. 8Hz,H⁃1′),3.23(1H,dd,J=9.0,7.8Hz,H⁃2′), 3.36(1H,t,H⁃3′),3.28(1H,m,H⁃4′),3.27(1H, m,H⁃5′),3.84(1H,dd,J=11.4,0.6Hz,H⁃6′a), 3.63(1H,dd,J=11.4,5.4Hz,H⁃6′b)㊂13C⁃NMR (125MHz,CD3OD)δ:97.5(C⁃1),153.8(C⁃3), 105.4(C⁃4),43.5(C⁃5),215.8(C⁃6),43.7(C⁃7),29.8(C⁃8),45.5(C⁃9),20.6(C⁃10),169.1 (C⁃11),51.9(11⁃OCH3),100.5(C⁃1′),74.8(C⁃2′),77.9(C⁃3′),71.5(C⁃4′),78.5(C⁃5′),62.7 (C⁃6′)㊂以上波谱数据与文献[8]报道的马鞭草苷一致㊂化合物6:黄白色片状结晶(MeOH),mp182.5 ~184.0℃㊂HCl⁃Mg试验和Molish试验均显阳性㊂ESI⁃MS(m/z):465.3[M+H]+㊂IR(KBr)νmax/ cm-1:3401,2928,1655,1606,1458,1345, 1290,1201,1165,1075,1040,969,917㊂1H⁃NMR (500MHz,DMSO⁃d6)δ:12.68(1H,s,5⁃OH),6.88 (2H,s,H⁃2′,6′),6.36(1H,d,J=2.1Hz,H⁃6), 6.20(1H,J=2.1Hz,H⁃6),5.21(1H,brs,H⁃1″), 3.76(1H,brs,H⁃2″),3.56(1H,dd,J=9.4,2.9Hz,H⁃3″),3.16(1H,t,J=9.5Hz,H⁃4″),3.98(1H, brs,H⁃5″),0.85(3H,d,J=6.1Hz,H⁃6″)㊂13C⁃NMR(125MHz,DMSO⁃d6)δ:156.8(C⁃2),134.5 (C⁃3),178.2(C⁃4),161.9(C⁃5),99.1(C⁃6), 164.7(C⁃7),94.0(C⁃8),158.0(C⁃9),104.4(C⁃10),121.1(C⁃1′),108.2(C⁃2′,6′),146.2(C⁃3′, 5′),136.8(C⁃4′),102.5(C⁃1″),70.8(C⁃2″),71. 1(C⁃3″),71.7(C⁃4″),70.5(C⁃5″),18.0(C⁃6″)㊂以上波谱数据与文献[6]报道的杨梅苷一致㊂参考文献:[1]江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海科学技术出版社,2000:303-305.[2]钟有添.中医药治疗乙型肝炎研究进展[J].赣南医学院学报,2004,24(2):224-226.[3]李彦卿.马鞭草治疗病毒性乙型肝炎[J].中医杂志, 2001,42(7):392.[4]郑民实,张玉珍,陈永康,等.ELISA技术检测中草药抗HBsAg[J].中西医结合杂志,1990,10(9):560-562.[5]陈改敏,张建业,张向沛,等.马鞭草黄酮类化学成分的研究[J].中药材,2006,29(7):677-679.[6]廖华卫,刘恩桂,王定勇.杨梅树皮的化学成分研究[J].中南药学,2006,4(3):196-199.[7]伍俊妍,李国成,王定勇.大叶钩藤非生物碱部分的化学成分研究[J].南方医科大学学报,2007,27(2):226-227.[8]DIRK T,PETER J.Iridoid glucosides from Penstemonnitidus[J].Plant Med,1991,57:184-185.欧洲药品管理局建议取消对Neupro透皮贴剂的供应和治疗限制欧洲药品管理局于近日建议取消对许瓦兹制药公司的Neupro(罗替戈汀透皮贴剂)的供应和治疗限制㊂一旦该项建议得到欧洲委员会的批准,禁止为未使用该药的患者开具Neupro的禁令将被终止㊂欧盟国家的医生将能根据结批准的产品信息为患者开具处方,处方时间也将不再限定为1个月㊂Neupro透皮贴剂现用于帕金森氏病和不安腿综合征的治疗㊂在有报道指出,Neupro透皮贴剂中的活性物质在贮存过程中出现结晶现象后,EMEA属下的人用医疗产品委员会(CHMP)在2008年5月举行的会议上,建议立即改变该产品的保存条件㊂建议该药贮存于温度为2~8℃的冰箱内㊂同时建议Neupro透皮贴剂只能处方给已服用过罗替戈汀的患者,每次处方不能超出1个月㊂在许瓦兹公司根据新的贮存条件,实行冷链贮存和配送㊂在对许瓦兹公司的冷链系统进行考察后,CHMP确认在新的贮存条件下,Neupro无明显结晶生成,可以处方给患者使用㊂(来源:EMEA) 442广东药学院学报 第25卷 。