真菌-β-D葡聚糖

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真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测标准操作规程附1

1.目的

规范真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测的操作规程，保证结果准确性。

2.原理

实验条件下，来源于某些真菌细胞壁的(1-3)-β-D葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂的酶促凝集系统，使反应溶液的透光度发生变化。利用(1-3)- β-D葡聚糖标准品建立β-D-葡聚糖生物效应与透光度变化关系的标准曲线，便可定量地测定人血液的(1-3)- β-D葡聚糖含量。3.试剂

真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒，湛江安度斯生物有限公司。

试剂盒包装规格：20人份/盒。

试剂盒组成：

复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。若当次试验有剩余，可将剩余的试剂溶液置-20℃以下冷冻保存，一周内使用。不能反复冻融试剂溶液。

4.检测设备：LKM动态试管检测仪。

5.实验用具：250 μl无热原吸头、20-200 μl移液器、75℃试管恒温仪、旋涡混合器、塑料试管架、无热原真空采血管（肝素抗凝剂）。

6.标本采集及送检要求

6.1标本采集要求

采集过程要求无菌操作，用指定的肝素类抗凝、无菌、无β葡聚糖采血管； 6.1.1常规住院病人早上用药前空腹采血，血透患者透析前采血。 6.1.2标本的送检和保存要求6.2

标本采集后应在半小时内离心，4小时内检测完。若当日不能及时检测的标本应将离心后的血浆转移至无β葡聚糖的容器内-20℃以下冷冻保存，一周内使用。

7.实验操作

7.1在试验开始前，先开启LKM动态试管检测仪，预热，一段时间后发出哔的一声，试管仪温度达到37℃，待用；

取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血1～2 ml，以400 g离心10分钟；7.2

取富含血小板的血浆100 μl，加到样品稀释瓶中，在旋涡混合器上轻轻混匀，然后插入75℃7.3试管恒温仪中加热10分钟；

加热10分钟后，将样品稀释瓶从757.4℃试管恒温仪中取出，使其降至室温即可，即为1:10稀释的样品供试溶液；

7.51支，开启；-G取β试剂试剂中，轻轻摇匀，澄清后得试-G加入支，开启后用移液器取试剂复溶液β取7.6-G10.25 mlβ剂溶液备用；;.

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7.7打开检测软件连接LKM动态试管检测仪，进入临床检查采集数据界面，点击“开始”按钮，使检测软件进入待采集状态；

取本试剂盒所配的专用反应试管，先取已制备好的样品供试溶液100 7.8μl加入反应试管中，然后加入50 μl试剂溶液，每个样品供试品溶液平行两管；

加样完毕，依次拿起试管在旋涡混合器上轻点一下，使试管中的溶液均匀混合，然后把各试7.9管逐一插到LKM动态试管仪中，反应开始，37℃反应75分钟，在反应结束前填写试验相关的信息；

7.10反应完毕，检测软件将自动处理数据，计算出样品供试溶液中的（1-3）-β-G葡聚糖测量值，进入“临床检查数据报告”可查看检验结果，进入“临床检查数据分析”可查看反应曲线。

8.假阳性因素

8.1(1-3)-β-D葡聚糖污染。使用非试剂厂家提供的采血管、反应试管、吸头等容易受(1-3)-β-D 葡聚糖污染；

某些纤维素透析膜污染，如血液透析、腹膜透析等；8.2G试验前注射过香菇多糖、脂肪乳等药物；8.3

手术后使用纱布。8.49.假阴性因素

葡聚糖成分；隐球1-3）9.1-β-D 不敏感菌：某些真菌如接合菌（毛霉菌、根霉菌）细胞壁没有（有临床症状，葡聚糖释放不出，这些真菌试验不能检测。G（菌细胞壁外有荚膜致使1-3）-β-D

试验阴性时，临床医生可考虑这两种真菌感染的可能。但G葡聚糖升高，即使是严重定植。β-D 9.2定植菌：研究显示，定植真菌不引起患者血液的（1-3）-试验阴性可以区分真菌定植或侵袭性感染。因此G结果分析10.

11.反应曲线分析;.

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反应分析曲线表2

异常的真菌阳性曲线正常的真菌阳性曲线

异常的真菌阳性曲线阳正常的真菌形，曲线前走势呈“S”走势呈性曲线曲线后段段突然下降，反“S”形，曲线RT 趋平，曲线终点的RT值较终点的值较高。低。

异常的真菌阳性曲线一般是临床用药产生的干扰，建议排除干扰后重新检测；1、>6000pg/ml）的阳性结果，应做反应曲线分析；对达限时间短（<700s），测量值高（2、

为对患者负责，建议对检测阳性结果都做反应曲线分析。3、注意事项12.使其达到工分钟左右，LKM 动态试管检测仪一定要提前预热3012.1预热采集在进行试验之前，按钮，使软件进入待采”℃后，打开检测软件连接试管仪，在加样反应前点击“开始作温度37集状态。①可检测的样本：血液、尿液、腹水等；②采集要求：采样过程要求无菌操作，取样与保存12.2

小时内不用，可分离4无热原真空采血管采血；③保存：样品采集后应在半小时内离心，若30℃以下冰箱中进行冷冻保存天。出血浆置-20分钟；②取已分离心10 ①采有血液的无热原真空采血管应以400g12.3样本预处理及加样反应分钟，加热完毕后冷却至室温；④插管要一10C③75°加热应为时间离的血浆上清液的中部；次性插到底，插入后不能再触碰；⑤每个样本的平行两管必须插入仪器的连续两孔；⑥可在插入管反应后再填写相关的试验信息，但一定要在试验结束前填写，否则数据将不保存。临床意义13.

）IFD，可用于真菌感染早期筛查；13.1G试验可以早期、快速诊断侵袭性真菌病（适用于念珠菌，曲霉，肺孢子菌，镰刀菌，地霉，组织胞浆菌，毛孢子菌等侵袭性感染检测，13.2

不适用于检测隐球菌和接合菌感染；试验（半乳甘露聚糖检测）联合可区分曲霉菌或其他真菌感染；与GM13.3 2-3次。高危患者建议每周检测13.4

参考文献葡聚糖检测试剂盒说明书。β真菌1.(1-3)--D

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