1,3-β-D-葡聚糖检验简介
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9
镜检和培养方法
敏感性低
血培养：在肿瘤和血液病病人中，50%尸检证 实深部念珠菌感染的病例血培养阴性。
培养结果阳性仅表示存在某种真菌，区 分定植和感染困难
培养时间长 有些标本采集困难
10
非培养方法优点
快速报告结果 敏感性提高 取材简便 多以真菌在致病状态产生的物质为检
评价效果：应用抗真菌药物后，定期检测血浆中葡聚 糖浓度变化，评价选用药物的有效性。
磷脂 双分 子层
b1,3葡聚糖 合成酶
几丁质
麦角固 醇
羊毛固醇C－14去甲基化酶
14位还原和7－8位异构酶
角鲨烯环氧化酶
17
1,3-β-D-葡聚糖结构
葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁
糖蛋白类
中Baidu Nhomakorabea
1,3-β-D-葡聚糖占真菌壁成
葡聚糖
分50%以上，是真菌细胞壁上
几丁质
的特有成分 以1,3-β-糖苷键连接的葡萄
13
侵袭性真菌感染的诊断标准 EORTC/MSG2008修订版
宿主因素 临床特征 病原学
真菌镜检 真菌培养 组织病理学检查 血清学检查方法（间接证据）
CSF隐球菌抗原阳性——确诊 GM-test, G-test——临床诊断
Clinical Infectious Diseases 2008; 46
活化G因子
活化B因子
B因子
凝胶法、比浊法
凝固酶
凝固酶原 显色法
凝固蛋白（凝胶）
凝固蛋白原 AC-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA（酶作用物）
AC-Ile-Glu-Ala-Arg-OH
pNA（对硝基苯胺，黄色）
405nm测光度值
21
分析前注意事项
采用无热原采血管 抽血后2h内送检 血标本4-8℃最多存放48h 检测环境应保持清洁
14
诊断IPFI的三个级别
宿主因素 临床特征 微生物学 组织病理学
确诊
＋
＋
＋
＋
临床诊断 ＋
＋
＋
－
拟诊
＋
＋
－
－
注：＊原发性者可无宿主因素，△肺组织、胸液、血液真菌培养阳性（除外肺孢子菌）
15
（1,3） - β- D-葡聚糖检测
16
真菌细胞膜、壁结构
mannoproteins
β1, b1,36 葡聚糖
延长了真菌感染 的高危期
使此类患者业已增加 的人数进一步扩大
严重真菌感染迅速上升势头
是日益严重的威胁！
5
真菌感染的危险因素：
中心静脉插管 尿道插管 广谱抗生素 气管插管 腹部外科 肠胃外营养 营养不良 住院时间
感染之前定殖
6
侵袭性真菌感染
条件致病性真菌
念珠菌病 曲霉病 隐球菌病 其他
真菌特异的代谢产物
D-阿拉伯糖醇
真菌 DNA 的检测
12
临床诊断、拟诊的微生物学
1 合格痰标本直接镜检发现菌丝，且连续培养 ≥2次分离到同种真菌
2 BALF经直接镜检发现菌丝真菌培养阳性 3 痰液或BALF直接镜检发现新生隐球菌 4 乳胶凝集法检测隐球菌荚膜多糖抗原阳性 5 G实验连续两次阳性 6 GM实验连续两次阳性
在浅部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被释放出来， 故其在体液中的量不增高。
可用于检测念珠菌、毛孢子菌、曲霉菌、镰刀菌、卡 氏肺孢子菌
不可检测隐球菌、接合菌（根霉/毛霉等）
19
“G”试验缘何而来？
20
检测原理（比色法）
β葡聚糖或LAL-RM
旁路反应
内毒素
活化C因子
C因子
G因子
7
诊断方法
影像学 组织病理学/细胞学 传统的方法 培养 血清学 分子生物学方法：
Platelia Aspergillus ELISA Fungitell assay PCR（unavailable）
8
真菌病实验室诊断主要内容
准确、快速检出真菌病原体 真菌镜检 真菌培养 组织病理 生理生化 血清学方法 分子生物学
真菌（1-3）-β-D-葡聚糖 与革兰氏阴性菌脂多糖检测
器械部 广东金羽医药发展有限公司
1
鲎
20世纪六十年代，人们 发现一种古老的海洋生物， 被称为“海洋活化石”的 鲎，它的血液与内毒素接 触后会发生特异性的凝集 反应，人们经过大量研究 和实验从它的血液中提取 出了用来检测内毒素的 “鲎试剂”。
2
23
1,3-β-D-葡聚糖检测临床价值
早期诊断：侵袭性真菌感染增多且复杂，早期症状无 特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死 亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早 期诊断。
指导用药：快速确定真菌感染后，选择好治疗方案,有 针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小，疗 效高，价格适宜的药物提供准确的依据。
麦角固醇
糖残基骨架作为主链 以分支状1-6-β-D葡萄糖残
基作为侧链
B1， 3葡聚糖合成酶
18
1,3-β-D-葡聚糖特性
对热极为稳定，高压121℃并不能使其灭活。在念珠菌 和曲霉菌细胞壁中含量较多，对G实验灵敏。
当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞 噬、消化等处理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可从胞壁中释 放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌 在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。
22
1,3-β-D-葡聚糖相关影响因素
以下情况可出现假阳性：
使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其 他含有葡聚糖的材料；
静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品； 链球菌血症； 操作者处理标本时存在污染； 使用多糖类抗癌药物、放化疗造成的粘膜损伤导致食
物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液等也 可能造成假阳性。
测标志物，结果阳性提示有致病性 定量检测可判断感染严重程度及疗效
评估
11
非培养诊断的方法简介
真菌细胞壁成分
（1-3） - β- D-葡聚糖检测（G试验）
真菌抗原检查
半乳甘露聚糖（galactomannan) 抗原 （GM)
甘露聚糖(mannan)抗原 隐球菌荚膜多糖抗原（乳胶凝集试验）
鲎试剂的发明
1981年1月Jack Levin和 Frederik B.Bang教授在美国马塞 诸塞州Wools Hole海洋 生物实验室成功分离提 取鲎血细胞并研制成能 够检测细菌内毒素的鲎 试剂，开辟了人类认识 和检测内毒素的新纪元！
3
侵袭性真菌感染率上升↑
AIDS
4
医学和相关科学的进步
危重病人的存活期延长
镜检和培养方法
敏感性低
血培养：在肿瘤和血液病病人中，50%尸检证 实深部念珠菌感染的病例血培养阴性。
培养结果阳性仅表示存在某种真菌，区 分定植和感染困难
培养时间长 有些标本采集困难
10
非培养方法优点
快速报告结果 敏感性提高 取材简便 多以真菌在致病状态产生的物质为检
评价效果：应用抗真菌药物后，定期检测血浆中葡聚 糖浓度变化，评价选用药物的有效性。
磷脂 双分 子层
b1,3葡聚糖 合成酶
几丁质
麦角固 醇
羊毛固醇C－14去甲基化酶
14位还原和7－8位异构酶
角鲨烯环氧化酶
17
1,3-β-D-葡聚糖结构
葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁
糖蛋白类
中Baidu Nhomakorabea
1,3-β-D-葡聚糖占真菌壁成
葡聚糖
分50%以上，是真菌细胞壁上
几丁质
的特有成分 以1,3-β-糖苷键连接的葡萄
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侵袭性真菌感染的诊断标准 EORTC/MSG2008修订版
宿主因素 临床特征 病原学
真菌镜检 真菌培养 组织病理学检查 血清学检查方法（间接证据）
CSF隐球菌抗原阳性——确诊 GM-test, G-test——临床诊断
Clinical Infectious Diseases 2008; 46
活化G因子
活化B因子
B因子
凝胶法、比浊法
凝固酶
凝固酶原 显色法
凝固蛋白（凝胶）
凝固蛋白原 AC-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA（酶作用物）
AC-Ile-Glu-Ala-Arg-OH
pNA（对硝基苯胺，黄色）
405nm测光度值
21
分析前注意事项
采用无热原采血管 抽血后2h内送检 血标本4-8℃最多存放48h 检测环境应保持清洁
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诊断IPFI的三个级别
宿主因素 临床特征 微生物学 组织病理学
确诊
＋
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＋
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临床诊断 ＋
＋
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拟诊
＋
＋
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注：＊原发性者可无宿主因素，△肺组织、胸液、血液真菌培养阳性（除外肺孢子菌）
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（1,3） - β- D-葡聚糖检测
16
真菌细胞膜、壁结构
mannoproteins
β1, b1,36 葡聚糖
延长了真菌感染 的高危期
使此类患者业已增加 的人数进一步扩大
严重真菌感染迅速上升势头
是日益严重的威胁！
5
真菌感染的危险因素：
中心静脉插管 尿道插管 广谱抗生素 气管插管 腹部外科 肠胃外营养 营养不良 住院时间
感染之前定殖
6
侵袭性真菌感染
条件致病性真菌
念珠菌病 曲霉病 隐球菌病 其他
真菌特异的代谢产物
D-阿拉伯糖醇
真菌 DNA 的检测
12
临床诊断、拟诊的微生物学
1 合格痰标本直接镜检发现菌丝，且连续培养 ≥2次分离到同种真菌
2 BALF经直接镜检发现菌丝真菌培养阳性 3 痰液或BALF直接镜检发现新生隐球菌 4 乳胶凝集法检测隐球菌荚膜多糖抗原阳性 5 G实验连续两次阳性 6 GM实验连续两次阳性
在浅部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被释放出来， 故其在体液中的量不增高。
可用于检测念珠菌、毛孢子菌、曲霉菌、镰刀菌、卡 氏肺孢子菌
不可检测隐球菌、接合菌（根霉/毛霉等）
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“G”试验缘何而来？
20
检测原理（比色法）
β葡聚糖或LAL-RM
旁路反应
内毒素
活化C因子
C因子
G因子
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诊断方法
影像学 组织病理学/细胞学 传统的方法 培养 血清学 分子生物学方法：
Platelia Aspergillus ELISA Fungitell assay PCR（unavailable）
8
真菌病实验室诊断主要内容
准确、快速检出真菌病原体 真菌镜检 真菌培养 组织病理 生理生化 血清学方法 分子生物学
真菌（1-3）-β-D-葡聚糖 与革兰氏阴性菌脂多糖检测
器械部 广东金羽医药发展有限公司
1
鲎
20世纪六十年代，人们 发现一种古老的海洋生物， 被称为“海洋活化石”的 鲎，它的血液与内毒素接 触后会发生特异性的凝集 反应，人们经过大量研究 和实验从它的血液中提取 出了用来检测内毒素的 “鲎试剂”。
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1,3-β-D-葡聚糖检测临床价值
早期诊断：侵袭性真菌感染增多且复杂，早期症状无 特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死 亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早 期诊断。
指导用药：快速确定真菌感染后，选择好治疗方案,有 针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小，疗 效高，价格适宜的药物提供准确的依据。
麦角固醇
糖残基骨架作为主链 以分支状1-6-β-D葡萄糖残
基作为侧链
B1， 3葡聚糖合成酶
18
1,3-β-D-葡聚糖特性
对热极为稳定，高压121℃并不能使其灭活。在念珠菌 和曲霉菌细胞壁中含量较多，对G实验灵敏。
当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞 噬、消化等处理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可从胞壁中释 放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌 在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。
22
1,3-β-D-葡聚糖相关影响因素
以下情况可出现假阳性：
使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其 他含有葡聚糖的材料；
静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品； 链球菌血症； 操作者处理标本时存在污染； 使用多糖类抗癌药物、放化疗造成的粘膜损伤导致食
物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液等也 可能造成假阳性。
测标志物，结果阳性提示有致病性 定量检测可判断感染严重程度及疗效
评估
11
非培养诊断的方法简介
真菌细胞壁成分
（1-3） - β- D-葡聚糖检测（G试验）
真菌抗原检查
半乳甘露聚糖（galactomannan) 抗原 （GM)
甘露聚糖(mannan)抗原 隐球菌荚膜多糖抗原（乳胶凝集试验）
鲎试剂的发明
1981年1月Jack Levin和 Frederik B.Bang教授在美国马塞 诸塞州Wools Hole海洋 生物实验室成功分离提 取鲎血细胞并研制成能 够检测细菌内毒素的鲎 试剂，开辟了人类认识 和检测内毒素的新纪元！
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侵袭性真菌感染率上升↑
AIDS
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医学和相关科学的进步
危重病人的存活期延长