游离a-氨基酸含量的测定

2、加抗坏血酸可减少氧气对显色影响，但用量要
严格控制。 3、蒸馏水最好是无氨蒸馏水。
4、水合茚三酮不要溅到皮肤上。
思考题
1、简述721型分光光度计的操作步骤。 2、实验过程为何使用无氨蒸馏水。
2、标准曲线制作： 在6支比色管中，按下表顺序与用量加入试剂：
比色管号 V标/mL V缓/mL V茚/mL 1 0 3.00 2.00 2 0.50 2.50 2.00 3 0.10 2.00 2.00 4 1.50 2.00 2.00 5 2.00 2.00 2.00 6 2.50 2.00 2.00
度，从标准曲线上查到对应的氨基氮的含量，按下
公式计算样品中氨基氮的含量：
25.0 K 氨基氮含量 (mg/kg鲜样)＝ 1.00 m
K为查标准曲线所得氨基氮含量（ug） m为样品称取量（g）
数据处理
在坐标纸上画出标准曲线，并查得样品管中
的氨基氮含量K值，计算初鲜蘑菇中的氨基氮含量。
注意事项 1、显色反应应控制在85℃以内，否则溶液易退 色；显色反应后在50分钟内应完成测量任务， 否则溶液会退色。
仪 器 721型分光光度计 25mL比色管 试剂 pH＝5.0的缓冲液 1％水合茚三酮溶液 0.1％抗坏血酸 恒温水浴槽 5mL吸量管 漏斗 研钵
氨基酸标准溶液
鲜蘑菇
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基本操作
1）吸量管的使用 2）比色管的使用 3）721分光光度计计的使用
实验原理
α－氨基酸在pH=5.0的溶液中与茚三酮共热时，
与茚三酮作用生成蓝紫色化合物。该化合物的最大 吸收波长为570nm，根据朗伯比尔定律，采用分光 光度法测定其吸光度，通过标准曲线法进行定量分 析，求出样品中α－氨基酸的浓度。
实验内容
1、样品中游离a－氨基酸的提取： 称1.0g剪碎的新鲜蘑菇放入研钵中，加入2mL
蒸馏水，研磨成匀浆，再转入7号25mL比色管，然
后用6mL蒸馏水分三次洗涤研钵，分别转入7号比色 管，再置于80℃水浴槽加热10分钟后用冷水冷却，
再用蒸馏定容至25mL。摇匀后，过滤，将滤液置于
8号比色管以备用。
游离a－氨基酸含量的测定
• 目的与要求
• 实验的重点和难点
• 仪器和试剂 • 基本操作 • 实验原理 • 实验内容 •数据记录和处理 • 思考题
•注意事项
实验目的与要求
1、了解分光光度法测定游离氨基酸的原理与方法； 2、掌握分光光度计的使用。
重点和难点
分光光度计的使用与标准曲线的制作
仪器和试剂
抗坏血酸（滴）
氨基氮ug/管 吸光度
4
0
4
12.5
4
25.0
4
37.5
4
50.0
4
62.5
摇匀后，将上述6支比色管置于80℃水浴槽加热
15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL，摇匀。
3、样品含量的测定
从8号比色管移取1.00mL溶液于9号25mL比色
管，在分别加入3.00mL缓冲溶液、2.00mL茚三酮 溶液和4滴抗坏血酸，摇匀后置于80℃水浴槽加热 15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL， 摇匀。以1号比色管溶液为参比液测出样品的吸光