刺五加中紫丁香苷的提取分离及抗肿瘤作用研究
大孔吸附树脂富集刺五加中紫丁香苷和刺五加总苷的研究
刺五加购自哈尔滨中药二厂,由哈尔滨商业大 学张德连副教授鉴定为五加科植物刺五加A.senti— cOSUS Harms的干燥根及根茎或茎;紫丁香苷对照品 (批号:111574—200201,供定量测定用),购自中国药 品生物制品检定所;大孔树脂由南开大学提供;除高 效液相用甲醇、乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1 大孔吸附树脂的预处理和再生:取大孔树脂湿 法装柱保持液面高于大孔树脂,95%乙醇浸泡24 h。 用2BV乙醇,以2BV/h的速度通过树脂层,并浸泡 4~5 h。用乙醇以2 BV/h的流速通过树脂层,洗至 流出液加水不呈白色浑浊为止,并用水以同样流速 洗净乙醇。用2BV的5%盐酸溶液,以4~6 BV/h 的流速通过树脂层,并浸泡2~4 h,而后用水以同 样流速洗至出水pH值中性。用2BV的2%氢氧化 钠溶液,以4~6 BV/h的流速通过树脂层,并浸泡 2~4 h,而后用水以同样流速洗至出水pH值中性, 即得。 2.2上柱样品液的制备:取刺五加粗粉适量,加20 倍量蒸馏水,煎煮2次,每次3 h,合并煎液,滤过,滤 液浓缩成原药材1/10的浸膏。临用时现溶解配制成 0.2 g生药/mL的上柱样品溶液。 2.3紫丁香苷HPLC测定方法的建立‘3] 2.3.1色谱条件:美国迪马公司ODS C】8(200 mm×
始显著增大,说明树脂柱此时不能完全吸附药液中
的紫丁香苷和刺五加总苷。为了紫丁香苷和刺五加
总苷保留完全,设定紫丁香苷未吸附率10%、刺五
HPLC法测定黑龙江省不同地区刺五加紫丁香苷的含量
HPLC法测定黑龙江省不同地区刺五加紫丁香苷的含量张艳华;孙立夫;施维林;王奇超【期刊名称】《植物研究》【年(卷),期】2006(26)1【摘要】刺五加(Acanthopanax senticosus(Rupr.EtMaxim.)Harms)是五加科植物,是全球畅销的植物药之一,含有大量生物活性物质,其中所含有的刺五加苷类具有抗疲劳、抗衰老、抑制肿瘤生长等作用,紫丁香苷则是其中的主要活性成分之一。
用HPLC法测定黑龙江省不同地区刺五加中紫丁香苷的含量,确定了刺五加紫丁香苷用超声波提取1.5 h、60%甲醇作提取溶剂、提取温度为55℃的最佳提取条件组合。
HPLC条件则是以检测波长为266 nm、流动相为甲醇/水(V/V)=28/72、流速为1 mL.m in-1、柱温为25℃。
对黑龙江省不同地区类似生境条件下,同龄野生刺五加中紫丁香苷的含量进行比较,在所调查的7个地区中,以五营丰林国家自然保护区的生长在红松原始林下的刺五加紫丁香苷含量最高,五大连池雪洞风景区和牡丹江镜泊湖地区的刺五加紫丁香苷的含量最低。
该研究结果对刺五加的采集和种植生境的选择具有积极的指导意义。
【总页数】4页(P123-126)【关键词】刺五加;紫丁香苷;HPLC【作者】张艳华;孙立夫;施维林;王奇超【作者单位】绍兴文理学院;东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室【正文语种】中文【中图分类】Q949.763.2;TS207.3【相关文献】1.HPLC法测定刺五加软胶囊中紫丁香苷的含量 [J], 叶新;崔玉海;李绍铭;孙玉艳;李男2.RP-HPLC法测定刺五加注射液中紫丁香苷、紫丁香树脂苷的含量 [J], 焦正花;顾秀琰;杨小源;金录胜3.HPLC梯度洗脱法同时测定刺五加注射液中紫丁香苷与刺五加苷E含量 [J], 姬铁强4.HPLC法测定不同产地刺五加中紫丁香苷的含量 [J], 张海峰5.RP-HPLC法测定刺五加滴丸中紫丁香苷含量研究 [J], 史磊;张涛;李峰;郭琪因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
刺五加的研究进展
目录中文摘要与关键词 (1)1. 化学成分 (1)1.1苷类 (1)1.2多糖 (1)1.3 微量元素及氨基酸 (1)1.4其他成分 (1)2. 药理作用 (2)2.1 增强免疫功能 (2)2.2 抗疲劳作用 (2)2.3 抗衰老作用 (2)2.4 抗菌、抗病毒作用 (2)2.5 抗辐射作用 (2)2.6 抗应激作用 (3)2.7 抗肿瘤作用 (3)2.8对血糖的影响 (3)2.9对心脑血管系统的作用 (3)2.10 对慢性胃炎的作用 (3)2. 11改善帕金森病症 (3)参考文献 (4)致谢 (5)[ 摘要] 目的:对刺五加国内外化学成分、药理研究进展进行总结。
方法:根据国内外有关文献, 按照化学成分、药理作用进行分类。
结果:总结发现刺五加含有多种活性成分, 具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳等药理作用。
结论:刺五加具有开发成新型中药保健品及药品的价值。
[ 关键词] 刺五加;活性化学成分;药理作用刺五加的研究进展刺五加,又名五加参、刺拐棒,在我国本草医籍中均有记述《本草纲目》称刺五加为“本经上品”,能“补中益气,坚筋骨,强意志,久服轻身耐老”。
民间有“宁得一把五加,不用金玉满车”的说法。
刺五加主要分布于我国的东北、河北、及山西等地。
以干燥的根及根茎入药,叶、茎、亦可供药用[1]。
该药性温,味辛、微苦,无毒,入脾肾经。
益气健脾,补肾安神。
主治脾肺气虚,体虚乏力,食欲不振,肺肾两虚,久咳虚喘,肾虚腰膝酸痛,心脾不足,失眠多梦[2]。
近年来,国内外学者经过大量的研究和实验,证实刺五加含有多种活性成分,并对其药理作用有了更进一步了解。
本文就其化学成分及药理研究进展作一概述。
1 化学成分1.1 苷类刺五加根和根茎中的主要成分为酚苷类化合物。
实验证明刺五加总苷是其生物活性成分之一。
总苷在根和根茎中的含量分别占干药材重量0.6〜0.9%和0.6%〜1.5%。
已分离出七种刺五加苷(A、B、C、D E、F、G),分别为胡萝卜苷(A),紫丁香酚苷(B) , 7羟基6 , 8 -二甲基香豆精葡萄糖苷(B i),乙基半乳糖苷(C),紫丁香树脂酚二糖苷(D和E)。
刺五加中药效成分的提取研究概况
刺五加中药效成分的提取研究概况许怀勇【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2009(003)004【摘要】刺五加为五加科植物刺五加Acanthopanax sentocosus(Rupr.et Maxim.)Harms的干燥根及根茎或茎,该植物主要分布在中国东北、华北、俄罗斯远东地区及日本北海道、朝鲜等地,我国黑龙江野生资源丰富。
刺五加有促性腺、抗疲劳和防止记忆衰退等活性,医学上被称之为“适应原”样药物。
特别是所含的多种糖类及刺五加苷是理想的干扰素(CFN)促诱生剂、可提高肌体内IFN水平,增强肌体免疫力。
经临床证明:五加参、刺五加片及刺五加注射液等制剂对心血管疾病有独特疗效,深受国内外患者青睐。
临床上正将其广泛用于神经衰弱、糖尿病、动脉硬化、风湿症、风湿性心脏病、心血管病、阳萎、听觉视觉疾病、急性颅脑创伤等病症的治疗,同时也被作为强壮及营养预防药物。
现代医学研究表明刺五加具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗损伤及抗疲劳作用,具有广泛的应用价值。
本文综述了近年来刺五加中药效成分的提取的研究进展,为刺五加深度研究利用提供文献线索。
刺五加根茎含有多种苷类及糖类,如三萜类皂苷、木脂素苷、鹅掌揪苷、异秦皮啶、芝麻脂素和多糖。
其叶和花中含有黄酮,果实含有水溶性多糖,全株均含有挥发油。
刺五加根和根茎中的主要成分为酚苷类化...【总页数】2页(P201-202)【作者】许怀勇【作者单位】625000,四川省雅安食品药品检验所【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.复合酶法辅助提取刺五加叶中金丝桃苷工艺研究* [J], 陈秋连;郑曼玲;蔡恩博;赵岩;赵天琦;屠书梅;杨利民2.罐组式逆流提取刺五加叶中抗氧化活性成分工艺研究 [J], 宗永辉;徐照辉3.超声波辅助提取野生刺五加中总黄酮的工艺研究 [J], 杨芙莲;聂小伟4.刺五加中异嗪皮啶提取工艺优化及其抗肿瘤、抗氧化活性研究 [J], 汪琢;姜守刚;郭晓帆;王虹玲;刘欣5.四种从刺五加中提取紫丁香苷方法的对比研究 [J], 宋永军;赵增任;侯林;李向阳因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
刺五加的药用研究进展
刺五加的药用研究进展作者:王海霖朱艳华来源:《经济技术协作信息》 2017年第35期一、概述刺五加是东北道地药材,刺五加为五加科植物刺五加Acanthopanaxseuticosus(Rupr.eAcanthopanax seuticosus(Rupr.et Maxim.)Harms 的干燥根。
在李时珍的《本草纲目》中,人们认为它具有“补中益气,坚筋骨强意志,久服轻身耐老”的作用,因此,它被归入“本经上品”。
刺五加作为中药材的一种,研发其药理作用,开发新型制剂是极其重要的。
本文就刺五加的成分,药理作用和临床应用展开论述。
二、刺五加的成分1.苷类成分。
刺五加苷(acanthoside)是刺五加重要的生物活性成分之一,可分为糖苷、皂苷及木脂素等类型。
从刺五加根茎中分离出来的8种糖苷(A、B、B1、C、D、E、F 和G),其中起主要作用的有紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶等。
2.多糖。
刺五加多糖(Acanthopanax SenticosusPolysaccharides,ASPS)是从刺五加中提取出来的粗多糖,包括葡萄糖、果糖、阿拉伯糖等,为免疫活性成分之一。
它具有抗辐射、抗炎、抗病毒以及抗肿瘤等多种功效,ASPS的抗肿瘤作用主要是通过增强机体的免疫力和改变膜磷脂生化特性来进行的。
我国从刺五加中提取出刺五加多糖PES,其中两种多糖被命名PES-A和PES-B,分子量分别为7000和7600}PES-A的组成比为葡萄糖:半乳糖:阿拉伯糖=33:2:1,主要为D一葡萄毗喃糖及一些1→2与1→4连接的毗喃型己醛糖。
刺五加果中游离的单糖、寡糖经提取及层析分离鉴定有五种成份,其中葡萄糖Glc含量占样品干重的1.1%,果糖Fuc占5.3%,蔗糖Suc占1。
8%,麦芽糖Mal占1.8%,刺五加果二糖占6.8%,这些单糖均可被酵母菌发酵。
3.其他成分。
近年来,在刺五加叶中还发现苯丙素类化合物(绿原酸)、总糖、氨基酸等的含量也相对较高,且依据出产地的不同,其中香豆素类化合物(异嗪皮啶)、木质素类化合物(刺五加酚)、酚酸类化合物(丁香苷)等的含量也各不相同。
高效液相色谱法测定复方刺五加糖浆中紫丁香苷含量
高效液相色谱法测定复方刺五加糖浆中紫丁香苷含量【摘要】目的建立复方刺五加糖浆的含量测定方法。
方法采用高效液相色谱法测定复方刺五加糖浆中紫丁香苷的含量。
以甲醇-水(8∶2)为流动相,以岛津VP-ODSC18柱(5 μm 4.6×150 mm)为固定相,检测波长为265 nm。
结果紫丁香苷在0.080 5~1.61 μg范围内有良好的线性关系,r=0.999 7。
平均回收率为97.4%(n=6),RSD=0.55%。
结论该法操作简便准确,可作刺五加糖浆中紫丁香苷的质量控制方法。
【Abstract】Objective To study determination method of Syringin in Compound Ciwujia Syrup by HPLC.Methods Using VP-ODS C18column(5 μm 4.6×150mm),the mobile phase was methanol-water(8:2)at the rate 1.0 ml/min,the wavelength of detector was 265 nm.Results The linear rang was 0.080 5~1.61 μg(r=0.999 7).The average recovery was 97.4%(RSD=0.55%,n=6).Conclusion The method is simple,rapid,reliable.It can be used for the quality control of Compound Ciwujia Syrup.【Key words】Compound Ciwujia Syrup;Syringin;HPLC复方刺五加糖浆为医院制剂,其处方中含有刺五加浸膏、五味子、蔗糖及苯甲酸钠。
其中有效成分之一的紫丁香苷(即刺五加苷B)具有抗疲劳的作用,对中枢神经的兴奋与抑制均有影响。
刺五加有效成分的抗肿瘤作用研究与评价
刺五加有效成分的抗肿瘤作用研究与评价杜佳新;顾玉红;张博;朱小红【摘要】目的:研究刺五加有效成分的抗肿瘤作用进展.方法:分别介绍了刺五加中皂甙、多糖以及与黄芩联用的抗肿瘤作用研究,同时,对刺五加制剂治疗疾病的研究和评价做了总结,并对刺五加有效成分的抗肿瘤作用进行了展望.结果:刺五加有效成分具有一定的抗肿瘤作用.结论:临床医师应重视刺五加在抗肿瘤方面的作用,开发利用更多有效成分.【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2010(010)003【总页数】2页(P199-200)【关键词】刺五加;皂苷;多糖;抗肿瘤【作者】杜佳新;顾玉红;张博;朱小红【作者单位】哈尔滨医科大学附属第一医院,哈尔滨市150001;哈尔滨医科大学附属肿瘤医院,哈尔滨市,150081;哈尔滨医科大学附属肿瘤医院,哈尔滨市,150081;哈尔滨医科大学附属肿瘤医院,哈尔滨市,150081【正文语种】中文【中图分类】R979.11 刺五加皂苷抗肿瘤作用研究刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms为名贵中草药刺五加的原植物,属五加科,别名刺拐棒,为五加科多年生落叶灌木。
主产黑龙江小兴安岭,在吉林、辽宁、河北、山西等省也有分布。
树皮为入药的五加皮,民间多用根及根茎。
刺五加具有益气健脾、补肾安神、益精壮骨之功效。
国内外已将刺五加作为与人参具有相似作用的药物应用于临床。
自20世纪50年代以来,国内外的研究人员对刺五加的化学成分、药理作用等进行了大量的研究,验证了刺五加的活性物质及其良好的药理作用,并分离得到了其中大部分有效成分。
抗肿瘤作用作为刺五加研究中一个新的结论已经受到人们关注,为进一步推广其临床应用,现将刺五加的抗肿瘤研究作一综述。
1.1 刺五加皂苷抗肝癌作用研究吕冬霞[1]等对刺五加皂苷ASS与肝癌SMMC-7721细胞株发生、发展的关系及ASS抗肝癌SMMC-7221细胞的机制进行了研究,发现经ASS诱导肝癌SMMC -7721细胞后,肿瘤细胞体积缩小,染色质浓缩,细胞核呈新月形、环状或碎块状,并出现凋亡小体等典型凋亡形态学的改变;DNA电泳出现凋亡所特有的梯状条带。
刺五加成分的多种抗肿瘤作用
的体 内外 生长 而起 到抗 肿瘤 作 用 。 1 . 1 . 2 刺五 加苷 E 迄今为止 , 没 有 直 接 的实 验 证 实 刺 五 加 苷 E具
说 明刺五加 的抗 肿瘤 作用 。
键 词 :刺 五加 ; 刺五加 苷 ; 刺五加 多糖 ; 抗 肿瘤
强 免疫力 和பைடு நூலகம் 肿瘤 等作用 。刺 五加 苷和刺 五加 多糖是 刺 五加抗 肿瘤 的主 要成分 。 以下就 刺五加 的不 同成 分来
一 一
关
中 图分 类 号 :R 2 8 5
文献标 识码 :A
布在我 国的北 部 地 区 。在李 时珍 的 《 本 草 纲 目》中 ,
人 们认 为它 具 有 “ 补 中益 气 , 坚 筋 骨强 意 志 , 久 服 轻
身耐老 ” 的作 用 , 因此 , 它被归入“ 本经 上品” 。现 代 药 理学 证实 , 刺五 加具有 极 高 的药 用价值 。刺五加 引 起 了 国内外 众多 学者 的研 究兴趣 , 研究 人员 从刺 五加
中分离 出了苷类 、 多 糖 和 氨基 酸 等 多 种 活性 成 分 , 其 中刺五 加 的苷类 和多糖 具有 抗肿瘤 作 用 ¨ 。本 文就
刺五加 苷类 和多 糖 的抗 肿瘤 作用 进行 说 明。 1 刺 五加 苷类及 其抗 肿瘤 作用
刺 五加糖 苷 是刺 五加 的主要 活性成 分 之一 , 它具 有 明显 的抑 制 肿 瘤 细胞 生 长 的作 用 。紫 丁香 苷 ( s y ,
通讯作者 :齐
玲( 1 9 7 4一) , 女( 汉族 ) , 副教授 , 博 士
刺五加中紫丁香苷的提取分离及抗肿瘤作用研究
刺五加中紫丁香苷的提取分离及抗肿瘤作用研究
汪琢;姜守刚;祖元刚;付玉杰;张宇
【期刊名称】《时珍国医国药》
【年(卷),期】2010(21)3
【摘要】目的研究紫丁香苷的体内外抗肿瘤作用。
方法应用MTT法观察紫丁香苷对体外培养的4种人癌细胞的抑制作用,构建S180实体瘤小鼠模型研究紫丁香苷的体内抗肿瘤作用。
结果紫丁香苷对体外培养的4种人癌细胞有一定的抑制作用,并且能抑制小鼠S180实体瘤。
结论紫丁香苷具有一定的体内外抗肿瘤活性。
【总页数】2页(P752-753)
【关键词】紫丁香苷;提取分离;抗肿瘤作用;MTT;小鼠
【作者】汪琢;姜守刚;祖元刚;付玉杰;张宇
【作者单位】东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2;R285.5
【相关文献】
1.刺五加注射液中紫丁香苷及刺五加苷E含量限度的研究 [J], 杨阔;赵沛然
2.四种从刺五加中提取紫丁香苷方法的对比研究 [J], 宋永军;赵增任;侯林;李向阳
3.从刺五加中提取紫丁香苷的研究 [J], 项艳薇;史十例;李莉;奚春艳
4.大孔吸附树脂富集刺五加中紫丁香苷和刺五加总苷的研究 [J], 杨书良;杨波;田凤;
孙婷
5.刺五加提取物中紫丁香苷、紫丁香树脂苷的HPLC测定法 [J], 刘莹;惠玉虎因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
刺五加的药理研究及现代应用
刺五加的药理研究及现代应用刺五加为五加科植物刺五加干燥根茎或茎。
是一味古老的补虚类中药,临床上,长期以来用于治疗脾肺气虚证、肾虚腰膝酸痛、心脾两虚、心神失养之失眠、健忘等证。
近年来,国内外对刺五加的药理研究发现,刺五加具有双向免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗疲劳、抗应激、耐缺氧、抗心律失常、双向调节血压和中枢神经系统作用等功能,现将有关方面的研究及应用综述如下。
1抗疲劳国内外研究发现,刺五加苷B、刺五加苷E和绿原酸是抗疲劳作用的活性成分。
小鼠游泳耐力试验表明,刺五加具有明显增强小鼠运动耐力作用,能增强小鼠活动能力,具有抗疲劳作用[1]。
进一步的研究表明:刺五加能够增强乳酸脱氢酶刺五加中对心脑血管产生作用的活性成分是皂苷和黄酮类物质。
刺五加可扩张外周血管、冠状血管,增加冠状动脉回流量,减少心肌氧量,改善血液循环。
关利新等[4]研究观察到刺五加注射液可明显降低脑组织MDA含量,提高SOD活性,抑制神经细胞凋亡,增加bcl_2蛋白表达,减少bax和caspase_3蛋白表达。
刺五加冻干粉针剂可降低心肌梗死面积,其药物强度呈剂量依赖性。
临床上,刺五加用于治疗冠心病、心绞痛、心律失常引起的各种并发症;用于脑动脉粥样硬化症、脑血栓形成、脑栓塞等症。
7双向免疫调节国内外研究表明:刺五加免疫调节的活性成分是苷类和多糖。
进一步研究发现,刺五加苷A、D、E能显著提高疟鼠腹腔巨噬细胞及单核巨噬系统的吞噬活性,从而提高其免疫功能。
刺五加的双向调节作用表现在对免疫机能低下者起促进作用,对免疫机能过高者起抑制作用,其免疫的双向性体现了“扶正祛邪,调节平衡”的本质。
由于刺五加可刺激T_细胞,特别是助手细胞的产生,已被用于多种免疫相关疾病的治疗。
德国科学家发现该药对治疗AIDS的早期阶段有很大帮助,具有良好的开发前景。
8双向调节血压和中枢神经系统研究证实:刺五加苷对外周血管、冠状血管有扩张作用,从而降外周阻力而降压[5]。
刺五加注射液中3个主要活性成分与相应单体在大鼠体内的药动学比较
刺五加注射液中3个主要活性成分与相应单体在大鼠体内的药动学比较标签:紫丁香苷;刺五加苷E;异嗪皮啶;刺五加注射液;药动学比较刺五加注射液是刺五加药材经“水提醇沉”法提取制成的棕红色灭菌溶液,临床上主要用于肝肾不足所致的短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化、脑血栓和脑栓塞。
亦可用于冠心病、心绞痛合并神经衰弱和更年期综合症等。
紫丁香苷、刺五加苷E及异嗪皮啶是从刺五加中分离得到的3种有效活性成分,分别属于苯丙素类、木脂素类和香豆素类化合物,是刺五加注射液发挥药效作用的物质基础[1-3]。
药理实验表明,单体紫丁香苷、刺五加苷E及异嗪皮啶分别具有调节免疫功能[4-5],保护心肌[6],保护神经系统[7-8],抗肿瘤[4]以及抗氧化[9]等作用。
目前国内外对刺五加注射液中紫丁香苷、刺五加苷E的药代动力学研究已有报道[11],而对刺五加注射液中异嗪皮啶在大鼠体内的药代动力学研究未见报道。
本实验通过液相色谱质谱联用技术,考察静脉给予刺五加注射液后紫丁香苷、刺五加苷E及异嗪皮啶在大鼠体内药代动力学行为,与分别静脉给予3个单体药物后的药代动力学行为进行比较,初步探索刺五加注射液中共存成分对3个有效成分药动学行为的影响,为临床合理用药提供依据。
1 材料1.1 仪器Agilent1200高效液相色谱仪购自美国Agilent公司,包括G1322A 在线脱气机、G1312B二元泵、G1367D自动进样器、G1316B DAD检测器等模块;Agilent6410三重四级杆串联质谱仪购自美国Agilent公司,配备电喷雾(ESI)离子源;TGL-16G高速台式离心机,购自常州澳华仪器有限公司;SK-1快速混匀器涡流混悬仪,购自常州澳华仪器有限公司。
1.2 试药及试剂紫丁香苷、刺五加苷E、异嗪皮啶、牡荆苷(内标物质)均购于沈阳泷浦科技有限公司,纯度均>98%,批号分别为LPZ022,LPC031,LPQ069,LPM041。
刺五加注射液购自黑龙江乌苏里江制药有限公司,批号20120112,规格250 mL/支。
不同产地刺五加中紫丁香苷量的测定研究
不同产地刺五加中紫丁香苷量的测定研究作者:徐瑞东来源:《科学与财富》2017年第19期摘要:目的:研究不同产地的刺五加中紫丁香苷的含量测定,为制定刺五加的质量标准及选购刺五加提供依据。
方法:利用高效液相色谱法对不同产地的刺五加中紫丁香苷的含量进行测定。
结论:不同产地的刺五加中紫丁香苷的含量顺序为林口>伊春>五常>牡丹江。
HPLC测定刺五加中紫丁香苷含量的方法简便可靠、快速、重现性好,适用于刺五加中紫丁香苷的测定。
关键词:刺五加;紫丁香苷;高效液相;含量测定1试药、仪器和材料Prominenece UFLC超快速液相色谱仪、C18柱、智能数控、单频BK-C系列超声波清洗机、甲醇(色谱纯)、紫丁香苷对照品批号:(11574-20160703)。
刺五加药材①批号20160801产地牡丹江,②批号20160802产地五常,③批号20160803产地伊春,④批号20160804产地林口,四个产地的刺五加药材皆购于黑龙江省中药材公司。
2实验方法2.1色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(20:80)为流动相;检测波长为265nm。
理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于2000。
2.2原料预处理2.2.1对照品溶液的配制取紫丁香苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含80μg的溶液,即得。
2.2.2供试品溶液的配制分别取林口、牡丹江、伊春、五常四个产地的刺五加药材粗粉各2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入甲醇25mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率33kHz)30min,放冷,再称定重量,分别用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,各自贴上标签,即得。
2.3含量测定分别依次精密吸取紫丁香苷对照品溶液与四个产地的刺五加药材供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品按干燥品计算,含紫丁香苷(C17H24O9)不得少于0.050%。
2.4精密度实验分别精密吸取同一紫丁香苷对照品溶液,连续进样5次,每次10μL,注入液相色谱仪测定其峰面积,计算RSD%。
刺五加胶囊中紫丁香苷含量的HPLC测定
刺五加胶囊中紫丁香苷含量的HPLC测定作者:孙广泽张明珠来源:《科学与财富》2018年第35期摘要:建立反相高效液相色谱法测定刺五加胶囊中紫丁香苷的含量。
方法:采用奥泰公司C18色谱柱(220mm×4.6mm,5μm),乙腈-甲醇-0.1mol/L醋酸溶液(10∶15∶75)为流动相,检测波长为265nm,流速为1.0ml/min,柱温为30℃。
紫丁香苷在1~32μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
紫丁香苷平均回收率分别为99.6%。
结论:本法简便、准确,可用于刺五加胶囊中紫丁香苷的含量测定。
关键词:刺五加胶囊;含量;测定刺五加胶囊具有益气健脾,补肾安神功效。
刺五加胶囊常用于脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、失眠多梦等。
刺五加在中国医药学中做为药物广泛应用已有悠久的历史,具有补肾强腰、益气安神、活血通络的功效。
《药性论》记载:“能破逐恶风血,四肢不遂,贼风伤人,软脚,暨腰,主多年瘀血在皮肌,治痹湿内不足,主虚赢,小儿三岁不能行。
”刺五加具有免疫调节、抗肿瘤、抗辐射、抗应激、耐缺氧、抗衰老等药理作用[1-6]。
本文采用高效液相法对刺五加胶囊中的紫丁香苷的进行了含量测定。
1 仪器与试药1.1 仪器:VWR天平防震垫(北京慧龙环科环境仪器有限公司);JJ-BF 0.001g天平(上海仁沃实业发展有限公司);YLC1620A高效液相色谱仪(河南郑州南北仪器设备有限公司);RU超纯水机(上海同田生物技术有限公司);长城狮鼎SHB-III型台式循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);Milli-Q Direct水纯化系统(上海力晶科学仪器有限公司);DX-208恒温水浴槽(北京长流科学仪器有限公司);天星进样瓶清洗机TX-500型(北京天星科仪科技有限公司)。
1.2 色谱柱:奥泰公司C18色谱柱(220mm×4.6mm,5μm)。
1.3 对照品:紫丁香苷。
1.4 试剂:醋酸钠(北京市津同乐泰化工产品有限公司)、冰醋酸(北京市津同乐泰化工产品有限公司)、甲醇(北京市津同乐泰化工产品有限公司)、三乙胺(昆山诺普森实验室用品科技有限公司)、磷酸二氢铵(北京市津同乐泰化工产品有限公司)、乙腈(北京市津同乐泰化工产品有限公司)。
刺五加研究进展综述
叶红军等[39]证实刺五加叶皂苷可促进体外培养肝癌细胞凋亡,且随着时间的 增加和剂量加大,诱发凋亡程度增高。丰俊东等[40]研究显示,一定剂量的刺五加叶 皂苷能抑制 HepG2 细胞株的 VEGFmRNA 表达及蛋白的表达,提示刺五加可能是通过
2.2 抗衰老活性
刺五加不仅可以提高单胺类介质水平,改善神经系统功能,而且可以温和地促 进小鼠脑内蛋白质、DNA 和 RNA 的生物合成,明显提高衰老神经细胞的 MTT 活性, 降低 LDH 的活性,有效地延缓神经元细胞的衰老[22]。 2.3对免疫功能的影响 2.3.1对细胞吞噬功能的影响 刺五加及其多糖能促使正常小鼠及荷瘤小鼠巨噬 细胞数显著增加[23],能明显增加单核吞噬细胞和腹腔巨噬细胞的吞噬能力。 刺五加苷A、D、E 能阻止由氯喹引起的小鼠腹腔巨的苦杏仁苷能使安静及饥饿、 冷冻状态下的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能显著增强[24]。 2.3.2对淋巴细胞功能的影响 刺五加提取物能明显阻止因游泳疲劳所致的T、B 淋巴细胞及NK细胞、非特异性免疫功能下降。刺五加多糖能明显增强细胞毒T淋巴 细胞杀伤靶细胞的活性,同时对小鼠全脾细胞以及去T 细胞后的脾细胞都有强的 促进有丝分裂作用,并能促进Con A 刺激小鼠脾细胞分泌白介素-2[25]。 2.3.3对抗体形成的影响 刺五加多糖能明显增加小鼠分泌IgG、IgM的抗体分泌细
刺五加(Radix Caulis Acanthoanatcis Senticosi)又名五加参 、刺拐棒 , 是五加科五加属植物刺五加的根、根茎和茎叶。辛、微苦、温。归脾、 肾 、心 经 。[1]《 神 农 本 草 经 》将 其 列 为 上 品 。陶 弘 景 著《 名 医 别 录 》认 为 刺五加具 有 “ 补 中 , 意 气 , 坚 筋 骨 , 强 意 志 ” 功 效 。 [2]目前, 刺五加作 为常用中药已广泛应用于中医临床。刺五加主要分布在中国东北、华北、俄罗斯 远东地区及日本北海道、朝鲜等地,我国黑龙江野生资源丰富。刺五加主要生于 低山 ,丘陵 阔 叶 林 或 针 阔 混 交 林 下 ,林 缘 ,喜温暖、湿 润 气 候,耐 寒 ,地 下 茎 发 达,对土 壤 要求 不严。[3]自50年代以来,国内外的研究人员对刺五加的化学成 分、药理作用等进行了大量的研究,验证了刺五加的活性物质及其良好的药理作用, 并分离得到了其中大部分有效成分。[4]本文对近年来刺五加的化学成分、药理作 用等研究进展综述如下。
刺五加总苷的提取及纯化研究进展
刺五加总苷的提取及纯化研究进展郭冷秋;张博;李廷利【摘要】刺五加总苷是刺五加中主要活性成分之一,具有确切的抗疲劳、抑制肿瘤的生长及减轻抗癌药物的毒性、减少肿瘤手术后并发症的发生率及降低死亡率等作用.通过对近20多年国内外刺五加总苷提取和纯化方面的相关文献进行了系统的整理,总结了刺五加中有效成分的提取方法主要有水提、甲醇提、乙醇加热回流提取和超临界二氧化碳提取等,纯化方法目前使用最为广泛的是大孔吸附树脂法.通过综述刺五加总苷提取和纯化工艺的研究进展,为刺五加总苷进一步的纯化研究及新药开发奠定了一定的基础.【期刊名称】《中医药学报》【年(卷),期】2012(040)004【总页数】3页(P127-129)【关键词】刺五加总苷;提取;纯化【作者】郭冷秋;张博;李廷利【作者单位】黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】R28刺五加为五加科植物刺五加Acanthopanax Senticosus(Rupr.etMaxim.)Harms的干燥根及根茎[1],茎、叶也可作药用[2]。
刺五加商品名为五加参,味辛、微苦、性温、无毒[3]。
刺五加别名:豺节五加(《名医别录》),五加参(黑龙江),老虎钉子(东北、河北),刺拐棒(东北),刺木棒(辽宁),刺花棒(本溪),刺老鸦子(开原),刺针(临江),一百针(兴隆),五加皮木(朝鲜北部)[4]散生或丛生山地阔叶混交林下及林缘,主要分布在我国辽宁、吉林、黑龙江、河北、山西、陕西等地,在前苏联、朝鲜和日本也有分布。
刺五加具有益气健脾、补肾安神、益精壮骨之功效[5]。
本草纲目称刺五加为“本经上品”,能“补中益气,坚筋骨强意志,久服轻身耐老”。
李时珍在《本草纲目》中写道:“五加治风湿痿痹,壮筋骨,其功良深,仙家所述,虽若过情,盖奖辞多溢。
”并形象地引述了古人孟绰子与董士固的一段对话:“宁得一把五加,不用金玉满车,”来对五加做了极高的赞誉。
刺五加注射液中紫丁香苷及刺五加苷E含量限度的研究
刺五加注射液中紫丁香苷及刺五加苷E含量限度的研究杨阔;赵沛然【期刊名称】《求医问药(学术版)》【年(卷),期】2013(011)011【摘要】目的:测定刺五加注射液(100ml/支和250ml/支)中紫丁香苷及刺五加苷E的含量,制定紫丁香苷及刺五加苷E的含量限度.方法:采取高效液相色谱法,选用Diamonsil C18(250×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液(V/V)为流动相B,梯度洗脱,柱温40℃;流速为每分钟1.0ml;检测波长为220nm.结果:检测20批刺五加注射液(100ml/支)中紫丁香苷的含量,最高值为0.36,最低值为0.21;刺五加苷E的最高值为0.23,最低值为0.15.检测20批刺五加注射液(250ml/支)中紫丁香苷的含量,最高值为0.23,最低值为0.14;刺五加苷E的最高值为0.16,最低值为0.10.结论:紫丁香苷和刺五加苷E的限度:100ml刺五加注射液中紫丁香苷的含量不低于0.21mg/ml,刺五加苷E的含量不低于0.15mg/ml;250ml刺五加注射液中紫丁香苷的含量不低于0.14mg/ml,刺五加苷E的含量不低于0.10mg/ml.【总页数】2页(P311-312)【作者】杨阔;赵沛然【作者单位】黑龙江乌苏里江制药有限公司,黑龙江,虎林,158417;黑龙江乌苏里江制药有限公司,黑龙江,虎林,158417【正文语种】中文【中图分类】R927【相关文献】1.RP-HPLC法测定刺五加注射液中紫丁香苷、紫丁香树脂苷的含量 [J], 焦正花;顾秀琰;杨小源;金录胜2.HPLC法测定刺五加注射液中紫丁香苷的含量 [J], 王常禹;史慧玲;何培孝3.HPLC梯度洗脱法同时测定刺五加注射液中紫丁香苷与刺五加苷E含量 [J], 姬铁强4.HPLC法测定刺五加注射液中紫丁香苷和异嗪皮啶的含量 [J], 隆颖;栗建明;莫结丽;廖弦5.RP-HPLC法测定刺五加滴丸中紫丁香苷含量研究 [J], 史磊;张涛;李峰;郭琪因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
刺五加成分的多种抗肿瘤作用
刺五加成分的多种抗肿瘤作用
杨阳;刘玉翠;韩玉坤;金嵩;朱天信;臧琳(综述);齐玲(审校)
【期刊名称】《吉林医药学院学报》
【年(卷),期】2014(000)005
【摘要】刺五加主要分布在中国北部地区,是补中益气的上好中草药。
它具有抗
疲劳、抗衰老、抗菌、抗炎、增强免疫力和抗肿瘤等作用。
刺五加苷和刺五加多糖是刺五加抗肿瘤的主要成分。
以下就刺五加的不同成分来一一说明刺五加的抗肿瘤作用。
【总页数】4页(P366-369)
【作者】杨阳;刘玉翠;韩玉坤;金嵩;朱天信;臧琳(综述);齐玲(审校)
【作者单位】吉林医药学院临床班,吉林吉林 132013;吉林医药学院临床班,吉林吉林 132013;吉林医药学院护理班,吉林吉林 132013;吉林医药学院临床班,吉林吉林 132013;吉林医药学院临床班,吉林吉林 132013;吉林医药学院临床班,吉林吉林 132013;吉林医药学院病理教研室,吉林吉林 132013
【正文语种】中文
【中图分类】R285
【相关文献】
1.刺五加有效成分的抗肿瘤作用研究与评价 [J], 杜佳新;顾玉红;张博;朱小红
2.刺五加成分的多种抗肿瘤作用 [J], 杨阳;刘玉翠;韩玉坤;金嵩;朱天信;臧琳;齐玲;
3.多种气相色谱联用技术分析陕西刺五加茎挥发油的化学成分 [J], 于万滢;张华;黄
威东;陈吉平;梁鑫淼
4.高速逆流色谱法对刺五加有效成分刺五加苷E的分离制备 [J], 魏芸;张天佑;吴克友
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五加皮中草药活性成分紫丁香苷提取工艺研究
五加皮中草药活性成分紫丁香苷提取工艺研究
王秀皊;刘玉;曹乐;薛洪宝;梁丽丽
【期刊名称】《广东化工》
【年(卷),期】2017(44)20
【摘要】目的:建立五加皮中活性成分紫丁香苷的最佳提取工艺.方法:通过溶剂回流、超声提取法以及索氏提取法,分别控制反应时间、液料比、溶剂等单因素实验考察其对五加皮中活性成分提取率的影响.结果:五加皮中草药活性成分最佳提取工艺为:丙酮为溶剂、液料比6︰1、回流6小时提取率最高.结论:该方法简单易行,灵敏可靠,经济适用,重复性好,为五加皮中草药中提取活性成分紫丁香苷的提供了一个简单易行的方法.
【总页数】2页(P32-33)
【作者】王秀皊;刘玉;曹乐;薛洪宝;梁丽丽
【作者单位】蚌埠医学院制药工程系,安徽蚌埠 233030;蚌埠医学院制药工程系,安徽蚌埠 233030;蚌埠医学院制药工程系,安徽蚌埠 233030;蚌埠医学院制药工程系,安徽蚌埠 233030;蚌埠医学院制药工程系,安徽蚌埠 233030
【正文语种】中文
【中图分类】TQ461
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刺五加的提取
刺五加苷类物质的提取实验实验目的:1.提取刺五加中的有效成分苷类,以完成饮料制作一、原液:取25g刺五加原叶弄碎成粉末,放入圆底烧瓶中,加入50ml95%乙醇,装好回流装置,连续提取1h,放冷后抽取滤液约50ml,备用。
二、然后进行刺五加苷类物质萃取实验原理:萃取和洗涤是利用物质在不同溶解剂中的溶解度不同来进行分离的操作。
萃取和洗涤在原理上是一样的,知识目的不同。
从混合物中抽取的物质,如果是我们需要的,这种操作叫做萃取或提取:如果是我们不要的,这种操作叫做洗涤。
萃取是利用物质在两种不互溶(或微溶)溶剂中溶解度或分配比的不同来带到分离、提取或纯化目的的一种操作。
实验仪器及药品:仪器:分液漏斗、研钵、铁架台、容量瓶、托盘天平、剪刀药品:无水乙醚(后面做蒸馏处理时加热到35c),原液实验操作步骤:1.选择溶剂较液体体积大一倍以上的分液漏斗,把活塞擦干,在活塞上均匀涂上一层润滑脂,使润滑脂均匀分布,看上去透明即可。
2.检查分液漏斗的顶塞与活塞处是否渗漏(用水检验),确认不漏水时方可使用。
3.将被萃取液(刺五加乙醇溶液)和萃取剂(50ml无水乙醚)一次从上口倒入漏斗中,赛紧(顶塞不能涂润滑脂)。
4.取下分液漏斗,并前后振荡,然后再降漏斗放回铁圈中静置。
5.待两层液体完全分开后,打开顶塞,再将下层液体自活塞放出至接受瓶。
6.将所有的萃取液合并,加入过量的干燥剂干燥。
7.然后蒸去溶剂,根据化合物的性质利用蒸馏、重结晶等方法纯化。
本次试验成败关键:1.分液漏斗的使用方法正确(包括振摇、“放气”、静置、分液等操作)2.准确判断萃取液与被萃取液的上下层关系注意事项:乙醚对人体有害,请注意安全。
三、完成萃取试验后,对萃取液进行蒸馏,把乙醚从萃取液中蒸馏出去,留下从刺五加中萃取出来的苷类。
实验仪器:圆底烧瓶、蒸馏头、直形冷凝管、真空尾接管、锥形瓶、温度计导管、温度计(100)、橡皮管等。
1.加料:将待蒸馏液通过玻璃漏斗小心倒入蒸馏瓶中。
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刺五加中紫丁香苷的提取分离及抗肿瘤作用研究汪琢,姜守刚,祖元刚,付玉杰,张宇【摘要】目的研究紫丁香苷的体内外抗肿瘤作用。
方式应用MTT 法观看紫丁香苷对体外培育的4种人癌细胞的抑制作用,构建S180实体瘤小鼠模型研究紫丁香苷的体内抗肿瘤作用。
结果紫丁香苷对体外培育的4种人癌细胞有必然的抑制作用,而且能抑制小鼠S180实体瘤。
结论紫丁香苷具有必然的体内外抗肿瘤活性。
【关键词】紫丁香苷; 提取分离; 抗肿瘤作用; MTT; 小鼠刺五加为五加科植物刺五加Acanthopanax Senticosus Maxim) Harms 的干燥根及根茎,要紧散布在我国的黑龙江、吉林、河北、山西、宁夏、陕西及四川等地,朝鲜、俄罗斯远东地域及日本北海道等地亦有散布和种植[1]。
刺五加具有利气健脾、补肾安神之功效, 要紧用于脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦等病症[2]。
另外,国内外对刺五加的药理作用研究还说明,刺五加可增强机体非特异性防御能力,除具有免疫调剂、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射损伤及抗疲劳等作用外,还可医治心脑血管疾病、糖尿病、神经虚弱等症[3]。
刺五加的根和茎部份含有多种活性化学成份, 到目前为止,分离出的重要成份为苷类化合物。
紫丁香苷为β-谷甾醇葡萄糖苷,是一种较为典型的苷类化合物[4],对它的研究要紧集中在含量测定,而药效学研究并非多见,文献报导其有降血脂[5,6]和增强免疫力作用(张勇.《紫丁香苷的测定及其降血脂增强免疫力的研究》.2004吉林大学硕士学位论文),对心肌缺血的爱惜(张迪.《刺五加皂苷单体B对大鼠急性心肌缺血的爱惜作用》.2006东北师范大学硕士学位论文),抗氧化[7]和抗抑郁[8]等作用。
本实验从刺五加根茎中提取分离紫丁香苷,进行了结构确认,并在此基础上对紫丁香苷进行了抗肿瘤作用研究。
1 仪器与材料仪器CO2 培育箱, 美国SIM 公司;TS-100 倒置显微镜, 日本Nikon 公司;DL-CJ-2N 生物干净工作台, 哈尔滨市东联电子技术开发; Stat Fax-3200 酶标仪 ,美国AWARENESS 公司;1-15K高速冷冻离心机, 德国Sigma 公司;BS110 电子天平, 美国Sartorius 公司; 3102型电子天平,辽宁龙腾电子;DK-8D 型电热恒温热水槽 ,上海森信实验仪器;一次性针头式滤器, 美国Pall Life Sciences 公司;Milli-Q 超纯水系统, 美国Millpore 公司;MDF-U32V 超低温冰箱, 日本SANYO 公司;PB-21 PH 计, 美国Sartorius 公司;accu-jet 电动移液器 ,德国Brand 公司;吉尔森Gilson 移液器 ,法国Gilson 公司;LDZX-40BI 型立式自动电热压力蒸气灭菌器, 上海申安医疗器械厂;X-4数字显示显微熔点测定仪(温度未较正),北京泰克仪器制造;旋光用WZZ-1S型数字自动旋光仪,上海浦东物理光学仪器厂;液相质谱仪 API3000 ,加拿大Applied Biosystems公司; AV-300核磁共振波谱仪(TMS内标,300 MHz),美国Bruker公司;Waters 600 半制备液相(Waters2996二极管阵列),美国Waters公司; HYPERSIL C18 ( mm×150 mm 5 μm)色谱柱,美国Waters公司;RE-52AA旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂。
药品%的生理盐水,哈尔滨三联药业产品; RPMI1640培育基, 美国Hyclone 公司产品;胰蛋白酶,美国Gibco 公司产品;EDTA,美国Sigma 公司产品;MTT(噻唑蓝),美国Sigma 公司产品;小牛血清,天津灏洋生物制品科技有限责任公司产品;96 孔培育板,加拿大JET 公司产品;二甲基亚砜(DMSO),美国Amerseco 公司产品;青霉素、链霉素,美国Hyclone 公司产品; 甲醇(色谱级、分析纯)、其他试剂均为分析纯,青岛海洋化工厂产品;环磷酰胺,江苏恒瑞制药厂产品。
动物昆明种小鼠,雄性18~22 g,由哈尔滨医科大学肿瘤医院提供;荷肉瘤S180小鼠,由哈尔滨医科大学肿瘤医院传代培育。
肿瘤细胞株人宫颈癌Hela细胞、乳腺癌MCF-7 细胞、肺癌A549 细胞和前列腺癌PC-3 细胞购于哈尔滨医科大学。
2 方式紫丁香苷的提取分离称取刺五加干粉3 kg,过60目筛,加入甲醇回流提取3次,3 h/次,固液比别离为(1∶9,1∶8,1∶8) ,过滤,归并滤液,回收甲醇,得总浸膏。
总浸膏加10倍量水超声振荡使成混悬液,用等量石油醚别离萃取3次,水层再用醋酸乙酯等体积萃取4次,弃去水层,归并醋酸乙酯层,减压浓缩干燥,得浸膏约40 g。
取35 g浸膏,上硅胶柱分离,依次用氯仿- 甲醇极性递增梯度洗脱,当氯仿- 甲醇为100∶4时,洗脱得粗结晶紫丁香苷,经甲醇重结晶得紫丁香苷晶体[9]。
紫丁香苷的结构鉴定经UV,EI-MS,NMR 光谱和其他物理化学方式鉴定为紫丁香苷。
紫丁香苷的纯度检测取紫丁香苷晶体1 mg,加5 ml色谱甲醇溶解,经0. 45 μm微孔滤膜过滤后定容于5 ml容量瓶中,即为供试液。
色谱条件: 色谱柱为Zorbax Extrend C18,(416 mm ×250 mm, 5 μm);流动相为乙腈∶水 20∶80 ; 流速为1. 0 ml/min; 检测波长为265 nm;柱温为室温;进样体积为10 μl[10]。
MTT法检测紫丁香苷对4种人癌细胞增殖的体外抑制作用别离取处于指数生长期的A549,PC-3,MCF-7,Hela细胞,用含有 10%胎牛血清的 RPMI1640培育液稀释成20 000个细胞/mL, 96 孔板每孔中加入 200 μl细胞悬液,置于 37℃,5%CO2 培育箱中培育 24 h,将紫丁香苷用必然浓度的DMSO溶解,每孔中加入设定浓度紫丁香苷,稀释至需要的工作浓度。
置于 37℃,5%CO2 培育箱中培育48h。
MTT 用PBS配成 5 mg/ml 溶液,每孔中加入20 μl,置于37℃,5%CO2 孵箱中孵育 4 h。
吸出上清,用PBS洗3次,加入150 μl DMSO 溶解沉淀物,用振荡器摇匀,酶标仪测定其OD值。
计算药物对肿瘤细胞的抑制率:肿瘤细胞生长抑制率(%)=(1-实验组OD/对照组OD)×100%依如实验数据,由OD值计算生长抑制率,将抑制率与药物浓度做图,得出剂量反映曲线,计算出 IC50 (半数抑制浓度) 值。
紫丁香苷对小鼠实体瘤S180的抑制作用取生长旺盛的S180腹水瘤小鼠,无菌抽取腹水,用生理盐水(1∶6)稀释,制成细胞悬浮液,取 ml于玻璃片上,加%台朌蓝1滴,在光镜下计数,活细胞数应大于95%。
取此肿瘤细胞悬液,无菌条件下接种于昆明种小鼠右腋下,每只 ml,然后随机分组[11]。
取小鼠80只,按上述方式造模后,随机分为4组,别离为阳性对照组,紫丁香苷高剂量组、紫丁香苷低剂量组和空白对照组。
持续小鼠尾静脉注射给药7 d,末次给药后第二天处死动物,解剖取瘤,称重,计算抑瘤率,并进行统计学(t查验)处置。
计算抑瘤率。
抑瘤率(%)=(1-实验组平均瘤重/模型对照组平均瘤重)×100%3 结果紫丁香苷的鉴定所取得的白色针状结晶经UV,EI-MS,NMR 光谱分析与文献对照大体一致[12~15],确信为紫丁香苷。
分子结构如图1。
图1 紫丁香苷(syringin)的化学结构紫丁香苷的纯度检测对所取得的紫丁香苷采纳高效液相色谱法进行纯度检测(见图2)。
依照面积归一化法计算,所得的紫丁香苷纯度为%。
紫丁香苷对4种人癌细胞增殖的阻碍MTT检测结果说明紫丁香苷对4种肿瘤细胞均有明显的抑制作用,随着紫丁香苷浓度的增大肿瘤抑制率也升高,呈明显的剂量依托性(见图3)。
对4种肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50值见表1。
表1 紫丁香苷对4种肿瘤细胞的IC50值μg·ml-1紫丁香苷对小鼠肿瘤S180的抑制结果如表2所示,紫丁香苷高低剂量组S180小鼠平均瘤重均明显低于生理盐水组,抑瘤率别离为%和%,作用强度略小于阳性对照药环磷酰胺,抗肿瘤成效显著。
4 讨论紫丁香苷是从中药刺五加中提取分离纯化取得的一种单体化合物。
本实验对刺五加根茎进行提取和分段萃取后再利用传表 2 syringin 对小鼠S180实体瘤的抑制作用统的硅胶柱层析分离,重结晶取得白色晶体,利用UV、EI-MS、NMR 光谱等波谱技术鉴定为紫丁香苷,并用高效液相色谱测定纯度,从而确保肿瘤抑制实验的准确性。
评判药物抗肿瘤成效的方式从体内和体外两个方面进行。
MTT法为抗肿瘤药物挑选的经常使用方式,简便、高效、可重复性好,本实验选用人宫颈癌Hela细胞、乳腺癌MCF-7 细胞、肺癌A549 细胞和前列腺癌PC-3 细胞进行抗肿瘤实验,结果发觉紫丁香苷对上述4种肿瘤细胞均有明显的抗肿瘤活性,IC50值别离为,,μg/ml和μg/ml,均呈明显的量-效关系。
另外,荷瘤小鼠实验说明,紫丁香苷能够抑制实体瘤的生长,高低剂量组抑瘤率别离为%和%,尽管作用小于阳性对照药环磷酰胺,但平安性较高。
因此,紫丁香苷临床上可用于肿瘤的防治,具有良好的开发前景。
我国刺五加资源丰硕,但目前要紧利用刺五加混合物成份,本文对紫丁香苷的抗肿瘤活性进行研究,在开发抗肿瘤药物的同时,更充分利用了刺五加药材资源,为进一步开发利用刺五加的药用价值提供参考。
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