血清-病毒中和试验的标准操作规程

血清-病毒中和试验的标准操作规程（编号：034）

1、目的及使用范围

该SOP以PRRSV为例，测定血清中的病毒中和抗体滴度。

2、主要仪器及试剂

CO2细胞培养箱、普通光学显微镜、超净工作台（生物安全级别）、电动吸引器、移液器、水浴锅、DMEM培养基、胎牛血清、96孔细胞培养板

3、相关器皿的预处理

玻璃制品要高压灭菌

4、操作步骤

4.1按常规细胞培养方法培养Marc-145细胞

4.2胰酶消化Marc-145细胞，均分与96孔板中，100μL/孔，并保证细胞数为（2～8）×105/孔；CO2细胞培养箱培养16～24h；

4.3抗血清56℃水浴锅灭活30min，与含100 TCID50 PRRSV的DMEM（2%FBS）2倍倍比稀释，混匀后，37℃孵育1h；

4.4弃除96孔板中细胞培养基，加入血清-病毒混合物100μL/孔，置于CO2细胞培养箱中，吸附1h；

4.5弃除上清，用无菌PBS洗2次，吸干各孔中的残留液后，加入含2%FBS的DMEM，置于CO2细胞培养箱培养3～5d；

4.6第4天，于光学显微镜下观察细胞病变CPE，记录病变孔数目；

4.7计算中和抗体滴度，按照运用Reed-Muench法计算。

5、问题向导

5.1细胞病变不明显

根据细胞状态或病毒种类的不同，细胞病变时间会相应发生改变，一般而言，第3天就会出现CPE，第4天就可以计算其中和抗体滴度。

5.2 Reed-Muench法计算中和抗体滴度范例，见表1。

68