实验一大肠杆菌DNA的提取

大肠杆菌总DNA的提取

实验原理：本实验利用溶菌酶和碱裂解液SDS使细胞壁破坏，利用氯仿抽提的方法去除蛋白质，得到的DNA溶液利用乙醇将DNA沉淀下来。

实验目的：1. 掌握DNA提取的原理和方法；

2. 掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法

实验材料：

1.实验菌株：大肠杆菌

2.试剂：TE溶液：Tris•HCl 10 mM，EDTA 1 mM，pH 8.0，

20% SDS：

溶菌酶（50mg/ml）

5M NaCl

氯仿：异戊醇（24：1 v/v）

无水乙醇

0.8%琼脂糖

TAE电泳缓冲液

仪器：离心机，电泳仪

实验步骤：

1)取1.5ml培养好的大肠杆菌培养液与离心管中，7,000 rpm离心5 min，弃上清；

2)加入500ul TE溶液洗涤菌体7,000 rpm离心5 min，弃上清；

3)用360ul TE溶液悬浮菌体，加入20ul 溶菌酶（50mg/ml），37°C保温30min；

4)加入40ul 20 %SDS使其终浓度为2 %，60°C水浴30min。

5)加入110ul 5 M 高氯酸钠使其终浓度为1 M，充分混匀；

6)加入等体积氯仿：异戊醇（24：1 v/v），充分混匀，4°C 12,000 rpm 离心15min，

吸取上清于一新离心管中；

7)加入2倍体积的无水乙醇，混匀后12000rpm 离心10min；

8)弃上清，离心管在空气中自然晾干；

9)加入30-40ul TE溶解DNA；

10)取3-5ul DNA溶液，琼脂糖电泳检测。