药典三部(2015版)-通则-3407外源性DNA残留量测定法
《中国药典》2020版—通则 3407 外源性 DNA 残留量测定法第三法公示稿
通则3407 外源性DNA 残留量测定法第三法公示稿定量PCR 法PCR 反应过程中可通过荧光标记的特异性探针或荧光染料掺入而检测PCR产物量，通过连续监测反应体系中荧光数值的变化，可即时反映特异性扩增产物量的变化。
在反应过程中所释放的荧光强度达到预设的阈值时，体系的PCR 循环数(Ct 值)与该体系所含的起始DNA 模板量的对数值呈线性关系。
采用已知浓度的DNA 标准品，依据以上关系，构建标准曲线，对特定模板进行定量分析，测定供试品中的外源DNA 残留量。
试剂（1）PCR 反应预混液（2×) 含MgCl2、扩增酶、dNTPs 等，按试剂使用说明书要求配制，或符合条件的其它配方预混液。
（2）TE 缓冲液（pH 8.0）同方法一。
（3）荧光标记探针用TE 缓冲液稀释至100μmol/L，-20℃保存。
（4）正向和反向序列检测引物用TE 缓冲液稀释至100μmol/L，-20℃保存。
（5）碘化钠溶液（6mol/L 碘化钠，15 mmol/L EDTA，0.5%月桂酰肌氨酸钠，25mmol/L Tris-HCl pH 8.0 以及35µg/ml 糖原）：配制100ml 碘化钠溶液，先取干净的烧杯置于磁力搅拌器上，依次加入以下成分，同时用搅拌子不断搅拌混匀：50ml 的无核酸酶水，3.0 ml 的0.5 mol/L EDTA 溶液，2.5ml 的1 mol/L Tris-HCl pH 8.0，缓慢加入89.93g 的碘化钠，加入适量的无核酸酶水至100 ml（可根据需要等比增加或减少）。
用0.2 微米孔径的尼龙膜过滤溶液。
避光4℃储藏。
（6）2%蛋白酶K 溶液同方法一。
（7）蛋白酶K 缓冲液（10×），同方法一但不加氯化钠，或按蛋白酶K 试剂说明书要求配制。
（8）推荐的检测探针及引物CHO 细胞探针: 5ˊFAM-ACTCGCTCTGGAGACCAGGCTGGC-TAMRA3ˊ正向引物: 5ˊ-TGTGTAGCTTTGGAGCCTATCCT-3ˊ反向引物: 5ˊ-CAGCACTCGGGAGGCAGA-3ˊ大肠杆菌。
外源性DNA残留量测定法
溶 解 ，室 温 放 置 2 4 小 时 ，裂 解 物 加 水 1 80 4 ，再 冷 冻 干
燥 。冻 干 的 裂 解 物 用 水 复 溶 至 适 当 浓 度 。照 SDS- 聚丙烯
酰 胺 凝 胶 电 泳 法 （通 则 0541第 五 法） （胶 浓 度 20% ) 进行
电 泳 ，用 银 染 法 染 色 。
将待提取的细胞基质悬液的细胞浓度调整为每lml约 含 107 个 细 胞 ，如 果 为 细 菌 ，则 将 其 浓 度 调 整 为 每 l m l 约 含 108 个 细 菌 。量 取 悬 液 lml，离 心 ，在 沉 淀 中 加 裂 解 液 400^1混 匀 ，37°C作 用 12〜2 4 小 时 后 ，加人饱和苯酚溶液 450^1,剧 烈 振 摇 混 匀 ，以 每 分 钟 10 0 0 0 转 离 心 1 0 分 钟 ， 转 移 上 层 液 体 ，以 饱 和 苯 酚 溶 液 450M1 重 复 抽 提 1 次 ；转 移 上 层 液 体 ，加 人 三 氯 甲 烷 450^1，剧 烈 振 摇 混 匀 ，以每
中 国 药 典 2015年版
以 每 分 钟 15 0 0 0 转 离 心 1 5 分 钟 ；用 适 量 一20eC 7 0 % 乙醇 溶 液 洗 涤 沉 淀 1 次 ，以 每 分 钟 15 0 0 0 转 离 心 1 5 分 钟 ，弃 上 清 液 ，保 留 沉 淀 ，吹 至 干 燥 后 ，加 适 量 灭 菌 T E 缓冲液 溶 解 ，R N a s e 酶 切 ，苯 酚 -三 氯 甲 烷 抽 提 ，分 子 筛 纯 化 D N A , 即得。
(12) D N A 稀 释 液 取 1 % 鱼 精 D N A 溶 液 50^1，加 T E 缓 冲 液 至 10ml。
用于探针标记和阳性对照的D N A 制 备 用于探针标 记 和 阳 性 对 照 的 D N A ，由生 产供 试 品 用 的 传 代 细 胞 、工
2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》第四部(1)
2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》的内容（以下红色标记的内容更需要关注）序号编码目录10100 制剂通则2 0101 片剂3 0102 注射剂4 0103 胶囊剂5 0104 颗粒剂6 0105 眼用制剂7 0106 鼻用制剂8 0107 栓剂9 0108 丸剂10 0109 软膏剂乳膏剂11 0110 糊剂12 0111 吸入制剂13 0112 喷雾剂14 0113 气雾剂15 0114 凝胶剂16 0115 散剂17 0116 糖浆剂18 0117 搽剂19 0118 涂剂20 0119 涂膜剂21 0120 酊剂22 0121 贴剂23 0122 贴膏剂24 0123 口服溶液剂口服混悬剂口服乳剂25 0124 植入剂26 0125 膜剂27 0126 耳用制剂28 0127 洗剂29 0128 冲洗剂30 0129 灌肠剂31 0181 合剂32 0182 锭剂33 0183 煎膏剂（膏滋）34 0184 胶剂35 0185 酒剂36 0186 膏药37 0187 露剂38 0188 茶剂39 0189 流浸膏剂与浸膏剂400200 其他通则41 0211 药材和饮片取样法42 0212 药材和饮片检定通则43 0213 炮制通则44 0251 药用辅料45 0261 制药用水46 0291 国家药品标准物质通则47030048 0301 一般鉴别试验49 0400 光谱法50 0401 紫外-可见分光光度法51 0402 红外分光光度法52 0405 荧光分光光度法53 0406 原子吸收分光光度法54 0407 火焰光度法55 0411 电感耦合等离子体原子发射光谱法56 0412 电感耦合等离子体质谱法57 0421 拉曼光谱法58 0431 质谱法59 0441 核磁共振波谱法60 0451 X射线衍射法610500 色谱法62 0501 纸色谱法63 0502 薄层色谱法64 0511 柱色谱法65 0512 高效液相色谱法66 0513 离子色谱法67 0514 分子排阻色谱法68 0521 气相色谱法69 0531 超临界流体色谱法70 0532 临界点色谱法71 0541 电泳法72 0542 毛细管电泳法730600 物理常数测定法74 0601 相对密度测定法75 0611 馏程测定法76 0612 熔点测定法77 0613 凝点测定法78 0621 旋光度测定法79 0622 折光率测定法80 0631 pH值测定法81 0632 渗透压摩尔浓度测定法82 0633 黏度测定法83 0661 热分析法84 0681 制药用水电导率测定法85 0682 制药用水中总有机碳测定法860700 其他测定法87 0701 电位滴定法与永停滴定法88 0702 非水溶液滴定法89 0703 氧瓶燃烧法90 0704 氮测定法91 0711 乙醇量测定法92 0712 甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法93 0713 脂肪与脂肪油测定法94 0721 维生素A测定法95 0722 维生素D测定法96 0731 蛋白质含量测定法970800 限量检查法98 0801 氯化物检查法99 0802 硫酸盐检查法100 0803 硫化物检查法101 0804 硒检查法102 0805 氟检查法103 0806 氰化物检查法104 0807 铁盐检查法105 0808 铵盐检查法106 0821 重金属检查法107 0822 砷盐检查法108 0831 干燥失重测定法109 0832 水分测定法110 0841 炽灼残渣检查法111 0842 易炭化物检查法112 0861 残留溶剂测定法113 0871 甲醇量检查法114 0872 合成多肽中的醋酸测定法115 0873 2-乙基己酸测定法1160900 特性检查法117 0901 溶液颜色检查法118 0902 澄清度检查法119 0903 不溶性微粒检查法120 0904 可见异物检查法121 0921 崩解时限检查法122 0922 融变时限检查法123 0923 片剂脆碎度检查法124 0931 溶出度与释放度测定法125 0941 含量均匀度检查法126 0942 最低装量检查法127 0951 吸入制剂微细粒子空气动力学特性测定法128 0952 黏附力测定法129 0981 结晶性检查法130 0982粒度和粒度分布测定法131 0983 锥入度测定法132 1100 生物检查法133 1101 无菌检查法134 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法135 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法136 1107 非无菌药品微生物限度标准137 1121 抑菌效力检查法138 1141 异常毒性检查法139 1142 热原检查法140 1143 细菌内毒素检查法141 1144 升压物质检查法142 1145 降压物质检查法143 1146 组胺类物质检查法144 1147 过敏反应检查法145 1148 溶血与凝聚检查法1461200 生物活性测定法147 1201 抗生素微生物检定法148 1202 青霉素酶及其活力测定法149 1205 升压素生物测定法150 1206 细胞色素C活力测定法151 1207 玻璃酸酶测定法152 1208 肝素生物测定法153 1209 绒促性素生物测定法154 1210 缩宫素生物测定法155 1211 胰岛素生物测定法156 1212 精蛋白锌胰岛素注射液延缓作用测定法157 1213 硫酸鱼精蛋白生物测定法158 1214 洋地黄生物测定法159 1215 葡萄糖酸锑钠毒力检查法160 1216 卵泡刺激素生物测定法161 1217 黄体生成素生物测定法162 1218 降钙素生物测定法163 1219 生长激素生物测定法164 1401 放射性药品检定法165 1421 灭菌法166 1431 生物检定统计法1672000 中药其他方法168 2001 显微鉴别法169 2101 膨胀度测定法170 2102 膏药软化点测定法171 2201 浸出物测定法172 2202 鞣质含量测定法173 2203 桉油精含量测定法174 2204 挥发油测定法175 2301 杂质检查法176 2302 灰分测定法177 2303 酸败度测定法178 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法179 2322 汞和砷元素形态及其价态测定法180 2331 二氧化硫残留量测定法181 2341 农药残留量测定法182 2351 黄曲霉毒素测定法183 2400 注射剂有关物质检查法1843000 生物制品相关检查方法1853100 含量测定法186 3101 固体总量测定法187 3102 唾液酸测定法（间苯二酚显色法）188 3103 磷测定法189 3104 硫酸铵测定法190 3105 亚硫酸氢钠测定法191 3106 氢氧化铝（或磷酸铝）测定法192 3107 氯化钠测定法193 3108 枸橼酸离子测定法194 3109 钾离子测定法195 3110 钠离子测定法196 3111 辛酸钠测定法197 3112 乙酰色氨酸测定法198 3113 苯酚测定法199 3114 间甲酚测定法200 3115 硫柳汞测定法201 3116 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法202 3117 O-乙酰基测定法203 3118 己二酰肼含量测定法204 3119 高分子结合物含量测定法205 3120 人血液制品中糖及糖醇测定法206 3121 人血白蛋白多聚体测定法207 3122 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法208 3123 人免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法209 3124 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法210 3125 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法211 3126 IgG含量测定法212 3127 单抗分子大小变异体测定法（CE-SDS）2133200 化学残留物测定法214 3201 乙醇残留量测定法215 3202 聚乙二醇残留量测定法216 3203 聚山梨酯80残留量测定法217 3204 戊二醛残留量测定法218 3205 磷酸三丁酯残留量测定法219 3206 碳二亚胺残留量测定法220 3207游离甲醛测定法221 3208 人血白蛋白铝残留量测定法222 3209 羟胺残留量测定法2233300 微生物检查法224 3301 支原体检查法225 3302 外源病毒因子检查法226 3303 鼠源性病毒检查法227 3304 SV40核酸序列检查法228 3305 猴体神经毒力试验229 3306 血液制品生产用人血浆病毒核酸检测技术要求2303400 生物测定法231 3401 免疫印迹法232 3402 免疫斑点法233 3403 免疫双扩散法234 3404 免疫电泳法235 3405 肽图检查法236 3406 质粒丢失率检查法237 3407 外源性DNA残留量测定法238 3408 抗生素残留量检查法（培养法）239 3409 激肽释放酶原激活剂测定法240 3410 抗补体活性测定法241 3411 牛血清白蛋白残留量测定法242 3412 大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定法243 3413 假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法244 3414 酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法245 3415 类A血型物质测定法246 3416 鼠IgG残留量测定法247 3417 无细胞百日咳疫苗鉴别试验（酶联免疫法）248 3418 抗毒素、抗血清制品鉴别试验（酶联免疫法）249 3419 A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法250 3420 伤寒Vi多糖分子大小测定法251 3421 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法252 3422 人凝血酶活性检查法253 3423 活化的凝血因子活性检查法254 3424 肝素含量测定法255 3425 抗A、抗B血凝素测定法256 3426 人红细胞抗体测定法257 3427 人血小板抗体测定法258 3500 生物活性/效价测定法259 3501 重组乙型肝炎疫苗（酵母）体外相对效力检查法260 3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法261 3503 人用狂犬病疫苗效价测定法262 3504 吸附破伤风疫苗效价测定法263 3505 吸附白喉疫苗效价测定法264 3506 类毒素絮状单位测定法265 3507 白喉抗毒素效价测定法266 3508 破伤风抗毒素效价测定法267 3509 气性坏疽抗毒素效价测定法268 3510 肉毒抗毒素效价测定法269 3511 抗蛇毒血清效价测定法270 3512 狂犬病免疫球蛋白效价测定法271 3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法272 3514 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法273 3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（E玫瑰花环形成抑制试验）274 3516 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（淋巴细胞毒试验）275 3517 人凝血因子Ⅱ效价测定法276 3518 人凝血因子Ⅶ效价测定法277 3519 人凝血因子Ⅸ效价测定法278 3520 人凝血因子Ⅹ效价测定法279 3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法280 3522 重组人促红素体内生物学活性测定法281 3523 干扰素生物学活性测定法282 3524 重组人白介素-2生物学活性测定法283 3525 重组人粒细胞刺激因子生物学活性测定法284 3526 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法285 3527 重组牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法286 3528 重组人表皮生长因子生物学活性测定法287 3529 重组链激酶生物学活性测定法288 3530 鼠神经生长因子生物学活性测定法289 3531 尼妥珠单抗注射液生物学活性测定法290 3532 重组人白介素-11生物学活性测定法291 3533 注射用A型肉毒毒素成品效价测定法（平行线法）2923600 特定生物原材料/动物293 3601 无特定病原体鸡胚质量检测要求294 3602 实验动物微生物学检测要求295 3603 实验动物寄生虫学检测要求296 3604 新生牛血清检测要求297 3605 细菌生化反应培养基2983700299 3701 生物制品国家标准物质目录3008000 试剂与标准物质301 8001 试药302 8002 试液303 8003 试纸304 8004 缓冲液305 8005 指示剂与指示液306 8006 滴定液307 8061 对照品对照药材对照提取物308 8062 对照品标准品3099000 指导原则310 9001 原料药物与制剂稳定性试验指导原则311 9011 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则312 9012 生物样品定量分析方法验证指导原则313 9013 缓释、控释和迟释制剂指导原则314 9014 微粒制剂指导原则315 9015 药品晶型研究及晶型质量控制指导原则316 9101 药品质量标准分析方法验证指导原则317 9102 药品杂质分析指导原则318 9103 药物引湿性试验指导原则319 9104 近红外分光光度法指导原则320 9105 中药生物活性测定指导原则321 9106 基于基因芯片的药物评价技术与方法指导原则322 9107 中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则323 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则324 9202 非无菌产品微生物限度检查指导原则325 9203药品微生物实验室质量管理指导原则326 9204 微生物鉴定指导原则327 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则328 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则329 9301注射剂安全性检查法应用指导原则330 9302 中药有害残留物限量制定指导原则331 9303 色素测定法指导原则332 9304 中药中铝、铬、铁、钡元素测定指导原则333 9305 中药中真菌毒素测定指导原则334 9501 正电子类放射性药品质量控制指导原则335 9502 锝［99mTc］放射性药品质量控制指导原则336 9601 药用辅料功能性指标研究指导原则337 9621 药包材通用要求指导原则338 9622 药用玻璃材料和容器指导原则339 9901 国家药品标准物质制备指导原则。
中国药典》2015年版通则目录及增修订内容
《中国药典》2015年版通则目录及增修订内容 0100 制剂通则 0101 片剂 0102 注射剂 0103 胶囊剂 0104 颗粒剂 0105 眼用制剂 0106 鼻用制剂 0107 栓剂 0108 软膏剂 0109 乳膏剂 0110 糊剂 0111 吸入制剂 0112 喷雾剂 0113 气雾剂 0114 凝胶剂 0115 散剂 0116 滴丸剂 0117 糖丸 0118 糖浆剂 0120 涂剂 0121 涂膜剂 0122 酊剂 0123 贴剂 0124 贴膏剂 0125 口服溶液剂口服混悬剂口服乳剂 0126 植入剂 0127 膜剂 0128 耳用制剂 0129 洗剂 0130 冲洗剂 0131 灌肠剂 0181 丸剂 0182 合剂 0183 锭剂 0184 煎膏剂(膏滋) 0185 胶剂 0186 酒剂 0187 流浸膏剂与浸膏剂 0189 露剂 0190 茶剂 0200 其他通则 0211 药材和饮片取样法(未修订) 0212 药材和饮片检定通则(第二增补本) 0213 炮制通则(未修订) 0251 药用辅料通则 0261 制药用水 0271 药包材通则(待定) 0272 玻璃容器(待定) 0291 国家药品标准物质通则(第二增补本) 0300 0301 一般鉴别试验(第二增补本) 0400 光谱法 0401 紫外-可见分光光度法 0402 红外分光光度法 0405 荧光分光光度法 0406 原子吸收分光光度法 0407 火焰光度法 0411 电感耦合等离子体原子发射光谱法 0412 电感耦合等离子体质谱法(增订) 0421 拉曼光谱法(新增) 0431 质谱法 0441 核磁共振波谱法 0451 X射线衍射法 0500 色谱法(未修订) 0501 纸色谱法 0502 薄层色谱法 0511 柱色谱法(未修订) 0512 高效液相色谱法 0513 离子色谱法 0514 分子排阻色谱法 0521 气相色谱法 0531 超临界流体色谱法(拟新增) 0532 临界点色谱法(拟新增) 0541 电泳法 0542 毛细管电泳法 0600 物理常数测定法 0601 相对密度测定法(未修订) 0611 馏程测定法 0612 熔点测定法 0613 凝点测定法 0621 旋光度测定法 0622 折光率测定法(未修订) 0631 pH值测定法 0632 渗透压摩尔浓度测定法 0633 黏度测定法 0661 热分析法(第二增补本) 0681 制药用水电导率测定法(未修订) 0682 制药用水中总有机碳测定法(未修订) 0700 其他测定法Other Assays 0701 电位滴定法与永停滴定法(未修订) 0702 非水溶液滴定法 0703 氧瓶燃烧法(未修订) 0704 氮测定法 0711 乙醇量测定法 0712 甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法(未修订) 0713 脂肪与脂肪油测定法(未修订) 0721 维生素A测定法(未修订) 0722 维生素D测定法(未修订) 0731 蛋白质含量测定法 0800 限量检查法 0801 氯化物检查法(未修订) 0802 硫酸盐检查法(未修订) 0803 硫化物检查法(未修订) 0804 硒检查法(未修订) 0805 氟检查法(未修订) 0806 氰化物检查法 0807 铁盐检查法(未修订) 0808 铵盐检查法(第二增补本) 0821 重金属检查法(第一增补本) 0822 砷盐检查法(未修订) 0831 干燥失重测定法 0832 水分测定法 0841 炽灼残渣检查法(第二增补本) 0842 易炭化物检查法(未修订) 0861 残留溶剂测定法(未修订) 0871 甲醇量检查法 0872 合成多肽中的醋酸测定法(未修订) 0873 2-乙基己酸测定法(未修订) 0900 物理特性检查法 0901 溶液颜色检查法 0902 澄清度检查法 0903 不溶性微粒检查法 0904 可见异物检查法 0921 崩解时限检查法 0922 融变时限检查法(未修订) 0923 片剂脆碎度检查法(未修订) 0931 溶出度测定法(合并释放度测定法) 0941 含量均匀度检查法 0942 最低装量检查法 0951 吸入制剂微细粒子的空气动力学评价方法(原雾滴粒分布测定法) 0952 贴膏剂黏附力测定法 0981 结晶性检查法(未修订) 0982 粒度和粒度分布测定法(第一增补本) 0983 锥入度测定法 1000 分子生物学技术 1001 核酸分子鉴定法(待定) 1100 生物检查法 1101 无菌检查法 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 1107 非无菌药品微生物限度标准 1121 抑菌效力检查法(第三增补本、新增) 1141 异常毒性检查法 1142 热原检查法 1143 细菌内毒素检查法 1144 升压物质检查法 1145 降压物质检查法(未修订) 1146 组胺类物质检查法(新增) 1147 过敏反应检查法(未修订) 1148 溶血与凝聚检查法 1200 生物活性测定法 1201 抗生素微生物检定法(未修订) 1202 青霉素酶及其活力测定法(未修订) 1205 升压素生物测定法 1206 细胞色素C活力测定法(未修订) 1207 玻璃酸酶测定法(未修订) 1208 肝素生物测定法(第三增补本) 1209 绒促性素生物测定法 1210 缩宫素生物测定法 1211 胰岛素生物测定法(未修订) 1212 精蛋白锌胰岛素注射液延缓作用检查法(未修订) 1213 硫酸鱼精蛋白生物测定法(未修订) 1214 洋地黄生物测定法(未修订) 1215 葡萄糖酸锑钠毒力检查法(未修订) 1216 卵泡刺激素生物测定法 1217 黄体生成素生物测定法 1218 降钙素生物测定法 1219 生长激素生物测定法(未修订) 1401 放射性药品检定法(未修订) 1421 灭菌法(未修订) 1431 生物检定统计法(未修订) 2000 中药相关检查方法 2001 显微鉴别法(第二增补本) 2002 中药材DNA条形码分子鉴定法(新增) 2101 膨胀度测定法(第二增补本) 2102 膏药软化点测定法(未修订) 2201 浸出物测定法(未修订) 2202 鞣质含量测定法(第二增补本) 2203 桉油精含量测定法(未修订) 2204 挥发油测定法(未修订) 2301 药材和饮片杂质检查法 2302 灰分测定法(未修订) 2303 酸败度测定法(未修订) 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法(未修订) 2322 元素形态及其价态测定法（拟新增） 2331 二氧化硫残留量测定法 2341 农药残留量测定法（第二增补本+增订） 2351 黄曲霉毒素测定法（第二增补本+增订） 2400 中药注射剂有关物质检查法(拟修订) 2401 中药注射剂蛋白质检查法(待定) 2402 中药注射剂鞣质检查法(待定) 2403 中药注射剂树脂检查法(待定) 2404 中药注射剂草酸盐检查法(待定) 2405 中药注射剂钾离子检查法(待定) 2406 中药注射剂高分子聚合物检查法(待定) 3000 生物制品相关检查方法(待定) 3100 含量测定法 3101 固体总量测定法 3102 唾液酸测定法 3103 磷测定法 3104 硫酸铵测定法 3105 亚硫酸氢钠测定法 3106 氢氧化铝(或磷酸铝)测定法 3107 氯化钠测定法 3108 枸橼酸离子测定法 3109 辛酸钠测定法 3110 乙酰色氨酸测定法 3111 苯酚测定法 3112 间甲酚测定法 3113 硫柳汞测定法 3114 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法 3115 O-乙酰基测定法 3116 己二酰肼含量测定法 3117 高分子结合物含量测定法 3118 人血液制品中糖及糖醇测定法 3119 人血白蛋白多聚体测定法 3120 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法 3121 人免疫球蛋白类制品甘氨酸含量测定法 3122 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法 3123 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法 3124 IgG含量测定法 3200 化学残留物测定法 3201 乙醇残留量测定法 3202 聚乙二醇残留量测定法 3203 聚山梨酯80残留量测定法 3204 戊二醛残留量测定法 3205 磷酸三丁酯残留量测定法 3206 碳二亚胺(EDAC)残留量测定法 3207 游离甲醛测定法 3208 人血白蛋白铝残留量测定法 3300 微生物检查法 3301 支原体检查法 3302 病毒外源因子检查法 3303 鼠源性病毒检查法 3400 生物测定法 3401 免疫印迹法 3402 免疫斑点法 3403 免疫双扩散法 3404 免疫电泳法 3405 肽图检查法 3406 质粒丢失率检查法 3407 SV40核酸序列检查法 3408 外源性DNA残留量测定法 3409 抗生素残留量检查法(培养法) 3410 激肽释放酶原激活剂测定法 3411 抗补体活性测定法 3412 牛血清白蛋白残留量测定法 3413 大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定法 3414 假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法 3415 酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法 3416 类A血型物质测定法 3417 鼠IgG残留量测定法 3418 无细胞百日咳疫苗鉴别试验(酶联免疫法) 3419 抗毒素、抗血清制品鉴别试验(酶联免疫法) 3420 A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法 3421 伤寒Vi多糖分子大小测定法 3422 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法 3423 人凝血酶活性检查法 3424 活化的凝血因子活性检查法 3425 肝素含量测定法 3426 抗A、抗B血凝素测定法 3427 人红细胞抗体测定法 3428 人血小板抗体测定法 3429 猴体神经毒力试验 3500 生物活性/效价测定法 3501 重组乙型肝炎疫苗(酵母)体外相对效力检查法 3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法 3503 人用狂犬病疫苗效价测定法 3504 吸附破伤风疫苗效价测定法 3505 吸附白喉疫苗效价测定法 3506 类毒素絮状单位测定法 3507 白喉抗毒素效价测定法 3508 破伤风抗毒素效价测定法 3509 气性坏疽抗毒素效价测定法 3510 肉毒抗毒素效价测定法 3511 抗蛇毒血清效价测定法 3512 狂犬病免疫球蛋白效价测定法 3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法 3514 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法 3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法(E玫瑰花环形成抑制试验) 3516 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法(淋巴细胞毒试验) 3517 人凝血因子Ⅱ效价测定法 3518 人凝血因子Ⅶ效价测定法 3519 人凝血因子Ⅸ效价测定法 3520 人凝血因子Ⅹ效价测定法 3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法 3522 重组人促红素体内生物学活性测定法 3523 干扰素生物学活性测定法 3524 重组人白介素-2生物学活性测定法 3525 重组人粒细胞刺激因子生物学活性测定法 3526 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法 3527 重组牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法 3528 重组人表皮生长因子生物学活性测定法 3529 重组链激酶生物学活性测定法 3600 特定生物原材料/动物 3601 无特定病原体鸡胚质量检测要求 3602 实验动物微生物学检测要求 3603 实验动物寄生虫学检测要求 3604 新生牛血清检测要求 3611 细菌生化反应培养基 8000 试剂和标准物质(待定) 8001 试药 8002 试液 8003 试纸 8004 缓冲液 8005 指示剂与指示液 8006 滴定液 8061 标准物质 9000 指导原则 9001 原料药与药物制剂稳定性试验指导原则(待定) 9011 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则(待定) 9012 生物样品定量分析方法指导原则(待定) 9013 缓释、控释和迟释制剂指导原则(未修订) 9014 微粒制剂指导原则(待定) 9015 注射剂制备指导原则(拟新增，待定) 9101 药品质量标准分析方法验证指导原则 9102 药品杂质分析指导原则 9103 药物引湿性试验指导原则(未修订) 9104 近红外分光光度法指导原则(未修订) 9105 多晶型药品的质量控制技术与方法指导原则(新增) 9106 基于基因芯片技术的药物安全性和有效性评价技术指导原则(新增) 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则(未修订) 9202 微生物限度检查法应用指导原则 9203 药品微生物实验室质量管理指导原则(第三增补本) 9204 微生物鉴定指导原则(新增) 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则(新增) 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则(新增) 9301 注射剂安全性检查法应用指导原则 9302 有害残留物限量制定指导原则(新增) 9401 中药生物活性测定指导原则 9501 正电子类放射性药品质量控制指导原则(未修订) 9502 锝[99mTc]放射性药品质量控制指导原则(未修订) 9701 药用辅料性能指标研究指导原则(第三增补本、拟新增) 9901 国家药品标准物质制备指导原则(第二增补本)。
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0101 0102 0103 0104 0105 0106 0107 0108 0109 0110 0111 0112 0113 0114 0115 0116 0117 0118 01190120 0121 0122 0123 0124 0125 0126 0127 0128 0129 0181 0182 0183 0184 0185 0186 0187 0188 018902610400 0401 0402 0405 0406 0407 0411 0412 0421 0431 0441 0451 X050105020512 0513 05140531 0532 0541 05420611 0612 0613 06210631 pH 0632 063307020704 07110731 08060831 083208710901 0902 0903 0904 09210931 0941 0942 09510952 09831101 1105 1106 1107 1121 1141 1142 1143 11441146 114812051208 1209 12101216 1217 121823012322 2331 2341 23513104 硫酸铵测定法3105 亚硫酸氢钠测定法3106 氢氧化铝（或磷酸铝）测定法3107 氯化钠测定法3108 枸橼酸离子测定法3109 辛酸钠测定法3110 乙酰色氨酸测定法3111 苯酚测定法3112 间甲酚测定法3113 硫柳汞测定法3114 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法3115 O-乙酰基测定法3116 己二酰肼含量测定法3117 高分子结合物含量测定法3118 人血液制品中糖及糖醇测定法3119 人血白蛋白多聚体测定法3120 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法3121 人免疫球蛋白类中甘氨酸含量测定法3122 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法3123 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法3124 IgG含量测定法3200 化学残留物测定法3201 乙醇残留量测定法3202 聚乙二醇残留量测定法3203 聚山梨酯80残留量测定法3204 戊二醛残留量测定法3205 磷酸三丁酯残留量测定法3206 碳二亚胺（EDAC）残留量测定法3207 游离甲醛测定法3208 人血白蛋白铝残留量测定法3209 羟胺残留量测定法3300 微生物检查法3301 支原体检查法3302 病毒外源因子检查法3303 鼠源性病毒检查法3400 生物测定法3401 免疫印迹法3402 免疫斑点法3403 免疫双扩散法3404 免疫电泳法3405 肽图检查法3406 质粒丢失率检查法3407 SV40核酸序列检查法3408 外源性DNA残留量测定法3409 抗生素残留量检查法3410 激肽释放酶原激活剂测定法3411 抗补体活性测定法3412 牛血清白蛋白残留量测定法3413 大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定法3414 假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法3415 酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法3416 类A血型物质测定法3417 鼠IgG残留量测定法3418 无细胞百日咳疫苗鉴别试验3419 抗毒素、抗血清制品鉴别试验3420 A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法3421 伤寒Vi多糖分子大小测定法3422 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法3423 人凝血酶活性检查法3424 活化的凝血因子活性检查法3425 肝素含量测定法3426 抗A、抗B血凝素测定法3427 人红细胞抗体测定法3428 人血小板抗体测定法3429 猴体神经毒力试验3430 人血浆病毒核酸检测技术要求3431 单抗纯度茨顶方法-CE-SDS毛细管电泳（还原和非还原）3500 生物活性/效价测定法3501 重组乙型肝炎疫苗（酵母）体外相对效力检查法3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法3503 人用狂犬病疫苗效价测定法3504 吸附破伤风疫苗效价测定法3505 吸附白喉疫苗效价测定法3506 类毒素絮状单位测定法3507 白喉抗毒素效价测定法3508 破伤风抗毒素效价测定法3509 气性坏疽抗毒素效价测定法3510 肉毒抗毒素效价测定法3511 抗蛇毒血清效价测定法3512 狂犬病免疫球蛋白效价测定法3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法3514 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法(E玫瑰花环形成抑制试验) 3516 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法(淋巴细胞毒试验)3517 人凝血因子Ⅱ效价测定法3518 人凝血因子Ⅶ效价测定法3519 人凝血因子Ⅸ效价测定法3520 人凝血因子Ⅹ效价测定法3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法3522 重组人促红素体内生物学活性测定法3523 干扰素生物学活性测定法3524 重组人白介素-2生物学活性测定法3525 重组人粒细胞刺激因子生物学活性测定法3526 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法3527 重组牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法3528 重组人表皮生长因子生物学活性测定法3529 重组链激酶生物学活性测定法3530 鼠神经生长因子生物学活性测定法3531 尼妥珠单抗生物学活性测定法3532 白介素-11-生物活性测定方法3600 特定生物原材料/动物3601 无特定病原体鸡胚质量检测要求3602 实验动物微生物学检测要求3603 实验动物寄生虫学检测要求3604 新生牛血清检测要求3611 细菌生化反应培养基8000 试剂与标准物质（待定）8001 试药8002 试液90119012901490159101910291059106910792029203 9204 9205 9206 9301 9302 9303 9304 9305 94019601 9621 96224.国家药典委员会2014年7月30日。
药典三部(2015版)-通则-外源病毒因子检查法
3302 外源病毒因子检查法病毒类制品在毒种选育和生产过程中，经常使用动物或细胞基质培养，因此，有可能造成外源因子的污染。
为了保证制品质量，需要对毒种和对照细胞进行外源病毒因子的检测。
对病毒主种子批或工作种子批，应抽取足够检测试验需要量的供试品进行外源病毒因子检测。
根据病毒的特性，有些检测需要在试验前中和病毒。
病毒中和时尽可能不稀释，但当中和抗体不能有效中和病毒而需要进行稀释病毒时，应选择可被中和的最大病毒量，但至少不得超过生产接种时毒种的稀释倍数。
进行病毒中和时，应采用非人源和非猴源（特殊情况除外）的特异性抗体中和本病毒，为降低样品中外源病毒被中和的可能性，最好采用单克隆抗体，中和过程不应干扰外源病毒的检测。
制备抗血清（或单克隆抗体）所用的免疫原应采用与生产疫苗（或制品）不同种而且无外源因子污染的细胞（或动物）制备。
如果病毒曾在禽类组织或细胞中繁殖过，则抗体不能用禽类来制备。
若用鸡胚，应来自SPF 鸡群。
病毒种子批外源因子检查⒈动物试验法⑴小鼠试验法取15～20g小鼠至少10只，取病毒种子批或经抗血清中和后的病毒悬液，每只脑内接种0.03ml，同时腹腔接种0.5ml，至少观察21天。
解剖每只在试验24小时后死亡或有患病体征的小鼠，直接肉眼观察其病理改变，并将有病变的相应的组织制成悬液通过脑内和腹腔接种另外至少5只小鼠，并观察21天。
接种24小时内小鼠死亡超过20%，试验无效。
在观察期内最初接种的乳鼠以及每个盲传组的小鼠至少有80%健存，且小鼠未出现与待测毒种无关的可传播性因子或其他病毒感染，为符合要求。
⑵乳鼠试验法取出生24小时内的乳鼠至少10只，取病毒种子批或经抗血清中和后的病毒悬液，脑内接种0.01ml，同时腹腔接种至少0.1ml。
每天观察至少14天。
解剖每只在试验24小时后死亡或有患病体征的乳鼠，直接肉眼观察其病理改变，并取有病变的相应的组织和脑、脾制备成悬液通过脑内和腹腔接种另外至少5只乳鼠，并每天观察至接种后14天。
【最新精选】外源性DNA残留量测
外源性DNA残留量检测1.目的描述外源性DNA残余量检定（地高辛法）的操作过程和注意事项。
2.材料及设备2.1试剂试液无水乙醇。
Tris饱和酚。
三氯甲烷。
异戊醇。
吐温20。
20%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液，用盐酸调pH至7.2。
0.2mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液（pH8.0）。
3mol/L醋酸钠溶液。
20×SSC溶液：0.3mol/L柠檬酸钠,3mol/L NaCl,调pH至7.0。
Buffer I (0. lmol/L Tris-HCl，0.15mol/L NaCI，用固体NaOH调pH7. 5)。
Buffer Ⅲ (100mmo1/L Tris-HCl 100mmo1/L NaCI, 50mmo1/LMgCl2，pH9. 5)。
TE缓冲液（pH8.0)：量取1mol/L Tris溶液（pH8.0）10ml,0.5mol/L EDTA溶液（pH8.0）2ml, 加灭菌水至1000ml。
ECORI内切酶（宝生物工程（大连）有限公司）BamHI内切酶（宝生物工程（大连）有限公司）2.2材料和用具细菌基因组DNA提取试剂盒（天根生物）批号H6611琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（天根生物）批号I7908外源DNA残留量检测试剂盒（Roche）货号：11745832910和1109365791尼龙膜（PALL 0.45微米）点样器（Bio-RAD;Model No:Bio-Dot SF Cell;Serial No:160BR07680）、移液器、tip 头、恒温水浴锅、超净工作台、冰盒、离心机、三维旋混仪、电磁炉3.操作原理用随机启动法，将地高辛甙元标记的脱氧尿苷三磷酸掺入未标记DNA，通过一个手臂将dUTP与载体半抗原地高辛甙元连接起来（dig-dUTP）。
与目的DNA杂交后，杂交分子用酶联免疫法检测；应用抗体－酶联接物（抗地高辛甙元－碱性磷酸酶复合物）和随后用酶促颜色反应使5－溴－4－氯－3－吲哚磷酸（BCIP）和氮蓝四唑（NBT）显色。
药典三部(2015版)-通则-外源病毒因子检查法
3302 外源病毒因子检查法病毒类制品在毒种选育和生产过程中，经常使用动物或细胞基质培养，因此，有可能造成外源因子的污染。
为了保证制品质量，需要对毒种和对照细胞进行外源病毒因子的检测。
对病毒主种子批或工作种子批，应抽取足够检测试验需要量的供试品进行外源病毒因子检测。
根据病毒的特性，有些检测需要在试验前中和病毒。
病毒中和时尽可能不稀释，但当中和抗体不能有效中和病毒而需要进行稀释病毒时，应选择可被中和的最大病毒量，但至少不得超过生产接种时毒种的稀释倍数。
进行病毒中和时，应采用非人源和非猴源（特殊情况除外）的特异性抗体中和本病毒，为降低样品中外源病毒被中和的可能性，最好采用单克隆抗体，中和过程不应干扰外源病毒的检测。
制备抗血清（或单克隆抗体）所用的免疫原应采用与生产疫苗（或制品）不同种而且无外源因子污染的细胞（或动物）制备。
如果病毒曾在禽类组织或细胞中繁殖过，则抗体不能用禽类来制备。
若用鸡胚，应来自SPF 鸡群。
病毒种子批外源因子检查⒈动物试验法⑴小鼠试验法取15～20g小鼠至少10只，取病毒种子批或经抗血清中和后的病毒悬液，每只脑内接种0.03ml，同时腹腔接种0.5ml，至少观察21天。
解剖每只在试验24小时后死亡或有患病体征的小鼠，直接肉眼观察其病理改变，并将有病变的相应的组织制成悬液通过脑内和腹腔接种另外至少5只小鼠，并观察21天。
接种24小时内小鼠死亡超过20%，试验无效。
在观察期内最初接种的乳鼠以及每个盲传组的小鼠至少有80%健存，且小鼠未出现与待测毒种无关的可传播性因子或其他病毒感染，为符合要求。
⑵乳鼠试验法取出生24小时内的乳鼠至少10只，取病毒种子批或经抗血清中和后的病毒悬液，脑内接种0.01ml，同时腹腔接种至少0.1ml。
每天观察至少14天。
解剖每只在试验24小时后死亡或有患病体征的乳鼠，直接肉眼观察其病理改变，并取有病变的相应的组织和脑、脾制备成悬液通过脑内和腹腔接种另外至少5只乳鼠，并每天观察至接种后14天。
外源性DNA残留量测定法(qPCR法)
重组抗人表皮生长因子受体人源化单克隆抗体外源性DNA残留量测定法(ｑＰCＲ法）1原理实时定量ＰCＲ（ｑＰCR)扩增分2个阶段，指数增长阶段与之后出现得非指数平台阶段。
在指数增长阶段，每个循环ＰCR产物量大约增加一倍。
然而，随着反应得进行,反应体系组成成分得消耗，其中得一种或多种成分限制反应，产物增长速度变慢,反应进入平台期.反应最初，虽然产物呈指数增长，但就是荧光处于背景水平,检测不到荧光增加。
但积累了足够得扩增产物，才可检测到得荧光信号，这个循环数叫初始循环数，即C T。
C T值主要由扩增反应体系中模板得初始浓度决定得。
如果模板初始浓度高，只需要较少得扩增循环就可以积累足够得产物，产生高过背景得荧光信号，因此,反应就有一个小或早出现得C T;相反,如果模板初始浓度低，需要较多得扩增循环才能产生高过背景得荧光信号,反应就有一个大或迟出现得C T。
两者之间关系得建立就是qPＣＲ用于定量得依据。
2主要仪器3主要试剂4溶液配制4、1 蛋白酶K混合液（新配)裂解混合液（新配）4、2注：ＤNA标准品溶液4℃放置保存1天，—20℃放置保存1周.5测定方法５、１样品处理5．1.1除蛋白1）在2mｌ离心管中加入100μl样品；2）每１０0μｌ得样品中加入70μl得蛋白酶Ｋ混合液,混合均匀，56℃水浴3０min；3）每100μl得样品中加入360μl得裂解液，室温裂解2小时以上。
5.1．2 DNA得纯化１)磁珠使用前于37℃温浴10ｍin，高速涡旋，彻底悬浮磁珠;2）每1０0μｌ得样品加入３0μl得磁珠悬浮液；3）每100μl得样品加入30０μｌ得BｉｎdinｇSoｌｕｔion，涡旋混合5min；4)1２000r/min离心30sec,将离心管放置于磁力架上,静置5min直至溶液清澈,弃上清；5）从磁力架上取下离心管,加入３０0μl 得Ｗash Bu ｆｆｅr ，涡旋混合5 sec ；6）１200０ｒ/min 离心30sec ，将离心管放置于磁力架上,静置2min,弃上清; 7）重复步骤６)1次,打开离心管得盖子，室温下风干;8）加入50μl 得Ｅｌution Bu ｆｆｅr ，高速涡旋10 sec,70℃处理１0ｍin ，在温浴过程中,涡旋２～３次； 9）1200０r/mi ｎ离心30ｓｅc,将离心管放置于磁力架上，静置２ｍｉn,将含有洗脱DNA 得液体转移到新得1、5ｍl 得离心管中，用于进行qP ＣＲ反应。
《中国药典》2020版—通则3407外源性DNA残留量测定法第三法公示稿
《中国药典》2020版—通则3407外源性DNA残留量测定法第三法公示稿通则3407 外源性DNA 残留量测定法第三法公示稿定量PCR 法PCR 反应过程中可通过荧光标记的特异性探针或荧光染料掺入而检测PCR产物量，通过连续监测反应体系中荧光数值的变化，可即时反映特异性扩增产物量的变化。
在反应过程中所释放的荧光强度达到预设的阈值时，体系的PCR 循环数(Ct 值)与该体系所含的起始DNA 模板量的对数值呈线性关系。
采用已知浓度的DNA 标准品，依据以上关系，构建标准曲线，对特定模板进行定量分析，测定供试品中的外源DNA 残留量。
试剂（1）PCR 反应预混液（2×) 含MgCl2、扩增酶、dNTPs 等，按试剂使用说明书要求配制，或符合条件的其它配方预混液。
（2）TE 缓冲液（pH 8.0）同方法一。
（3）荧光标记探针用TE 缓冲液稀释至100μmol/L，-20℃保存。
（4）正向和反向序列检测引物用TE 缓冲液稀释至100μmol/L，-20℃保存。
（5）碘化钠溶液（6mol/L 碘化钠，15 mmol/L EDTA，0.5%月桂酰肌氨酸钠，25mmol/L Tris-HCl pH 8.0 以及35μg/ml 糖原）：配制100ml 碘化钠溶液，先取干净的烧杯置于磁力搅拌器上，依次加入以下成分，同时用搅拌子不断搅拌混匀：50ml 的无核酸酶水，3.0 ml 的0.5 mol/L EDTA 溶液，2.5ml 的1 mol/L Tris-HCl pH 8.0，缓慢加入89.93g 的碘化钠，加入适量的无核酸酶水至100 ml（可根据需要等比增加或减少）。
用0.2 微米孔径的尼龙膜过滤溶液。
避光4℃（6）2%蛋白酶K 溶液同方法一。
（7）蛋白酶K 缓冲液（10×），同方法一但不加氯化钠，或按蛋白酶K 试剂说明书要求配制。
（8）推荐的检测探针及引物CHO 细胞探针: 5ˊFAM-ACTCGCTCTGGAGACCAGGCTGGC-TAMRA3ˊ正向引物: 5ˊ-TGTGTAGCTTTGGAGCCTATCCT-3ˊ反向引物: 5ˊ-CAGCACTCGGGAGGCAGA-3ˊ大肠杆菌探针: 5ˊ FAM-CGGTGCTGCGACGGCGGAGT-TAMRA3ˊ正向引物: 5ˊ-GAAAGTAACACCAGCGTGCG-3ˊ反向引物: 5ˊ-CCAATGCATTAACGCTGGCA-3ˊ毕赤酵母探针: 5ˊ FAM-TAACTACGGTTGATCGGACGGGAAA-TAMRA3ˊ正向引物: 5ˊ-ACACTACTCGGTCAGGCTCT-3ˊ反向引物: 5ˊ-TTTCGGTTGCGGCCATATCT-3ˊNS0 细胞探针: 5ˊ FAM-AGGGCCCCCAATGGAGGAGCT-T AMRA3ˊ正向引物: 5ˊ-CCCCTTCAGCTCCTTGGGTA-3ˊ反向引物: 5ˊ-GCCTGGCAAATACAGAAGTGG-3ˊVero 细胞探针: 5ˊ FAM-CCTTCAAGAAGCCTTTCGCTAAG-TAMRA3ˊ正向引物: 5ˊ-GCTTTCTGAGAAACTGCTCTGTGT-3ˊ反向引物: 5ˊ-GGAAGATATTTCCTTTTTCACCATAGC-3’（9）DNA 共沉淀染色剂（10）清洗液A 按试剂(5)方法配制,含碘化钠37.5ｇ，1 mol/L Tris 缓冲液（pH8.4）) 2.0ml，0.5M EDTA 溶液(pH8.4) 2.0ml，异丙醇50ml，N-月桂酰肌氨酸钠0.5% (w/v)，加去离子水至总体积（11）清洗液B 含有35 μg/ml 糖原的乙醇（70%）水溶液。
外源性DNA残留检测原理及过程
杂交
1.预杂交 ：将点样的膜放入杂交液中40℃下预杂交30分钟。 2 .探针变性 ：将探针放入100℃水浴5 min，即刻放入冰盒冷却 变性； 3 .将变性的DNA探针加入预热的杂交缓冲液 DIG Easy Hyb (约 需3.5 mL/100 cm2 膜面积) ，充分混匀。 4 .点样膜经预杂交后，丢弃预杂交溶液，代之以探针/杂交混合 物。 5 .置40℃ 温育16 小时以上。 6. 使用过的DNA探针杂交缓冲液 DIG Easy Hyb可以保存在15～-25℃中反复使用几次,使用前在68℃加热10分钟使用。
装膜点样
1.将裁剪好的膜预先用TE缓冲液浸湿，然后把杂交膜装载于BioRad 点样器上。 2 .所有阳性和阴性对照DNA、以及待检样本分别置100℃水浴10 分钟后即刻冰浴冷却。 3. 以8000rpm转速 离心 5 分钟。 4 .取上清液点样，阴性对照和阳性对照点样量100 μL，供试品为 实际的计算量。DNA标准阳性对照范围从 100 ng 至 10 pg /点。 5.阳性对照梯度点为一排，供试品、阴性对照另点一排；点样完 毕后，再用TE缓冲液冲洗一次，取出杂交膜用铅笔做好标记。 6.膜放到紫外灯下，紫外交联1个小时，然后将膜放入烤箱80℃ 烘烤2小时固定DNA。
–
数据分析及结果判定
7. 阳性对照梯度是否清晰可见，而且所生色斑深浅应具有色差梯度。 8.样品色斑与阳性对照色斑比较，确定样品DNA量的范围。 9. 报告结果，抗体原液呈现的斑点颜色应浅于阳性对照100pg点斑点颜 色。
图例（未酶切）
酶切后
结束
谢谢
DNA变性过程
理论详解
变性DNA只要消除变性条件，二条互补链还可 以重新结合，恢复原来的双螺旋结构，这一过 程称为复性（renaturation）。通常DNA热变 性后，将温度缓慢冷却，并维持在比Tm低 25～30℃左右时，变性后的单链DNA即可恢 复双螺旋结构，因此，这一过程又叫做退火。 复性后的DNA，理化性质都能得到恢复。倘若 DNA热变后快速冷却，则不能复性
《中国药典》2015年版勘误表(第二批)
《中国药典》2015年版勘误表
大豆磷脂（供注射用）469【微生物限度】取本品，……每1g供试品
中除细菌、霉菌及酵母菌数不得过
100cfu，……
【微生物限度】取本品，……每1g供试品中
除需氧菌总数、霉菌及酵母菌数不得过
100cfu，……
油酸钠528【微生物限度】……，再用预热至45℃的
无菌氯化钠-蛋白胨冲洗液（pH7.0）冲洗
液冲洗二次，每次100ml，取膜，贴膜培养
检查细菌数；……
【微生物限度】……，再用预热至45℃的无
菌氯化钠-蛋白胨冲洗液（pH7.0）冲洗液冲
洗二次，每次100ml，取膜，贴膜培养检查
需养菌总数；……
粉状纤维素551
续表续表
硅化微晶纤维素559【鉴别】（3）……，缓缓加入钼酸铵溶液
（，……在搅拌下缓缓加入钼酸32ml与水
40ml的混合溶液中，……）2ml，……
【鉴别】（3）……，缓缓加入钼酸铵溶液
（，……在搅拌下缓缓加入硝酸32ml与水
40ml的混合溶液中，……）2ml，……
微晶纤维素605
续表
聚山梨酯80（供注射用）625【脂肪酸组成】……。
分别取肉豆蔻酸甲
酯、棕榈酸甲酯、棕榈油酸甲酯、硬脂酸
甲酯、亚油酸甲酯、亚麻酸甲酯以及油酸
甲酯对照品适量，加正庚烷溶解并制成每
1ml中各含0.1g的溶液，……
【脂肪酸组成】……。
分别取肉豆蔻酸甲酯
、棕榈酸甲酯、棕榈油酸甲酯、硬脂酸甲酯
、亚油酸甲酯、亚麻酸甲酯以及油酸甲酯对
照品适量，加正庚烷溶解并制成每1ml中各
含0.01mg的溶液，……。
外源DNA残留量测定(荧光定量PCR法)标准操作规程SOP
外源性DNA 残留量测定法（荧光定量PCR 法）标准操作规程文件编码：XXXXXX目录1. 目的.................................................................. 1..2. 范围.................................................................. 1..3. 职责.................................................................. 1..4. 依据.................................................................. 1..5. 定义.................................................................. 1..6. 内容.................................................................. 1..6.1. 原理 ............................................................ 1.6.2. 实验材料 ........................................................ 1..6.3. 操作步骤 ........................................................ 3..6.4. 结果计算 ........................................................ 6..6.5. 判定标准 ........................................................7..6.6. 注意事项 ........................................................7..7. 相关文件.............................................................. 7.8. 附件.................................................................. 7..9. 变更历史.............................................................. 7.1. 目的1.1. 规范外源性DNA 残留量测定法（荧光定量PCR 法）的操作过程。
2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》第四部(1)
2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》的内容（以下红色标记的内容更需要关注）序号编码目录10100 制剂通则2 0101 片剂3 0102 注射剂4 0103 胶囊剂5 0104 颗粒剂6 0105 眼用制剂7 0106 鼻用制剂8 0107 栓剂9 0108 丸剂10 0109 软膏剂乳膏剂11 0110 糊剂12 0111 吸入制剂13 0112 喷雾剂14 0113 气雾剂15 0114 凝胶剂16 0115 散剂17 0116 糖浆剂18 0117 搽剂19 0118 涂剂20 0119 涂膜剂21 0120 酊剂22 0121 贴剂23 0122 贴膏剂24 0123 口服溶液剂口服混悬剂口服乳剂25 0124 植入剂26 0125 膜剂27 0126 耳用制剂28 0127 洗剂29 0128 冲洗剂30 0129 灌肠剂31 0181 合剂32 0182 锭剂33 0183 煎膏剂（膏滋）34 0184 胶剂35 0185 酒剂36 0186 膏药37 0187 露剂38 0188 茶剂39 0189 流浸膏剂与浸膏剂400200 其他通则41 0211 药材和饮片取样法42 0212 药材和饮片检定通则43 0213 炮制通则44 0251 药用辅料45 0261 制药用水46 0291 国家药品标准物质通则47030048 0301 一般鉴别试验49 0400 光谱法50 0401 紫外-可见分光光度法51 0402 红外分光光度法52 0405 荧光分光光度法53 0406 原子吸收分光光度法54 0407 火焰光度法55 0411 电感耦合等离子体原子发射光谱法56 0412 电感耦合等离子体质谱法57 0421 拉曼光谱法58 0431 质谱法59 0441 核磁共振波谱法60 0451 X射线衍射法610500 色谱法62 0501 纸色谱法63 0502 薄层色谱法64 0511 柱色谱法65 0512 高效液相色谱法66 0513 离子色谱法67 0514 分子排阻色谱法68 0521 气相色谱法69 0531 超临界流体色谱法70 0532 临界点色谱法71 0541 电泳法72 0542 毛细管电泳法730600 物理常数测定法74 0601 相对密度测定法75 0611 馏程测定法76 0612 熔点测定法77 0613 凝点测定法78 0621 旋光度测定法79 0622 折光率测定法80 0631 pH值测定法81 0632 渗透压摩尔浓度测定法82 0633 黏度测定法83 0661 热分析法84 0681 制药用水电导率测定法85 0682 制药用水中总有机碳测定法860700 其他测定法87 0701 电位滴定法与永停滴定法88 0702 非水溶液滴定法89 0703 氧瓶燃烧法90 0704 氮测定法91 0711 乙醇量测定法92 0712 甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法93 0713 脂肪与脂肪油测定法94 0721 维生素A测定法95 0722 维生素D测定法96 0731 蛋白质含量测定法970800 限量检查法98 0801 氯化物检查法99 0802 硫酸盐检查法100 0803 硫化物检查法101 0804 硒检查法102 0805 氟检查法103 0806 氰化物检查法104 0807 铁盐检查法105 0808 铵盐检查法106 0821 重金属检查法107 0822 砷盐检查法108 0831 干燥失重测定法109 0832 水分测定法110 0841 炽灼残渣检查法111 0842 易炭化物检查法112 0861 残留溶剂测定法113 0871 甲醇量检查法114 0872 合成多肽中的醋酸测定法115 0873 2-乙基己酸测定法1160900 特性检查法117 0901 溶液颜色检查法118 0902 澄清度检查法119 0903 不溶性微粒检查法120 0904 可见异物检查法121 0921 崩解时限检查法122 0922 融变时限检查法123 0923 片剂脆碎度检查法124 0931 溶出度与释放度测定法125 0941 含量均匀度检查法126 0942 最低装量检查法127 0951 吸入制剂微细粒子空气动力学特性测定法128 0952 黏附力测定法129 0981 结晶性检查法130 0982粒度和粒度分布测定法131 0983 锥入度测定法132 1100 生物检查法133 1101 无菌检查法134 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法135 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法136 1107 非无菌药品微生物限度标准137 1121 抑菌效力检查法138 1141 异常毒性检查法139 1142 热原检查法140 1143 细菌内毒素检查法141 1144 升压物质检查法142 1145 降压物质检查法143 1146 组胺类物质检查法144 1147 过敏反应检查法145 1148 溶血与凝聚检查法1461200 生物活性测定法147 1201 抗生素微生物检定法148 1202 青霉素酶及其活力测定法149 1205 升压素生物测定法150 1206 细胞色素C活力测定法151 1207 玻璃酸酶测定法152 1208 肝素生物测定法153 1209 绒促性素生物测定法154 1210 缩宫素生物测定法155 1211 胰岛素生物测定法156 1212 精蛋白锌胰岛素注射液延缓作用测定法157 1213 硫酸鱼精蛋白生物测定法158 1214 洋地黄生物测定法159 1215 葡萄糖酸锑钠毒力检查法160 1216 卵泡刺激素生物测定法161 1217 黄体生成素生物测定法162 1218 降钙素生物测定法163 1219 生长激素生物测定法164 1401 放射性药品检定法165 1421 灭菌法166 1431 生物检定统计法1672000 中药其他方法168 2001 显微鉴别法169 2101 膨胀度测定法170 2102 膏药软化点测定法171 2201 浸出物测定法172 2202 鞣质含量测定法173 2203 桉油精含量测定法174 2204 挥发油测定法175 2301 杂质检查法176 2302 灰分测定法177 2303 酸败度测定法178 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法179 2322 汞和砷元素形态及其价态测定法180 2331 二氧化硫残留量测定法181 2341 农药残留量测定法182 2351 黄曲霉毒素测定法183 2400 注射剂有关物质检查法1843000 生物制品相关检查方法1853100 含量测定法186 3101 固体总量测定法187 3102 唾液酸测定法（间苯二酚显色法）188 3103 磷测定法189 3104 硫酸铵测定法190 3105 亚硫酸氢钠测定法191 3106 氢氧化铝（或磷酸铝）测定法192 3107 氯化钠测定法193 3108 枸橼酸离子测定法194 3109 钾离子测定法195 3110 钠离子测定法196 3111 辛酸钠测定法197 3112 乙酰色氨酸测定法198 3113 苯酚测定法199 3114 间甲酚测定法200 3115 硫柳汞测定法201 3116 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法202 3117 O-乙酰基测定法203 3118 己二酰肼含量测定法204 3119 高分子结合物含量测定法205 3120 人血液制品中糖及糖醇测定法206 3121 人血白蛋白多聚体测定法207 3122 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法208 3123 人免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法209 3124 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法210 3125 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法211 3126 IgG含量测定法212 3127 单抗分子大小变异体测定法（CE-SDS）2133200 化学残留物测定法214 3201 乙醇残留量测定法215 3202 聚乙二醇残留量测定法216 3203 聚山梨酯80残留量测定法217 3204 戊二醛残留量测定法218 3205 磷酸三丁酯残留量测定法219 3206 碳二亚胺残留量测定法220 3207游离甲醛测定法221 3208 人血白蛋白铝残留量测定法222 3209 羟胺残留量测定法2233300 微生物检查法224 3301 支原体检查法225 3302 外源病毒因子检查法226 3303 鼠源性病毒检查法227 3304 SV40核酸序列检查法228 3305 猴体神经毒力试验229 3306 血液制品生产用人血浆病毒核酸检测技术要求2303400 生物测定法231 3401 免疫印迹法232 3402 免疫斑点法233 3403 免疫双扩散法234 3404 免疫电泳法235 3405 肽图检查法236 3406 质粒丢失率检查法237 3407 外源性DNA残留量测定法238 3408 抗生素残留量检查法（培养法）239 3409 激肽释放酶原激活剂测定法240 3410 抗补体活性测定法241 3411 牛血清白蛋白残留量测定法242 3412 大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定法243 3413 假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法244 3414 酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法245 3415 类A血型物质测定法246 3416 鼠IgG残留量测定法247 3417 无细胞百日咳疫苗鉴别试验（酶联免疫法）248 3418 抗毒素、抗血清制品鉴别试验（酶联免疫法）249 3419 A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法250 3420 伤寒Vi多糖分子大小测定法251 3421 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法252 3422 人凝血酶活性检查法253 3423 活化的凝血因子活性检查法254 3424 肝素含量测定法255 3425 抗A、抗B血凝素测定法256 3426 人红细胞抗体测定法257 3427 人血小板抗体测定法258 3500 生物活性/效价测定法259 3501 重组乙型肝炎疫苗（酵母）体外相对效力检查法260 3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法261 3503 人用狂犬病疫苗效价测定法262 3504 吸附破伤风疫苗效价测定法263 3505 吸附白喉疫苗效价测定法264 3506 类毒素絮状单位测定法265 3507 白喉抗毒素效价测定法266 3508 破伤风抗毒素效价测定法267 3509 气性坏疽抗毒素效价测定法268 3510 肉毒抗毒素效价测定法269 3511 抗蛇毒血清效价测定法270 3512 狂犬病免疫球蛋白效价测定法271 3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法272 3514 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法273 3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（E玫瑰花环形成抑制试验）274 3516 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（淋巴细胞毒试验）275 3517 人凝血因子Ⅱ效价测定法276 3518 人凝血因子Ⅶ效价测定法277 3519 人凝血因子Ⅸ效价测定法278 3520 人凝血因子Ⅹ效价测定法279 3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法280 3522 重组人促红素体内生物学活性测定法281 3523 干扰素生物学活性测定法282 3524 重组人白介素-2生物学活性测定法283 3525 重组人粒细胞刺激因子生物学活性测定法284 3526 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法285 3527 重组牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法286 3528 重组人表皮生长因子生物学活性测定法287 3529 重组链激酶生物学活性测定法288 3530 鼠神经生长因子生物学活性测定法289 3531 尼妥珠单抗注射液生物学活性测定法290 3532 重组人白介素-11生物学活性测定法291 3533 注射用A型肉毒毒素成品效价测定法（平行线法）2923600 特定生物原材料/动物293 3601 无特定病原体鸡胚质量检测要求294 3602 实验动物微生物学检测要求295 3603 实验动物寄生虫学检测要求296 3604 新生牛血清检测要求297 3605 细菌生化反应培养基2983700299 3701 生物制品国家标准物质目录3008000 试剂与标准物质301 8001 试药302 8002 试液303 8003 试纸304 8004 缓冲液305 8005 指示剂与指示液306 8006 滴定液307 8061 对照品对照药材对照提取物308 8062 对照品标准品3099000 指导原则310 9001 原料药物与制剂稳定性试验指导原则311 9011 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则312 9012 生物样品定量分析方法验证指导原则313 9013 缓释、控释和迟释制剂指导原则314 9014 微粒制剂指导原则315 9015 药品晶型研究及晶型质量控制指导原则316 9101 药品质量标准分析方法验证指导原则317 9102 药品杂质分析指导原则318 9103 药物引湿性试验指导原则319 9104 近红外分光光度法指导原则320 9105 中药生物活性测定指导原则321 9106 基于基因芯片的药物评价技术与方法指导原则322 9107 中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则323 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则324 9202 非无菌产品微生物限度检查指导原则325 9203药品微生物实验室质量管理指导原则326 9204 微生物鉴定指导原则327 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则328 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则329 9301注射剂安全性检查法应用指导原则330 9302 中药有害残留物限量制定指导原则331 9303 色素测定法指导原则332 9304 中药中铝、铬、铁、钡元素测定指导原则333 9305 中药中真菌毒素测定指导原则334 9501 正电子类放射性药品质量控制指导原则335 9502 锝［99mTc］放射性药品质量控制指导原则336 9601 药用辅料功能性指标研究指导原则337 9621 药包材通用要求指导原则338 9622 药用玻璃材料和容器指导原则339 9901 国家药品标准物质制备指导原则。
门冬胰岛素外源性DNA残留量的荧光法检测
门冬胰岛素外源性DNA残留量的荧光法检测目的建立门冬胰岛素外源性DNA残留量的荧光检测方法，用于门冬胰岛素的质量控制。
方法参照《中国药典》三部附录及相关资料方法，对门冬胰岛素外源性DNA残留的荧光检测法进行研究，确定检测方法的最适条件，并对方法的线性、加样回收率、精密度、耐用性、重复性等方面进行方法学验证。
结果建立了门冬胰岛素原料药中外源性DNA残留量的荧光检测方法，并进行了方法学验证。
结论该方法操作简便、准确快捷，且无需标准宿主DNA，可用于门冬胰岛素质量标准中外源性DNA残留量的检测方法。
[Abstract] Objective To develop a fluorescence method of determining residual DNA in recombinant Insulin Aspart for its quality control. Methods According to CP (2010 edition) and relative methods, fluorescence method was researched .The method validation was studied from standard curve,recovery,precision,reproducibility etc. Results Fluorescence method of determining residual DNA was developed and the method was valided. Conclusion This method is convenient,fast and good reproducibility, it can be used determination of residual DNA in recombinant insulin aspart .[Key words] Fluorescence method;Residual exogenous DNA;Insulin aspart;Quality control门冬胰岛素是一种新型的人胰岛素改构产物，通过基因工程重组技术、利用大肠杆菌或酵母表达得到的一种重组蛋白类药物。
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3407 外源性DNA残留量测定法
在进行外源性DNA残留量测定时，可根据供试品具体情况选择下列任何一种方法进行测定。
第一法 DNA探针杂交发
供试品中的外源性DNA经变性为单链后吸附于固相膜上，在一定条件下可与相匹配的单链DNA复性而重新结合成为双链DNA，称为杂交。
将特异性单链DNA探针标记后，与吸附在固相膜上的供试品单链DNA杂交，并使用与标记物相应的显示系统显示杂交结果，与已知含量的阳性DNA对照比对后，可测定供试品中外源性DNA残留量。
试剂⑴ DNA标记和检测试剂盒
⑵ DNA杂交膜尼龙膜或硝酸纤维素膜。
⑶ 2% 蛋白酶K溶液称取蛋白酶K 0.20g，溶于灭菌水（电阻率大于
18.2MΩ·cm）10ml中，分装后贮藏于﹣20℃ 备用。
⑷ 3% 牛血清白蛋白溶液称取牛血清白蛋白0.30g，溶于灭菌水（电阻率大于18.2MΩ·cm）10ml中。
⑸ 1 mol/L 三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液（pH8.0）用适宜浓度盐酸溶液调pH值至8.0。
⑹ 5.0 mol/L氯化钠溶液。
⑺ 0.5 mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液（pH8.0）用10mol/L氢氧化钠溶液调pH值至8.0。
⑻ 20% 十二烷基硫酸钠（SDS）溶液用盐酸调pH值至7.2。
⑼ 蛋白酶缓冲液（pH8.0）量取1 mol/L Tris溶液1.0ml（pH8.0）、
5.0 mol/L氯化钠溶液2.0ml、0.5 mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液（pH8.0）
2.0ml、20% SDS溶液2.5ml、加灭菌水（电阻率大于18.2MΩ·cm）至10ml。
如供试品遇氯化钠溶液发生沉淀反应，可免加氯化钠。
⑽ TE缓冲液（pH8.0）量取1 mol/L Tris溶液（pH8.0）10ml、0.5 mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液（pH8.0）2ml，加灭菌水（电阻率大于
18.2MΩ·cm）至1000ml。
⑾ 1% 鱼精DNA溶液精密称取鱼精DNA 0.10g，置10ml量瓶中，用TE缓冲液溶解并稀释至刻度，摇晃，用7号针头反复抽打，以剪切DNA成为小分子，分装后贮藏于﹣20℃ 备用。
⑿ DNA稀释液取1% 鱼精DNA溶液50μl，加TE缓冲液至10ml。
用于探针标记和阳性对照的DNA制备用于探针标记和阳性对照的DNA，由生产供试品用的传代细胞、工程菌或杂交瘤细胞提取纯化获得，其提纯和鉴定可参考下述推荐方案进行，具体方法可参考《分子克隆实验指南》（［美］J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译，科学出版社，2002）或《精编分子生物学实验指南》（［美］F.奥斯伯等著，颜子颖、王海林译，科学出版社，1998）。
将待提取的细胞基质悬液的细胞浓度调整为每1ml 约含107个细胞，如果为细菌，则将其浓度调整为每1ml 约含108个细胞。
量取悬液1ml ，离心，在沉淀中加裂解液400ul混匀，37℃ 作用12～24小时后，加入饱和苯酚溶液450μl，剧烈振摇混匀，以每分钟10000转离心10分钟，转移上层液体，以饱和苯酚溶液450μl重复抽提1次；转移上层液体，加入三氯甲烷450μl，剧烈振摇混匀，以每分钟10000转离心10分钟；转移上层液体，加入pH5.2的3mol/L醋酸钠溶液40μl，充分混合，再加入﹣20℃ 以下的无水乙醇1ml ，充分混合，﹣20℃以下
作用2小时，以每分钟15000转离心15分钟；用适量﹣20℃ 70% 乙醇溶液洗涤沉淀1次，以每分钟15000转离心15分钟，弃上清液，保留沉淀，吹至干燥后，加适量灭菌TE缓冲液溶解，RNase酶切，苯酚-三氯甲烷抽提，分子筛纯化DNA，即得。
用1% 琼脂糖凝胶电泳法和分光光度法鉴定阳性对照品的DNA纯度；应无RNA 和寡核苷酸存在；A260/A280比值应在1.8～2.0之间（测定时将供试品稀释至
A260为0.2～1.0）。
用于阳性对照和标记探针的DNA在使用前应进行酶切或超声处理，使其片段大小适合于DNA杂交和探针标记。
阳性对照品的DNA浓度按下式计算：
DNA浓度（μg /ml）=50×A260
阳性对照品可分装于适宜的小管中，﹣20℃ 以下保存，长期使用。
探针的标记按试剂盒使用说明书进行。
测定法⑴ 蛋白酶K预处理按下表对供试品、阳性对照和阴性对照进行加样，混合后于37℃ 保温4小时以上，以保证酶切反应完全。
注意事项供试品的稀释
根据成品最大使用剂量，用DNA稀释液将供试品（原液）稀释至每100μl含1人份剂量；如成品最大使用剂量较大，而供试品的蛋白质含量较低，可用DNA稀释液将供试品稀释至每100μl含1/10人份剂量或每100μl含1/100人份剂量。
D1、D2、D3为稀释的阳性DNA对照。
用DNA稀释液稀释至每 1ml中含DNA 1000ng，然后依次10倍稀释成10ng/100μl（D1）、1ng/100μl（D2）、
100pg/100μl（D3）3个稀释度；如成品使用剂量较大，而且DNA限量要求
（100pg/剂量）较严格时，则需要提高DNA检测灵敏度，相应的阳性DNA对照应稀释成100pg/100ul（D1）、10pg/100ul（D2）、1pg/100ul（D3）三个稀释度。
阴性对照为DNA稀释液，空白对照为未进行蛋白酶K预处理的TE缓冲液。
当供试品1/100人份剂量大于100μl时，终体积也随之增大，一般终体积为供试品体积的1倍左右，供试品体积和终体积相差过小，可能会影响蛋白酶K的活性。
2% 蛋白酶K溶液和蛋白酶缓冲液的比例为1︰20，蛋白酶缓冲液和终体积的比例为1︰10。
加入3%牛血清白蛋白溶液适量，是为了使阳性对照和阴性对照中含有一定的蛋白质，与供试品（通常为蛋白质）的酶切条件保持一致；如供试品为其他物质，则应改用其他相应物质。
若预处理后的供试品溶液中的蛋白质干扰本试验，可用上述饱和苯酚溶液抽提法或其他适宜方法提取供试品DNA（阳性对照、阴性对照也应再次提取DNA，与供试品溶液平行）。
无论采用何种方式抽取，Vero细胞DNA参考品至少应能达到10pg的检测限。
供试品为疫苗制品时，供试品和阳性对照均采用TE缓冲液进行稀释。
阴性对照为TE缓冲液。
⑵ 点膜用TE缓冲液浸润杂交膜后，将预处理的供试品、阳性对照、阴性对照与空白对照置100℃水浴加热10分钟，迅速冰浴冷却，以每分钟8000转离心5秒。
用抽滤加样器点样于杂交膜（因有蛋白质沉淀，故要视沉淀多少确定加样量，以避免加入蛋白质沉淀。
所有供试品与阳性对照、阴性对照、空白对照加样体积应一致，或按同样比例加样）。
晾干后可采用紫外交联法或置80℃真空干烤1小时以上。
⑶ 杂交及显色按试剂盒使用说明书进行。
结果判定阳性对照应显色，其颜色深度与DNA含量相对应，呈一定的颜色梯度；阴性对照、空白对照应不显色，或显色深度小于阳性DNA对照D3，试验成立。
将供试品与阳性对照进行比较，根据显色的深浅判定供试品中外源性DNA的含量。
第二法荧光染色法
应用双链DNA荧光染料与双链DNA特异结合形成复合物，在波长480nm激发下产生超强荧光信号，可用荧光酶标仪在波长520nm处进行检测，在一定的DNA浓度范围内以及在该荧光染料过量的情况下，荧光强度与DNA浓度成正比，根据供试品的荧光强度，计算供试品中的DNA残留量。
试剂⑴ 1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液（pH7.5）用盐酸调pH 值至7.5。
⑵ 0.5mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液（pH7.5）用10mol/L氢氧化钠溶液调pH值至7.5。
⑶ TE缓冲液（pH7.5）量取1mol/L Tris溶液（pH7.5）1.0ml、
0.5mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液（pH7.5）0.2ml，加灭菌注射用水至100ml。
⑷ 双链DNA荧光染料按试剂使用说明书配制。
⑸ DNA标准品取DNA标准品适量溶于TE缓冲液中，制成50μg/ml DNA
标准品，于-20℃保存。
DNA标准品浓度根据下式计算：
DNA浓度（μg/ml）=50×A260
DNA标准品溶液的制备用TE缓冲液将DNA标准品配成0ng/ml、
1.25ng/ml、
2.5ng/ml、5.0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml的标准品溶液。
测定法精密量取DNA标准品溶液和供试品溶液各400μl于1.5ml离心管中，分别加入新配制的双链DNA荧光染料400μl，混匀后，避光室温放置5分钟。
取250μl上述反应液于96孔黑色酶标板中，并做3个复孔。
用荧光酶标仪在激发波长480nm、发射波长520nm处测定荧光强度。
以TE缓冲液测得的荧光强度为本底，测定和记录各测定孔的荧光值。
以标准品溶液的浓度对其相应的荧光强度作直线回归，求得直线回归方程（相关系数应不低于0.99），将供试品溶液的荧光强度代入直线回归方程，求出供试品中DNA残留量。
注意事项⑴ DNA残留量在1.25～80ng/ml范围内，本法线性较好，因此供试品DNA残留量在该范围内可定量测定；当DNA残留量低于1.25ng/ml时应为限量测定，表示为小于1.25ng/ml。
⑵ 供试品首次应用本法测定时需要进行方法学验证，验证内容至少包括精密度试验和回收率试验。
若供试品干扰回收率和精密度，应采用适宜方法稀释或纯化DNA（可参见本项目第一法）以排除干扰，直至精密度试验和回收率试验均符合要求。
需要纯化DNA后再进行测定的供试品，每次测定均应从纯化步骤起增加回收率试验，并用回收率对测定结果进行校正。