植物染色体毒理实验 蚕豆根尖微核实验
蚕豆根尖微核测试技术
7 镜检及微核识别 找到分生组织区细胞分散均匀、膨大、分裂相对多的部位， 再转到高倍镜（物镜40X）下进行观察 微核的识别标准 （1）凡是主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 （2）小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态可以是圆形、椭圆形、不规则形。 每一处理观察5个根尖，每个根尖观察1000个细胞，并计数 其中有微核的细胞数（微核千分率）
蚕豆根尖微核测试技术
实验原理
蚕豆根尖细胞在分裂时染色体的复制过程中常 发生断裂，断裂下来的片段在正常情况下能自行 复位愈合，如果此时受到外界诱变因子的作用， 会阻碍染色体的愈合，于是会出现微核，由于产 生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，所 以可用微核出现的百分率来评价环境诱变因子对 生物遗传物质影响的程度。
4 “污染指数”判别：此方法可避免因实验条件等因 素带来的微核千分率本底的波动，故较宜适用。 污染指数=样品实测微核千分率平均值/对照组微 核千分率平均值 0-1.5 基本没有污染 1.5-2.0 轻污染 2-3.5中污染 3.5以上重污染
பைடு நூலகம்
结果分析与报告
1 各测试样品微核千分率的计算 2 如果被检测样品不多，可直接用各样品微核千分率平 均值与对照组比较（t检验），从差异的显著性判断 水质污染与否。 3 如果监测的样品较多，可先用方差分析（F检验）看 各采样点所测的微核千分率平均值和对照的差异显 著性。如差异显著，还可进行各采样点微核差异显 著性的多重比较，看被检样品微核千分率平均值差 异显著性的分组情况，以归纳划分这些不同采样点 不同级别的污染程度。
3 根尖细胞恢复培养 处理后的种子用自来水（或蒸馏水）浸洗三次，每次2～3分 钟。洗净后再置入辅有湿脱脂棉中，25℃下再恢复培养 22～24h。 4 固定 将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用卡诺 氏固定液固定24小时。固定后的根如不及时制片，可换入 70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存备用。 5 解离：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5分钟，吸 净蒸馏水，加入5mol/L盐酸将幼根浸没，室温下酸解10分 钟，幼根软化即可。 6染色 吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次1～2分钟。截下 1～2mm左右长的根尖，滴加席夫氏试剂（在生物实验可 以和经过酸化的DNA 发生反应，DNA 被染成紫红色，而 不和核仁，细胞质发生反应，因此可以来鉴定DNA的存 在。），染色5～8分钟，加盖玻片，压片观察
蚕豆根尖微核检测
蚕豆根尖微核检测一、实验背景和目的本组实验运用蚕豆根尖微核检测技术，分别用不同牌子0.25mg/mL洗发露（欧莱雅、力士、沙宣）对蚕豆根尖做处理，同时以0.25mg/mL的醋酸铅溶液处理蚕豆根尖做阳性对照，自来水作阴性对照。
洗发露是我们生活中的日用品，洗发露主要成分为：界面活性剂，也就洗干净的成分。
以SLS及sls的乙基衍生物类：月桂醇聚醚硫酸酯钠盐、十二酯硫酸铵（月桂酸硫酸酯纳）为主，SLS争议很多，主要表现在对皮肤的刺激性，容易让你头皮变得敏感，虽然SLS也有用在牙膏中，但是在舒适达等国外牙膏中，是没有SLS的存在的，从这一点上，也看出SLS的刺激性是厂商的心知肚明的。
微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。
微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。
微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。
一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。
有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。
这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。
已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。
所以许多人认为可用简易的周期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。
由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出等都存在污染环境的可能性，欲了解这些因素对机体潜在的遗传危害，需要有一套高度灵敏，技术简单易行的测试系统来监测环境的变化。
只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。
植物染色体安全毒理实验
植物染色体安全毒理实验洗衣粉对蚕豆根尖细胞的微核诱变效应摘要本实验研究一定浓度的洗衣粉对蚕豆根尖的诱变效应试验。
采用蚕豆根尖细胞的微核试验方法，以一定浓度的洗衣粉处理蚕豆根尖，观察蚕豆根尖细胞的微核率。
学会理论联系实际的去独立设计实验、准备实验、完成实验和分析实验，从本质上理解毒物对有丝分裂过程中的影响，即毒物能抑制有丝分裂过程，导致染色体畸变效应和微核效应，产生染色体膨大，滞后染色体和染色体桥。
关键词洗衣粉蚕豆根尖微核效应染色体前言微核（micronucleus,MCN）是指位于生物细胞的细胞质中，完全与主核分开的椭圆形或圆形的微小核。
目前普遍认为微核是由外界损害因素(生物、物理、化学)作用细胞后，导致细胞染色体发生畸变，造成无着丝粒的染色体发生断裂,细胞进入下一次分裂时,染色体载玻片段不能随有丝分裂进入子细胞,而在细胞浆中形成直径小于主核的、嗜色与主核一致、完全与主核分开的圆形或椭圆形微小核，其染色同主核，但比主核淡，其直径小于主核1/3，在胞浆中形成1个或数个小核。
［1］蚕豆根尖微核试验在１９８６年已被中国环保局列为一种水环境生物测试的规范方法。
它作为一种环境致突变性的检测手段，在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。
［2］蚕豆根尖微核技术是一种检测化学药品对生物毒害的毒理学方法，具有简便、快速、重复性好和灵敏度高的优势。
利用洗衣粉处理蚕豆根尖，测定蚕豆根尖细胞的微核数和微核率，得到实验结果表明：毒物（洗衣粉）能引起染色体畸变和微核效应，根尖细胞的有丝分裂受到抑制。
［3］1材料和方法1.1实验材料立白洗衣粉、蚕豆、滤纸、纱布、培养皿、恒温箱、量筒、锥形瓶、标签、刀片、卡诺氏Ⅰ固定液（3甲醇：1冰醋酸）、1mol/L的盐酸、蒸馏水、石碳酸-品红溶液、乙醇（95%、70%）、显微镜1.2实验方法1.2.1浸泡选用适量大小均匀、色泽一致的籽粒，将试验用蚕豆种子按需要量（20粒）放人盛有自来水的烧杯中，浸泡24 h，（22～23℃）1.2.2发芽种子吸胀后松散的铺在铺有2层浸湿纱布的培养皿中，用2层浸湿纱布盖在种子上，保持湿度，在22～23℃催芽2天，待大部分初生根长至1～2 cm左右时，再选取发芽良好的种子，作为实验材料，便可进行实验。
环境污染物的蚕豆根尖微核试验
环境污染物的蚕豆根尖微核试验实验内容随着工农业生产的迅速发展，新的化学物质和工业“三废”不断地进入人们的生活环境，它们中有许多可能对遗传物质产生损害并造成致癌、致畸、致突变等遗传毒理效应的环境致突变物，可对人类健康和生存构成严重危害。
微核试验(Themicro nucleu stest, MN T)是以动植物为材料，采用细胞生物学手段，观测其出现的微核率来表示材料受遗传损伤程度的一种检测遗传毒物的方法。
微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期不能向两极移动，所以游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，即可在它附近看到一到几个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的 1 ／20 － 1 ／ 5 ，这就是微核（micronucleus ）。
微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。
由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧，而微核产生的数量又可与诱变因子剂量的强弱呈正比，因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。
蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。
蚕豆的染色体大，数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察，而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感，便于遗传毒性检测实验，因此，早在1959年，放射生物学家已经用蚕豆的根尖细胞来进行X射线的遗传损伤研究。
到了上世纪70年代，蚕豆根尖染色体畸变技术已发展得相当成熟，作为一种检测化学品遗传学毒性的方法为人们所知并被广泛采用。
蚕豆根尖微核试验在1986 年已被中国环保局列为一种环境生物测试的规范方法，它作为一种环境变异的检测手段，在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。
蚕豆根尖微核试验在对水体污染物、空气污染物、农药、重金属、化妆品、工业化学品等的致突变性检测方面，都得到了较广泛的应用，在此仅以农药污染的蚕豆微核实验为例介绍其相应的实验方法与步骤，学生在具体开展相关环境污染物的蚕豆根尖微核试验时可参考使用。
蚕豆根尖细胞微核实验报告
利用蚕豆根细胞微核技术检测洗发水的毒性09生物技术宁伟王晓刚太红桥刘经源摘要微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。
[1]蚕豆根尖细胞微核试验(Micronucleustest,MC-NT)技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核检测方法。
它是一种应用于监测环境致突变物对人体和其他生物体的遗传物质产生危害的技术,并从细胞遗传学水平上探讨植物遗传物质的改变状况与环境污染，也可以检测淡水环境的质量。
[2]关键词蚕豆根尖微核洗发水千分率蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。
它的染色体为六对相当大的染色体，而且根尖含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察。
目前，蚕豆根尖微核技术在环境致突变性检测/监测方面已经形成了一套完整的体系。
它的可靠性和灵敏性较高，且本底较低，这对于一种致突变性检测方法是十分重要的。
此外，它的检测物谱较广。
目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核：（1）凡主核大小1/3以下，与主核分离的小核；（2）小核的着色与主核相当或稍浅；（3）小核形态可为圆形，不规则等。
[3]1. 实验目的掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。
并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗发水的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆根尖细胞MCN对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。
2. 材料与方法2.1实验材料蚕豆种子、洗发水、显微镜、镊子、培养皿、剪刀、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液、NaN3等。
生态毒理学_4 实验四
实验三重铬酸钾对蚕豆根尖细胞的致畸效应研究一、实验目的1、通过对微核及染色体畸变的观察，了解重铬酸钾对蚕豆根尖细胞的致畸效应。
2、掌握微核率、染色体畸变率的计算方法及数据处理方法。
二、实验原理铬是植物需要的微量元素，而铬水平的提高又会产生毒害作用，并引起机体病变。
可溶性六价铬化物被认为是人类肺的致癌剂。
本次研究不同浓度重铬酸钾对蚕豆根尖细胞有丝分裂指数、微核率、染色体畸变率的影响，以期探明铬对植物细胞的致畸效应三、实验材料与仪器1、材料：蚕豆(Viciafaba L.)，蒸馏水，重铬酸钾，无水酒精，70％酒精，冰醋酸，碱性品红，石碳酸，甲醛，山梨醇。
2、仪器：培养皿，滤纸，培养箱，纱布，载玻片，盖玻片，指管，试剂瓶，滴瓶，镊子，解剖针，吸水纸,电子天平，烧杯，玻璃棒，水浴锅，量筒，容量瓶。
3、改良石碳酸品红：取石碳酸品红染色液2-10毫升，加入90-98毫升45%的醋酸和1.8克山梨醇。
此染色液初配好时颜色较浅，放置二周后，染色能力显著增强，在室温下不产生沉淀而较稳定。
四、实验步骤1.选择饱满、大小均匀的蚕豆种子于蒸馏水中浸泡ld，让其吸胀，然后铺展在垫有湿滤纸的培养皿中，盖上湿纱布，于培养箱中23℃下培养。
2.当根长至1cm左右，分别用蒸馏水（对照组）及25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L、250mg/L 5种浓度的重铬酸钾溶液处理4h，恢复培养24h，切取根尖，用卡诺氏固定液固定24h。
如不继续实验，可置70%乙醇于4℃冰箱中保存。
3.用蒸馏水漂洗蚕豆根尖数次，晾干，加入1.0mol/L盐酸，于50～60℃的恒温水浴中解离10-15min，至根尖呈乳白半透明时取出。
用蒸馏水漂洗3次，每次2分钟。
晾干后放入小离心管，滴上适量的改良石炭酸染色液，染色15-20min。
压片镜检，观察统计细胞有丝分裂指数、微核率（j）（每个根尖的每个区域观察100个细胞）、染色体畸变百分率（每个根尖的每个区域观察100个细胞），观察2-3个区域。
实验06 蚕豆根尖微核检测技术
实验六蚕豆根尖微核检测技术一、实验目的⒈了解微核测试原理和毒理遗传学意义。
⒉学习蚕豆根尖的微核测试技术。
二、实验原理微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/10，染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。
三、实验器材和药品松滋青皮蚕豆、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、1mol／L盐酸、改良苯酚品红染液、NaN3。
四、方法与步骤⑴浸种催芽：择饱满、均匀的种子，洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24～30h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入铺有干净、双层湿纱布的托盘内培养。
⑵用被检测液处理根尖：当初生根长到1～2cm时，选初生根生长良好的蚕豆6～8粒，分别放入蒸馏水（CK）、0.４mmol／L、0.８mmol／L、1.2mmol／L的NaN3中染毒8～12h。
⑶根尖细胞恢复培养：处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于湿棉花上恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。
以上温度均为25℃。
⑷根尖细胞固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1～1.5cm长的幼根，用Carnoys 固定液固定20～24h。
固定后的根如不及时制片，可换入70%的酒精溶液中置4℃冰箱中保存备用。
⑸酸解：用1mol／L盐酸在60±5℃下酸解8min，幼根软化即可。
⑹染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1～2分钟。
最后浸于水中。
制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴1-2滴改良苯酚品红染液染色10～15min 后，加上盖玻片，覆以吸水纸常规压片。
实验四 蚕豆根尖微核监测技术
实验四蚕豆根尖微核监测技术（VMT）一、实验目的学习如何利用高等植物间期体细胞遗传检测系统以监测环境中的致突变物。
二、原理在细胞分裂早期，若受到有害理化因子的攻击，使染色体发生断裂，产生染色体片段。
在这些片段中，有些可能重新愈合恢复正常，随细胞分裂进入子细胞，有些则由于缺乏着丝点，不能移向细胞的极部而变成圆球体，像卫星一样分布在主核的周围，这便是微核，由于染色体片段的大小和数量不一，所以微核的大小和数量也不相同。
而蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量多，因而对诱发物的反应敏感，通过显微镜下的观察和计数，便可监测环境污染。
三、器材与试剂（一）显微镜、温箱、恒温水浴箱、冰箱、手揿计数器、解剖盘、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微镜压片实验用具。
（二）试剂1.5N HCl、45%醋酸、卡诺氏液（无水乙醇3份加冰醋酸1份配成，固定根尖时随用随备）、Schiff试剂、SO洗涤液。
2四、操作步骤1、蚕豆浸种催芽（1）浸种：将当年或前一年的松滋青皮豆种子按需要量放入盛有有自来水的烧杯中，臵25℃温箱内，浸泡20~30小时，此期间至少换水2次，换用的水最好事先臵于25℃温箱中预温。
（2）催芽：待种子吸胀后，用纱布松松包裹臵解剖盘内，保持温度，在25℃的温箱中催芽12~24小时。
待种子初生根露出2~3mm时，再选取发芽良好的种子，放入铺有薄层温脱脂棉的解剖盘内，仍臵入25℃的温箱中继续催芽，注意保护湿度。
再经24~36h，种子大部分初生根长至2~3cm，根毛发育良好，这时就可用来作为监测水源样品或药物溶液突变效应之间。
2、被监测液处理根尖（1）每一处理选取6~8粒初生根尖生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，被测液浸泡住根尖即可，用自来水处理作对照，方法相同。
（2）处理时间4~6h。
3、根尖细胞恢复培养：（1）将处理的种子，用自来水浸洗8次，每次2~3min。
（2）洗净后的种子再放入新铺好湿脱脂棉的解剖盘内，按前述培养条件使根尖细胞恢复22~24h。
利用蚕豆根尖细胞的微核试验进行安全毒理评价
利用蚕豆根尖细胞的微核试验进行安全毒理评价利用蚕豆根尖细胞的微核试验进行安全毒理评价摘要当致畸性化学物质作用于细胞周期G期和S期时～可以诱发染色体畸变～作用于G12[1]期～诱发染色单体畸变。
染色体畸变后在显微镜下可观察到微核。
用洗发水、洗面奶、洗衣粉处理蚕豆根尖～并根据微核出现率与对照组进行了t检验。
结果表明:三种毒液均会诱发微核效应～其中洗发水、洗面奶基本无污染～洗衣粉属轻度污染。
关键词蚕豆根尖微核效应安全评价微核是染色体畸变的一种表现形式，为有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体片段，在分裂末期未能进入主核，便在细胞质中形成了一个或多个圆形或杏仁状结构。
微核游离于主核之外，大小在主核的1/3以下。
其折光率与细胞化学反应性质和主核一样，也具有合成DNA的能力。
许多理化因素，如辐射、化学药剂等作用于分裂细胞会诱发染色体畸变，形成微核。
通过测定微核率，可应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂、环境检测的安全评价及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。
.尤其是各种化学产品与日俱增,研究和探索与人民生产和生活密切相关的化学产品对人类健康的影响和潜在危害性[2] 有重要的意义。
1材料与方法1.1材料蚕豆宿舍同学使用的洗发水、洗面奶和洗衣粉自来水卡诺氏I液 Giemsa染色 1mol/L的HCl1.2方法1.2.1蚕豆种子的吸涨和发芽取20粒蚕豆种子，用自来水于22—23?下浸种24h。
种子吸涨后，保持湿度和温度催芽2天。
1.2.2毒液处理各取10粒种子，分别用自来水和三种毒液分别培养种子1天后，用蒸馏水将根浸洗，1洗净后再将其置于培养皿中保持温度培养24h。
1.2.3Giemsa染色和压片剪取上述种子根尖约1cm，用卡诺氏I液固定数小时。
用蒸馏水浸洗两次，吸干后加入1mol/L的HCl将幼根于60?下酸解10—15min，使幼根软化。
倒去HCl，吸干水再加Giemsa[3] —15min。
植物染色体安全毒理实验—设计型
植物染色体安全毒理实验—设计型蚕豆根尖微核实验摘要微核是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。
[1]为观察生活用水溶液水对植物染色体的影响，采用蚕豆根尖细胞的微核实验和染色体畸变实验的方法，以不同生活用品水溶液作为诱变剂，通过观察微核的形态，记录微核的数目，测定蚕豆根尖细胞的微核率，并且在实验中以未经污染处理的蚕豆根尖作为对照，来比较测定生活用品对环境中水资源的污染程度。
关键词染色体畸变微核污染指数微核千分率Chromosomal toxicity testRoot tip cells of Vicia faba micronucleus experimentAbstract: Micronuclei are eukaryotic cells by a variety of physical and chemical factors effect caused by chromosomal aberrations in interphase cells, in a form. To observe the water solution of water on plant chromosome effects, using the root tip cells of Vicia faba micronucleus test and chromosome aberration test method, with different living supplies water solution as mutagen, through the observation of micronucleus form, recording micronucleus number, determination of root tip cells of Vicia faba micronucleus rate, and in the experiment without pollution treatment Vicia faba root tip as compared to the control, determination of supplies for water resources pollution.Keywords: Chromosome aberration Micronucleus Pollution index Micronucleus rate per thousand前言微核简称(MCN)，是真核细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。
蚕豆根尖微核检测技术
蚕豆根尖微核检测技术实验名称: 方便面面饼液对蚕豆根尖微核率的影响专业年级: 2010级级生物科学成员: 尹忠围安树珺谢林芝刘伟指导教师:实验时间: 2013年4 月一、摘要用蚕豆根尖细胞微核技术检测不同种类方便面面饼液微核的诱变效果。
设置了阴性对照:自来水处理组，实验组:康师傅、统一、老坛，麻老表四组饼液分别处理蚕豆根尖，阳性对照:用0.02g/L的醋酸铅溶液处理。
发现方便面面饼液在诱导微核产生方面影响明显，醋酸铅溶液具有诱导微核产生的作用。
关键字:蚕豆根尖，方便面面饼，微核千分率，污染指数二、实验背景和目的随着现代社会的发展，越来越多的化学物质运用到人们的日常生活之中，如种类繁多的食品添加剂。
而其中有些物质具有较强的危害，如致畸，致癌，致突变等。
为了检测已存在或潜在的危害，各种检测技术应运而生。
微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。
无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。
用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。
微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。
我们采用蚕豆作为实验材料，采用植物微核技术来检测方便面面饼中添加剂对人体是否产生危害。
方便面是日常生活中经常接触到的食品，其市场占据快餐食品的大壁江山，在超市中油炸方便面与非油炸方便面占到快餐食品的60%到70%。
另一方面，在各媒体的报道中，经常出现有关方便面的食用危害，而且很有争议，所以这也是我们进行本实验的一个原因。
三、实验原理微核是间期细胞中在细胞核之外存在的一个或多个圆形或杏仁状结构，大小在主核的1/3以下，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。
20世纪70年代初，Matter和Schmid等首先用动物骨髓细胞微核率来测定怀疑具有诱变活力的化合物，并称之为微核。
利用蚕豆根尖细胞的微核实验进行安全毒理评价
利用蚕豆根尖细胞的微核试验进行安全毒理评价摘要当致畸性化学物质作用于细胞周期G1期和S期时，可以诱发染色体畸变，作用于G2期，诱发染色单体畸变。
染色体畸变后在显微镜下可观察到微核。
[1]用洗发水、洗面奶、洗衣粉处理蚕豆根尖，并根据微核出现率与对照组进行了t检验。
结果表明：三种毒液均会诱发微核效应，其中洗发水、洗面奶基本无污染，洗衣粉属轻度污染。
关键词蚕豆根尖微核效应安全评价微核是染色体畸变的一种表现形式，为有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体片段，在分裂末期未能进入主核，便在细胞质中形成了一个或多个圆形或杏仁状结构。
微核游离于主核之外，大小在主核的1/3以下。
其折光率与细胞化学反应性质和主核一样，也具有合成DNA 的能力。
许多理化因素，如辐射、化学药剂等作用于分裂细胞会诱发染色体畸变，形成微核。
通过测定微核率，可应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂、环境检测的安全评价及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。
.尤其是各种化学产品与日俱增,研究和探索与人民生产和生活密切相关的化学产品对人类健康的影响和潜在危害性有重要的意义。
[2]1材料与方法1.1材料蚕豆宿舍同学使用的洗发水、洗面奶和洗衣粉自来水卡诺氏I液Giemsa染色1mol/L的HCl1.2方法1.2.1蚕豆种子的吸涨和发芽取20粒蚕豆种子，用自来水于22—23℃下浸种24h。
种子吸涨后，保持湿度和温度催芽2天。
1.2.2毒液处理各取10粒种子，分别用自来水和三种毒液分别培养种子1天后，用蒸馏水将根浸洗，洗净后再将其置于培养皿中保持温度培养24h。
1.2.3Giemsa染色和压片剪取上述种子根尖约1cm，用卡诺氏I液固定数小时。
用蒸馏水浸洗两次，吸干后加入1mol/L的HCl将幼根于60℃下酸解10—15min，使幼根软化。
倒去HCl，吸干水再加Giemsa染液染色10—15min。
[3]1.2.4微核（micronuclei,MN.）的统计选择根尖分生组织区平铺均匀的细胞，在油镜下直接观察计数。
实验蚕豆根尖微核检测技术优秀PPT
也可以采用“污染指数”判别：此方法可避免因实验 条件等因素带来的MCN‰本底的波动，方法如下：
污染指数在0－1.5区间为基本没有污染； 污染指数在1.5－2区间为轻度污染； 污染指数在2－3.5区间为中度污染； 污染指数在3.5以上为重度污染； 如果对照本底MCN‰为10 ‰以上，可采用t检验（被 测样品较少时）检测处理液致畸效果是否明显，或以 F检验（被测样品较多时）检测各处理之间是否具有 显著的差异。
3． 处理
每一处理选取6-8粒初生根生长良好、根长一致的 种子，放入盛有待测物溶液的培养皿中，浸没根尖。 阳性因子可采用CrO3（1.0和2.5 mol/L）、NaN3 （0.5、1.0和1.5mol/L）或EMS（150和200 mol/L）， 另取一处污水作待检测物质，用自来水作对照，共9 个处理，处理根尖6～24h(处理时间可视实验需要和 被测液浓度而定)。
4．根尖细胞恢复培养
将处理后的种子用蒸馏水浸洗三次，每次2－3min。 将洗净的种子再放入铺好滤纸或脱脂棉的白磁盘内 25℃温箱中恢复培养22－24小时。
5．固定根尖细胞及制片(参考根尖压片法)
(1)将恢复培养后的种子，从根尖顶端，切下1cm长的 幼根。用卡诺氏液固定24h，固定后如果不及时制片， 可换入70% 的乙醇中，置4℃冰箱内保存备用。
凡数值在上下限时，定为上一级污染。
第三片
各自观察的细胞 细胞数 微核数 阳性因子可采用CrO3（1.
MCN‰在18‰－30‰区间，则表示有中度污染；
细胞数 微核数 细胞数 微核数
数或微核数 阳性因子可采用CrO3（1.
只有真核的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。
植物染色体安全毒理实验
植物染色体安全毒理实验关键词：微核，肥皂水，摘要：为了我们日常生活的健康问题，本实验研究了日用肥皂不同用量对身体的伤害程度。
本实验利用蚕豆根尖微核技术研究不同浓度的肥皂水溶液对蚕豆根尖细胞诱变效应。
以蚕豆作为实验材料，不同浓度肥皂水溶液作为诱变剂，采用蚕豆根尖细胞微核试验(Micronucleus test，MC—NT)技术，对蚕豆根尖进行污染处理，通过观察微核的形态，记录微核的数目，测定蚕豆根尖细胞的微核率，并且在实验中以未经污染处理的蚕豆根尖作为对照，来比较测定香烟对环境中水资源的污染程度。
结果表明，不同浓度的肥皂水溶液均会对蚕豆根尖细胞分裂产生遗传毒性，随着肥皂水溶液处理浓度增大，其诱导蚕豆根尖细胞有丝分裂指数、微核率、染色体畸变率和污染指数的增加。
得出了日用肥皂水具有毒性，并且随着量的增加对人体危害越大的结论。
前言微核是真核生物细胞中的一种异常结构，它主要有落后的染色体和无着丝粒的染色体片段所形成。
微核的数量反应了染色体损伤的程度，可反映诱变剂对生物的危害程度，所以，微核已经成为检测环境诱变剂毒害效应的一个重要指标。
1.材料与方法1.1 实验材料蚕豆1.2 实验用具恒温水浴锅、光学显微镜、刀片、载玻片、盖玻片、镊子1.3 实验药品蒸馏水、不同浓度的肥皂水、1mol/L HCl、吉姆萨染液、卡诺氏Ⅰ液（无水乙醇：冰醋酸 = 3 ：1）1.4实验方法1.4.1浸种催芽：每人取20粒种子，用自来水浸种24小时（22～23o C）。
种子吸胀后，保持适度，在22～23o C下催芽2天。
1.4.2毒液处理根尖：各取10粒，分别用蒸馏水（对照组）和毒液（洗面奶、洗发水、洗衣粉）培养1天后。
1.4.3恢复培养：用蒸馏水将根浸洗，洗净后再将其置培养皿中22～23o C 培养24小时。
1.4.4固定与保存：剪取上述根尖约1厘米，用卡诺氏固定液固定5～6小时，然后用70％的酒精保存。
1.4.5酸解：用蒸馏水浸洗两次，吸干，加入1mol／L的HCl将幼根浸洗，60 o C酸解3～5分钟，使幼根软化。
蚕豆根尖染色体核型分析(最全版)PTT文档
二 实验原理
因为核型分析能明确识别各个染色体的特征， 通过核型分析可以了解不同物种、同一物种不同 亚种、或家畜不同品种甚至同一品种不同个体之 间染色体结构的差异，有助于基因定位及其它遗 传分析。
三 实验材料
蚕豆根尖有丝分裂中期照片
四 实验器具、试剂 不锈钢尺，小剪刀，小镊子，绘图纸，粘剂， 座五1清体．标楚清实准纸 ， 晰验备等染，方染。色染法色体色体集体标中 长本而 度的不 适相重 中片叠而，不将主弯制、曲作次的的缢染细痕色胞和体轮随标廓 着若若臂1体（（ 臂将着因同（1（排若 染相蚕臂（（（例表（表（不（1表排． ．．丝要要率标52率测丝为个15列要色对豆率231如1111锈41列） ）） ） ） ） ） -） -） ） -准制 制211粒 准 准 ： 本 ： 量 粒 核 体 好 准体 长 根 ： ： 钢 好备写是 染作 写是染染染染随作排确确长，长和排型之后确 总度尖长人核尺后核核染出否 色染 出否色色色色体染在细细臂通臂计在分间进细 长：染臂类型，进型型色核多 体色 核多体体体体、色同致致长过长算同析染行致 度每色长K分小行分分体型倍 数体 型倍的数数数次体（一分分度显度的一能色分分 ：一体度析剪分析析标公体 目核 公体对目目目缢核2水析析与微与数水明体析析 整条核与计刀析n实实本式、 （型 式、称（（（痕型）平，，短摄短据平确结比， 个染型短算，比测测的：非 图 ：非性的图2222=线必必臂影臂分线识构较必 染色分臂表小较nnnn记记4相 以 整。以 整 与 分 。））））6上须须长（长别上别的，须色体析长镊，录录=片公倍 公倍非布、、、、，进进度或度记，各差确进 体的度子确9表表式体 式体对情m染染染染短一一之描之录短个异定一 组长之，定将+的的称况色色色色臂步步比绘比如臂染，其步 全度比绘其1制形形性0体体体体在运运。）。表在色有核运 部与。图核作s式式m基基基基上用用、上体助型用 染总纸型1的+将将-数数数数1，染染冲，的于是染 色染，是4细和核核s（（（（长色色洗长特基否色 体色粘否t胞表型型XXXX臂体体、臂征因正体 长体剂正轮））））1分分在显显放在，定常显 度长，常-廓2析析。下带带大下通位。带 之度座。清的的。技技成。过及技 和的标楚结结术术染核其术 。百纸，果果。。色型它。 分等染和和体分遗比。色材材相析传。体料料片可分集核核。以析中型型了。而的的解不主主不重要要同叠特特物，征征种主表表、、示示同次出出一缢来来物痕，，种和简简不随明明同体扼扼亚清要 要种晰。。、，或染家色畜体不长同度品适种中甚而至不同弯一曲品的种染不色 本，通过显微摄影（或描绘）、冲洗、放大成 染色体相片。
植物染色体毒理实验 蚕豆根尖微核实验
蚕豆根尖微核实验摘要：本实验用洗发水诱导蚕豆根尖发生畸变，通过固定、酸解、，染色、压片、镜检等一系列过程观察蚕豆根尖细胞核及微核，通过微核的数量判断洗发水对人体毒害作用的大小。
由于产生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，因此可用微核实验来评价各种诱变因子对生物遗传物质的影响程度。
关键词：蚕豆根尖微核卡诺固定液吉姆萨染液前言：随着相关研究人员的一系列实验表明：日常用品中的一些物质会对植物细胞尤其是分生组织细胞产生明显影响，它们会破坏细胞中的遗传物质——染色体，导致微核的产生，破坏细胞正常的生命活动。
微核（micronucleus,简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下，着色与主核一致或稍浅，呈圆形或椭圆形。
蚕豆根尖细胞的微核是由于根尖细胞在分裂时受到外界诱变因子作用，形成的不随细胞分裂进入细胞核的染色体片段。
以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒物，称为微核实验。
利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测。
目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
1．材料1.1实验材料：蚕豆（根尖细胞的染色体大，DNA含量高，对诱变因子反应敏感）1.2实验药品：1mol/L盐酸、固定液（乙醇、冰醋酸3：1配制）、吉姆萨染液1.3实验用具：显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、盆、纱布、烧杯、水浴锅等2．步骤2.1 浸种催芽将试验所用适量蚕豆放入盛水烧杯盆中，在室温下浸泡1d。
种子吸胀后，用温润纱布松散包裹蚕豆置盆中，保持温度催芽2d，此时根长出将近约1.5cm。
2.2 毒性处理选取根生长良好，根长一致的种子，分成两组，一组放入盛有被测洗发水的盆中，被测液浸没根尖即可。
另一组放入盛有自来水的盆中培养，做对照组。
7,8,9综合实验蚕豆根尖微核检测技术
实验目的
1.了解微核检测的原理和毒理遗传学 2.学习蚕豆根尖微核检测技术
实验原理
微核（micronucleus，MCN）：
是真核生物细胞内遗传物质的一种异常结构
微核率（ MCN ‰）与作用因子的剂量或累积
效应呈正相关
污染指数
实验材料
蚕豆根尖
实验步骤
1、浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛有自来水的杯中，浸 泡24h，此间至少换水两次。种子吸胀后，25℃催芽，置于铺 有湿润滤纸的培养皿中，经36—48h，大部分初生根长至1— 2cm。 2、用被检测溶液处理蚕豆根尖：每一处理选取3-5粒初生根生长 良好的已萌发种子，放入盛有被测的培养皿中，被测液浸没根 尖即可。阳性检测因子可采用CrO3、NaN3、重铬酸钾、EDTA为加 强阳性效果可适当加大溶度，如1.0—2.5mol/L CrO3和0.5— 1.5mol/L NaN3、溶液。另外可取一污水作被检液之一，用自来 水（或蒸馏水）处理作对照。处理根尖12—24h，此时间也可 视试验要求和被检液溶度而定。
实验结果
若进行污水检测，根据污染指数鉴定出你所测水样的污染程 度，也可以计算被检化学药剂的污染指数。 污染指数（PI)=样品实测MCN ‰平均值/对照组（标准水） MCN ‰平均值 污染指数在0.50—1.50区间基本没 有污染； 1.51—2.00区间为轻度污染； 2.01—3.50区间为中度污染； 3.51以上为重度污染。
实验步骤
5、酸解：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5min，吸净蒸馏 水，加mol/L盐酸将幼根浸没，室温下解离10min至根尖软化。
6、染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1—2min。最后 浸于水中，制片前取出置于载玻片上，截下1—2mm长的根尖，滴 一滴石炭酸品红，染色10min，加一盖玻片，压片观察。
[小学]蚕豆根尖微核试验
![[小学]蚕豆根尖微核试验](https://img.taocdn.com/s3/m/c158301b81c758f5f71f677b.png)
[小学]蚕豆根尖微核试验学生设计性实验论文毒物对蚕豆根尖细胞的微核诱变效应姓名雷旭红学号2013131203专业生物科学班级 132相关实验课程名称细胞生物学实验,指导教师郝雪峰实验学期 2014-2015 学年第二学期太原师范学院教务处编印洗衣粉、洗衣露诱发蚕豆根尖细胞微核实验研究摘要掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。
根据微核诱导的原理，利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗衣粉的毒性状况给出客观评价。
结果表明:洗衣粉会诱导微核的产生，说明洗衣粉、洗衣露在超过一定浓度内对生物细胞是有毒的。
Abstract :Broad bean root tip cells micronucleus general method detection technology to master. According micronucleus induction principle, the use of nuclear civia toxicity testing technology gives an objective assessment of the situation detergent. The results showed that: detergent will produce micronuclei induction, indicating that exceed a certain concentration of detergent in a biological cell is toxic关键词蚕豆根尖细胞洗衣粉洗发露微核诱导作用损伤Key words : Civia detergent rinse micronuclei induced damage引言人类在发展经济的同时，对自然生活资源的肆意了开发和对环境的无偿利用，已造成了全球生态破坏、资源浪费和短缺、环境污染等重大问题。
为了探明环境污染物对生物机体是否有蓄积毒作用，必须从环境的一致性着手。
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蚕豆根尖微核实验
摘要：本实验用洗发水诱导蚕豆根尖发生畸变，通过固定、酸解、，染色、压片、镜检等一系列过程观察蚕豆根尖细胞核及微核，通过微核的数量判断洗发水对人体毒害作用的大小。
由于产生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，因此可用微核实验来评价各种诱变因子对生物遗传物质的影响程度。
关键词：蚕豆根尖微核卡诺固定液吉姆萨染液
前言：随着相关研究人员的一系列实验表明：日常用品中的一些物质会对植物细胞尤其是分生组织细胞产生明显影响，它们会破坏细胞中的遗传物质——染色体，导致微核的产生，破坏细胞正常的生命活动。
微核（micronucleus,简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下，着色与主核一致或稍浅，呈圆形或椭圆形。
蚕豆根尖细胞的微核是由于根尖细胞在分裂时受到外界诱变因子作用，形成的不随细胞分裂进入细胞核的染色体片段。
以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒物，称为微核实验。
利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测。
目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
1．材料
1.1实验材料：
蚕豆（根尖细胞的染色体大，DNA含量高，对诱变因子反应敏感）
1.2实验药品：
1mol/L盐酸、固定液（乙醇、冰醋酸3：1配制）、吉姆萨染液
1.3实验用具：
显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、盆、纱布、烧杯、水浴锅等
2．步骤
2.1 浸种催芽
将试验所用适量蚕豆放入盛水烧杯盆中，在室温下浸泡1d。
种
子吸胀后，用温润纱布松散包裹蚕豆置盆中，保持温度催芽2d，此时根长出将近约1.5cm。
2.2 毒性处理
选取根生长良好，根长一致的种子，分成两组，一组放入盛有被测洗发水的盆中，被测液浸没根尖即可。
另一组放入盛有自来水的盆中培养，做对照组。
两组均处理1d。
2.3恢复培养
处理后的种子用自来水浸洗，洗净后再置入盛有自来水的盆中，
恢复培养1d。
2.4 固定
将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用卡诺固定液
固定5-6h。
2.5 酸解
用蒸馏水浸洗干净固定好的幼根，吸净蒸馏水，加入1mol/L盐酸将幼根浸没，60℃酸解15分钟，幼根软化即可。
2.6 染色
用蒸馏水浸洗干净幼根，放入吉姆萨染液中，染色20-30min。
2.7 压片观察
从幼根上截下1-2mm左右长的根尖，盖上盖玻片，压片镜检。
3．结果
实验观察到的染色体图：
首先在显微镜低倍镜下找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察。
微核大小在主核1/3以下，并与主核分离，着色与主核一致或稍浅，呈圆形或椭圆形。
每一处理观察3个根尖，每个根尖数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，然后平均，即为微核千分率，以此可作一个检测指标。
实验组中，将近1000个细胞中，每个人（共八人）三次的平均数据是：6，4，8，10，10，13，24，17。
对照组中，制作了五个玻片，微核数分别为：0，0，0，0，1。
实验组微核千分率=具有微核的细胞数/观察统计的细胞数
6+4+8+10+10+13+24+17
=—————————————=11.5‰
8×1000
对照组微核千分率=具有微核的细胞数/观察统计的细胞数
0+0+0+0+1
=———————=0.2‰
5×1000
污染指数（PI）=样品实测微核率平均值/对照组微核率平均值=11.5/0.2=57.5
（污染指数在0～1.5区间基本没有污染，1.5～2区间为轻度污染，2～3.5区间为中度污染，3.5以上为重度污染。
）
4．分析讨论
通过对照组与实验组对比，对照组（自来水）培养出的根尖细胞几乎没有微核，实验组（洗发水）培养出的根尖细胞中发现微核并且重度污染，由此说明市场出售的丝蕴洗发水对细胞有严重破坏作用，因此人类在使用时应尽量避免。
此次实验中，做毒性处理时加入的洗发水剂量无法确定，所以实验观察到数量较多的微核有可能是由于诱变剂加多了。
实验中，我们要注意以下几点：（1）选择种子做毒性处理时要挑选发芽时间相同，芽长相近的种子。
（2）注意毒性处理时被测液的浓度，不能过高或过低。
（3）解离时间要适中，否则解离不充分会影响观察结果。
（4）要去根尖前端1-2mm左右长的根尖，适合观察。
（5）视野的选择最好选择细胞边缘清晰，不重叠的，并要避免同一视野重复计数，应随机选择。
（6）实验过程中，小组同学应互相配合，认真做好每一步，尤其是最后艰辛的计数工作，一定要耐心。
5．结论
经过此次实验我学会了运用微核实验检测不同诱变剂毒害作用的方法，也意识到了自己在理论知识及实验操作方面的一些不足，今后我一定在认真学习专业知识并努力锻炼自己的动手操作能力。
在此，向教会我理论知识并给予我实验技术指导的郝雪峰老师表示衷心的谢意，同时感谢太原师范学院细胞实验室为我提供实验地点和各种材料、用具、仪器、药品。
谢谢！
参考文献：
[1]梁光萍，罗向东，陈渝，等.真菌代谢提取物对蚕豆根尖细胞微核的诱导效应［Q］.第四军医大学学报，2003,24（13）:1221-1223.
[2] 南晓光.蚕豆根尖细胞微核试验内蒙古民族大学学报Q31：自然科学版(NeiMengGuMinZuDaXueXueBao：ZiRanKeXueBan)，2002，56（2）：415-416.
[3] 吴安华.微核产生的原因和物质基础.中国科学院，2004，8(8)：19-22.。