蚕豆根尖微核技术实验方案

实验方案(蚕豆根尖微核技术)

一、实验题目

蚕豆根尖微核技术检测几种废旧电池夜

二、实验目的

1、利用植物压片技术和微核实验原理，设计实验方案，研究环境中存在的毒害物；

2、理解环境致突变因子对生物体DNA的损伤

3、掌握环境因子遗传毒性检测的微核实验方法

4、培养初步的科研能力

三、材料仪器与方法

1.1材料仪器

选取蚕豆大小均匀籽粒饱满无虫害100颗（安徽大学生物实验中心供给），N种品牌的废电池（安大李园宿舍楼收集）

滤纸若干，烧杯，剪刀，培养皿N*15个，量筒100ml，锥形瓶5个，胶头滴管，显微镜，卡诺固定液，5 mol/L盐酸，石炭酸品红溶液，天平（带砝码）1.2方法

1.2.1废电池浸泡液制备

采用浸泡方法处理废电池。随机取N种废电池各1节（用），称重后砸破外壳暴露内部填充物，尽量使外壳破损程度一致。每克填充物加70ml蒸馏水，薄膜覆盖浸泡3天，每天搅动1次。每种电池浸泡液配成未稀释，稀释10倍、50倍、100倍4组，设蒸馏水为对照组。

1.2.2蚕豆根尖的培养处理

将蚕豆用蒸馏水浸泡一天使其充分吸胀，然后用滤纸浸水放于培养皿中在25℃恒温箱中培养24h。每12小时换水一次。待蚕豆初生根长至2cm左右，选取长度一致的蚕豆，分别用蒸馏水，1倍稀释液，10倍，50倍，100倍，分别处理6h，其中蒸馏水作为阴性对照处理。然后再放于25℃恒温箱恢复培养24h。卡诺固定液固定24 h；固定好的幼根以蒸馏水浸洗两次，用5 mol/L的盐酸于28℃水解约25 min，至幼根被软化即可；然后用蒸馏水洗净切取0.5cm的根尖，用改良的石炭酸品红溶液染色5~10分钟。

1.2.3制片

用常规压片法制作临时装片。

1.2.4镜检计数

每剂量组选取5个根尖，每个根尖随机镜检1000个细胞，计算微核率MCN‰=观察到微核细胞数/观察细胞总数*1000‰。

1.3统计学方法

采用spss统计软件，对数据采用方差和t检验，以α=0.05为检验水准。