蚕豆根尖微核测试技术
植物染色体毒理实验 蚕豆根尖微核实验
蚕豆根尖微核实验
摘要：本实验用洗发水诱导蚕豆根尖发生畸变，通过固定、酸解、，染色、压片、镜检等一系列过程观察蚕豆根尖细胞核及微核，通过微核的数量判断洗发水对人体毒害作用的大小。由于产生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，因此可用微核实验来评价各种诱变因子对生物遗传物质的影响程度。
关键词：蚕豆根尖微核卡诺固定液吉姆萨染液
前言：随着相关研究人员的一系列实验表明：日常用品中的一些物质会对植物细胞尤其是分生组织细胞产生明显影响，它们会破坏细胞中的遗传物质——染色体，导致微核的产生，破坏细胞正常的生命活动。
微核（micronucleus,简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下，着色与主核一致或稍浅，呈圆形或椭圆形。蚕豆根尖细胞的微核是由于根尖细胞在分裂时受到外界诱变因子作用，形成的不随细胞分裂进入细胞核的染色体片段。
以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒物，称为微核实验。利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
1．材料
1.1实验材料：
蚕豆（根尖细胞的染色体大，DNA含量高，对诱变因子反应敏感）
1.2实验药品：
1mol/L盐酸、固定液（乙醇、冰醋酸3：1配制）、吉姆萨染液
1.3实验用具：
显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、盆、纱布、烧杯、水浴锅等
实验五、蚕豆根尖微核检测技术
包裹置白磁盘中，保持湿度，在25℃恒温箱中催芽1224小时，待初生根长出2-3mm时，再取发芽良好的种 子，放入铺满滤纸的磁盘中，25℃继续催芽，经约3648小时，大部分初生根长至1-2cm左右，根毛发育良 好，这时即可用来进行检测了。
3．处理
每一处理选取6-8粒初生根生长良好、根长一致的
种子，放入盛有待测物溶液的培养皿中，浸没根尖。
第二片 第三片
细胞数 微核数 微核数
细胞数
平均微核千分率
幼根。用卡诺氏液固定24h，固定后如果不及时制片，
可换入70% 的乙醇中，置4℃冰箱内保存备用。
6．酸解：
从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗３ min→吸水纸吸干→放入盛有适量1 mol/L HCl， 60±0.5℃水浴保温的瓶中→解离10min。
7．染色 ：
解离后材料水洗3min并吸干，挑取1个根尖的乳
白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加1～2滴染液，
染色10～15min，压片。
8．压片
在经染色的材料上加一滴染液，盖上盖玻片，覆 一层吸水纸，用带橡皮头的铅笔垂直敲打，或以拇指 垂直紧压盖片(注意勿使盖片搓动)，使材料分散压平，
便于观察。
9．镜检及微核识别标准
首先在低倍镜下找到分生组ห้องสมุดไป่ตู้区细胞分散均匀，分 裂相较多的部位，再转高倍镜观察。
色体计数。
蚕豆根尖微核技术实验方案
实验方案(蚕豆根尖微核技术)
一、实验题目
蚕豆根尖微核技术检测流仓河污水污染情况
二、实验目的
1、利用植物压片技术和微核实验原理，设计实验方案，研究环境中存在的毒害物；
2、理解环境致突变因子对生物体DNA的损伤
3、掌握环境因子遗传毒性检测的微核实验方法
4、培养初步的科研能力
三、材料仪器与方法
1.1材料仪器
选取蚕豆大小均匀籽粒饱满无虫害100颗，采集于流仓河污水，烧杯，剪刀，培养皿，量筒100ml，，胶头滴管，显微镜，卡诺固定液，5 mol/L盐酸，石炭酸品红溶液，天平（带砝码）
1.2方法
1.2.1污水处理
将采集到的污水稀释100倍、10倍、不稀释，用自来水做对照
1.2.2蚕豆根尖的培养处理
将蚕豆用蒸馏水浸泡一天使其充分吸胀，然后用滤纸浸水放于培养皿中在25℃恒温箱中培养24h。每12小时换水一次。待蚕豆初生根长至2cm左右，选取长度一致的蚕豆，分别用蒸馏水，1倍稀释液，10倍，50倍，100倍，分别处理6h，其中蒸馏水作为阴性对照处理。然后再放于25℃恒温箱恢复培养24h。卡诺固定液固定24 h；固定好的幼根以蒸馏水浸洗两次，用5 mol/L的盐酸于28℃水解约25 min，至幼根被软化即可；然后用蒸馏水洗净切取0.5cm的根尖，用改良的石炭酸品红溶液染色5~10分钟。
1.2.3制片
用常规压片法制作临时装片。
1.2.4镜检计数
每剂量组选取5个根尖，每个根尖随机镜检1000个细胞，计算微核率MCN‰=观察到微核细胞数/观察细胞总数*1000‰。
细胞实验方案
重金属离子对蚕豆根尖细胞的微核效应
一、实验目的
1.了解微核测试的原理和毒理遗传学在实际生活与工作中的应用范围及意义
2．学习蚕豆等根尖的微核测试技术
二、实验原理
微核是在理化诱变因子的作用下, 在细胞形态学上表现出来的一种染色体损伤类型, 只要环境中存在着一定剂量的遗传毒性物质, 生长于其中的植物就有可能产生微核现象. 根据植物细胞的徽核效应, 可以对环境污染进行监测和评价.
三、实验材料：蚕豆
四、实验器具和药品：
实验器具：显微镜；解剖刀；镊子；解剖盘；冰箱；恒温水浴锅；滤纸；盖玻片；载玻片；烧杯；量筒；试管。
实验药品：PbCl2溶液；CdCl3溶液；CuCl2溶液；去离子水；石碳酸品红；0.05% NaClO；5-氨基尿嘧啶；无水乙醇；冰醋酸；盐酸。
五、实验步骤
1.根尖的培养
选取籽粒饱满、大小一致的蚕豆种子洗净后，放入盛有蒸馏水的大烧杯内，浸泡约24 h，期间换水1～2次。待种子充分吸胀后，将其放入铺有一薄层湿润脱脂棉的解剖盘中，置（25 ±1）℃的恒温培养室中培养2～3 d，期间换水4～6次，使其长出1.5～3.0cm长的初生根。
2.根尖毒性处理
取PbCl2溶液、CdCl3溶液、CuCl2溶液，将每种溶液稀释配制成50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L 4个浓度梯度，以无离子水为空白对照，。在芽长出0. 2—0. 5 cm 时, 经4℃培养14 h, 转移在0.075%的5-氨基尿嘧啶中培养24h ( 23℃) 冲洗, 移至含氧丰富的蒸馏水中培养8—12h, 大约24% 的细胞可比较同步地出现细胞有丝分裂高峰。2h后,转移到浓度已定的重金属离子溶液中( pH 6.6—7.2)。培养1个细胞周期18h。
蚕豆根尖微核监测技术
实验三蚕豆根尖微核监测技术（MVT）一、目的
学习如何利用高等植物间期细胞遗传检测系统以监测环境中的致突变物。
二、原理
在细胞分裂早期，若受到有害因子的攻击，从使染色体发生断裂，产生染色体片断。在这些片断中，有些可能愈合恢复正常为，随细胞分裂进入子细胞，有些则由于缺乏着丝点，不能移向细胞的级部而变成圆球体，象卫星一样分布在主核的周围，这便是微核，由于染色体片段的大小的数量不一，所以微核的大小和数量也不相同，而蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量多，因而对诱变物的反应敏感，通过显微镜下的观察和计数，便可以监测环境污染。
三、器材与试剂：
（一）显微镜、温箱、恒温水浴箱、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微压片试验用具。
（二）试剂
5N HCl 、45%醋酸、卡诺氏液化、席夫氏试剂、SO2 洗涤剂
四、操作步骤
1、蚕豆浸种催芽。
2、被监测液处理根尖。
3、根尖细胞恢复培养。
4、固定根尖细胞。(这四步由实验人员完成)
5、孚尔根染色
（1）固定后的幼根，在青霉素瓶中用蒸馏水浸泡2次，每次5分钟。（2）吸净蒸馏水，再加入5N HCl 将幼泡住，连瓶放入28度的水浴锅中水解幼根25分钟左右，至幼根被软化即可。
（3）用蒸馏水浸泡幼根2次，每次5分钟。
（4）在暗室或遮光条件下加席夫试剂，每瓶用量以淹住幼根液面高出两毫米为好。浸洗衣两次
（5）除去染液，用SO2洗涤剂浸洗衣两次，每次五分钟。
（6）用蒸馏水浸洗一次，五分钟
（7）将幼根放入新换的蒸馏水中，置4度的冰箱内保存，可供随时制片之用。
6、制片
（1）将幼根放在擦净的载玻片上，用解剖针截除根寇区，截留一毫米的根据尖分生区。
蚕豆根尖微核检测技术
蚕豆根尖微核检测记录表
试验号
镜检日期
镜检者
片号
第一片
细胞数 微核数
各自观察的细胞 数或微核数
第二片
第三片
细胞数 微核数 细胞数 微核数
总计 平均微核千分率
➢目前,微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、 化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期 诊断等各方面,
➢利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试,可准确显 示各种处理诱发畸变的效果,并可用于污染程度的监测,
三、实验材料
蚕豆种子
四、实验器具、药品试剂
实验器具： 显微镜,计数器,镊子,载玻片,盖玻片,烧杯,瓷盘等,
实验药品： 6mol/L盐酸,甲醇,冰乙酸,醋酸洋红, 氟化钠处理液：0.5mmol/L 3种浓度,
五、实验方法
1．实验材料的培育 蚕豆根尖细胞的染色体大,DNA含量高,因而对诱
变因子反应敏感,种子成熟后,晒干贮藏于干燥器内或 4℃冰箱内备用,
2．浸种催芽：
将实验用蚕豆种子按需要量放入盛有蒸馏水的烧杯 中,在25℃下浸泡24小时,种子吸胀后,用纱布松散包裹 置白磁盘中,保持湿度,在25℃恒温箱中催芽12-24小时, 待初生根长出2-3mm时,再取发芽良好的种子,放入铺满 滤纸的磁盘中,25℃继续催芽,经约36-48小时,大部分初 生根长至1-2cm左右,根毛发育良好,这时即可用来进行 检测了,
蚕豆根尖微核检测
蚕豆根尖微核检测
指导老师：吴麟
组长：路青瑜
小组成员:何悦李婷陈鸿谭小娥刘清唐珍冯沁李双吴海林符方亮
摘要：本实验运用蚕豆根尖微核检测技术，分别用0.25mg/mL染发剂、0.5mg/mL 洗洁精对蚕豆根尖做处理，同时以0.25 mol/L叠氮化钠处理蚕豆根尖做阳性对照，自来水作阴性对照。镜检后测得其微核率分别为17.55%，19.82%，23.18%，11.16%；染发剂、洗洁精处理的污染指数分别为1.7、1.8，结果表明均属于轻度污染。
关键词：蚕豆微核检测微核率
Abstract：This experiment using vicia faba micronucleus test technology, respectively for 0.25 mg/mL colourants, 0.5 mg/mL of vicia faba detergent, at the same time to do processing mol 0.25 / sodium azide processing vicia faba do positive, negative control for water. After the microscopic micronucleus rate 17.55% respectively, 19.82%, 23.18%, 11.16%, Hair, detergent pollution index respectively with 1.7, 1.8, results show that belong to light pollution.
利用蚕豆根尖细胞微核技术检测咖啡和茶叶对细胞生长的影响
利用蚕豆根尖细胞微核技术检测咖啡和茶
叶对细胞生长的影响
一、实验目的
1、学习蚕豆根尖的微核测试技术。
2、探究咖啡对蚕豆根尖生长的影响。
3、探究茶叶对蚕豆微核的影响。
二、实验原理
微核（micronuclei）试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。
用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。
微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。若采用核型稳定的细胞,确立统一的操作协议,进行实验室间的合作建立数据库,应用探针技术的微核试验很可能被纳入遗传毒理学试验。
蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。蚕豆的染色体大，数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察，而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感，便于遗传毒性检测实验。
咖啡问世以来受到世界各地人们的追捧,不论是老人还是年轻人。众所周知咖啡有提神的功效，有助于防止放射线伤害，而且咖啡会起到预防肝癌的作用但是咖啡还有一些副作用，如：经常喝咖啡会使人上瘾，饮用过多的咖啡人麻痹瘫痪等。
茶叶在中国有着悠久的历史，如今也受到世界各地人们的青睐。喝茶对人体有很大的益处，如：茶叶中的茶多酚可与重金属结合产生沉淀，使身体中的一些有害物质迅速排出体外，达到解毒的效果。
实验六蚕豆根尖微核检测技术学时综合性设计性
3． 处理
每一处理选取6-8粒初生根生长良好、根长一致的 种子，放入盛有待测物溶液的培养皿中，浸没根尖。 阳性因子可采用CrO3（1.0和2.5 mol/L）、NaN3 （0.5、1.0和1.5mol/L）或EMS（150和200 mol/L）， 另取一处污水作待检测物质，用自来水作对照，共9 个处理，处理根尖6～24h(处理时间可视实验需要和 被测液浓度而定)。
六、实验数据的统计处理和污染程度划分
将实验数据按以下步骤进行统计学分析处理： 1． 计算各测试样品（包括对照组）微核千分率（MCN‰） 如果对照本底MCN‰为10 ‰以下，可采用如下标准进行 分析以确定样品的污染程度： MCN‰在10‰以下，表示基本没有污染； MCN‰在10‰－18‰区间，则表示有轻度污染； MCN‰在18‰－30‰区间，则表示有中度污染； MCN‰在30‰以上，则表示有重度污染；
4．根尖细胞恢复培养
将处理后的种子用蒸馏水浸洗三次，每次2－3min。 将洗净的种子再放入铺好滤纸或脱脂棉的白磁盘内 25℃温箱中恢复培养22－24小时。
5．固定根尖细胞及制片(参考根尖压片法)
(1)将恢复培养后的种子，从根尖顶端，切下1cm长的 幼根。用卡诺氏液固定24h，固定后如果不及时制片， 可换入70% 的乙醇中，置4℃冰箱内保存备用。
实验六、蚕豆根尖微核检测技术（３学时） （综合性、设计性实验）
微核实验
组别
浓度
（mol/L)
细胞数
微核细
胞数
微核细胞
率/%
1 0.
2 1000 85 8.5
2 0.2 1000 72 7.2
3 0.2 1000 83 8.3
4 0.2 1000 94 9.4
5 0.2 1000 73 7.3
6 0.2 1000 99 9.9
7 0.2 1000 77 7.7
采样地点微核细胞率
/%
污染指
数
污染等
级
对照组 2.11
1 8.5 4.03 重污染
2 7.2 3.41 中污染
3 8.3 3.93 重污染
4 9.4 4.4
5 重污染
5 7.3 3.4
6 中污染
6 9.9 4.69 重污染
7 7.7 3.65 重污染
蚕豆根尖微核检测技术
蚕豆根尖微核检测技术
实验名称: 方便面面饼液对蚕豆根尖微核率的影响专业年级: 2010级级生物科学
成员: 尹忠围安树珺
谢林芝刘伟
指导教师:
实验时间: 2013年4 月
一、摘要
用蚕豆根尖细胞微核技术检测不同种类方便面面饼液微核的诱变效果。设置了阴性对照:自来水处理组，实验组:康师傅、统一、老坛，麻老表四组饼液分别处理蚕豆根尖，阳性对照:用0.02g/L的醋酸铅溶液处理。发现方便面面饼液在诱导微核产生方面影响明显，醋酸铅溶液具有诱导微核产生的作用。
关键字:蚕豆根尖，方便面面饼，微核千分率，污染指数二、实验背景和目的随着现代社会的发展，越来越多的化学物质运用到人们的日常生活之中，如种类繁多的食品添加剂。而其中有些物质具有较强的危害，如致畸，致癌，致突变等。为了检测已存在或潜在的危害，各种检测技术应运而生。微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。我们采用蚕豆作为实验材料，采用植物微核技术来检测方便面面饼中添加剂对人体是否产生危害。
方便面是日常生活中经常接触到的食品，其市场占据快餐食品的大壁江山，在超市中油炸方便面与非油炸方便面占到快餐食品的60%到70%。另一方面，在各媒体的报道中，经常出现有关方便面的食用危害，而且很有争议，所以这也是我们进行本实验的一个原因。三、实验原理
实验5蚕豆根尖细胞微核检测技术
一般认为微核是有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。
这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主 核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时， 它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。微核率的多少与和 作用因子的剂量或辐射累积效应有正相关。
二 目的
微核测试用于辐射损伤、辐射保护、化学诱变剂、新药试验、食 品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断。
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17
随着分子生物学技术的迅速发展和不断渗透到微核研究中, 使微核试验的检测应用范围不断扩大,现已发展成为能同时检测 染色体断裂、染色体丢失、分裂延迟、不分离、DNA 损伤修复 障碍、Hprt 基因突变、细胞凋亡、细胞分裂不平衡等多种遗传 损害终点 。
自20 世纪70 年代Heddle 和Schmid 利用啮齿类骨髓细胞建 立了微核试验检测方法以来,各国都在不断研究探索微核试验技 术。主要从三个方面来进行:一是探索微核试验的实验技术,即研 究材料、实验方法、给药方式、染毒途径、制片方法、染色方 法等;二是利用微核试验来检测各种致突变物质;三是通过微核试 验来预测疾病。
{最新文档}实验06蚕豆根尖微核检测技术
实验六蚕豆根尖微核检测技术
一、实验目的
⒈了解微核测试原理和毒理遗传学意义。
⒉学习蚕豆根尖的微核测试技术。
二、实验原理
微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色
体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，
游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/10，染色与主核一样或稍浅。一般认为
微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便
形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核
之外的小核，即微核。
三、实验器材和药品
松滋青皮蚕豆、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、1mol／L盐酸、改良苯酚品红染液、NaN
3。
四、方法与步骤
⑴浸种催芽：择饱满、均匀的种子，洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24～30h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入铺有干净、双层湿纱布的托
盘内培养。
⑵用被检测液处理根尖：当初生根长到1～2cm时，选初生根生长良好的蚕豆6～8粒，分别放入蒸馏水（CK）、0.４mmol／L、0.８mmol／L、1.2mmol／L 的NaN
3中染毒8～12h。
⑶根尖细胞恢复培养：处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于湿棉花上恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。以上温度均为25℃。
⑷根尖细胞固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1～1.5cm长的幼根，用Carnoys固定液固定20～24h。固定后的根如不及时制片，可换入70%的酒精溶液中置4℃冰箱中保存备用。
蚕豆根尖细胞微核实验报告
利用蚕豆根细胞微核技术检测洗发水的毒性
09生物技术宁伟王晓刚太红桥刘经源
摘要微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。[1]
蚕豆根尖细胞微核试验(Micronucleustest,MC-NT)技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核检测方法。它是一种应用于监测环境致突变物对人体和其他生物体的遗传物质产生危害的技术,并从细胞遗传学水平上探讨植物遗传物质的改变状况与环境污染，也可以检测淡水环境的质量。[2]
关键词蚕豆根尖微核洗发水千分率
蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。它的染色体为六对相当大的染色体，而且根尖含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察。目前，蚕豆根尖微核技术在环境致突变性检测/监测方面已经形成了一套完整的体系。它的可靠性和灵敏性较高，且本底较低，这对于一种致突变性检测方法是十分重要的。此外，它的检测物谱较广。目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核：
（1）凡主核大小1/3以下，与主核分离的小核；
（2）小核的着色与主核相当或稍浅；
（3）小核形态可为圆形，不规则等。[3]
1. 实验目的
掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗发水的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆根尖细胞MCN对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。
微核检测技术
微核检测技术
一、目的
1. 了解微核测试原理和毒理遗传学意义。
2. 学习小鼠骨髓细胞和蚕豆根尖的微核测试技术。
二、原理
微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。所以许多人认为可用简易的周期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出等都存在污染环境的可能性，欲了解这些因素对机体潜在的遗传危害，需要有一套高度灵敏，技术简单易行的测试系统来监测环境的变化。只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。目前国内外不少部门已把微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。
微核检测技术
微核检测技术实验计划书
一、实验目的
了解微核测试原理和毒理遗传学意义。学习蚕豆根尖的微核测试技术。
二、实验原理
微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。
已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。所以许多人认为可用简易的周期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出等都存在污染环境的可能性，欲了解这些因素对机体潜在的
遗传危害，需要有一套高度灵敏，技术简单易行的测试系统来监测环境的变化。只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。目前国内外不少部门已把微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。
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实验原理
蚕豆根尖细胞在分裂时染色体的复制过程中常 发生断裂，断裂下来的片段在正常情况下能自行 复位愈合，如果此时受到外界诱变因子的作用， 会阻碍染色体的愈合，于是会出现微核，由于产 生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，所 以可用微核出现的百分率来评价环境诱变因子对 生物遗传物质影响的程度。
7 镜检及微核识别 找到分生组织区细胞分散均匀、膨大、分裂相对多的部位， 再转到高倍镜（物镜40X）下进行观察 微核的识别标准 （1）凡是主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 （2）小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态可以是圆形、椭圆形、不规则形。 每一处理观察5个根尖，每个根尖观察1000个细胞，并计数 其中有微核的细胞数（微核千分率）
4 “污染指数”判别：此方法可避免因实验条件等因 素带来的微核千分率本底的波动，故较宜适用。 污染指数=样品实测微核千分率平均值/对照组微 核千分率平均值 0-1.5 基本没有污染 1.5-2.0 轻污染 2-3.5中污染 3.5以上重污染
结果分析与报告
1 各测试样品微核千分率的计算 2 如果被检测样品不多，可直接用各样品微核千分率平 均值与对照组比较（t检验），从差异的显著性判断 水质污染与否。 3 如果监测的样品较多，可先用方差分析（F检验）看 各采样点所测的微核千分率平均值和对照的差异显 著性。如差异显著，还可进行各采样点微核差异显 著性的多重比较，看被检样品微核千分率平均值差 异显著性的分组情况，以归纳划分这些不同采样点 不同级别的污染程度。
3 根尖细胞恢复培养 处理后的种子用自来水（或蒸馏水）浸洗三次，每次2～3分 钟。洗净后再置入辅有湿脱脂棉中，25℃下再恢复培养 22～24h。 4 固定 将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用卡诺 氏固定液固定24小时。固定后的根如不及时制片，可换入 70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存备用。 5 解离：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5分钟，吸 净蒸馏水，加入5mol/L盐酸将幼根浸没，室温下酸解10分 钟，幼根软化即可。 6染色 吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次1～2分钟。截下 1～2mm左右长的根尖，滴加席夫氏试剂（在生物实验可 以和经过酸化的DNA 发生反应，DNA 被染成紫红色，而 不和核仁，细胞质发生反应，因此可以来鉴定DNA的存 在。），染色5～8分钟，加盖玻片，压片观察
操作步骤Байду номын сангаас
1 浸种催芽 将实验用蚕豆按需要量放入盛水烧杯中，在25℃下浸泡24 小时，此间至少换水两次，所换水应25℃预温。种子吸胀 后，用纱布松散包裹置瓷盘中，保持温度，在25℃温箱中 催芽12～24小时，待初生根长出2～3mm时，再取发芽良 好的种子，放入铺满滤纸的瓷盘中，25℃继续催芽，经约 36-48小时，大部分初生根长至1～2cm左右，根毛育良好， 此时可用来进行实验。 2 蚕豆根尖染毒 选取初生根生长良好，根长一致的6-8粒种子，放入盛有 被测液的培养皿中，被测液浸没根尖即可，一般染毒6-8h， 另设自来水对照组