蛋白质的沉淀反应剖析

3．有机酸沉淀蛋白质： 取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加 入1mL5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察 沉淀的生成。
4．有机溶剂沉淀蛋白质： 取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加 入2mL95%乙醇。混匀，观察沉淀的生成。
5、乙醇引起的变性与沉淀： 取3支试管，编号。依下表顺序加入试剂：
试剂（mL）
观察沉淀是否溶解，为什么？ 向另一离心管的上清液添加硫酸铵粉末，边
加边搅，直至硫酸铵粉末不再溶解达到饱和为 止，此时析出的沉淀为清蛋白。静置5min 后， 离心（3000r/min） 10min，倒去上清液，向 沉淀中加少量水，观察沉淀是否溶解。
2．重金属盐沉淀蛋白质： 取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入 2滴3%硝酸银溶液，振荡试管，观察沉淀的 生成。
四、结果：
写出实验过程中观察到的现象并加以解释。
试剂和器材 1. 试剂
(1) 蛋白质溶液： 新鲜鸡蛋清∶5% NaCl溶源自文库=1∶9
(2) 饱和硫酸铵溶液； (3) 硫酸铵结晶粉末； (4) 3%硝酸银溶液； (5) 5%三氯乙酸溶液； (6) 95%乙醇； (7) 0.2 mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲溶液；
实验二 蛋白质的沉淀反应
一、目的
1．加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2．了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 3．了解蛋白质变性与沉淀的关系。
二、原理
在水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化 层和带有相同电荷而成为稳定的亲水胶体颗粒， 在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失 去电荷和脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反应
可分为两类。 （1）可逆的沉淀反应 指蛋白质分子的结
构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素 后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中， 并保持其天然性质而不变性。例如大多数蛋 白质的盐析作用或在低温下用乙醇（丙酮） 短时间作用于蛋白质等。提纯蛋白质时，常 用此类反应。
（2）不可逆的沉淀反应 指蛋白质分子内 部结构发生重大变化，蛋白质常变性而沉淀， 不能再溶于原来的溶剂中。例如加热引起的 蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离
离子或某些有机酸的反应都属于此类反应。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定
的条件仍然存在（如电荷），并不析出。因 此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉 淀的蛋白质也未必都已变性。
三、操作
1．蛋白质的盐析即中性盐沉淀蛋白质： 取1个离心管加入5mL蛋白质溶液和5mL饱 和硫酸铵溶液，混匀后静置5min，则球蛋白 沉淀析出。离心（3000r/min）10min后，将上 清液转入另一离心管，向沉淀中加少量水，
试管编号
1
2
3
蛋白质溶液
1.0
1.0
1.0
pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲溶液
1.0
—
—
0.1mol/L氢氧化钠溶液
—
1.0
—
0.1mol/L 盐酸溶液
—
—
1.0
95%乙醇
2.0
2.0
2.0
摇匀后，观察是否有沉淀生成。放置片 刻，向各管内加水4mL，然后在2，3号管中 各加1滴甲基红，观察颜色的变化。 接着2 号管用0.1mol/L醋酸溶液中和， 3号管用 0.05mol/L碳酸钠溶液中和，观察颜色的变 化和沉淀的生成。最后各管再加0.1mol/L盐 酸溶液数十滴，观察沉淀的再溶解。
试剂和器材 1. 试剂：
(8) 0.1 mol/L盐酸溶液； (9) 0.1 mol/L氢氧化钠溶液； (10) 0.05 mol/L碳酸钠溶液； (11) 0.1 mol/L醋酸溶液； (12) 甲基红溶液；
2. 器材：
离心机、离心管、试管、试管架、吸管、 滴管等。