浙科版选修1第一部分实验二微生物的培养和利用课件6

3、有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色 的环带出现。
? 细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水 解，水解后产生氨，氨为碱性，酚酞在酸 性环境里呈黄色，碱性里呈红色。培养基 中酸碱指示剂产生颜色变化（变红），标 志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明 这一菌株以尿素为氮源。
4、与全营养培养基上的菌落数比较，为什 么尿素培养基上只有少数菌落
3个尿素平板(平行重复组)
配制菌悬液
得102,
103, 104的菌悬液
1g土壤
1个99ml无菌水
2个9ml无菌水
接种
? 取100ul菌悬液
涂布分离
涂布分离
涂布前后三角刮刀需要灼烧吗？
涂布平板的所有操作都应在火焰附近 进行。结合平板划线与系列稀释的无菌 操作要求，想一想，第2步应如何进行无 菌操作？
实验2 分离以尿素为氮 源的微生物
尿素又称脲,是蛋白质的降解产物,哺乳动 物的尿液中含有,植物不能直接吸收尿素, 因此,大量尿素的存在对环境造成污染.有 些细菌可产生脲酶,以尿素为氮源,脲酶可 将尿素分解为氨,被植物吸收.
一、实验原理
用选择培养基可分离出以尿素为氮源的微生物， 这些微生物可产生脲酶，脲酶可将尿素分解 为能被植物吸收的氨，因此这类微生物具有 一定的生态学价值。稀释涂布平板法统计土 壤样品中含有的这种微生物的数目
１g土壤＋９９ ml无菌水，振荡，为１０ ２稀释液，依 次制备１０ ３、１０４、１０５的土壤稀释液。
４、稀释涂布分离法分离细菌（无菌， 0.1ml，玻璃刮刀） ５、培养观察（倒置，３７度）
配制培养基
实验组
对照组
? 尿素培养基（1L）
葡萄糖
10g
NaCl
4.8g
K2HPO4 4.8g
琼脂
20g
酚红
0.01g
碳源、尿素、无机盐、水、酚红
（三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物 对尿素分解能力的高低？
培养基红色的深浅
（四）统计微生物的数量可用哪些方法？
稀释涂布平板法，显微镜直接记数法
四、操作步骤：
１、制备无菌的ＬＢ固体培养基和尿素固体培养基
２、倒平板：倒３个ＬＢ培养基，９个尿素固体培养基
３、制备一定浓度梯度的细菌悬液：
? 通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基 pH 的变化(脲酶催化的化学反应 )
? 统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生 物的数量
三、实验中涉及到的一些问题：
（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？ （选材的问题） 没硬化，腐殖质丰富的土壤
（二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？
尿素
80g
选择培养基
? LB培养基（1L） 蛋白胨： 10g 酵母粉： 5g NaCl： 10g 琼脂： 20g
LB培养基 是一种培养 基的名称 ,生化分子实 验中一般用该培养基来 预培养菌种 ,使菌种成
倒平板
? 需要倒3个LB平板，9个尿素平板
LB(对照)
尿素
Leabharlann Baidu
10-2
10-3
10-4
每个稀释度 1个LB对照平板
应从操作的各个细节保证“无菌”。 例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、 吸管头不要接触任何其他物体、吸管要 在酒精灯火焰周围等等。
防止冷凝水污
37℃倒置培养 染培养皿，防 止其它细菌污 染。
按浓度捆成一摞
恒温37℃培养
五、操作步骤：（学生做）
１、制备无菌的ＬＢ固体培养基和尿素固体培养基
２、倒平板：倒２个ＬＢ培养基，２个尿素固体培养基
? 表明能利用尿素的细菌在土壤菌落中只占 有极少数。
细菌
尿素 中性
NH3 碱性
酚红颜色： 黄色
紫红色
稀释涂布平板法的原理
? 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不 同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基 的表面，进行培养，以形成标准菌落
? http://www.tudou.com/programs/view/4 GG6NWunN6w/
二、实验目的:
? 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌 (有 脲酶)
? 因为琼脂是未被纯化的混合物，内含一定 量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基， 会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这 样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素 为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细 菌的筛选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂 做固化剂
2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什 么作用
? 土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨， 氨使土壤碱化，氨还与SO42-等离子形成化 合物，使土壤板结。而脲酶的细菌不仅使 动植物尸体降解，而且利用了所形成的氨， 有利于自然界中氮的循环。
３、制备一定浓度梯度的细菌悬液：
１g土壤＋９９ml无菌水，振荡，为１０ ２稀释液，依次 制备１０ ３、１０ ４（０.５＋４.５ml无菌水） 的土壤稀 释液。
４、稀释涂布分离法分离细菌
５、培养观察（倒置，３７度）
10-4 、 10-3,、 10-2
思考1、题为：什么要用琼脂糖代替琼脂配置 固体培养基