劳拉西泮片有关物质检查方法的比较

劳拉西泮片有关物质检查方法的比较

目的比较并讨论中国药典2015年版二部和美国药典39版中劳拉西泮片有关物质检查方法的异同，为选择合理有效的有关物质检测方法提供科学依据。方法比较两种检测方法在杂质分离能力、方法学以及检测结果一致性等方面的差异并进行评价。结果采用中国药典检测方法对劳拉西泮片中主要杂质之间的分离效果差，从而影响有关物质结果的判定；美国药典检测方法杂质分离好，灵敏度高，提高了分析方法的专属性和结果的准确性。结论美国药典有关物质检测方法更适合劳拉西泮片中杂质的控制，从而保证该产品的质量和安全。

[Abstract] Objective To compare and discuss the differences and similarities of related substances test method on lorazepam tablets between Chinese pharmacopoeia 2015 edition two and United States pharmacopoeia 39 edition. Methods The differences in the aspects of impurity separation capability，methodology and the consistency of test results etc between the two test methods were compared and evaluated. Results The separation effect of major impurities in lorazepam tablets by the test method of Chinese pharmacopoeia was bad，which could influence the determination of related substances result，while the impurity separation effect by the test method of United States pharmacopoeia was good，had high sensitivity and improved the specificity of analytical method and the accuracy of results. Conclusion The relative substances’ test method of United States pharmacopoeia was more suitable for the impurity control in lorazepam tablets，which ensured the quality and safety of the product.

[Key words] Lorazepam tablets；High performance liquid chromatography method；Related substances；Test method；Separating degree

劳拉西泮属于苯二氮类精神安定药，具有镇静、催眠和抗癫痫等作用[1-3]。其常用口服固体制剂劳拉西泮片是一线抗癫痫持续状态的首选药物[4-7]。查阅各主要国家和地区药典，劳拉西泮原料药在欧洲药典8.0版（EP8.0）[8]、英国药典2016年版（BP2016）[9]、美国药典39版（USP39）[10]、日本药局方ⅩⅥ版（JP16）[11]和中国药典2015年版二部（ChP2015）[12]均有收载，其制剂劳拉西泮片在BP2016、USP39和ChP2015有收载。根据文献报道[13-15]，劳拉西泮易受酸和热等条件影响降解产生出6-氯-4-（邻氯苯基）-2-喹唑啉甲醛（即USP39中杂质C）等杂质，因此，收载有本品及其制剂的药典中均设立了有关物质检查项。其中，在劳拉西泮片有关物质检查项下，BP2016采用薄层色谱（TLC）法，USP39和ChP2015采用高效液相色谱（HPLC）法。

在实际检验检测工作中发现，采用ChP2015色谱条件对劳拉西泮片中有关物质进行检查时，杂质C与相邻杂质不能有效分离，造成测定结果不准确甚至可能造成检验结论的误判。同时，通过试验发现，USP39中劳拉西泮片有关物质检测方法灵敏度高，专属性强，各杂质之间以及杂质与主成分之间分离度较好，该方法优于ChP2015中的检测方法，更适合劳拉西泮片有关物质的检测和控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100型高效液相色谱仪；Sartorius CP225D型电子天平；GW-UP型普析通用超纯水器；天大天发科技有限公司YB-2型澄明度检测仪；上海一恒科学仪器有限公司HWS-24型电热恒温水浴锅。

1.2 试药

劳拉西泮片（A厂家，规格：1mg，批号：131002，140301，140402；B厂家，规格：1mg，批号：B140701，B140434）；劳拉西泮片辅料由厂家提供；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 ChP2015有关物质检查方法（ChP法）

2.1.1 色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.05mol/L磷酸二氢铵溶液（含0.5%三乙胺，用磷酸调节pH值至2.5）-甲醇-乙腈（40∶35∶30）；流速：1.0mL/min，检测波长：230nm，柱温：30℃，进样量：20μL；稀释溶剂：乙腈。2.1.2 测定方法取本品细粉适量（约相当于劳拉西泮2mg），置10mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取需滤液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成份保留时间的3倍。

2.1.3 测定结果杂质C与相邻杂质（相对保留时间分别约为1.9和1.8）不能有效分离（图1B），将色谱柱更换为Xtimate-XB C18柱（150mm×4.6mm，5μm）（图1C）或Diamonsil C18柱（图1D）（150mm×4.6mm，5μm），并通过改变流动相比例±5%、pH值±0.2、柱温±5℃等条件下均不能有效改善杂质分离情况，杂质C与相邻杂质重叠严重，甚至重合，影响了有关物质的指认和结果判定。

2.2 USP39有关物质检查方法（简称USP法）

2.2.1 色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：水-乙腈-冰醋酸（50∶50∶1.2）；流速1.0mL/min，检测波长：230nm，柱温：30℃；稀释溶剂：甲醇-缓冲液（三水合乙酸钠67.7g，加水1L 溶解，用冰醋酸调pH值至5.0±0.05）（75∶25）。

2.2.2 测定方法除稀释剂外，其余条件同“2.1.2”项。

2.2.3 测定结果与ChP法杂质检出个数一致，均检出3个杂质，但本法色谱图中，杂质C与相邻杂质（相对保留时间分别为2.2和1.8）能完全分离，主