免疫凝集反应及临床应用演示教学

0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5
菌液 1
2 3 45 6 7
结 果
试管凝集试验原理
试管凝集试验结果判断
上清 清亮 轻度混浊 中等混浊 混浊 与对照相同
沉淀 大的凝集块 大多凝集管底 小、部分凝集块 很小的凝集颗粒 无凝集现象
凝集程度 ++++ +++ ++ + -
管底沉淀 凝集程度
致 敏
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
红
致敏
细 胞
待测抗体
红
间接血凝试验原理
细 胞
凝
集
血凝试验强度
-：红细胞沉积于孔底 +：红细胞沉积于孔底，周围有散在少量凝集 ++：红细胞形成凝集，面积较小，边缘较松散 +++：红细胞形成片层凝集，面积略多于++ ++++：红细胞形成片层凝集，均匀布满孔底，或边缘皱缩如花边状
自身红细胞凝集试验
分类：直接与间接凝集反应
直接凝集反应 direct agglutination
颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质 的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。
包括：
玻片凝集试验 试管凝集试验
➢玻片凝集试验：
定性 已知抗体检测抗原 简便、快速 菌种的诊断或分型 ABO血型的鉴定
➢试管凝集试验：
半定量 已知抗原检测抗体 易引起抗原的非特异性凝集 肥达试验
反向间接凝集反应
用抗体致敏载体----检测抗原
间接凝集抑制反应
用抗原致敏载体--检测抗原
有凝集颗
粒为阴性
协同凝集反应
➢ 反向间接凝集试验，载体为金黄色葡 萄球菌
➢ 金黄色葡萄球菌的细胞壁成分A蛋白， 和IgG的Fc段结合，使Fab段暴露在菌 体表面， Fab段仍然保持正常的抗体 活性。
➢ 利用这种特性可以将特异性IgG结合在 菌体上，形成致敏颗粒，检测特异性 抗原。
➢ 与一般间接血凝试验不同 之处为反应中的红细胞是未 经致敏的受检者新鲜红细胞 ➢ 主要试剂材料为抗红细胞 单克隆抗体，能与红细胞结 合，但不引起凝集反应 ➢ 这种抗体与另一特异性抗 体连接成的双功能抗体可用 于检测标本中的抗原 ➢ 如与特异性抗原连接，则 可用于检测标本中的抗体 ➢ 反应中的标本为受检者的 全血 ➢ HIV抗体、HBV抗原检测
免疫凝集反应及临床应用
刘静 2014.11.26
凝集反应定义
细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗 原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏 颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应， 在一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。
凝集反应
反应阶段：
➢抗原抗体的特异性结合阶段
➢出现肉眼可见的凝集现象
间接Coombs试验
检测血清中游离的不完全抗体
临床应用
➢检测母体Rh(D)抗体 ➢检测红细胞不相容的输血所产生 的血型抗体
➢ 当致敏明胶颗粒与样品血清作用时，若血清 含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色 凝集
➢ 常用于抗HIV-1抗体和抗精子抗体的检测
➢ 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)
抗球蛋白参与的血凝试验
抗球蛋白参与的血凝试验
➢ 又称Coombs试验，利用抗球蛋白抗体作为第二 抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体 ，使红细胞凝集
➢ 用于检测抗红细胞不完全抗体
➢ 不完全抗体：能与颗粒抗原牢固结合，但一般不 出现可见反应，多为7S的IgG
➢ 诊断免疫性溶血性贫血的主要方法
抗球蛋白参与的血凝试验
分为两种方法： ➢ 直接Coombs试验 ➢ 间接Coombs试验
直接Coombs试验
检测红细胞上的不完全抗体
临床应用
➢新生儿溶血症 ➢自身免疫性溶血症 ➢特发性自身免疫性贫血 ➢医源性溶血
胶乳凝集试验
➢ 以聚苯乙烯胶乳为载体颗粒的间接凝集反应 ➢ 胶乳为人工合成的载体，性能比红细胞稳定
，均一性好 ➢ 但与蛋白质结合能力以及聚集性能不如红细
胞 ➢ 因此作为间接凝集反应，胶乳凝集的敏感度
不及血凝试验
明胶凝集试验
➢ 以明胶为载体颗粒的间接凝集反应
➢ 用粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原或重组抗原
反应特点：
➢IgM的作用比IgG大数百倍
➢IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全 抗体
可见反应形成
环境因素
电解质：稀释液或缓冲液（8.5g/L NaCl） pH：pH6～pH9（ pH3为细菌抗原的等电点） 温度：15℃～40℃，37℃最适（ 4℃特例 ） 反应时间：不同反应时间不同 外力：震荡或搅拌
混 合
SPA
IgG
原理图
SPA- IgG
SPAIgG-待测 抗原凝集 颗粒
待测抗原
按载体分类间接凝集试验
➢间接血凝试验 ➢胶乳凝集试验 ➢明胶凝集试验
间接血凝试验
➢ 以红细胞为载体的间接凝集试验。 ➢ 将已知抗原(或抗体）致敏红细胞，
与相应抗体（或抗原）特异结合，出 现红细胞凝集现象。
红细胞 抗原
试管凝集试验 结果判断
最高稀释比例
待测血清的滴度
间接凝集反应 indirect agglutination
将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表 面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解 质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象
载体种类
➢RBC、白陶土、活性炭、某些细 菌、聚苯乙烯胶乳颗粒
良好载体有如下几点基本要求：①在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；②大小 均匀；③比重与介质相似，短时间内不能沉淀；④无化学或血清学活性；⑤吸 附抗原（或抗体）后，不影响其活性。
目前应用最广的是人的O型红细胞和绵羊红细胞。而后者应用更广，因为其 来源方便。另外绵羊红细胞的表面有大量的（约1 000个以上）糖蛋白受体， 极易吸附某些抗原物质，吸附性能好。
间接凝集反应
➢正向间接凝集试验 ➢反向间接凝集试验 ➢间接凝集抑制试验 ➢协同凝集试验
正向间接凝集反应
用抗原致敏载体--检测抗体