免疫凝集反应及临床应用演示教学
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凝集反应现象的全面解析及实际应用
凝集反应现象的全面解析及实际应用一、引言凝集反应是一种重要的血清学反应，广泛应用于医学诊断、血型鉴定和流行病学调查等领域。
本文将详细介绍凝集反应的定义、分类、机制、应用及其在不同领域的具体案例。
二、凝集反应的定义和分类1. 定义凝集反应（Agglutination Reaction）是指颗粒性抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集块的现象¹。
2. 分类- 直接凝集反应：颗粒性抗原直接与相应抗体结合，形成凝集块。
常用于细菌鉴定和血型检测²。
- 间接凝集反应：可溶性抗原或抗体先吸附于颗粒状载体表面，再与相应抗体或抗原结合，形成凝集块。
常用于检测微量抗体或抗原³。
三、凝集反应的机制1. 抗原抗体结合抗原与抗体的结合是凝集反应的基础。
抗原表面具有特异性抗原决定簇，抗体通过其结合部位与抗原结合，形成抗原抗体复合物⁴。
2. 电解质的作用电解质（如生理盐水）在凝集反应中起到中和抗原抗体复合物表面电荷的作用，降低分子间的静电排斥力，使抗原抗体复合物更易凝集⁵。
3. 凝集块的形成在电解质的作用下，抗原抗体复合物失去静电排斥力，分子间相互吸引，形成肉眼可见的凝集块⁶。
四、凝集反应的应用1. 医学诊断- 细菌鉴定：通过凝集反应可以快速鉴定细菌种类，如伤寒杆菌的肥达氏反应。
- 血型鉴定：利用凝集反应可以准确鉴定ABO血型系统中的血型。
2. 流行病学调查凝集反应在流行病学调查中用于检测人群中抗体的存在和水平，帮助判断疾病的流行情况。
3. 临床诊断- 感染性疾病：通过凝集反应检测患者血清中的特异性抗体，诊断感染性疾病。
- 自身免疫性疾病：检测患者血清中的自身抗体，辅助诊断自身免疫性疾病。
五、凝集反应的具体案例1. 伤寒诊断肥达氏反应是利用伤寒杆菌抗原与患者血清中的抗体发生凝集反应，诊断伤寒病。
2. 布氏病诊断瑞特氏反应是利用布氏杆菌抗原与患者血清中的抗体发生凝集反应，诊断布氏病。
5章凝集反应 Microsoft PowerPoint 演示文稿
抗原抗体在玻片上进行的反应，血型鉴定、细菌分型。
相应抗体
玻片法直接凝集反应示意图
(1)半定量试验-抗体效价测定。 (2)玻片凝集试验也可用试管法，如肥达外斐反应。 非特异性凝集可出现假阳性，必须做阴性对照(不加抗体， 只加抗原)。
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1:2 1:4 1:8 1;16 1:32 1:64 1:64 1:128
临床检验中早期妊娠试验，现已被金标法替代。
三、间接血凝试验 间接血凝实验是以红细胞作为载体的间接凝集实验，用已 知的抗原或抗体致敏红细胞与标本中的抗体或抗原特异性结 合。常用绵羊、家兔等红细胞。
自身红细胞凝集试验 样本：患者全血(含有红细胞，血清中有待检的抗原或抗)。 试剂：抗红细胞单克隆抗体与已知抗体连接，检测未知抗 原。例如：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
载体颗粒
抗原致敏颗粒
凝集
正向间接凝集反应原理
已知 抗原
无抗体
胶乳 颗粒
载体颗粒
抗原致敏颗粒
无凝集
无相应抗体存在时无凝集现象发生
2.反向间接凝集反应 用特异性抗体(已知)致敏载体检测未知抗原。
已知 抗体
待检 抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
凝集
反向间接凝集反应原理
已知 抗体
无抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
无凝集
待检血清 (RH抗体)
不完全抗体 (RH抗体)
Rh抗原
凝集 现象
Rh＋O型红细胞
抗人球蛋白
间接接coombs试验原理示意图
直接与间接Coombs试验的区别
试验 检测目的
样本
直接 红细胞表面的
相应抗体
玻片法直接凝集反应示意图
(1)半定量试验-抗体效价测定。 (2)玻片凝集试验也可用试管法，如肥达外斐反应。 非特异性凝集可出现假阳性，必须做阴性对照(不加抗体， 只加抗原)。
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临床检验中早期妊娠试验，现已被金标法替代。
三、间接血凝试验 间接血凝实验是以红细胞作为载体的间接凝集实验，用已 知的抗原或抗体致敏红细胞与标本中的抗体或抗原特异性结 合。常用绵羊、家兔等红细胞。
自身红细胞凝集试验 样本：患者全血(含有红细胞，血清中有待检的抗原或抗)。 试剂：抗红细胞单克隆抗体与已知抗体连接，检测未知抗 原。例如：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
载体颗粒
抗原致敏颗粒
凝集
正向间接凝集反应原理
已知 抗原
无抗体
胶乳 颗粒
载体颗粒
抗原致敏颗粒
无凝集
无相应抗体存在时无凝集现象发生
2.反向间接凝集反应 用特异性抗体(已知)致敏载体检测未知抗原。
已知 抗体
待检 抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
凝集
反向间接凝集反应原理
已知 抗体
无抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
无凝集
待检血清 (RH抗体)
不完全抗体 (RH抗体)
Rh抗原
凝集 现象
Rh＋O型红细胞
抗人球蛋白
间接接coombs试验原理示意图
直接与间接Coombs试验的区别
试验 检测目的
样本
直接 红细胞表面的
医学免疫学：实验2 凝集反应(ABO血型测定)
实验目的:
检测血清标本中有无HBsAb
材料:
48孔ELISA板
阳性对照血清（HBsAb） 阴性对照血清 酶标二抗
乙肝病毒表面抗体 诊断试剂盒
洗涤液
底物A和B
微量加样器，待测血清标本等
实验方法
微孔板已包被HBsAg
HBsAg
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+ + — — ① ① ① ① ② ② ② ②A + + — — ③ ③ ③ ③ ④ ④ ④ ④B + + — — ⑤ ⑤ ⑤ ⑤ ⑥ ⑥ ⑥ ⑥C + + — — ⑦ ⑦ ⑦ ⑦ ⑧ ⑧ ⑧ ⑧D
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值
酶标板
酶标仪Βιβλιοθήκη 样+-1 2 3456
每孔加 50μl 不同的血清样本 Positive control (HBsAb) ：1 滴 Negative control (NS): 1 滴
加样
+
- sample
加酶结合物
enzyme
每孔加酶结合物1滴 混匀， 37 ℃ 30 min.
放射物标记技术 酶标技术
免疫荧光技术
酶联免疫吸附试验
酶免疫组化技术
双抗体夹心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
直接法
原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验)
不显色
洗涤
洗涤
1.包被已知抗原 2.加入待测标本 （未知抗体？） 3.加入酶标二抗 （即抗抗体 ：抗人Ig的抗体） 4.加入底物
颜色改变 = 待测标本中存在抗体
实验结果
呈红色片状凝集颗粒为阳性 实验结束后，洗涤试管；
《凝集反应实验》幻灯片PPT
是指细菌、螺旋体和红细胞等颗 粒性抗原，在适当电解质参与下可直 接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝 集。反响中的抗原称为凝集原，参与 反响的抗体称为凝集素。
二、间接凝集反响
将的可溶性抗原〔或抗体〕吸附或耦联 到与免疫无关的载体颗粒外表,形成致敏颗粒, 再与相应抗体〔或抗原〕作用,在适宜的电解 质存在的条件下，出现肉眼所见的凝集现象， 称之。
A、正向：诊断试剂为抗原致 敏的载体颗粒及相应抗体，用 于检测标本中是否存在与致敏 抗原一样的抗原。
第一种情况：
(标本)
结果：免疫微球不凝集为阳性
第二种情况：
标本 中无 抗原
结果：免疫微球凝集为阴性
3间接凝集抑制反响
B、反向：诊断试剂为抗体致敏的 载体颗粒及相应抗原，用于检测标 本中是否存在与致敏抗体一样的抗 体。
凝集反响
是指颗粒性抗原(红细胞、细菌等)或可 溶性抗原〔或抗体〕与载体颗粒结合 成致敏颗粒后与相应抗体〔或抗原〕 发生特异性结合，在适当电解质存在 下，形成肉眼可见的凝集现象。
在免疫学技术中，凝集反响可分为 直接凝集反响和间接凝集反响两大类 。
凝集反响的类型 一、直接凝集反响(direct agglutination)
非特异性类脂抗体测定
1、性病研究实验室试验〔VDRL〕 2、不加热血清反响素试验〔USR〕 3、快速血浆反响素试验 〔RPR〕 4、甲苯胺红试验〔TRUST〕
特异性梅毒血清学试验
梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗 原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，其 敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试 验，但不能用作疗效观察的指标。
• 梅毒快速血浆反响素试验 • Rapid Plasma Reagin 〔RPR〕 • RPR试验
二、间接凝集反响
将的可溶性抗原〔或抗体〕吸附或耦联 到与免疫无关的载体颗粒外表,形成致敏颗粒, 再与相应抗体〔或抗原〕作用,在适宜的电解 质存在的条件下，出现肉眼所见的凝集现象， 称之。
A、正向：诊断试剂为抗原致 敏的载体颗粒及相应抗体，用 于检测标本中是否存在与致敏 抗原一样的抗原。
第一种情况：
(标本)
结果：免疫微球不凝集为阳性
第二种情况：
标本 中无 抗原
结果：免疫微球凝集为阴性
3间接凝集抑制反响
B、反向：诊断试剂为抗体致敏的 载体颗粒及相应抗原，用于检测标 本中是否存在与致敏抗体一样的抗 体。
凝集反响
是指颗粒性抗原(红细胞、细菌等)或可 溶性抗原〔或抗体〕与载体颗粒结合 成致敏颗粒后与相应抗体〔或抗原〕 发生特异性结合，在适当电解质存在 下，形成肉眼可见的凝集现象。
在免疫学技术中，凝集反响可分为 直接凝集反响和间接凝集反响两大类 。
凝集反响的类型 一、直接凝集反响(direct agglutination)
非特异性类脂抗体测定
1、性病研究实验室试验〔VDRL〕 2、不加热血清反响素试验〔USR〕 3、快速血浆反响素试验 〔RPR〕 4、甲苯胺红试验〔TRUST〕
特异性梅毒血清学试验
梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗 原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，其 敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试 验，但不能用作疗效观察的指标。
• 梅毒快速血浆反响素试验 • Rapid Plasma Reagin 〔RPR〕 • RPR试验
医学免疫学检验-凝集反应PPT优选课件
凝集反应
第一课件网网站
2020/10/18
1
一、凝集反应的概念及特点
定义：细菌，螺旋体，红细胞等颗粒性 抗 原,或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合 成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原） 发生特异结合，在适当电解质存在下，形成 肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应 （agglutination)。 反应的两个阶段：1）抗原抗体的特异性结合 阶段，2）出现肉眼可见的凝集现象。
直接Coombs试验 检测红细胞上的不完全抗体
间接Coombs试验 检测游离在血清中的不完全抗体
2020/10/18
12
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13
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18
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2020/10/18
2
2020/10/18
3
特点：抗原抗体反应既可以在体内作为 体液免疫应答的效应机制自然发生，也 可以在体外作为免疫学试验的结果而出 现，体外实验的抗原抗体反应称为血清 学反应（serological reaction).
2020/10/18
4
二.直接凝集反应
定义：细菌、红细胞等颗粒性抗原在适量电解 质的参与下，直接与相应抗体结合，出现肉眼 可见的凝集现象，该反应中的抗原称为凝集原 （agglutinatinogen)，抗体称为凝集素 （ agglutinin)。 一）玻片凝集试验（ABO血型鉴定）；二） 试管凝集试验（肥达试验）。
缘皱缩成花边状
2020/10/18
9
自身红细胞凝集试验
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2020/10/18
1
一、凝集反应的概念及特点
定义：细菌，螺旋体，红细胞等颗粒性 抗 原,或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合 成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原） 发生特异结合，在适当电解质存在下，形成 肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应 （agglutination)。 反应的两个阶段：1）抗原抗体的特异性结合 阶段，2）出现肉眼可见的凝集现象。
直接Coombs试验 检测红细胞上的不完全抗体
间接Coombs试验 检测游离在血清中的不完全抗体
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特点：抗原抗体反应既可以在体内作为 体液免疫应答的效应机制自然发生，也 可以在体外作为免疫学试验的结果而出 现，体外实验的抗原抗体反应称为血清 学反应（serological reaction).
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二.直接凝集反应
定义：细菌、红细胞等颗粒性抗原在适量电解 质的参与下，直接与相应抗体结合，出现肉眼 可见的凝集现象，该反应中的抗原称为凝集原 （agglutinatinogen)，抗体称为凝集素 （ agglutinin)。 一）玻片凝集试验（ABO血型鉴定）；二） 试管凝集试验（肥达试验）。
缘皱缩成花边状
2020/10/18
9
自身红细胞凝集试验
免疫凝集类实验演示文稿
液（7×108/ml)、生理盐水
第五页，总共五十二页。
实验方法（Widal test）
1. 取试管7支，依次编号并做好标记。
2. 每支试管中加生理盐水0.5ml。
3. 倍比稀释血清：
取1∶20稀释的待测血清0.5ml加入到第1管，混匀后吸取 0.5ml加入到第2管，如此连续稀释至第6管，混匀后吸取0.5ml弃 去；第7管不加血清作为阴性对照。
❖ 临床上开展的外斐反应是利用与立克次体有共同耐热性多糖抗原的 变形杆菌OX19、OX2、OXk菌株代替立克次体作为已知抗原，与患 者血清进行凝集试验，以辅助诊断斑疹伤寒、恙虫病等立克次体疾 病。
❖ 现有OX19、OX2、OXk三种诊断菌液和待测血清，请写出利用试管凝集法进
行的外斐试验的操作步骤。
第十三页，总共五十二页。
❖ 肉眼观察不够清晰者，可在低倍镜下观察。
第十二页，总共五十二页。
实验讨论
❖ 肥大试验是一种经典的半定量试管凝集试验。在临床上主要用已知 的伤寒沙门菌O或H抗原检测血清中有无相应的特异性抗体及其效价 ，以协助诊断伤寒病或供流行病学调查。
❖ 凝集反应只有在抗原抗体比例适当时，才能出现肉眼可见的凝集现象 。
免疫凝集类实验演示文稿
第一页，总共五十二页。
（优选）第单元免疫凝集类实验
第二页，总共五十二页。
❖ 颗粒性抗原与相应抗体直接反应，在适当电解质 参与下出现的肉眼可见的凝集现象。
❖ 常用的试验方法有玻片凝集法和试管凝集法。 ❖ 本实验以试管法凝集试验——肥大试验（Widal
test）验证凝集反应及其特点。
❖ 以胶乳凝集试验检测类风湿因子（rheumatoid
factor,RF）为例验证间接凝集实验的原理和特点
第五页，总共五十二页。
实验方法（Widal test）
1. 取试管7支，依次编号并做好标记。
2. 每支试管中加生理盐水0.5ml。
3. 倍比稀释血清：
取1∶20稀释的待测血清0.5ml加入到第1管，混匀后吸取 0.5ml加入到第2管，如此连续稀释至第6管，混匀后吸取0.5ml弃 去；第7管不加血清作为阴性对照。
❖ 临床上开展的外斐反应是利用与立克次体有共同耐热性多糖抗原的 变形杆菌OX19、OX2、OXk菌株代替立克次体作为已知抗原，与患 者血清进行凝集试验，以辅助诊断斑疹伤寒、恙虫病等立克次体疾 病。
❖ 现有OX19、OX2、OXk三种诊断菌液和待测血清，请写出利用试管凝集法进
行的外斐试验的操作步骤。
第十三页，总共五十二页。
❖ 肉眼观察不够清晰者，可在低倍镜下观察。
第十二页，总共五十二页。
实验讨论
❖ 肥大试验是一种经典的半定量试管凝集试验。在临床上主要用已知 的伤寒沙门菌O或H抗原检测血清中有无相应的特异性抗体及其效价 ，以协助诊断伤寒病或供流行病学调查。
❖ 凝集反应只有在抗原抗体比例适当时，才能出现肉眼可见的凝集现象 。
免疫凝集类实验演示文稿
第一页，总共五十二页。
（优选）第单元免疫凝集类实验
第二页，总共五十二页。
❖ 颗粒性抗原与相应抗体直接反应，在适当电解质 参与下出现的肉眼可见的凝集现象。
❖ 常用的试验方法有玻片凝集法和试管凝集法。 ❖ 本实验以试管法凝集试验——肥大试验（Widal
test）验证凝集反应及其特点。
❖ 以胶乳凝集试验检测类风湿因子（rheumatoid
factor,RF）为例验证间接凝集实验的原理和特点
《凝集反应》课件
特性
抗原抗体反应具有特异性、可逆 性、比例性、阶段性等特点。
凝集反应的类型
直接凝集反应
间接凝集抑制反应
颗粒状抗原与相应抗体直接结合出现 的凝集现象。如玻片凝集试验、试管 凝集试验等。
在间接凝集反应的基础上，加入特异 性抗体，使原有的间接凝集现象受到 抑制。常用于测定激素、抗原等小分 子物质。
间接凝集反应
纳米技术
纳米技术与凝集反应的结合可以实现更精细的样本处理和检 测。纳米材料具有优异的物理化学性质，可以改善凝集反应 的条件和效果，为凝集反应的发展提供新的思路和方向。
THANKS
感谢您的观看
在最适pH值下，凝集反应的速 率和程度可能达到最大值。
pH值的改变可能影响分子的构 象和稳定性，从而影响凝集反 应的进行。
Part
04
凝集反应的实验操作与演示
实验前的准备
实验材料
试管、滴管、抗A血清、抗B血清、A型血、B型血、O型血等。
实验设备
显微镜、离心机、恒温水浴箱等。
实验试剂
生理盐水、洗涤液等。
细菌凝集试验可用于鉴定细菌种类、检测抗体水平以及诊断某些传染病 。
常见的细菌凝集试验包括伤寒沙门氏菌的肥达试验和副伤寒甲、乙的副 伤寒沙门氏菌的肥达试验等。
病毒凝集反应的实例
病毒凝集反应是指病毒颗粒与细胞表面 受体结合后，引起细胞聚集的现象。
病毒凝集反应可用于病毒的分离和鉴定 ，例如流感病毒的分离和鉴定。
准确性。
凝集反应的热力学
热力学研究反应的平衡常数、能 量变化和熵变等性质，对于理解 凝集反应的机理和性质非常重要
。
热力学参数如焓变、熵变和吉布 斯自由能变等可以描述反应的能
量变化和平衡状态。
抗原抗体反应具有特异性、可逆 性、比例性、阶段性等特点。
凝集反应的类型
直接凝集反应
间接凝集抑制反应
颗粒状抗原与相应抗体直接结合出现 的凝集现象。如玻片凝集试验、试管 凝集试验等。
在间接凝集反应的基础上，加入特异 性抗体，使原有的间接凝集现象受到 抑制。常用于测定激素、抗原等小分 子物质。
间接凝集反应
纳米技术
纳米技术与凝集反应的结合可以实现更精细的样本处理和检 测。纳米材料具有优异的物理化学性质，可以改善凝集反应 的条件和效果，为凝集反应的发展提供新的思路和方向。
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pH值的改变可能影响分子的构 象和稳定性，从而影响凝集反 应的进行。
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凝集反应的实验操作与演示
实验前的准备
实验材料
试管、滴管、抗A血清、抗B血清、A型血、B型血、O型血等。
实验设备
显微镜、离心机、恒温水浴箱等。
实验试剂
生理盐水、洗涤液等。
细菌凝集试验可用于鉴定细菌种类、检测抗体水平以及诊断某些传染病 。
常见的细菌凝集试验包括伤寒沙门氏菌的肥达试验和副伤寒甲、乙的副 伤寒沙门氏菌的肥达试验等。
病毒凝集反应的实例
病毒凝集反应是指病毒颗粒与细胞表面 受体结合后，引起细胞聚集的现象。
病毒凝集反应可用于病毒的分离和鉴定 ，例如流感病毒的分离和鉴定。
准确性。
凝集反应的热力学
热力学研究反应的平衡常数、能 量变化和熵变等性质，对于理解 凝集反应的机理和性质非常重要
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热力学参数如焓变、熵变和吉布 斯自由能变等可以描述反应的能
量变化和平衡状态。
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0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5
菌液 1
2 3 45 6 7
结 果
试管凝集试验原理
试管凝集试验结果判断
上清 清亮 轻度混浊 中等混浊 混浊 与对照相同
沉淀 大的凝集块 大多凝集管底 小、部分凝集块 很小的凝集颗粒 无凝集现象
凝集程度 ++++ +++ ++ + -
管底沉淀 凝集程度
目前应用最广的是人的O型红细胞和绵羊红细胞。而后者应用更广，因为其 来源方便。另外绵羊红细胞的表面有大量的（约1 000个以上）糖蛋白受体， 极易吸附某些抗原物质，吸附性能好。
间接凝集反应
➢正向间接凝集试验 ➢反向间接凝集试验 ➢间接凝集抑制试验 ➢协同凝集试验
正向间接凝集反应
用抗原致敏载体--检测抗体
➢ 当致敏明胶颗粒与样品血清作用时，若血清 含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色 凝集
➢ 常用于抗HIV-1抗体和抗精子抗体的检测
➢ 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)
抗球蛋白参与的血凝试验
抗球蛋白参与的血凝试验
➢ 又称Coombs试验，利用抗球蛋白抗体作为第二 抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体 ，使红细胞凝集
混 合
SPA
IgG
原理图
SPA- IgG
SPAIgG-待测 抗原凝集 颗粒
待测抗原
按载体分类间接凝集试验
➢间接血凝试验 ➢胶乳凝集试验 ➢明胶凝集试验
间接血凝试验
➢ 以红细胞为载体的间接凝集试验。 ➢ 将已知抗原(或抗体）致敏红细胞，
与相应抗体（或抗原）特异结合，出 现红细胞凝集现象。
红细胞 抗原
➢ 用于检测抗红细胞不完全抗体
➢ 不完全抗体：能与颗粒抗原牢固结合，但一般不 出现可见反应，多为7S的IgG
➢ 诊断免疫性溶血性贫血的主要方法
抗球蛋白参与的血凝试验
分为两种方法： ➢ 直接Coombs试验 ➢ 间接Coombs试验
直接Coombs试验
检测红细胞上的不完全抗体
临床应用
➢新生儿溶血症 ➢自身免疫性溶血症 ➢特发性自身免疫性贫血 ➢医源性溶血
反应特点：
➢IgM的作用比IgG大数百倍
➢IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全 抗体
可见反应形成
环境因素
电解质：稀释液或缓冲液（8.5g/L NaCl） pH：pH6～pH9（ pH3为细菌抗原的等电点） 温度：15℃～40℃，37℃最适（ 4℃特例 ） 反应时间：不同反应时间不同 外力：震荡或搅拌
分类：直接与间接凝集反应
直接凝集反应 direct agglutination
颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质 的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。
包括：
玻片凝集试验 试管凝集试验
➢玻片凝集试验：
定性 已知抗体检测抗原 简便、快速 菌种的诊断或分型 ABO血型的鉴定
➢试管凝集试验：
半定量 已知抗原检测抗体 易引起抗原的非特异性凝集 肥达试验
间接Coombs试验
检测血清中游离的不完全抗体
临床应用
➢检测母体Rh(D)抗体 ➢检测红细胞不相容的输血所产生 的血型抗体
致 敏
红
致敏
细 胞
待测抗体
红
间接血凝试验原理
细 胞
凝
集
血凝试验强度
-：红细胞沉积于孔底 +：红细胞沉积于孔底，周围有散在少量凝集 ++：红细胞形成凝集，面积较小，边缘较松散 +++：红细胞形成片层凝集，面积略多于++ ++++：红细胞形成片层凝集，均匀布满孔底，或边缘皱缩如花边状
自身红细胞凝集试验
免疫凝集反应及临床应用
刘静 2014.11.26
凝集反应定义
细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗 原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏 颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应， 在一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。
凝集反应
反应阶段：
➢抗原抗体的特异性结合阶段
➢出现肉眼可见的凝集现象
胶乳凝集试验
➢ 以聚苯乙烯胶乳为载体颗粒的间接凝集反应 ➢ 胶乳为人工合成的载体，性能比红细胞稳定
，均一性好 ➢ 但与蛋白质结合能力以及聚集性能不如红细
胞 ➢ 因此作为间接凝集反应，胶乳凝集的敏感度
不及血凝试验
明胶凝集试验
➢ 以明胶为载体颗粒的间接凝集反应
➢ 用粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原或重组抗原
试管凝集试验 结果判断
最高稀释比例
待测血清的滴度
间接凝集反应 indirect agglutination
将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表 面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解 质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象
载体种类
➢RBC、白陶土、活性炭、某些细 菌、聚苯乙烯胶乳颗粒
良好载体有如下几点基本要求：①在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；②大小 均匀；③比重与介质相似，短时间内不能沉淀；④无化学或血清学活性；⑤吸 附抗原（或抗体）后，不影响其活性。
➢ 与一般间接血凝试验不同 之处为反应中的红细胞是未 经致敏的受检者新鲜红细胞 ➢ 主要试剂材料为抗红细胞 单克隆抗体，能与红细胞结 合，但不引起凝集反应 ➢ 这种抗体与另一特异性抗 体连接成的双功能抗体可用 于检测标本中的抗原 ➢ 如与特异性抗原连接，则 可用于检测标本中的抗体 ➢ 反应中的标本为受检者的 全血 ➢ HIV抗体、HBV抗原检测
反向间接凝集反应
用抗体致敏载体----检测抗原
间接凝集抑制反应
用抗原致敏载体--检测抗原
有凝集颗
粒为阴性
协同凝集反应
➢ 反向间接凝集试验，载体为金黄色葡 萄球菌
➢ 金黄色葡萄球菌的细胞壁成分A蛋白， 和IgG的Fc段结合，使Fab段暴露在菌 体表面， Fab段仍然保持正常的抗体 活性。
➢ 利用这种特性可以将特异性IgG结合在 菌体上，形成致敏颗粒，检测特异性 抗原。