第五章 减压柱色谱分离技术要点
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为避免每一流分拆卸漏斗，可采用图B的方 法，该抽滤甁底部为磨口，减去负压后，更 换接受甁。
六、应用实例
1. VLC 法可用于合成反应混合物的分离．
delphinine(翠雀花碱)于220℃， 0．1 mmHg下 发生裂解反应，生成 Pyrodelphine (焦翠雀 灵)．两者的混台物用甲苯：丙酮＝24：1洗脱， 得到896mg Pyrodelphinines; 甲苯：丙＝19：1 洗脱，得到108 mg Delphinine．分离全程仅仅 花费2小时．
B．可也采用固体上样法。即先将样 品溶于极性溶剂，加入5～10份吸附 剂，旋转蒸发至干后，加到吸附剂的 表面上，然后进行洗脱。
四，VLC流动相选择
与柱层析相同，先用TLC来选择条件。VLC更 适用于梯度洗脱，可用二元，三元混合溶剂系 统。一般先用极性较小溶剂，如石油醚、正己 烷 、 环 己 烷 ， 然 后 逐 渐 加 大 极 性 （ CH2Cl2、 Et2O、AcOEt、CH3OH）
Байду номын сангаас
三、上样
放掉真空后，常压下加入低极性 溶剂于吸附剂表面上，减压使溶 剂均匀流过吸附剂。如有空隙， 需要重装。使柱子抽干后，重复 1～2次，即可准备上样。
A．用低极性溶剂或洗脱剂（如石油醚、 正己烷）溶解样品。常压下小心加入 柱顶端，再加入洗脱剂或溶剂覆盖吸 附剂表面，慢慢减压，使样品在柱顶 端形成样品层。
1.固定相；
常10u采m用～4T0LuCm用硅硅胶胶6、0HA或l26O03G,（）粒聚度酰：胺 等
2. 装柱：干法装柱法。
将吸附剂装入漏斗或短柱中，轻轻拍 紧或减压拍打或从顶端挤压，直至吸 附剂紧密，最后变得坚硬。吸附剂的 高度一般不超过5cm。
3，吸附剂用量：
（1）对于微量分离，样品＜100mg,可采用直径 为0.5～1cm色谱柱或漏斗，吸附剂高度为5cm， 一般固定相用量为10～15：1倍，如图4-a,可在 小试管中收集流分。
（2）对于0.5～1.0g样品，柱中装有2.5×4cm高 度的吸附剂较合适。
（3）对于1～10g样品的分离，可在柱中装入 5×5cm的吸附剂。
（4）较大样品分离，最好采用250ml砂芯漏斗中 进行。吸附剂的高度为5cm。（如图b）可用 三角烧瓶收集之。
加大吸附剂与样品比例，可提高分离度。常 用比例为30：1～300：1
2. VLC法用于多种天然化合物的分离
（1）曾有人用VLC法对姜中辛辣成分的分离
先将冷冻干燥的姜粉用丙酮提取，经过一系列溶剂分 配后，得所需部位。
选用一内径为3.5cm的100ml的布氏漏斗内装硅胶60 （40～63μm,Merck公司）9.5g, 高度3cm.
300mg姜提取物的溶液与硅胶60混和，蒸发除去溶剂 后，均匀分布于硅胶柱床表面上，并在样品表面上覆 盖一张与漏斗内径相同的滤纸，缓缓加入25ml的己烷。 待溶剂透过柱床后，开始减压抽干柱床，得第一流分。 继续用极性增大的溶剂（己烷－乙醚－乙醚－甲醇） 洗脱，每份25ml，共得20份洗脱液，利用该法可将姜 醇与姜烯酚完全分开。
极性溶剂的增加开始要缓慢（1%，2%，3% 等），然后增加的幅度可逐渐增大（5% 10% 20%等），通常收集20～25个流分可将所有成 分洗脱。
五、洗脱与收集
用适当溶剂系统洗脱或用梯度洗脱 （gradient elution）。
在常压下，加入溶剂后，将柱抽干，收集为 一个流分。真空度要求20～70mmHg；抽干 后再更换溶剂和容器，重复以上操作，并用 TLC跟踪每一个流分的分离情况（先摸一摸 再行动）。
VLC不同于常压柱层析和快速柱层析Fcc，因为后 两者洗脱剂是连续的，在操作中不会间断；而VLC 进行溶剂洗脱时，在加洗脱剂后，在柱后减压下全 部抽出，每一次洗脱收集一次，抽干后，再更换溶 剂，并再进行下一个流分的收集，所以在这一点上 VLC与PTLC多次展开极为相似。（展开一次后吹 干，再展）。
FCC采用柱前加压，而VLC采用柱后加压。
VLC可分离样品量达几十克，而FCC只能分离几克。
VLC吸附剂经处理后可反复使用。
二、实验装置与操作
1986年，Coll和Bowden曾介绍过一种 十分简单的用于实验室小规模的减压 液相色谱法装置（图－a,b）。
Pelletier在1986年，介绍可使用于较大规模的分 离的装置（图－2）
第一节 真空液相色谱技术
Vacuum Liquid Chromatography
真空液相色谱法，简称VLC，也称减压液相色 谱法。
是近几年来国外实验室迅速发展起来的新技术， 它是利用柱后减压使洗脱剂迅速通过固定相从 而很好的分离样品的色谱技术。
VLC具有快速，简易，高效，价廉等优点，目 前已成功的应用于有机制备以及天然产物如萜 类，类酯，双萜及多种生物样品的分离。
由于经典的柱层析费时费力，需要大量的固定 相和洗脱液，工作效率低，为此人们相继建立 了离心薄层、 VLC、 FCC等快速层析分离的 方法。其中VLC在天然产物分离中应用最多。
该法1969年由澳大利亚Coll J.C提出，1977年 首次应用于分离澳洲软珊瑚中2个新的二萜化
合物(Cembrenoids).
1 9 7 9 年 美 国 Targett.NM 将 该 法 命 名 为 Vacuum liquid chromatography (VLC), 并且详细报道了实验装置和操作方法。
从此以后，VLC便逐渐为广大化学家所 接受，并且在实验装置上作了进一步改 进。
一、VLC特点
VLC 实 质 上 是 柱 色 谱 ， 它 综 合 了 制 备 薄 层 （Preparative PTLC）和真空抽滤技术。
第五章 减压柱色谱 分离技术
为加快柱分离的速度和/或增加分离 度，通常采用在柱前加压和柱后减压 的方法进行柱层析与分离。 —柱前加压法通常称为加压柱色谱 —柱后减压法通常称为减压柱色谱
第一节 真空液相色谱技术 Vacuum Liquid Chromatography 第二节 半干柱液相色谱 Semi-Dry Column Chromatography SDC
六、应用实例
1. VLC 法可用于合成反应混合物的分离．
delphinine(翠雀花碱)于220℃， 0．1 mmHg下 发生裂解反应，生成 Pyrodelphine (焦翠雀 灵)．两者的混台物用甲苯：丙酮＝24：1洗脱， 得到896mg Pyrodelphinines; 甲苯：丙＝19：1 洗脱，得到108 mg Delphinine．分离全程仅仅 花费2小时．
B．可也采用固体上样法。即先将样 品溶于极性溶剂，加入5～10份吸附 剂，旋转蒸发至干后，加到吸附剂的 表面上，然后进行洗脱。
四，VLC流动相选择
与柱层析相同，先用TLC来选择条件。VLC更 适用于梯度洗脱，可用二元，三元混合溶剂系 统。一般先用极性较小溶剂，如石油醚、正己 烷 、 环 己 烷 ， 然 后 逐 渐 加 大 极 性 （ CH2Cl2、 Et2O、AcOEt、CH3OH）
Байду номын сангаас
三、上样
放掉真空后，常压下加入低极性 溶剂于吸附剂表面上，减压使溶 剂均匀流过吸附剂。如有空隙， 需要重装。使柱子抽干后，重复 1～2次，即可准备上样。
A．用低极性溶剂或洗脱剂（如石油醚、 正己烷）溶解样品。常压下小心加入 柱顶端，再加入洗脱剂或溶剂覆盖吸 附剂表面，慢慢减压，使样品在柱顶 端形成样品层。
1.固定相；
常10u采m用～4T0LuCm用硅硅胶胶6、0HA或l26O03G,（）粒聚度酰：胺 等
2. 装柱：干法装柱法。
将吸附剂装入漏斗或短柱中，轻轻拍 紧或减压拍打或从顶端挤压，直至吸 附剂紧密，最后变得坚硬。吸附剂的 高度一般不超过5cm。
3，吸附剂用量：
（1）对于微量分离，样品＜100mg,可采用直径 为0.5～1cm色谱柱或漏斗，吸附剂高度为5cm， 一般固定相用量为10～15：1倍，如图4-a,可在 小试管中收集流分。
（2）对于0.5～1.0g样品，柱中装有2.5×4cm高 度的吸附剂较合适。
（3）对于1～10g样品的分离，可在柱中装入 5×5cm的吸附剂。
（4）较大样品分离，最好采用250ml砂芯漏斗中 进行。吸附剂的高度为5cm。（如图b）可用 三角烧瓶收集之。
加大吸附剂与样品比例，可提高分离度。常 用比例为30：1～300：1
2. VLC法用于多种天然化合物的分离
（1）曾有人用VLC法对姜中辛辣成分的分离
先将冷冻干燥的姜粉用丙酮提取，经过一系列溶剂分 配后，得所需部位。
选用一内径为3.5cm的100ml的布氏漏斗内装硅胶60 （40～63μm,Merck公司）9.5g, 高度3cm.
300mg姜提取物的溶液与硅胶60混和，蒸发除去溶剂 后，均匀分布于硅胶柱床表面上，并在样品表面上覆 盖一张与漏斗内径相同的滤纸，缓缓加入25ml的己烷。 待溶剂透过柱床后，开始减压抽干柱床，得第一流分。 继续用极性增大的溶剂（己烷－乙醚－乙醚－甲醇） 洗脱，每份25ml，共得20份洗脱液，利用该法可将姜 醇与姜烯酚完全分开。
极性溶剂的增加开始要缓慢（1%，2%，3% 等），然后增加的幅度可逐渐增大（5% 10% 20%等），通常收集20～25个流分可将所有成 分洗脱。
五、洗脱与收集
用适当溶剂系统洗脱或用梯度洗脱 （gradient elution）。
在常压下，加入溶剂后，将柱抽干，收集为 一个流分。真空度要求20～70mmHg；抽干 后再更换溶剂和容器，重复以上操作，并用 TLC跟踪每一个流分的分离情况（先摸一摸 再行动）。
VLC不同于常压柱层析和快速柱层析Fcc，因为后 两者洗脱剂是连续的，在操作中不会间断；而VLC 进行溶剂洗脱时，在加洗脱剂后，在柱后减压下全 部抽出，每一次洗脱收集一次，抽干后，再更换溶 剂，并再进行下一个流分的收集，所以在这一点上 VLC与PTLC多次展开极为相似。（展开一次后吹 干，再展）。
FCC采用柱前加压，而VLC采用柱后加压。
VLC可分离样品量达几十克，而FCC只能分离几克。
VLC吸附剂经处理后可反复使用。
二、实验装置与操作
1986年，Coll和Bowden曾介绍过一种 十分简单的用于实验室小规模的减压 液相色谱法装置（图－a,b）。
Pelletier在1986年，介绍可使用于较大规模的分 离的装置（图－2）
第一节 真空液相色谱技术
Vacuum Liquid Chromatography
真空液相色谱法，简称VLC，也称减压液相色 谱法。
是近几年来国外实验室迅速发展起来的新技术， 它是利用柱后减压使洗脱剂迅速通过固定相从 而很好的分离样品的色谱技术。
VLC具有快速，简易，高效，价廉等优点，目 前已成功的应用于有机制备以及天然产物如萜 类，类酯，双萜及多种生物样品的分离。
由于经典的柱层析费时费力，需要大量的固定 相和洗脱液，工作效率低，为此人们相继建立 了离心薄层、 VLC、 FCC等快速层析分离的 方法。其中VLC在天然产物分离中应用最多。
该法1969年由澳大利亚Coll J.C提出，1977年 首次应用于分离澳洲软珊瑚中2个新的二萜化
合物(Cembrenoids).
1 9 7 9 年 美 国 Targett.NM 将 该 法 命 名 为 Vacuum liquid chromatography (VLC), 并且详细报道了实验装置和操作方法。
从此以后，VLC便逐渐为广大化学家所 接受，并且在实验装置上作了进一步改 进。
一、VLC特点
VLC 实 质 上 是 柱 色 谱 ， 它 综 合 了 制 备 薄 层 （Preparative PTLC）和真空抽滤技术。
第五章 减压柱色谱 分离技术
为加快柱分离的速度和/或增加分离 度，通常采用在柱前加压和柱后减压 的方法进行柱层析与分离。 —柱前加压法通常称为加压柱色谱 —柱后减压法通常称为减压柱色谱
第一节 真空液相色谱技术 Vacuum Liquid Chromatography 第二节 半干柱液相色谱 Semi-Dry Column Chromatography SDC