志贺氏菌检验
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
精品课件
（一）增 菌 培 养
用志贺氏菌增菌液增菌, 41.5 ℃±１℃，16 h～20 h厌氧
培养。
精品课件
智能厌氧微需氧培养系统
精品课件
（二）分 离 培 养
• 取增菌后的GN增菌液或志贺氏增菌肉汤分 别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板 或R&F志贺氏菌显色培养基平板上
• 于36 ℃1 ℃培养20 h～24 h，观察各个 平板上生长的菌落形态
精品课件
2、志贺氏菌的分群与血清型
志贺氏菌分为四群： A群（痢疾志贺氏菌）：1~10型
B群（福氏志贺氏菌）：1~6型+X、Y两个变种， C群（鲍氏志贺氏菌 ）：1~15型 D群（宋内氏志贺氏菌） ：1个型
精品课件
三、志贺氏菌检验
GB 4789.5-2012
1.以原国标为基础，保持与原标准的连续性
精品课件
1 宋内氏典型菌落
XLD
精品课件
志显
2 福氏典型菌落
XLD
精品课件
ຫໍສະໝຸດ Baidu
志显
3 鲍氏典型菌落
志显
XLD
精品课件
4 痢疾典型菌落
XLD
精品课件
志显
5 熟肉制品中宋内的分离效果
R&F志显
精品课件
XLD
6 蔬菜制品中宋内分离效果
XLD
精品课件
志显
7 鲍氏在生肉中的分离效果
XLD
精品课件
志显
考虑基层单位方法的可操作性，对增菌步骤、培养条件 尽可能简化；生化反应方面亦尽量沿用原标准中的方法
2.与国际接轨的原则
该标准的起草内容主要参考了国际标准组织ISO标准 ， 部分参考采用了美国FDA、NMKL等标准
精品课件
3.与现有已颁布的新版国家标准协调 统一
参考了已颁布的2008版国标，在样品 的前处理步骤，培养条件的选择，文字 描述等方面尽量 保持一致。
志贺氏菌的检验
精品课件
一、流行病学简介
• 一种古老的肠道传染性腹泻。19世纪曾出现全世 界菌痢的大流行。
• 1899年，日本人志贺氏首先发现菌痢是由痢疾杆 菌引起。
• 第一次世界大战期间（1914-1918年），德国死 于痢疾者约4万余人，并进一步证实痢疾杆菌是 菌痢流行的病原。
精品课件
• 细菌性痢疾历年来一直是我国夏秋季发病 率最高的肠道传染病。
精品课件
（三）、生化反应
1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺 氏菌外，均不发酵乳糖。
2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，
不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。
精品课件
（四）、抗原结构
1、抗原构成： O抗原：
群特异性抗原：A、B、C、D K抗原：除B群外，一般有K抗原
• 各种志贺菌都可以产生强烈的内毒素，是 引起全身毒血症的主要因素。志贺菌还可 产生外毒素（志贺毒素），具有神经毒、 细胞毒和肠毒性作用，能引起更严重的临 床表现如溶血性尿毒综合症等。
精品课件
二、生物学特性
• （一）、形态与染色 • 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无
鞭毛 • • 2~3um*0.5~0.7um
• 1994年5月11日，江苏省无锡市发生一起26 所小学的学生因课间餐食用豆奶导致1345 人食物中毒的事故，后经调查是一起志贺 菌和致病性大肠杆菌混合感染引起的食物 中毒，此次爆发波及范围之大，发病人数 之多，在我国历史上颇为少见。
精品课件
• 志贺菌致病力强，少量细菌进入人体即可 引起发病。是否发病，取决于细菌数量、 致病力（粘附、侵袭力、毒素）和人体的 抵抗力。
• 若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察， 则继续培养至48 h再进行观察。
精品课件
菌落特征
• MAC琼脂 ：无色至浅粉红色， 半透明、光滑、 湿润、圆形、 边缘整齐或不齐，直径2～3 mm
• XLD琼脂 ：粉红色至无色，半 透明、光滑、 湿润、圆形、边缘整齐或不齐， 直径1 ～2 mm
精品课件
R&F志贺氏菌显色琼脂 ：白色，不透明、圆形、 边缘不整齐，直径1 mm～3 mm，菌落周围琼脂 颜色变为紫红色
精品课件
（二）、培养特性
1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH7.2~7.4 2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、
光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小 的菌落 3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁 平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。 4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
8 熟肉制品中福氏的分离效果
志显
精品课件
（四）初 步 生 化
• 选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种TSI、葡萄糖 半固体、营养琼脂斜面，36 ℃1 ℃培养20 h～24 h， 观察结果。
精品课件
培养条件：41.5℃±1℃ 厌氧培养
原国标： 37℃需氧培养 ISO： 41.5℃厌氧培养 FDA： 42℃（除宋内其他志贺菌)
和44℃（宋内）厌氧培养 NMKL： 42℃厌氧培养
精品课件
分离用平板
原国标：HE或SS; MAC或EMB ISO： MAC、 XLD 、 HE FDA： MAC NMKL： MAC、 XLD 、 HE
选择性平板分离培养： XLD+MAC/显色培养基
生化试验：可采用 API 20E或VITEK2
血清学鉴定：特异性 诊断血清鉴定到种。
精品课件
志贺氏菌操作流程
修改的内容
增菌部分
志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ）
原国标：GN ISO ：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ） FDA：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL 和3 μg/mL ） NMKL：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ）
精品课件
GB/T 4789.5-2003 标准不足处
1. 采用GN增菌肉汤,37℃需氧培养,4小时后 大肠菌的生长速度大大超过志贺氏菌, 检测 效果较差
2. 使用的分离平板SS对志贺1型有抑制 3. 检验方法与现行的其它国家的标准存在差
异
精品课件
增菌：用GN增菌液使 处于濒死状态的细菌 恢复活力
• 近年来报道非洲及中美洲流行的痢疾志贺 菌病死率达5%-15%。
• 我国属发展中国家，人民的生活条件虽然 在不断改善，但由于部分地区卫生知识普 及不够，食品卫生管理、监督不力，使得 志贺菌的感染在我国传染病中多年来一直 处于较高的地位。
精品课件
• 每年均有志贺菌感染暴发的报告，每次暴 发的发病人数在数十人到上千人不等。多 数由于食物和饮水污染引起。
（一）增 菌 培 养
用志贺氏菌增菌液增菌, 41.5 ℃±１℃，16 h～20 h厌氧
培养。
精品课件
智能厌氧微需氧培养系统
精品课件
（二）分 离 培 养
• 取增菌后的GN增菌液或志贺氏增菌肉汤分 别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板 或R&F志贺氏菌显色培养基平板上
• 于36 ℃1 ℃培养20 h～24 h，观察各个 平板上生长的菌落形态
精品课件
2、志贺氏菌的分群与血清型
志贺氏菌分为四群： A群（痢疾志贺氏菌）：1~10型
B群（福氏志贺氏菌）：1~6型+X、Y两个变种， C群（鲍氏志贺氏菌 ）：1~15型 D群（宋内氏志贺氏菌） ：1个型
精品课件
三、志贺氏菌检验
GB 4789.5-2012
1.以原国标为基础，保持与原标准的连续性
精品课件
1 宋内氏典型菌落
XLD
精品课件
志显
2 福氏典型菌落
XLD
精品课件
ຫໍສະໝຸດ Baidu
志显
3 鲍氏典型菌落
志显
XLD
精品课件
4 痢疾典型菌落
XLD
精品课件
志显
5 熟肉制品中宋内的分离效果
R&F志显
精品课件
XLD
6 蔬菜制品中宋内分离效果
XLD
精品课件
志显
7 鲍氏在生肉中的分离效果
XLD
精品课件
志显
考虑基层单位方法的可操作性，对增菌步骤、培养条件 尽可能简化；生化反应方面亦尽量沿用原标准中的方法
2.与国际接轨的原则
该标准的起草内容主要参考了国际标准组织ISO标准 ， 部分参考采用了美国FDA、NMKL等标准
精品课件
3.与现有已颁布的新版国家标准协调 统一
参考了已颁布的2008版国标，在样品 的前处理步骤，培养条件的选择，文字 描述等方面尽量 保持一致。
志贺氏菌的检验
精品课件
一、流行病学简介
• 一种古老的肠道传染性腹泻。19世纪曾出现全世 界菌痢的大流行。
• 1899年，日本人志贺氏首先发现菌痢是由痢疾杆 菌引起。
• 第一次世界大战期间（1914-1918年），德国死 于痢疾者约4万余人，并进一步证实痢疾杆菌是 菌痢流行的病原。
精品课件
• 细菌性痢疾历年来一直是我国夏秋季发病 率最高的肠道传染病。
精品课件
（三）、生化反应
1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺 氏菌外，均不发酵乳糖。
2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，
不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。
精品课件
（四）、抗原结构
1、抗原构成： O抗原：
群特异性抗原：A、B、C、D K抗原：除B群外，一般有K抗原
• 各种志贺菌都可以产生强烈的内毒素，是 引起全身毒血症的主要因素。志贺菌还可 产生外毒素（志贺毒素），具有神经毒、 细胞毒和肠毒性作用，能引起更严重的临 床表现如溶血性尿毒综合症等。
精品课件
二、生物学特性
• （一）、形态与染色 • 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无
鞭毛 • • 2~3um*0.5~0.7um
• 1994年5月11日，江苏省无锡市发生一起26 所小学的学生因课间餐食用豆奶导致1345 人食物中毒的事故，后经调查是一起志贺 菌和致病性大肠杆菌混合感染引起的食物 中毒，此次爆发波及范围之大，发病人数 之多，在我国历史上颇为少见。
精品课件
• 志贺菌致病力强，少量细菌进入人体即可 引起发病。是否发病，取决于细菌数量、 致病力（粘附、侵袭力、毒素）和人体的 抵抗力。
• 若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察， 则继续培养至48 h再进行观察。
精品课件
菌落特征
• MAC琼脂 ：无色至浅粉红色， 半透明、光滑、 湿润、圆形、 边缘整齐或不齐，直径2～3 mm
• XLD琼脂 ：粉红色至无色，半 透明、光滑、 湿润、圆形、边缘整齐或不齐， 直径1 ～2 mm
精品课件
R&F志贺氏菌显色琼脂 ：白色，不透明、圆形、 边缘不整齐，直径1 mm～3 mm，菌落周围琼脂 颜色变为紫红色
精品课件
（二）、培养特性
1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH7.2~7.4 2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、
光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小 的菌落 3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁 平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。 4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
8 熟肉制品中福氏的分离效果
志显
精品课件
（四）初 步 生 化
• 选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种TSI、葡萄糖 半固体、营养琼脂斜面，36 ℃1 ℃培养20 h～24 h， 观察结果。
精品课件
培养条件：41.5℃±1℃ 厌氧培养
原国标： 37℃需氧培养 ISO： 41.5℃厌氧培养 FDA： 42℃（除宋内其他志贺菌)
和44℃（宋内）厌氧培养 NMKL： 42℃厌氧培养
精品课件
分离用平板
原国标：HE或SS; MAC或EMB ISO： MAC、 XLD 、 HE FDA： MAC NMKL： MAC、 XLD 、 HE
选择性平板分离培养： XLD+MAC/显色培养基
生化试验：可采用 API 20E或VITEK2
血清学鉴定：特异性 诊断血清鉴定到种。
精品课件
志贺氏菌操作流程
修改的内容
增菌部分
志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ）
原国标：GN ISO ：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ） FDA：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL 和3 μg/mL ） NMKL：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5 μg/mL ）
精品课件
GB/T 4789.5-2003 标准不足处
1. 采用GN增菌肉汤,37℃需氧培养,4小时后 大肠菌的生长速度大大超过志贺氏菌, 检测 效果较差
2. 使用的分离平板SS对志贺1型有抑制 3. 检验方法与现行的其它国家的标准存在差
异
精品课件
增菌：用GN增菌液使 处于濒死状态的细菌 恢复活力
• 近年来报道非洲及中美洲流行的痢疾志贺 菌病死率达5%-15%。
• 我国属发展中国家，人民的生活条件虽然 在不断改善，但由于部分地区卫生知识普 及不够，食品卫生管理、监督不力，使得 志贺菌的感染在我国传染病中多年来一直 处于较高的地位。
精品课件
• 每年均有志贺菌感染暴发的报告，每次暴 发的发病人数在数十人到上千人不等。多 数由于食物和饮水污染引起。