志贺氏菌检验

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志贺氏菌检验

• 番红或沙磺复染：在涂片薄膜上滴加番红1滴，染色1 ~ 2 min。
• 水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。 • ห้องสมุดไป่ตู้燥：于室温下自然干燥。 • 观察：干燥后，于涂片薄膜上滴香柏油1滴，置油镜下观
察。 • 结果:
革兰氏阳性菌——紫色；革兰氏阴性菌——红色。
志贺氏菌检验
革兰氏阴性短杆菌
增菌分离初步生化试验血清凝集试验革兰氏染色
增菌
固体样品：25g（电子天平）
稀释瓶或具
液体样品：25mL（25mL吸量管）塞广口瓶
+ 225mLGN增菌液（量筒），混匀。
培养（于36℃±1℃培养6~8h）
注意：液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至7.0。
结果：志贺氏菌多价血清：凝固灭菌生理盐水：不凝固
革兰氏染色步骤：
涂片—— 火焰固定——结晶紫初染—— 水洗—— 碘液媒染—— 乙醇脱色—— 水洗—— 吸干—— 番红或沙磺复染—— 水洗—— 干燥—— 镜检
• 涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作法挑取菌种于生理盐水中，调匀并涂成薄膜。注意：生理盐水不宜过多；涂片必须均匀。
分离
从阳性增菌液中用接种环取
1环
HE琼脂平板，划线
36℃±1 ℃培养
1环
麦康凯琼脂平板，划线
18~24h
HE琼脂平板
麦康凯琼脂平板
开始处
开始处
平板划线示意图
HE琼脂平板上的典型菌落特征：呈透明，不发酵乳糖菌落
麦康凯琼脂平板上的典型菌落特征：呈透明，不发酵乳糖菌落
初步生化试验
取有明显典型菌落的HE或麦康凯琼脂平板（在放阳性物品处）
• 火焰固定：载玻片通过火焰1 ~ 2 次固定，不可过热，以载玻片不烫手背为宜。

志贺氏菌检验方法

03
，如实验服、口罩、手套等。
样品处理注意事项
样品采集时应保证无菌操作，避免污染。
样品应尽快送至实验室进行检验，避免长时间存放导致细菌繁殖。
样品处理过程中应保持清洁卫生，避免交叉污染。
检验方法选择注意事项
1
根据样品类型和检验目的选择合适的检验方法。
2
对于不同种类的志贺氏菌，应选择具有针对性的检验方法。
断结果。
分子生物学检测法
聚合酶链式反应（PCR）
利用特异性引物扩增志贺氏菌基因片段，通过凝胶电泳检测扩增产物，判断是否存在志贺氏菌。
基因测序
对志贺氏菌基因进行测序分析，与其他已知基因序列进行比对，以确定志贺氏菌的种属和亚种。
生物传感器技术
利用生物传感器检测志贺氏菌的代谢产物或特异性抗原，通过信号转换器将生物信号转化为电信号，实现快速、灵敏的检测。
食品样品的处理
采集到的食品样品应尽快送往实验室进行检验，如果不能及时送检，应将样品低温保存，避免样品变质和污染。
04
志贺氏菌检验的注意事项
实验室安全注意事项
01
实验室应保持清洁卫生，定期进行消毒处理，确保无菌环境。
02
实验操作应在生物安全柜中进行，避免交叉污染和意外感染。
实验人员应接受专业培训，熟悉操作规程，佩戴个人防护装备
03
志贺氏菌检验的样品采集与处理粪便样品的采集与处理粪便样品的采集
采集粪便样品时，应确保采集到新鲜、未被污染的粪便，并尽量多采集一些，以增加检出率。
粪便样品的处理
采集到的粪便样品应尽快送往实验室进行检验，如果不能及时送检，应将样品低温保存，避免样品干燥和污染。
水样品的采集与处理

志贺氏菌的检验

免疫性：病后有一定的免疫力，但免疫期短，也不稳定。
四、志贺氏菌的检验
1、增菌称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL 广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎 1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。 2、分离和初步生化试验取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36℃培养18～24h。志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
麦康凯琼脂平板
EMB平板照片及原理
挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18～24h，分别观察结果。
动力试验
三糖铁（TSI）琼脂试验的原理
1. Pseudomonas aeruginosa：Motile 2. Staphylococcus aureus：Non-motile 3. Bacillus subtilis：Motile
3、血清学分型
挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。 4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价 1、2、3分别检查，并进一步用1～18各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。

志贺氏菌检验方法

利用色谱技术，特别是质谱技术，能够更准确地区分志贺氏菌和其他相似菌种。
未来展望与研究方向
THANK YOU.
谢谢您的观看
接种
将处理后的样品接种到培养基上，根据不同的实验需求，可采用不同的接种方法，如划线法、稀释法等。
培养基制备与接种
细菌鉴定
通过形态学观察、生化试验、血清学鉴定等方法，对培养出的细菌进行鉴定，以确定是否为志贺氏菌。
药敏试验
对鉴定的志贺氏菌进行药敏试验，以测定其对不同抗菌药物的敏感性和耐药性。
细菌鉴定与药敏试验
2023
《志贺氏菌检验方法》
志贺氏菌概述志贺氏菌的检验方法志贺氏菌检验的实验室操作流程志贺氏菌检验的临床意义及注意事项志贺氏菌检验方法的发展趋势与展望
contents
目录
01
志贺氏菌概述
志贺氏菌的特性
志贺氏菌是一种革兰阴性杆菌，无芽孢、无鞭毛，具有荚膜。
革兰阴性杆菌
需氧菌
耐酸
耐药性
志贺氏菌是一种需氧菌，生长繁殖需要氧气。
分离培养
通过对分离出的细菌进行形态学、生化反应等实验，确定是否为志贺氏菌。
鉴定
对分离出的志贺氏菌进行药敏试验，以确定其对抗菌药物的敏感性。
药敏试验
细菌培养法
酶联免疫吸附试验（ELISA）
免疫荧光抗体法
胶体金免疫层析法
免疫学检测法
分子生物学检测法
聚合酶链式反应（PCR）
通过扩增志贺氏菌的特异性基因片段，以检测样本中的志贺氏菌。
免疫学方法中的ELISA等，可能会与其它相似菌种发生交叉反应，影响结果的准确性。
基因组学应用
01
利用基因组学技术，开发基于基因序列的检测方法，能够更快速、准确地检测志贺氏菌。

食品中志贺氏菌检验

食品微生物检验技术
无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐
白色，不透明、圆形、边缘不整齐，直径1 mm～3 mm，菌落周围琼脂颜色变为紫红色
操作规程
已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验
二、志贺氏菌检测
ß-半乳糖苷酶
尿素
选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种TSI、葡萄糖半固体、营养琼脂斜面，36℃1 ℃培养20h～24h，观察结果。
食品微生物检验技术
一、志贺氏菌概况
概述
志贺氏菌属（Shigella）的细菌（通称痢疾杆菌），是细菌性痢疾的病原菌。临床上能引起痢疾症状的病原生物很多，有志贺氏菌、沙门氏菌、变形杆菌、大肠杆菌等，还有阿米巴原虫、鞭毛虫、以及病毒等均可引起人类痢疾，其中以志贺氏菌引起的细菌性痢疾最为常见。人类对痢疾杆菌有很高的易感性。在幼儿可引起急性中毒性菌痢，死亡率甚高。
一、志贺氏菌概况
需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH7.2-7.4；在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、
在中等大小的菌落；宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落
呈玫瑰红色；在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
增菌：用GN增菌液使处于濒死状态的细菌恢复活力
报告
二、志贺氏菌检测
操作规程
225ml 志贺氏菌增菌液增菌
选择性增菌
细胞数量增殖液体 25mL 摇匀
样品
25g 均质
固体样品
鉴别培养基
寻找可疑典型菌落
穿刺划斜面
TSI、营养琼脂、半固体培养基
41.5±1℃
16~18h 厌氧培养

志贺氏菌检验

1 宋内氏典型菌落
XLD
志显
2 福氏典型菌落
XLD
志显
3 鲍氏典型菌落
XLD
志显
4 痢疾典型菌落
XLD
志显
5 熟肉制品中宋内的分离效果
R&F志显
XLD
6 蔬菜制品中宋内分离效果
XLD
志显
7 鲍氏在生肉中的分离效果
XLD
志显
8 熟肉制品中福氏的分离效果
志显
（四）初步生化
• 选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种TSI、葡萄糖半固体、营养琼脂斜面，36 ℃1 ℃培养20 h～24 h，观察结果。
白色不透明圆形边缘不整齐直mm3mm菌落周围琼脂颜色变为紫红色宋内氏典型菌落xldxldxld熟肉制品中宋内的分离效果rf志显xld蔬菜制品中宋内分离效果xld鲍氏在生肉中的分离效果xld选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种tsi葡萄糖半固体营养琼脂斜面36培养20h24培养物中出现以下情况可以弃去a
（二）、培养特性
1 、需氧或兼氧性厌氧，最适温度 37℃ ， PH7.2~7.4
2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落
3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。
4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
• 若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48 h再进行观察。
菌落特征
• MAC琼脂：无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐，直径2～3 mm
• XLD琼脂：粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐，直径1 ～2 mm

志贺氏菌的检验

志贺氏菌的检验汇报人：2024-01-06•志贺氏菌概述•志贺氏菌检验方法•志贺氏菌检验过程目录•志贺氏菌检验的注意事项•志贺氏菌检验的应用01志贺氏菌概述志贺氏菌属于革兰氏阴性杆菌，无芽孢、无鞭毛，一般不形成荚膜。

革兰氏阴性杆菌需氧或微需氧抗原构造志贺氏菌在需氧或微需氧环境中生长良好，适宜温度为37℃。

志贺氏菌具有O抗原、K抗原和H抗原，其中O抗原是主要的毒力因子。

030201志贺氏菌的特性志贺氏菌随粪便排出体外，污染水源或食物，经口摄入后感染。

粪口途径传播接触被志贺氏菌污染的物品或环境，再经口摄入感染。

接触传播在医疗机构中，患者与医务人员、其他患者之间因接触而传播。

医疗机构传播志贺氏菌的传播途径志贺氏菌的危害肠道感染志贺氏菌主要引起肠道感染，导致腹泻、腹痛等症状。

败血症严重感染时，志贺氏菌可进入血液，引起败血症。

脑膜炎在特定情况下，如免疫功能低下，志贺氏菌可引起脑膜炎等严重并发症。

02志贺氏菌检验方法选择适合志贺氏菌生长的培养基，如SS琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基等。

培养基在37℃恒温条件下培养24-48小时，观察菌落形态、染色特性等特征。

培养条件通过生化试验、血清学试验等方法对培养出的菌落进行鉴定，以确定是否为志贺氏菌。

鉴定细菌培养法03胶体金免疫层析法利用胶体金标记的抗体与抗原的结合反应，通过肉眼观察或仪器检测金颗粒的聚集状态。

01酶联免疫吸附试验（ELISA）利用特异性抗体与抗原的结合反应，通过酶标记技术进行信号放大和检测。

02免疫荧光技术利用荧光标记的抗体与抗原的结合反应，通过荧光显微镜观察荧光信号。

免疫学检测法核酸检测法聚合酶链式反应（PCR）通过特异性引物扩增志贺氏菌的DNA片段，通过凝胶电泳检测扩增产物。

基因测序对志贺氏菌的基因组进行测序，通过比对已知基因序列确定菌种。

利用生物分子识别元件（如酶、抗体、核酸等）与目标物质特异性结合，将信号转换为可检测的电信号或光信号。

用于食品、水源等样品中志贺氏菌的快速检测，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。

志贺氏菌检测

志贺氏菌的检验（国标法）一、增菌称取检样25g ,加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎lmin ,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培育6〜8h。

培育时间视细菌生长状况而定，当培育液消失稍微混浊时即应中止培育。

二、分别和初步生化试验取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36工培育18~24h e志贺氏菌在这些培育基上呈现无色透亮不发酵乳糖的菌落。

挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。

一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培育18~24h ,分别观看结果。

下述培育物可以弃去：a.在三糖铁琼脂斜面上呈扩散生长的培育物；b.在18~24h内发酵乳糖、蔗糖的培育物;C.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培育物；d.产气的培育物；e.有动力的培育物；f.产生硫化氢的培育物。

凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。

三、血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培育物，做玻片凝集试验。

先用4种志贺氏菌多价血清检查，假如由于K抗原的存在而不消失凝集，应将菌液煮沸后再检查；假如呈现凝集，则用Al、A2、B群多价和D群血清分别试验。

如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。

福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表10可先用群因子血清检查，再依据群因子血清消失凝集的结果，依次选用型因子血清检查。

4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1~15各型因子血清检查。

假如鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3~12型多价血清及各型因子血清检查。

四、进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖镀西蒙氏柠檬酸盐赖氨酸和鸟氨酸脱竣酶pH7.2尿素KCN生长水杨昔和七叶昔的分解除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培育物均为阴性结果。

志贺氏菌检验

志贺氏菌检验志贺氏菌属于肠杆菌科，是一种革兰氏阴性菌，会引起肠道感染，引发肠炎，当人出现连续性腹泻、腹痛等症状的时候，就需要考虑是否感染志贺氏菌。

志贺氏菌的传播途径主要是食物和水，比如沙拉、土豆、金枪鱼、虾、奶制品等，在密闭以及不卫生的条件下志贺氏菌会迅速传播，而且经常出现在人员比较密集的地方，比如餐厅、食堂等地。

食源性志贺氏菌的传播主要是因为从事食品工作的人员感染了志贺氏菌，并且将其传播到食物上所引起的，另外，保存食物的温度不当，也可能引起志贺氏菌。

志贺氏菌检验是临床上检验肠道感染疾病的一个重要途径，在检测过程中常用的方法有以下几种。

一、生化鉴定法常规的生化鉴定方法是志贺氏菌检验过程中的常用方法，需要对细菌进行增殖培养、分离、生化试验、血清学检验等步骤来完成，步骤比较繁琐，而且耗时较长，每一次一般只能检验一个样品，但是检测的结果比较准确，检测稳定性较高，假阳性率低。

二、免疫学检验方法免疫学是检验志贺氏菌最快速、准确的方法，特异性较强，而且灵敏度很高，主要的免疫学检验方法有以下几种：第一，酶联免疫法。

这种方法的灵敏度很高，而且简单快速，检测过程比较稳定，可以进行自动化操作，是志贺氏菌检测过程中最快速的一种方法。

但是，使用酶联免疫法进行检验的时候，影响检测结果的因素较多，而且假阳性率高，所以还需要采用其他的方法进行配合检验。

第二，SPA协同凝集法。

这种方法是使用已知标准血清吸附到含Ａ蛋白的金黄色葡萄球菌表面之后，让金黄色葡萄球菌成为吸附抗体的载体，再根据吸附的结果来诊断是否感染志贺氏菌的一种方法。

三、分子生物学方法分子生物学是建立在很多其他的检测技术基础上的，敏感度高、检测快速，而且特意性高，是生物技术革命的一个重要产物，目前在志贺氏菌的检测过程中十分常见。

志贺氏菌的分子生物学检测方法有以下几种：第一，聚合酶链式反应法，比如常规PCR、多重PCR法、实时荧光PCR法和恒温荧光PCR法等。

以恒温实时荧光PCR法为例，这种方法的原理是利用环介导等温扩增反应为原理进行测量的方法，灵敏度很高，与传统的荧光测量方法相比，灵敏度高出2～5个数量级，而且测量十分迅速，荧光反应的时间较短，一般30-60分钟就可以完成荧光反应。

志贺氏菌检验方法

培养基
选择适合志贺氏菌生长的培养基，如SS、EMB等选择性培
养基。
培养条件
在37℃左右的恒温环境下培养24-48小时，观察细菌生长
情况。
菌落特征
志贺氏菌在培养基上形成的菌落较小，表面光滑、湿润、无
色或略带黄色。
鉴定试验
通过生化试验、血清学试验等方法对培养出的细菌进行鉴定，以确定是否为志贺氏菌。
05
志贺氏菌检验案例分析
案例一：某食品厂志贺氏菌污染事件调查
调查背景
调查过程
某食品厂生产的罐装饮料被检测出含有志贺氏菌，导致产品召回和消费者健康问题。
对食品厂的生产线、水源、原料、包装材料等进行全面检查，同时采集相关样品进行志贺氏菌检测。
调查结果
案例分析
发现生产线存在卫生问题，水源和原料未受到污染，包装材料合格。最终确定是生产线上的某个环节出现了交叉污染。
该案例表明，志贺氏菌污染可能源自食品生产过程中的交叉污染，需要加强生产过程中的卫生管理和监控。
案例二：某医院志贺氏菌感染病例诊断
病例背景
某医院收治了一名腹泻患者，经检测确诊为志贺氏菌感染。
诊断结果
确诊患者感染了志贺氏菌。
诊断过程
对患者进行粪便样本采集，采用分离培养、生化鉴定等方法进行志贺氏菌检测。
检验结果的判定
阳性判定
在培养基上出现志贺氏菌菌落，或通过免疫学方法检测到志贺氏菌抗原或抗体。
阴性判定
未在培养基上出现志贺氏菌菌落，且免疫学检测结果为阴性。
可疑判定
培养基上出现不能确定是否为志贺氏菌的菌落，需要进行进一步鉴定。
检验方法的优缺点比较
培养法
优点是灵敏度高、特异性好；缺点是操作繁琐、耗时长，需要专业人员操作。

食品中志贺氏菌检验

C高温灭菌15min ❖ 2、HE琼脂 ❖ 成分：蛋白胨12g 水杨素2g 蒸馏水1000ml 乙液20ml 牛肉膏3g 胆盐
20g 0.4% 溴麝香草芬兰钠溶液16ml 乳糖12g 氯化钠5g 蔗糖12g 琼脂20g 甲液20ml HP7.5 ❖ 制法：将蛋白胨、乳糖、水杨素、氯化钠、蔗糖、牛肉膏、胆盐等溶解于400ml蒸馏水中作为基础液；加琼脂与600ml蒸馏水中，加热溶解。加入甲液乙液与基础液中，校正HP,再加指示剂。并与琼脂液合并，冷却，倾注平板，
❖ 7.镜检从三塘铁琼脂和半固体各一管中挑取生长出来的菌落，进行革兰氏染色，然后放在显微镜下观察。
❖ 8.结果报告
五．注意事项
1、志贺菌在常温存活期很短。因此，当样品采集后，应尽快进行检验。如果在24h内检验，样品可保存在冰箱内，入欲保存较长时间，必须放在低温冰箱内。 2、迄今没有很好的曾菌培养基。目前仍然认为用GN 肉汤曾菌检查食品中和粪便中的志贺菌是有效的。
注意事项
3、增加鉴别培养基的数目，可以增加志贺菌的阳性检出率。用于分离的鉴别培养基一般不少于两个。中等选择性的，HE或SS琼脂平板一个；弱选择性的。麦康凯或EMB琼脂平板一个。WS 琼脂可作为中等选择性培养基使用，FX琼脂可作为弱选择性培养基使用。 4、动力的观察非常重要。挑取可疑菌落，除接种一支三糖铁琼脂外，还要接种一支半固体琼脂。
实验结果
志贺菌在培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落
志贺菌在三糖铁琼脂中底沉产酸，不产气，斜面产碱，不产生硫化氢无动力在，在半固体管内沿穿刺线生长。
实验结果
纹和水珠 ❖ 对试管、玻璃棒、移液管、锥形瓶、烧杯、培养皿进行包
扎：要将报纸裁成5-10公分，成30°卷起，结尾处向上折叠即。

志贺氏菌测定方法验证

方法验证报告项目名称：医疗机构污水和污泥中志贺氏菌的检验方法方法名称：《医疗机构污水污染物排放标准》GB 18466-2005/附录C 医疗机构污水中志贺氏菌的检验方法报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1 实验室基本情况1.1 人员情况实验室检测人员已通过标准《医疗机构污水污染物排放标准》GB 18466-2005/附录C的培训，熟知标准内容、检测方法及样品数据采集和处理等，考核合格，得到技术负责人授权上岗。

1.2 检测仪器/设备情况表1主要仪器基本情况1.3 检测用试剂情况表表2主要培养基基本情况1.4 环境设施和条件情况实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在标准要求范围内，满足检测环境条件。

另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。

2 实验室检测技术能力2.1样品采集与保存按照HJ 91.1的相关规定进行水样的采集。

采集样品时，采样瓶不得用样品洗涤，采集样品于灭菌的采样瓶中。

水体采样量不低于200 ml。

样品采集完毕后，迅速扎上无菌包装纸。

采集废水样品及一定深度的样品时，也可使用灭菌过的专用采样装置采样。

如果采集的是含有活性氯的样品，需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液，以除去活性氯对细菌的抑制作用（每125mL容积加入0.1mL的硫代硫酸钠）。

采样后应在2 h内检测，否则，应10℃以下冷藏但不得超过6 h。

实验室接样后，不能立即开展检测的，将样品于4℃以下冷藏并在2 h内检测。

2.2 检测步骤2.2.1样品的处理和增菌取200ml污水，用灭菌滤膜进行抽滤，用100ml二倍浓度GN增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱到灭菌三角瓶内，充分摇匀，置于37℃恒温培养箱，增菌培养6-8h。

2.2.2平板分离取上述增菌培养液，分别接种于SS培养基平板和EMB培养基平板，置于37℃培养箱中，培养24h。

挑取在SS培养基平板和EMB培养基平板上呈无色透明，直径1-1.5ml的菌落；可疑肠道病原菌菌落。

志贺氏菌的检验

的培养物。（4）产气的培养物（5）有动力的培养物（6）产H2S的培养物
第四天、进一步的生化试验
凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气 (福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做进一步的生化试验和生化分型实验。
（一）进一步生化试验
即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶，pH7.2尿素，KCN生长，以及水杨苷和七叶苷的分解， 36℃培养。
志贺氏菌的检验
一、生物学特性（一）形态与染色
革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛
2~3um*0.5~0.7um
（二）培养特性
1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH6。 4~7.8
2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落
2套
• 4、250ml量筒与500毫升广口瓶
酌情
• 7 、不锈钢汤匙1把，玻璃珠，杜氏小管酌情
（一）样品处理
无菌操作称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以800010000r/min打碎1min。
（二）增菌培养
放于36℃培养6～8h。
培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。
放于36℃培养18～24h。结果：乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力
志贺氏菌在TSI生长的结果（现象）：（1）斜面产碱仍为红色或粉红色；（2）底层产酸不产气，变黄色；（3）不产H2S，不出现黑色。
志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长：沿线生长，无动力。
（三）结果报告综合生化试验结果判定菌型并作出报告

志贺氏菌检验方法

01 Chapter志贺氏菌的特性030201志贺氏菌的致病性引发痢疾志贺氏菌具有较强的传染性，主要通过粪-口途径传播。

传染性强耐药性增强志贺氏菌的传播途径02 Chapter鉴定通过观察细菌的形态、染色特性、生化反应等指标，对分离出的细菌进行鉴定。

分离培养通过采集患者的粪便、尿液、血液等样本进行培养，以分离出志贺氏菌。

药敏试验对分离出的志贺氏菌进行药敏试验，以确定其对抗菌药物的敏感性。

细菌培养法酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫荧光抗体技术免疫学检测法聚合酶链式反应（PCR）通过扩增志贺氏菌的基因片段，以检测患者样本中的志贺氏菌。

基因测序对志贺氏菌的基因进行测序，以鉴定其种型和耐药性。

分子生物学检测法03 Chapter粪便样品采集食品样品采集采集对象为可疑污染食品，包括肉类、蔬菜、水果等。

采集方法为选取可疑污染食品，按照食品采样标准进行采集，并尽快送检。

食品样品是志贺氏菌检验的重要来源之一。

水质样品采集04 Chapter样品处理增菌培养样品处理与增菌培养分离培养与生化鉴定分离培养将增菌培养后的样品进行分离培养，以获得单个菌落。

生化鉴定对分离培养得到的菌落进行生化鉴定，包括糖发酵试验、柠檬酸盐利用试验、吲哚试验等，以确定是否为志贺氏菌。

血清学分型与药敏试验血清学分型药敏试验05 Chapter01020304使用无菌容器收集样品，避免容器被污染。

采集容器遵循无菌操作原则，避免样品受到外界污染。

采集方法采集足够量的样品，以便进行后续实验分析。

采集量尽量在发病初期或发病高峰期采集样品，以提高检出率。

采集时间样品采集前的注意事项实验室操作的注意事项实验室环境实验器材实验操作实验试剂检验结果的分析与解读01020304检验结果结果解读结果分析结果报告06 Chapter提高检测灵敏度的方法改进采用先进的扩增技术选择特异性更高的抗体增加样品前处理快速检测技术的研发与应用基于分子生物学技术的其他检测方法探索基于下一代测序技术的检测基于生物信息学的检测THANKS。

志贺氏菌检验方法

致病因素
志贺氏菌的致病因素包括侵袭力、内毒素，外毒素。志贺氏菌的菌毛能粘附于回肠末端和结肠粘膜的上皮细胞表面，继而在侵袭蛋白作用下穿入上皮细胞内，一般在粘膜固有层繁殖形成感染灶。各型痢疾杆菌都具有强烈的内毒素。志贺氏菌A群Ⅰ型及部分II 型菌株还可产生外毒素，称志贺氏毒素。
志贺氏菌属（Shigella）是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌。细菌性痢疾是最常见的肠道传染病,夏秋两季患者最多。可经由食物，水，日常接触，苍蝇等传播。
血清学分型
生化鉴定
志贺氏菌属分群及分型结果报告
XLD琼脂平板
志贺氏菌
粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐，直径1 mm～ 2 mm。
沙门氏菌
菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。
1
志贺氏菌简介
2
志贺氏菌检验
生物学性状
志贺氏菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短小，长约2-3μ m ,宽0.5-0.7μ m。不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛，有菌毛。为兼性厌
氧菌，在有氧和无氧条件下均能生长；最适生长温度为 36℃，最适pH为7.2～7.4； 36℃培养18-24小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边缘整齐，直径约2mm，宋内氏菌菌落一般较大，较不透明，并常出现扁平的粗糙型菌落。在液体培养基中呈均匀浑浊生长，无菌膜形成。
麦康凯琼脂平板
无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐，直径2 mm～3 mm。
培养物中出现下述情况之一者即可弃去：
a）在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长； b）发酵乳糖或蔗糖的； c）不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的； d）产气的（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）；

志贺氏菌的检验

2023-10-28contents •志贺氏菌概述•志贺氏菌的检验方法•志贺氏菌检验的实验室要求•志贺氏菌检验的临床意义•志贺氏菌检验的未来发展趋势目录01志贺氏菌概述志贺氏菌是一种革兰阴性细菌，属于肠杆菌科志贺氏菌属。

它是一种人类肠道内的正常菌群，但在特定条件下，如肠道疾病或免疫力下降时，它可以成为机会性致病菌，引起细菌性痢疾等肠道感染。

志贺氏菌的定义志贺氏菌主要通过粪-口途径传播，即通过摄入被志贺氏菌污染的食物、水或与感染者直接接触而传播。

此外，食物、水、生活用品等被志贺氏菌污染后，也可以通过间接接触传播给其他人。

志贺氏菌的传播途径志贺氏菌感染可引起细菌性痢疾，这是一种常见的肠道传染病，临床表现为发热、腹痛、腹泻、里急后重等症状。

严重病例可出现脱水、休克、死亡等严重后果。

因此，对志贺氏菌的检验和防控具有重要意义。

志贺氏菌的危害02志贺氏菌的检验方法通过选择性培养基，如SS、EMB等，将志贺氏菌从粪便、食物等样品中分离出来。

分离培养鉴定药敏试验通过生化试验、血清学鉴定等手段，对分离得到的菌株进行鉴定，确认为志贺氏菌。

对分离得到的志贺氏菌进行药敏试验，测定其对抗菌药物的敏感性，为治疗提供参考。

03细菌培养法0201免疫学检测法酶联免疫吸附试验（ELISA）通过特异性抗体捕捉志贺氏菌抗原，然后进行酶联免疫反应，检测粪便、食品等样品中的志贺氏菌。

免疫荧光抗体技术利用特异性抗体标记志贺氏菌，通过荧光显微镜观察，检测样品中的志贺氏菌。

设计特异性的引物，对志贺氏菌的DNA进行扩增，通过凝胶电泳等手段检测是否含有志贺氏菌DNA。

聚合酶链式反应（PCR）对扩增得到的DNA序列进行测序，与已知的志贺氏菌基因序列进行比对，确认是否为志贺氏菌。

基因测序分子生物学检测法03志贺氏菌检验的实验室要求实验室应具备有效的通风系统，减少空气中细菌数量。

实验室应配备高级别的个人防护装备，如实验服、手套、口罩等。

实验室内应保持清洁干燥，避免过度拥挤，减少交叉感染的风险。

志贺氏菌的检验

二、志贺氏菌的致病性与食物中毒 • （一）传染源 • 食物、病人、粪便、苍蝇等
（二）志贺氏菌的致病性
致病因素：侵袭力、菌体内毒素、外毒素临床症状 A、急性细菌性痢疾：急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾：慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。
三、志贺氏菌的检验
菌落为无色半透明状，可能为志贺氏菌
大肠杆菌
第三次初步生化试验
（一）接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体培养基从HE或SS、麦康凯或EMB琼脂平板、挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏。经 36℃培养18～24h，分别观察结果。（二）培养放于36℃培养18～24h。结果：乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力
不发酵乳糖，菌落呈蓝绿色或蓝色可能就是志贺氏菌
SS平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar)
是沙门氏菌。有黑色中心。如果没有黑色中心，就很可能是志贺氏菌了
大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌
麦康凯琼脂平板
菌落为粉红色，半透明的，
可能为志贺氏菌
EMB平板照片及原理
（三）结果报告综合生化试验结果判定菌型并作出报告
GB/T4789.5-2003 中志贺氏菌检验程序
（一）实验内容
样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→生化学试验→→结果报告
第一次样品处理和增菌培养
预先准备并灭菌的器材规格名称 • 1、18×180mm试管
数量
6支
• • • •
2、10ml移液管 1支 3、直径为90mm平皿 2套 4、250ml量筒与500毫升广口瓶酌情 7 、不锈钢汤匙1把，玻璃珠，杜氏小管酌情

志贺氏菌检验流程

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