引物退火温度与Tm值的关系

PCR的退火温度选择

熔解温度(Tm)是引物的一个重要参数。

这是当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度・Tm对于设定PCR退火温度是必需的。

在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非待异性结合。

合理的退火温度从55* 到7(TC。

退火温度一般设定比引物的Tm低5它。

设定Tm有几种公式。

有的是来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。

有的是根据GC 含量估算Tm。

确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法。

这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。

大部分计算机程序使用近邻分析法。

根据所使用的公式及引物序列的不同，Tm会差异很大。

因为大部分公式提供一个估算的Tm 值，所有退火温度只是一个起始点。

可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。

开始低于估算的Tm5°C,以为增量，逐步提高退火温度。

较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。

为获得最佳结果，两个引物应具有近似的Tm值。

引物对的Tm差异如果超过5。

(2,就会引物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。

如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5它或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。

这使得在较为严紧的条件下可以荻得目的模板的部分拷贝。

当引物长度低于20个bp可以根据Tm=3GC+2AT,对于更长的寡聚核昔酸，Tm计算公式为：Tm = 81.5+ 16. 6 x LoglO[Na+] + 0.41 (%GC) - 600/size公式中，Size =引物长度。

退火温度取决于引物长度及序列，GC含量越高退火温度越高，引物的Tm值减去5-8度即是引物的退火温度，引物的Tm值一般都会在引物合成单上体现，如果没有的话可以在网上搜个引物退火温度计算器输入序列就可以了。

退火时间一般都是30秒。

同源重组pcr引物退火温度-概述说明以及解释

同源重组pcr引物退火温度-概述说明以及解释1.引言1.1 概述同源重组PCR是一种重要的分子生物学技术，广泛应用于基因工程、基因组学和生命科学研究中。

在同源重组PCR反应中，引物的设计和退火温度的选择是非常关键的步骤。

引物退火温度的选择直接影响了PCR反应的特异性和扩增效率。

引物退火温度是指PCR反应中的温度条件，用来使引物与模板DNA 序列结合，以便进行DNA扩增。

引物的退火温度应适当高于其Tm（退火温度）值，以保证退火反应能够充分进行。

同时，引物退火温度也需要低于DNA链的解链温度，以避免在退火过程中引物与DNA链的解链，影响扩增效率。

引物退火温度的选择需要考虑多个因素。

首先，应根据引物的序列特性来确定其Tm值。

Tm值是DNA双链解链的温度，通常由引物的碱基组成、长度和浓度来决定。

较长的引物和富含GC碱基的引物通常具有较高的Tm值。

其次，引物的退火温度应根据模板DNA的GC含量来进行调整。

高GC含量的模板DNA需要较高的退火温度，以增加引物与模板DNA 的结合力。

最后，应该考虑反应体系的缓冲条件、引物浓度和DNA模板浓度等因素，以获得最优的引物退火温度。

通过合理选择引物退火温度，可以提高同源重组PCR反应的特异性和扩增效率。

较高的退火温度可以增加引物与目标序列的结合力，减少非特异性扩增产物的形成。

同时，适当的退火温度可以提高扩增效率，加快PCR 反应的速度。

总之，引物退火温度在同源重组PCR反应中起着至关重要的作用。

合理选择引物退火温度可以提高反应的特异性和扩增效率，为基因工程和生命科学研究提供有力的技术支持。

1.2文章结构文章结构指的是文章的整体框架和组织方式。

在本文中，我们将遵循以下结构来撰写和组织文章内容：1) 引言部分:a. 概述：介绍同源重组PCR的基本原理和应用背景；b. 文章结构：说明本文的整体组织结构和各个章节的内容；c. 目的：明确文章的研究目标和意义。

2) 正文部分：a. 同源重组PCR引物的意义：介绍同源重组PCR引物在相关研究领域的重要性和作用；b. 引物退火温度对同源重组PCR反应的影响：探讨引物退火温度在同源重组PCR反应中的作用机制和影响因素。

PCR参数

〔PCR的循环参数〕1、预变性（Initial denaturation）．模板DNA完全变性对PCR能否成功至关重要，一般95℃加热3-5分钟。

2、引物退火（Primer annealing）退火温度一般需要凭实验（经验）决定。

退火温度对PCR的特异性有较大影响。

Tm值(解链温度)=4(G+C)＋2(A+T)复性温度=Tm值-(5～10℃)在Tm值允许范围内，选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合，提高PCR反应的特异性。

复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。

3、引物延伸引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。

延伸时间随扩增片段长短而定。

PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。

PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够的。

3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。

延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。

对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。

4、循环中的变性步骤循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性：变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。

每完成一个循环需2～4分钟5、循环数大多数PCR含25-35循环，过多易产生非特异扩增。

6、最后延伸在最后一个循环后，反应在72℃维持5-15分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。

PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。

PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够的。

3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。

延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。

对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。

PCR条件中退火温度

PCR条件中退火温度引言聚合酶链反应（PCR）是一种重要的分子生物学技术，它用于扩增DNA片段。

PCR 的成功与否与许多因素有关，其中之一就是退火温度的选择。

本文将探讨PCR条件中退火温度的重要性以及如何选择适当的退火温度。

PCR的原理PCR是一种体外扩增DNA片段的技术，它通过反复进行三个步骤来实现：变性、退火和延伸。

其中退火是PCR过程中非常重要的一个步骤，它决定了扩增产物的特异性和产量。

退火温度对PCR的影响退火温度是指PCR反应中退火步骤发生的温度。

它的选择对PCR的成功起着至关重要的作用。

如果退火温度过高，会导致非特异性引物结合，扩增产物不准确。

反之，如果退火温度过低，可能导致引物无法结合，扩增效率低下。

如何选择适当的退火温度选择适当的退火温度是关键。

下面是一些选择退火温度的关键考虑因素：引物设计合适的引物设计是PCR成功的基础。

引物的长度、碱基组成以及Tm值（解离温度）都会影响退火温度的选择。

通常，引物的Tm值会与退火温度相差约5°C。

引物之间的Tm值差异过大可能会导致扩增产物的偏倚，因此需要确保引物的设计合理。

目标序列的碱基组成目标序列的碱基组成可能导致退火温度的微调。

富含GC的序列通常需要较高的退火温度，而富含AT的序列需要较低的退火温度。

因此，在选择退火温度时，需要对目标序列的碱基组成进行分析，并进行适当的微调。

目标产物的长度目标产物的长度也会影响退火温度的选择。

通常情况下，较长的DNA序列需要更高的退火温度，而较短的序列可以使用较低的退火温度。

因此，在选择退火温度时，需考虑目标产物的长度，并根据需要进行调整。

使用缓冲液和酶的要求不同的PCR缓冲液和酶对退火温度的要求可能不同。

因此，在进行PCR反应时，建议参照所使用的缓冲液和酶的说明书，以选择最佳的退火温度。

总结选择适当的退火温度是PCR成功的关键之一。

合适的退火温度可以保证扩增产物的特异性和产量。

在选择退火温度时，需要考虑引物设计、目标序列的碱基组成、目标产物的长度以及使用的缓冲液和酶的要求。

pcr中退火的作用及实例说明

pcr中退火的作用及实例说明我来为你详细介绍PCR中退火的作用，并结合实例进行说明。

1.PCR中退火的意义与作用PCR（聚合酶链式反应）是分子生物学中一项基础且强大的技术，用于体外扩增特定的DNA片段。

其中，退火是PCR循环中的一个关键步骤，对于整个反应的成功至关重要。

2.退火的定义退火是指在PCR反应中，将反应体系的温度降低到一个特定的温度范围（通常为50-65℃），使设计好的引物与变性后的单链DNA模板按碱基互补配对的原则结合的过程。

3.退火的作用•引物与模板的结合：退火过程为引物与模板的结合提供了必要的条件。

当温度降低时，引物与模板之间的氢键形成，从而使引物牢固地结合在模板上。

•确定扩增的特异性：引物的序列是根据目标基因设计的，只有完全互补的引物才能与模板结合。

通过控制退火温度，可以提高引物与模板的结合特异性，减少非特异性扩增产物的产生。

•为DNA聚合酶提供起始位点：引物与模板的结合为DNA聚合酶提供了起始位点，使得DNA聚合酶能够从引物的3'端开始沿着模板链延伸，合成新的DNA链。

4.退火温度的确定退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素。

一般来说，退火温度应略低于引物的Tm值（即引物完全解链所需的温度）。

Tm值可以通过引物序列和碱基组成来计算。

•Tm值的影响：Tm值过高，引物与模板结合不牢固，影响扩增效率；Tm 值过低，非特异性结合增加，影响扩增特异性。

•经验公式：常用的Tm值计算公式为：Tm = 4(G+C) + 2(A+T)。

•实际操作：在实际实验中，退火温度通常在Tm值的基础上下调3-5℃。

5.退火过程中的注意事项•退火时间：退火时间一般为30秒-1分钟，足够引物与模板充分结合。

•退火温度的精确控制：PCR仪的温度控制精度直接影响退火效果，因此选择性能稳定的PCR仪非常重要。

•引物设计：引物的设计是影响退火效率的关键因素。

引物长度、GC含量、碱基组成等因素都会影响引物的Tm值和特异性。

PCR的退火温度选择

熔解温度（Tm）是引物的一个重要参数。

这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的。

在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。

合理的退火温度从55℃到70℃。

退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃。

设定Tm有几种公式。

有的是来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。

有的是根据GC含量估算Tm。

确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法。

这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。

大部分计算机程序使用近邻分析法。

根据所使用的公式及引物序列的不同，Tm会差异很大。

因为大部分公式提供一个估算的Tm 值，所有退火温度只是一个起始点。

可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。

开始低于估算的Tm5℃，以2℃为增量，逐步提高退火温度。

较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。

为获得最佳结果，两个引物应具有近似的Tm值。

引物对的Tm差异如果超过5℃，就会引物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。

如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。

这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。

当引物长度低于20个bp可以根据Tm=3GC+2AT,对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size公式中，Size = 引物长度。

退火温度取决于引物长度及序列，GC含量越高退火温度越高，引物的Tm值减去5-8度即是引物的退火温度，引物的Tm值一般都会在引物合成单上体现，如果没有的话可以在网上搜个引物退火温度计算器输入序列就可以了。

退火时间一般都是30秒。

试试下载一个Oligo6.0，这个软件挺不错的，在计算出来的退火温度基础上上下幅度一点是没有什么问题的bioxm2.6 更专业软件很小很方便更能还挺强大我们刚做了PCR实验，当引物长度小于25bp时，退火温度通过（Tm-5）℃计算，Tm=4（G+C）+2（A+T）增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。

退火温度的选择1则

退火温度的选择1则以下是网友分享的关于退火温度的选择的资料1篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。

PCR的退火温度选择（1）熔解温度（Tm）是引物的一个重要参数。

这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的。

在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。

合理的退火温度从55℃到70℃。

退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。

设定Tm有几种公式。

有的是来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。

有的是根据GC含量估算Tm。

确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法。

这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。

大部分计算机程序使用近邻分析法。

根据所使用的公式及引物序列的不同，Tm会差异很大。

因为大部分公式提供一个估算的Tm值，所有退火温度只是一个起始点。

可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。

开始低于估算的Tm5℃，以2℃为增量，逐步提高退火温度。

较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。

为获得最佳结果，两个引物应具有近似的Tm值。

引物对的Tm差异如果超过5℃，就会引物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。

如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。

这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。

当引物长度低于20个bp可以根据Tm=3GC+2AT,对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size公式中，Size = 引物长度。

退火温度取决于引物长度及序列，GC含量越高退火温度越高，引物的Tm值减去5-8度即是引物的退火温度，引物的Tm值一般都会在引物合成单上体现，如果没有的话可以在网上搜个引物退火温度计算器输入序列就可以了。

退火温度 -回复

退火温度的概念、影响因素和应用退火温度是一个在不同领域有不同含义的术语，本文将从两个方面介绍退火温度的概念、影响因素和应用，分别是分子生物学中的PCR技术和金属材料的热处理工艺。

PCR技术中的退火温度PCR（聚合酶链式反应）是一种分子生物学实验技术，可以利用特定的引物（一段短的DNA片段）和DNA聚合酶，对目标DNA序列进行指数级的扩增。

PCR反应通常包括三个步骤：变性、退火和延伸，循环进行多次。

退火是PCR反应中的第二个步骤，是指引物和模板（目标DNA序列）在一定的温度下结合形成双链DNA的过程。

退火温度是指引物和模板结合时候的温度参数，当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。

它是影响PCR特异性的较重要因素。

在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。

合理的退火温度从55℃到70℃。

退火温度一般设定比引物的Tm（解链温度）低5℃。

Tm值是指当50%的引物和互补序列分离为单链DNA分子时的温度。

Tm值与引物的长度、碱基组成及其浓度有关。

Tm 值可以通过以下公式估算：Tm=4(G+C)+2(A+T)其中G、C、A、T分别表示引物中各种碱基的个数。

退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。

对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。

复性时间一般为30～60秒，足以使引物与模板之间完全结合。

选择合适的退火温度对于提高PCR反应的效率和特异性至关重要。

如果退火温度过高，会导致引物和模板结合不充分，降低扩增效率；如果退火温度过低，会导致引物和模板之间发生非特异性结合，产生非目标扩增产物。

金属材料中的退火温度金属材料在加工过程中会产生一定程度的形变硬化和残余应力，影响材料的力学性能和使用寿命。

为了消除或减少这些不利因素，通常需要对金属材料进行热处理工艺，其中最常见的一种就是退火。

PCR的退火温度选择

熔解温度（Tm）是引物的一个重要参数。

这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的。

在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。

合理的退火温度从55℃到70℃。

退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。

设定Tm有几种公式。

有的是来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。

有的是根据GC含量估算Tm。

确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法。

这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。

大部分计算机程序使用近邻分析法。

根据所使用的公式及引物序列的不同，Tm会差异很大。

因为大部分公式提供一个估算的Tm 值，所有退火温度只是一个起始点。

可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。

开始低于估算的Tm5℃，以2℃为增量，逐步提高退火温度。

较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。

为获得最佳结果，两个引物应具有近似的Tm值。

引物对的Tm差异如果超过5℃，就会引物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。

如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。

这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。

当引物长度低于20个bp可以根据Tm=3GC+2AT,对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size公式中，Size = 引物长度。

退火温度取决于引物长度及序列，GC含量越高退火温度越高，引物的Tm值减去5-8度即是引物的退火温度，引物的Tm值一般都会在引物合成单上体现，如果没有的话可以在网上搜个引物退火温度计算器输入序列就可以了。

退火时间一般都是30秒。

试试下载一个Oligo6.0，这个软件挺不错的，在计算出来的退火温度基础上上下幅度一点是没有什么问题的bioxm2.6 更专业软件很小很方便更能还挺强大我们刚做了PCR实验，当引物长度小于25bp时，退火温度通过（Tm-5）℃计算，Tm=4（G+C）+2（A+T）增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。

实时定量pcr引物tm值和溶解曲线横坐标的tm是一回事么

TM是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。

Tm对于设定PCR退火温度是必需的。

Tm可采用下列公式计算：Tm＝2(A+T) + 4(G+C)。

不一样的，引物的Tm是引物本身的解链温度，软件一般会自动给出。

溶解曲线横坐标的Tm 是PCR产物的解链温度，所以一般是比引物本身的Tm值大的。

就是说你的反应体系在80度时50%的DNA解链啊。

因为你用的模版应该的
都是一种或者亲缘关系较近的生物的，所以基本上都是这个值。

不同生物
的基因组的Tm值是不一样的。

不一样，你用的是什么方法啊染料还是探针啊如果是单独合成的引物，那
就是引物的Tm，这个就是你设计引物时软件上给你的Tm。

方便你设计反应
体系的退火温度。

一般情况下，这个值也只是个参考值，要想获得好的结
果是需要摸条件的。

分子就是烧钱的货，不要怕花钱哈……
ps.定量要的是曲线，所以退火温度什么倒不是主要的，主要的是你引物的
特异性，千万不能有杂带。

先跑个常规pcr看看比较好。

PCR的退火温度选择

熔解温度（Tm）是引物的一个重要参数。

这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的。

在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。

合理的退火温度从55℃到70℃。

退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃。

设定Tm有几种公式。

有的是来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。

有的是根据GC含量估算Tm。

确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法。

这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。

大部分计算机程序使用近邻分析法。

根据所使用的公式及引物序列的不同，Tm会差异很大。

因为大部分公式提供一个估算的Tm 值，所有退火温度只是一个起始点。

可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。

开始低于估算的Tm5℃，以2℃为增量，逐步提高退火温度。

较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。

为获得最佳结果，两个引物应具有近似的Tm值。

引物对的Tm差异如果超过5℃，就会引物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。

如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。

这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。

当引物长度低于20个bp可以根据Tm=3GC+2AT,对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size公式中，Size = 引物长度。

退火温度取决于引物长度及序列，GC含量越高退火温度越高，引物的Tm值减去5-8度即是引物的退火温度，引物的Tm值一般都会在引物合成单上体现，如果没有的话可以在网上搜个引物退火温度计算器输入序列就可以了。

退火时间一般都是30秒。

试试下载一个Oligo6.0，这个软件挺不错的，在计算出来的退火温度基础上上下幅度一点是没有什么问题的bioxm2.6 更专业软件很小很方便更能还挺强大我们刚做了PCR实验，当引物长度小于25bp时，退火温度通过（Tm-5）℃计算，Tm=4（G+C）+2（A+T）增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。

两条引物退火的条件

两条引物退火的条件
引物退火是聚合酶链反应（PCR）中的关键步骤，它决定了引物与DNA模板的结合程度，从而影响PCR的效率和特异性。

以下是两条引物退火的条件：
1. 退火温度：退火温度是引物退火的主要条件，它取决于引物的解链温度（Tm）。

通常，PCR引物的建议解链温度在55～70℃范围内，而退火温度一般比解链温度低5℃左右。

2. 时间：退火时间一般为30秒，时间过长或过短都会影响PCR效果。

另外，为了避免非特异性结合，退火温度越高，引物与模板结合的特异性越强，但非特异性扩增概率也降低，扩增效率也随之降低。

相反，随着温度的降低，引物与模板非特异性结合的概率提高。

以上信息仅供参考，如需了解更多信息，建议查阅相关文献或咨询专业人士。

退火温度与tm值的关系

退火温度与tm值的关系
退火温度与tm值的关系是一个非常复杂的话题，由于它涉及到物理学、化学和生物学之间的多方面因素。

这两个概念都是重要的，也被广泛应用于生物学、化学和工程领域。

首先，tm值是指DNA片段在不同温度下的最大保持强度的温度，它一般介于90-95°C之间，也就是说，当温度升高到这个范围时，DNA片段会被有效地分裂，而温度超过这个水平，就会导致DNA片段破坏。

其次，退火温度是指将特定物质从高温或过冷状态逐步降温，使其返回到它原本应有的状态，以便重新形成新的结构或者改变特定性质，以达到一定的目的。

一般情况下，退火温度可以从100°C开始，然后逐步降低到
50°C，每次降温10°C左右，一般会持续3-5小时。

因此，退火温度与tm值之间存在一定的关系，即DNA 片段在接近tm值的温度下，它可能会受到退火影响，从而改变其特性。

由于在退火过程中DNA片段的特性有可能发生变化，所以在接近tm值的温度下进行退火可能会影响DNA片段本身的特性，因此，在进行实验时，要注意控制退火温度，以避免发生变化。

此外，tm值可以用来预测某种物质在不同温度下的性质。

根据不同物质的性质，tm值可能会有所不同，因此，在考虑退火温度时，应该考虑物质的tm值，以避免温度过高或过低，导致物质性质发生变化。

总之，退火温度与tm值之间存在一定的关系，但是，要想准确预测某种物质在不同温度下的性质，还需要考虑物质的tm值，以及其他因素，如pH值、溶液组成等，最终选择合适的退火温度，以达到期望的结果。

退火延伸温度

退火温度和延伸温度是PCR（聚合酶链式反应）过程中的重要参数。

退火温度是指使模板DNA与引物结合的适宜温度，一般在
50~65℃之间，具体温度取决于引物的Tm值。

引物与模板DNA的结合特异性取决于退火温度，退火温度越高，引物与模板DNA的结合特异性越强，但过高的退火温度可能导致引物与模板DNA的结合概率降低。

一般退火时间为30秒。

延伸温度是指Taq DNA聚合酶催化引物延伸的最适温度，一般为72℃左右。

在此温度下，Taq DNA聚合酶以单链DNA链为模板，将单核苷酸逐个加入到引物的3'端，使引物不断延长，从而合成新的DNA 链。

PCR的退火温度选择

熔解温度（Tm）是引物的一个重要参数。

这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm关于设定PCR退火温度是必需的。

在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。

合理的退火温度从55℃到70℃。

退火温度一样设定比引物的Tm低5℃。

设定Tm有几种公式。

有的是来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。

有的是依照GC含量估算Tm。

确信引物Tm最可信的方式是近邻分析法。

这种方式从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳固性。

大部份运算机程序利用近邻分析法。

依照所利用的公式及引物序列的不同，Tm会不同专门大。

因为大部份公式提供一个估算的Tm值，所有退火温度只是一个起始点。

能够通过度析几个慢慢提高退火温度的反映以提高特异性。

开始低于估算的Tm5℃，以2℃为增量，慢慢提高退火温度。

较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。

为取得最正确结果，两个引物应具有近似的Tm值。

引物对的Tm不同若是超过5℃，就会引物在循环中利用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。

若是两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃或为了提高特异性，能够在依照较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在依照较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。

这使得在较为严紧的条件下能够取得目的模板的部份拷贝。

当引物长度低于20个bp能够依照Tm=3GC+2AT,关于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：Tm = + x Log10[Na+] + (%GC) – 600/size公式中，Size = 引物长度。

退火温度取决于引物长度及序列，GC含量越高退火温度越高，引物的Tm值减去5-8度即是引物的退火温度，引物的Tm值一样都会在引物合成单上表现，若是没有的话能够在网上搜个引物退火温度计算器输入序列就能够够了。

退火时刻一样都是30秒。

试试下载一个，那个软件挺不错的，在计算出来的退火温度基础上上下幅度一点是没有什么问题的更专业软件很小很方便更能还挺壮大咱们刚做了PCR实验，当引物长度小于25bp时，退火温度通过（Tm-5）℃计算，Tm=4（G+C）+2（A+T）增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。