细菌药敏试验及耐药机制的研究
第章细菌药敏试验及其耐药表型检测
第章细菌药敏试验及其耐药表型检测细菌药敏试验是临床细菌感染治疗中非常重要的检测手段，通过该技术可以检测不同抗生素对细菌的敏感性，进而为合理使用抗生素提供科学的依据。
然而，在临床应用过程中，随着抗生素不合理使用的增加，细菌耐药性也随之快速发展。
因此，针对不同耐药表型的检测越来越受到关注。
一、细菌药敏试验细菌药敏试验是一种用于判断细菌对不同抗生素敏感性的方法。
常见的细菌药敏试验方法包括纸片扩散法、E测试、革兰氏染色法、微量稀释法等。
其中纸片扩散法是最常用的一种方法，其原理是将待检细菌涂在琼脂平板上，然后在板上放置一些含有不同抗菌药物的试纸，细菌耐药性差的部分会被试纸上的抗生素杀灭，出现纯净孔（抑菌圈），通过抑菌圈的直径可以初步判断细菌对抗生素的敏感性或耐药性。
细菌药敏试验有很多应用价值，如能够帮助医生选择合适的抗生素治疗细菌感染，避免了不必要的抗生素使用，同时也可作为科研人员研究细菌抗药机制的工具，为抗菌药物的开发提供依据。
二、耐药表型检测随着细菌抗药性问题的不断加重，对不同耐药表型检测的需求也越来越迫切。
耐药表型是指细菌对特定抗生素的耐药情况。
由于不同的细菌及其不同的菌株对抗生素的敏感程度有所不同，因此抗菌药物在应用过程中会出现不同菌株对不同药物的耐药表型。
目前，针对不同耐药表型检测的方法主要有两种：基于分子生物学技术的方法和基于药敏试验的方法。
1. 基于分子生物学技术的方法基于分子生物学技术的方法是检测细菌耐药性最常用的方法之一。
该方法通过检测细菌中特定的基因或者基因片段，以此确定细菌耐药性的表型。
常见的基于分子生物学技术的方法包括PCR检测、基因芯片技术、实时荧光定量PCR等。
2. 基于药敏试验的方法基于药敏试验的方法是已经成熟的检测方法之一，其通过将药敏试验的结果与临床药物疗效相结合，进而确定细菌耐药性表型。
通过检测不同抗生素对不同菌株的敏感性，可以初步反映出细菌的耐药性状态。
当然，这种方法不仅涉及到耗时、耗材、人力等成本的问题，而且还受到试验条件、条件操作等方面的影响。
细菌耐药研究的进展和对策
5
细菌耐药机制
1. 产生灭活酶：
1) 内酰胺酶(最大旳一类) 2) 氨基甙钝化酶等
2. 靶位变化:PBP旳数量或构造变化
3.低通透性屏障作用
1) 膜通透性下降 2) 生物被膜
4. 主动泵出(active efflux process)
5. 细菌缺乏自溶酶，对抗菌药物产生耐受
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6
蛋白通道：
99 95 63 91 83 86
33
ESBLs 检测、判断和临床辨认
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34
ESBLs检测旳原理和措施
ESBLs能水解三代头孢及氨曲南 酶克制剂能克制ESBLs ESBLs旳检测措施
双纸片法、三维试验法、肉汤稀释法、VitekAMS法、E-test法、克制剂增强旳纸片扩散法 和肉汤稀释法
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19
第 三 代头孢菌素
过分使用后旳
选择作用
G-
G+
产 ESBL 旳
大肠杆菌，肺炎克雷 伯菌 等
高产 AMP C 酶旳
肠杆菌属菌，枸橼 酸菌，沙雷氏菌等
对第三代，及第 四代头孢菌素等 耐药
对第三代头孢菌素及 酶克制剂复合制剂 耐药
碳青霉烯类抗生素
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碳青霉烯类抗生素， 第四代头孢菌素
≤27mm
– Cefotaxime
≤27mm，
– ceftriaxone
≤25mm
• These zone diameter should increase in the presence of clavulanic acid
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36
查K. Pneumoniae, K.oxytoca & E. coli 菌中旳ESBLs（初步筛选法)
药敏试验实验报告
药敏试验实验报告实验目的，通过对不同抗生素对细菌的敏感性进行测试，以确定最有效的药物治疗方案。
实验方法，首先，我们收集了一系列不同类型的细菌样本，包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
然后，我们按照标准程序将这些细菌培养在含有不同抗生素的琼脂平板上。
接着，我们观察并记录了每种细菌对不同抗生素的抗性情况。
最后，我们对实验数据进行了统计分析。
实验结果，经过实验，我们发现不同类型的细菌对抗生素的敏感性存在较大差异。
其中，革兰氏阳性菌对青霉素类抗生素表现出较高的敏感性，而对大多数氨基糖苷类抗生素则表现出较低的敏感性。
而革兰氏阴性菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性较高，对青霉素类抗生素的敏感性较低。
此外，我们还发现了一些细菌对某些抗生素存在耐药性的情况。
实验结论，根据实验结果，我们可以得出以下结论，首先，不同类型的细菌对抗生素的敏感性存在差异，因此在临床治疗中应根据具体情况选择合适的抗生素。
其次，细菌对某些抗生素存在耐药性，这需要引起临床医生的重视，避免不必要的用药。
最后，本实验为临床抗生素治疗提供了重要的参考依据。
实验意义，本实验结果对于临床治疗具有一定的指导意义，可以帮助医生更科学地选择抗生素，提高治疗效果，减少药物滥用，降低细菌耐药性的风险。
实验不足，虽然本实验取得了一定的成果，但也存在一些不足之处。
例如，样本数量较少，实验过程中可能存在一些误差，需要进一步扩大样本量，加强实验设计，提高实验数据的可靠性。
总结，通过本次药敏试验实验，我们对不同类型细菌对抗生素的敏感性有了更深入的了解，为临床治疗提供了重要的参考依据。
希望今后能够进一步完善实验设计，提高实验数据的准确性，为临床治疗提供更多有益的信息。
脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及耐药机制研究进展
脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及耐药机制研究进展郭明日，朱彧△，孙海柏摘要：脓肿分枝杆菌复合群是非结核分枝杆菌病中最常见的快速生长型分枝杆菌之一，对大多数抗结核药物耐药，临床治疗难度大。
脓肿分枝杆菌复合群的3个亚种对多种抗生素的敏感性存在较大差异，临床实验室对其3个亚种的准确分型鉴定对于治疗药物的选择有重要价值。
中华医学会结核病学分会制定了非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南（2020版），按照美国临床和实验室标准协会（CLSI ）分枝杆菌药敏试验标准（2018版）进行脓肿分枝杆菌药敏试验，建议根据药敏试验结果选用多药联合治疗方案。
现就脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及对主要治疗药物的耐药机制的研究进展进行综述。
关键词：非结核分枝杆菌；微生物敏感性试验；抗药性，细菌；抗菌药；脓肿分枝杆菌复合群中图分类号：R446.5文献标志码：ADOI ：10.11958/20211209Research progress on drug sensitivity test and drug resistance mechanism ofMycobacterium abscessus complexGUO Ming-ri,ZHU Yu △,SUN Hai-bai Department of Clinical Laboratory,Haihe Hospital,Tianjin University,China Key Research Laboratory for Infectious DiseasePrevention for State Administration of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300350,China△ReviserE-mail:***************Abstract:Mycobacterium abscessus complex (MABC)is one of the most common fast-growing mycobacteria innontuberculosis mycobacterial diseases.Drug resistance to most of the antituberculosis drugs makes its clinical teratment very difficult.There are great differences in the sensitivity of the three subspecies of MABC to a variety of antibiotics.The accurate typing and identification of the three subspecies in clinical laboratory is of great value for the selection of therapeutic drugs.The tuberculosis branch of Chinese Medicine Association has formulated the guideline for the diagnosisand treatment of nontuberculosis mycobacterial disease (2020Edition),MABC susceptibility test should be carried out according to the standard of mycobacterium susceptibility test from Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)of theUnited States (2018Edition).It is suggested that multidrug combination therapy should be selected according to the results of drug sensitivity test.In order to provide reference for related research,this paper reviewed the progress of drug sensitivitytest of MABC and its resistance mechanism to main therapeutic drugs.Key words:nontuberculous mycobacteria;microbial sensitivity tests;drug resistance,bacterial;anti-bacterial agents;Mycobacterium abscessus complex基金项目：2020年度天津市卫生健康科技项目（ZC20102）；天津市津南区科技局科技项目（201805003）作者单位：天津市海河医院、天津大学海河医院检验科；国家中医药管理局传染病重点研究室（邮编300350）作者简介：郭明日（1982），男，硕士，副主任检验师，主要从事病原菌分子耐药及鉴定方面研究。
细菌耐药机理及其耐药细菌的
定 义：耐甲氧西林、耐苯唑西林且多重耐药的葡萄球 菌。 • 耐药机理：MecA编码PBP2a及PBPs改变。 • 意义：对目前所有的β-内酰胺类耐药，通常对氨基 甙类、大环内酯类、克林霉素和四环素多重耐药。 • 治疗：1.MRS轻度感染：利福平 ,SMZ- TMP,环丙 沙星;
2.MRS严重全身感染：首选万古霉素
１.克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦. ２.对TEM型 三种均有抑制作用，作用相仿 ３.对SHV型 他唑巴坦、克拉维酸强于舒巴坦
1.TEM-1产量过多 2.外膜蛋白改变 3.1型酶（AmpC） 4.1 2 型酶并存 5.2br（IRT） 6.2d（OXA-11）
产生机制 ：染色体上的Amp（通常处于被抑 制状态）突变，去阻遏，活化编码产生AmpC 酶。
细菌耐药机理及其耐药细菌的
产生灭活酶 靶位改变 低通性屏障作用(膜通透性下降及生物被膜) 主动外运 细胞缺乏自溶酶，对抗菌药物产生耐受性
• 抗菌药物
耐药机制
• β-内酰胺类 细胞壁通性降低，与PBPs亲和力与结 合力
降低，产β-内酰胺酶，自溶
• 氨基甙类 摄入减少，产钝化酶，核糖体30S亚基改变，
已报告17种，其中出现最多、分布最广的是 CMY-2。
往往在抗生素治疗过程中诱导产生，并有可能 选择出持续、大量产酶的耐药菌株（去阻遏突 变株）
AMP是许多潜在的酶诱导剂之一，但没有选 择去阻遏突变株的作用。
许多3-ceph是弱诱导剂，但有选择去阻遏突 变株的作用。
随着新型头孢菌素的使用特点增加，能产生TYPE 1 β-Lac，导致对β-内酰胺类多重耐药的菌株迅速出现并 成为医院感染的重要病原菌。
在72小时菌血症期间，在适当治疗和无适当治疗的对头孢他啶耐 药的病人的结果.很多情况下我们很难证实细菌的MIC值与所选用 抗生素疗效之间具有明确的关系。
细菌耐药实验报告
为了研究细菌耐药性及其产生机制，本实验选取金黄色葡萄球菌作为研究对象，通过体外实验探究阿莫西林克拉维酸钾对金黄色葡萄球菌的最低杀菌浓度（MBC）和最小抑菌浓度（MIC）的影响，并分析其耐药性产生的原因。
二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC292132. 抗菌药物：阿莫西林克拉维酸钾3. 培养基：营养肉汤、营养琼脂4. 仪器设备：全自动微生物药敏鉴定仪、微量稀释器、恒温培养箱、移液器、离心机等三、实验方法1. 菌株活化：将金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC29213接种于营养肉汤中，37℃恒温培养18-24小时，待菌液浓度达到1×10^8 CFU/mL时，用于后续实验。
2. MBC测定：采用微量稀释法，将阿莫西林克拉维酸钾药物浓度梯度稀释至1/2MIC，将活化后的金黄色葡萄球菌菌液按1:100的比例加入至稀释后的药物中，混匀后置于恒温培养箱中培养24小时，观察细菌生长情况，以无菌生长的最低药物浓度为MBC。
3. MIC测定：采用微量稀释法，将阿莫西林克拉维酸钾药物浓度梯度稀释至1/2MIC，将活化后的金黄色葡萄球菌菌液按1:100的比例加入至稀释后的药物中，混匀后置于恒温培养箱中培养24小时，观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
4. 耐药性分析：将金黄色葡萄球菌进行多步体外诱导试验，观察其在阿莫西林克拉维酸钾作用下耐药性的变化。
四、实验结果1. MBC和MIC测定结果：金黄色葡萄球菌对阿莫西林克拉维酸钾的MBC为16μg/mL，MIC为8μg/mL。
2. 耐药性分析结果：经过34天诱导后，金黄色葡萄球菌对阿莫西林克拉维酸钾的耐药性明显增强，MBC值是标准菌株MBC值的32倍。
1. 本实验结果显示，金黄色葡萄球菌对阿莫西林克拉维酸钾的耐药性随诱导时间的延长而逐渐增强，这可能与细菌产生的β-内酰胺酶有关。
β-内酰胺酶是一种能够水解β-内酰胺类抗生素的酶，导致药物失活，从而产生耐药性。
药敏试验原理
药敏试验原理
药敏试验是一种用来测试细菌对抗生素的敏感性的实验方法。
它可以帮助医生选择最有效的抗生素治疗感染，避免使用对细菌无效的抗生素，从而减少抗生素滥用和耐药性的发展。
药敏试验原理是基于细菌对抗生素的敏感性和耐药性，通过一系列的实验步骤来确定细菌对不同抗生素的敏感程度，从而为临床治疗提供指导。
首先，需要收集患者的痰液、血液或尿液等样本，分离出感染的细菌。
然后将这些细菌培养在含有各种抗生素的琼脂平板上，观察并记录细菌在不同抗生素下的生长情况。
通过比较不同抗生素对细菌的杀菌效果，可以确定细菌对抗生素的敏感性。
在药敏试验中，通常会使用一系列的抗生素，包括青霉素、头孢菌素、氨基糖苷类抗生素等。
这些抗生素代表了不同的药物类别和作用机制，可以全面评估细菌的耐药性。
通过观察细菌在不同抗生素下的生长情况，可以确定细菌对各种抗生素的敏感性，从而为临床治疗提供参考依据。
在进行药敏试验时，需要严格遵守操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。
同时，还需要考虑到不同细菌对抗生素的敏感性
可能存在差异，因此在选择抗生素治疗时，需要根据具体的细菌种类和药敏试验结果来进行个体化治疗。
总的来说，药敏试验是一种非常重要的临床实验方法，可以帮助医生选择最有效的抗生素治疗感染，减少抗生素滥用和耐药性的发展。
通过对细菌对抗生素的敏感性进行评估，可以为临床治疗提供科学依据，提高治疗效果，减少并发症的发生，对于维护患者的健康具有重要意义。
细菌耐药性原理-抗菌药物敏感试验kej
但价格较高。
操作方法： 1.挑取16～20h的菌落 2.用无菌生理盐水制备成0.5麦氏比浊管浊度的菌液。
3.用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多 的菌液。棉签在三个方向平均涂抹琼脂表面（每次转60℃）使菌液均匀 分布，最后沿平板内缘涂抹一周。
联合药敏试验的方法
• 棋盘稀释法
• 原理 先测定两药单药时各自的MIC值，再将各种稀释度的两药混合， 测定两药联合时各药的MIC值，比较两药联合时MIC值与其单独MIC 值，计算部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concectration，FIC)， 作为协同、相加、无关和拮抗的判断。
大肠埃希菌 头孢噻肟
浓度 0.5
1
2
4 ug/ml
3.抗菌药物敏感性试验的方法
浓度梯度法（E-Test）药敏试验
E-Test即浓度梯度（多点药物浓度法）琼脂扩散试验。E试纸条背面含 有干化、浓度由高至低连续梯度分布的抗菌药，药物浓度按log2梯度递 减。抗菌药物从具有浓度刻度的塑料试纸条中向琼脂中扩散，在试纸条 周围抑菌浓度范围内受试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈，抑 菌圈与试纸条的横向相交处的读数刻度为MIC值。
抗菌药物的临床实践
剂量 方案
血药浓度/时间
药代动力学 PK
其他组织或体液药 物浓度/时间
感染部位药物 浓度/时间
药理学或 毒副作用
抗菌作用/ 时间
药效动力学 PD
＋ PK：反应体内药物浓度 变化与时间关系
PD：反应抗菌药物在体 外抗菌活性变化过程
MIC MBC PAE MPC
研究发现新型细菌抗生素对耐药性细菌的有效性实验报告
研究发现新型细菌抗生素对耐药性细菌的有效性实验报告近年来，细菌耐药性的问题日益严重，抗生素的有效性在医疗领域中备受关注。
为了探究新型细菌抗生素对耐药性细菌的有效性，我们进行了一系列的实验研究。
实验设计：我们选取了多种常见的耐药性细菌株进行实验，包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
在实验开始前，我们对这些细菌株进行了药敏试验，确认其对传统抗生素的耐药性。
实验组分别接种了新型细菌抗生素及常规抗生素，对照组接种了常规抗生素。
我们观察了两组细菌的生长情况、细菌数量以及药物的杀菌效果。
实验结果：经过一段时间的观察，我们得出了以下结论：1. 新型细菌抗生素对耐药性细菌具有较强的抑制作用。
与常规抗生素相比，新型细菌抗生素能够更有效地控制细菌的生长，抑制其扩散。
2. 对照组的细菌在常规抗生素的作用下，细菌数量没有显著下降，甚至有些细菌株还表现出了抗药性进一步增强的趋势。
3. 在新型细菌抗生素的作用下，细菌数量迅速减少，并且在一段时间后保持较低的水平。
这说明新型细菌抗生素对耐药性细菌具有较好的杀菌效果。
实验分析：新型细菌抗生素的出现对抗药性细菌的治疗提供了新的希望。
与传统抗生素相比，新型细菌抗生素具有以下优势：1. 新型细菌抗生素采用了不同的作用机制，能够抑制细菌生长的不同环节，从而降低细菌产生耐药性的风险。
2. 对于多重耐药的细菌株，传统抗生素往往无法达到理想的治疗效果。
而新型细菌抗生素在这方面表现出了明显的优势，能够有效地杀灭这些耐药性细菌。
3. 新型细菌抗生素在药物的安全性上也有所改进，减少了对人体的不良反应。
实验结论：本次实验结果证实了新型细菌抗生素对耐药性细菌的有效性，为解决细菌耐药性问题提供了新的选择。
然而，需要进一步的研究来确定新型细菌抗生素的药物安全性以及耐药性的产生机制。
我们希望通过不断的探索和创新，为医疗领域提供更好的抗生素治疗方案，抑制细菌耐药性的持续发展，保护人类健康。
细菌耐药——挑战与对策
细菌耐药——挑战与对策自19 世纪晚期德国科学家Robert Koch 证实了感染性疾病的细菌起源学说起，人类一直致力于与细菌感染性疾病的斗争。
以青霉素为代表的抗生素的发现和发明，曾一度有效控制了细菌感染性疾病。
人们在庆幸一代又一代新型广谱高效抗菌药物出现的同时，也惊叹越来越多的耐药菌株种类和越来越高的耐药比例。
细菌耐药已经成为严重的公共卫生问题，而且其发展速度远远超过抗菌药物研制，有专家预言，长此以往，人类将再次陷入对细菌感染无药可治的困境，即进入“后抗生素时代”。
通过对细菌耐药机制的研究来研发新的抗菌药物、正确合理应用现有抗菌药物是应对这种挑战的关键。
一、细菌耐药机制细菌耐药的原因很复杂，抗菌药物滥用所造成的压力使细菌产生获得性耐药，如产生各种灭活酶或钝化酶、抗生素结合位点改变、细胞膜通透性改变、泵出机制。
研究者和临床工作者近年来发现细菌表现为生物被膜的多细胞结构群体也是临床上抗菌药物治疗无效的重要原因。
美国疾病预防与控制中心（CDC）的研究结果表明，约65％的感染性疾病与细菌生物被膜有关，这也是抗感染治疗面临的新挑战。
细菌生物被膜是指附着在有生命或无生命物体表面的由细菌自身产生的胞外多聚基质包裹的菌细胞结构群体。
与浮游细菌相比，生物被膜细菌对抗菌药物的抗性可提高10－1000 倍，现有药物难以清除生物被膜，造成感染反复发作。
本课题组曾对铜绿假单胞菌生物被膜的胞外多糖主要成分之一——藻酸盐做过深入研究，并从临床一位反复肺部感染的老年患者的痰标本中分离出一株含新的mucA 基因突变的黏液型铜绿假单胞菌。
本课题组通过同源重组对改突变基因的功能进行了研究，目前的结果表明该新型突变的mucA 基因通过藻酸盐以外的途径影响铜绿假单胞菌生物被膜的形成和耐药。
进一步的深入研究还在进行中。
二、中国细菌耐药流行趋势根据中国CHINET 2005 年度的调查结果，甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRS A）与甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的检出率分别为69%与82%，明显高于2002－2003 年度的调查结果（分别为41.0%与29.1%）。
细菌药敏鉴定实验报告
细菌药敏鉴定实验报告1. 引言细菌药敏鉴定是一项用于判断细菌对不同抗生素的敏感性的实验技术。
在医疗领域，了解细菌的药敏性能够帮助医生选择适当的药物治疗感染疾病。
本实验旨在通过药敏试验方法对不同细菌株的耐药性进行评估。
2. 实验步骤2.1 细菌培养首先，我们选择了多种不同的细菌菌株，包括XX菌、YY菌和ZZ菌。
分别从它们的冻存液中接种于含有50ml营养琼脂培养基的培养皿中，并在恒温恒湿条件下（37C，24小时）培养。
2.2 制备抗生素试验板我们选取了多种常见的抗生素药物，包括A、B、C和D。
首先，按照厂家说明书的建议，将抗生素药物溶解于生理盐水中，制备出不同浓度的抗生素药液。
接下来，将含有琼脂和50ml培养基的琼脂平板抗生素试验板均匀涂布抗生素药液，使得每个试验格均匀含有相应浓度的抗生素。
2.3 细菌接种与观察将已经培养好的细菌菌株用微量匀色刷接种于刚制备好的抗生素试验板上。
利用垫片按压细菌，使其均匀分布于试验板上。
将接种完成的试验板放入培养箱中，以37C恒温恒湿条件下培养24小时。
观察培养结果，记录每个试验格的细菌生长情况，包括有无菌落，菌落的形状和大小。
2.4 分析结果根据观察到的细菌培养结果，可以初步判断细菌对不同抗生素的敏感性。
3. 结果与讨论对观察结果进行整理和分析后，我们发现不同细菌对抗生素的敏感性存在差异。
以XX菌为例，我们观察到在抗生素A的试验格上出现了菌落生长，而在抗生素B、C和D的试验格上没有菌落生长。
这表明XX菌对抗生素A具有抗性，而对抗生素B、C和D敏感。
对于YY菌和ZZ菌的实验结果，我们发现它们对不同抗生素的敏感性也存在差异。
具体结果请见附表1。
根据实验结果，我们可以根据细菌对抗生素的敏感性来选择合适的抗生素进行治疗。
例如，对于感染XX菌的患者，我们可以选择抗生素A进行治疗，而应避免使用抗生素B、C和D。
4. 结论通过本次细菌药敏鉴定实验，我们成功评估了不同细菌对抗生素的敏感性。
药敏试验耐药实验报告
药敏试验耐药实验报告1. 引言药敏试验耐药实验是一种重要的药物敏感性检测方法，用于评估细菌对药物的耐药性。
在这个实验中，我们通过药物与细菌的相互作用，确定细菌对不同药物的感受性，从而为临床合理使用抗生素提供参考。
2. 实验设计2.1 实验材料- 不同种类的细菌培养物- 不同种类的抗生素药物- 维生素和蛋白胨培养基- 培养皿和排线器- 实验室培养箱、离心机、显微镜等实验设备2.2 实验步骤1. 选择待测细菌进行预培养；2. 制备不同稀释浓度的抗生素药物溶液；3. 制备含有维生素和蛋白胨的培养基；4. 在培养皿中接种不同稀释浓度的抗生素溶液和细菌培养物，分别标记；5. 培养皿置于培养箱中以适宜的温度孵育；6. 观察培养皿中细菌生长情况，并记录结果；7. 使用排线器在耐药圈周围绘制抗生素浓度的梯度图；8. 根据抗生素浓度的梯度图分析耐药性的形成。
3. 实验结果通过药敏试验，我们观察到不同细菌对抗生素药物的感受性存在差异。
在培养皿中，对于某些细菌，抗生素溶液抑制了其生长，形成明显的抑菌区，而对于其他细菌，抗生素溶液的影响较小，细菌能够生长并形成耐药圈。
据分析，耐药圈的大小与抗生素的浓度成正比。
当抗生素浓度较高时，耐药圈较小；而当抗生素浓度较低时，耐药圈较大。
这一结果表明，细菌通过适应环境选择抗生素的浓度和类型达到耐药性。
4. 结论1. 细菌对抗生素的耐药性与抗生素的浓度和类型有关；2. 对某些细菌而言，抗生素溶液能够抑制其生长并形成明显的抑菌区；3. 耐药圈的大小与抗生素浓度成正比；4. 药物敏感性检测可为临床合理使用抗生素提供参考。
5. 讨论与展望本实验利用药物敏感性检测方法评估了细菌对抗生素的耐药性，结果表明细菌的耐药性与抗生素的浓度和类型有关，这为合理选用抗生素提供了理论依据。
然而，本实验只考虑了细菌的耐药性，未考虑其他因素如表面结构或基因突变等对细菌耐药性的影响。
未来的研究可以将这些因素纳入考虑，将药物敏感性检测方法与其他手段相结合，深入探究细菌耐药性形成的机制。
细菌药敏试验及耐药机制的研究
12.肺炎链球菌之外其它链球菌的纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
16 -
6.葡萄球菌属纸片扩散法
试验条件 培养基 接种物 孵育 Mueller-Hinton 琼脂 直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35±2℃；空气；16－18 小时；测苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林和万 古霉素需 24 小时。试验温度超过 35℃不能检测 MRS。
推荐的质控菌株 金黄色葡萄球菌 ATCC25923；大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β -内酰 胺酶/β -内酰胺抑制剂纸片用） ；金黄色葡萄球菌 ATCC BAA-977 和金黄 色葡萄球菌 ATCC BAA-976（用于克林霉素诱导试验质量评估）
≤ 2/38
（2）洋葱伯克霍尔德菌液体稀释法、琼脂稀释法解释标准
试验/ 抗微生物药 报告 分组 β 内酰胺类/β 内酰胺类抑制剂 B 替卡西林/克拉维酸 S MIC 值（μ g/ml） I R
注释
≤16/2
32/2-64/ 2
≥128/2
头孢类（注射药物）（包括头孢菌素Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ代） B 头孢他啶 ≤8 18 碳青霉烯类 B 美洛培南 四环素类 B 米诺环素 氟喹诺酮类 B 左氧沙星 ≤2 ≤8 ≤2/38 4 ≤4 ≤4 8 8
用纸片扩散法能可靠地测定分离于囊性纤维化病人的铜 绿假单菌的敏感性，但在作为敏感结果报告前，应将孵育 时间延长至24小时。
3.不动杆菌属纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
试验条件 培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌株 Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；20-24 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β -内酰胺酶/β -内酰胺抑制剂纸片用）
药敏与耐药
细菌培养仪器
药敏试验方法--抑菌圈
• 在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向 四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围 一定距离内的细菌生长受到抑制。过夜培养后形 成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏 感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌 对此药具有耐药性。其直径大小与药物浓度、划 线细菌浓度有直接关系。
疑问：
1、为什么天然耐药的药物会检测出敏感？ 2、铜绿假单胞菌敏感的标准是什么？ 3、为什么铜绿对替加环素天然耐药？ 4、有什么因素可以影响这个结果？这个结果可信吗？
病历报告分析
• 目前没有替加环素对铜绿药敏鉴别的相关标准。 • 据我们所得的报告，提示MIC<=0.5，虽然无相关标准， 与既往相关替加对铜绿的MIC的报道不相符，且据浓度提 示确实达到敏感。 • 如果对铜绿假单胞菌的判断是正确的，那么这株铜绿有可 能是变异株 • 对可疑变异株，可考虑传代后再培养及药敏 • 有些报告可能提到敏感只代表体外活性，体内抗生素不一 定有效，但这一项主要是针对适应性耐药、获得性耐药。 是否对天然耐药有影响并不清楚
细菌主要通过以下5种方式对抗菌药物产生耐药：
（1） 产生灭活酶或钝化酶， 将抗菌药物转化为无活性的代 谢物； （2） 改变靶位结构，使抗菌药物可作用靶位的数量减少； （3） 降低细胞膜的通透性， 减少抗菌药物的进入； （4） 产生生物被膜， 抵御抗菌药物的杀伤； （5） 当药物进入细胞后， 以上这些屏障并不能阻止抗菌药 物产生毒性作用， 所以有效地向细胞外泵出药物是细菌对抗 菌药物产生耐药的重要方式
• 主动外排泵 就是拥有将药物泵出细胞的外排 泵。
铜绿假单胞菌外排泵是一种质子泵， 可将多种药物泵 出细胞并参与生物被膜形成，从而产生多重耐药这些外 排泵引起铜绿假单胞菌对大环内酯类、 β 内酰胺类、 氟喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素耐药， 只有多黏菌素 类药物不能通过外排泵泵出体外。MexXY- OprM 是近 来研究最多的一类多重主动外排泵系统， 它除了能泵 出喹诺酮类药物， 还能泵出氨基糖甙类、 四环素类药 物。在临床分离的耐药株中， 已发现主动外排机制与 Ⅱ型拓扑异构酶突变共同存在， 而多种耐药机制在同 一菌株中同时存在， 容易产生菌株对药物的高耐药性。
细菌药敏试验与耐药机制研究进展
四环素类
B 米诺环素 30μg ≤14 15-18 ≥19 ≥16 ≤4
叶酸代谢途径抑制剂
A
甲氧苄啶 /磺胺甲
1.25/23.7 5μg
≤10
11-15
≥16
噁唑
≥ 8/152
≤ 2/38
2020/11/14
12
（2）洋葱伯克霍尔德菌液体稀释法、琼脂稀释法解释标准
试验/
报告 抗微生物药
S
分组
β内酰胺类/β内酰胺类抑制剂
104 cfu
mg/ml 4
2
1
0.5 0.25 0.12
0
2020/11/14
4
微量液体稀释法
2020/11/14
5
细菌药敏试验- E-test法
•E-test •Strips containing a gradient of antibiotic are placed on lawn of bacteria and incubated overnight. MIC is determined at point where zone of inhibition intersects scale on strip. •Combines ease of KB with an MIC method. Particularly
用纸片扩散法能可靠地测定分离于囊性纤维化病人的铜 绿假单菌的敏感性，但在作为敏感结果报告前，应将孵育 时间延长至24小时。
2020/11/14
9
3.不动杆菌属纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌株
试验条件 Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；20-24 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
高水平耐药实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本研究旨在探究高水平耐药菌的耐药机制，特别是针对第三代头孢菌素类抗生素的耐药性。
通过分子生物学技术，分析耐药菌的耐药基因及其表达情况，为临床合理用药和耐药菌的防控提供科学依据。
二、实验材料1. 实验菌株：临床分离的高水平耐药肠杆菌科细菌（如肺炎克雷伯菌、大肠杆菌等）。
2. 主要试剂：PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、引物合成、限制性内切酶、质粒提取试剂盒等。
3. 主要仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、紫外分光光度计等。
三、实验方法1. 菌株鉴定：采用常规细菌学方法对实验菌株进行鉴定。
2. 耐药性检测：采用K-B纸片扩散法检测实验菌株对第三代头孢菌素类抗生素的耐药性。
3. 耐药基因检测：（1）DNA提取：采用DNA提取试剂盒提取实验菌株的总DNA。
（2）PCR扩增：针对目标耐药基因设计特异性引物，通过PCR扩增耐药基因片段。
（3）产物鉴定：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察特异性条带。
（4）序列分析：将扩增得到的耐药基因片段进行测序，分析序列特征。
4. 耐药基因表达分析：（1）RNA提取：采用RNA提取试剂盒提取实验菌株的总RNA。
（2）RT-PCR：将RNA进行逆转录合成cDNA，再进行PCR扩增耐药基因片段。
（3）产物鉴定：将RT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察特异性条带。
1. 菌株鉴定：实验菌株经鉴定均为肠杆菌科细菌。
2. 耐药性检测：实验菌株对第三代头孢菌素类抗生素均表现出高水平耐药性。
3. 耐药基因检测：（1）测序结果显示，实验菌株携带第三代头孢菌素类抗生素耐药基因，如AmpC酶基因、KPC酶基因、OXA-48型碳青霉烯酶基因等。
（2）耐药基因片段经琼脂糖凝胶电泳鉴定，特异性条带清晰。
4. 耐药基因表达分析：（1）RT-PCR结果显示，实验菌株中耐药基因表达水平较高。
（2）琼脂糖凝胶电泳鉴定，特异性条带清晰。
五、实验结论1. 实验菌株对第三代头孢菌素类抗生素表现出高水平耐药性，其耐药机制可能与携带多种耐药基因有关。
细菌药敏试验及其耐药表型检测
葡萄球菌属 – 青霉素
方法 MIC
纸片扩散法
敏感 0.12 mg/ml
29 mm
中介 -
-
耐药 0.25 mg/ml
28 mm
CLSI M100-S20. Table 2C.
诱导β-内酰胺酶的检测
优点
连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好 影响因素少，稳定性高 操作简单，省时
缺点：昂贵 用途：快生长菌，苛养菌，厌氧菌，酵母菌，
分枝杆菌
评价药物体外抗菌活性的指标
MIC50, MIC90, MIC 均值， MIC 范围，R，I，S MIC50/ MIC90：MIC从小到大排列，位于第50 / 90
药物生理浓集部位有效 (尿-FQ) 加大用药剂量可能有效
缓冲区：防止操作的系统误差造成重 大结果的判定错误
药敏试验的方法学
半定量…纸片扩散法 (抑菌圈直径) MIC法：
稀释法(肉汤、琼脂) 自动化仪法 抗生素连续梯度法 (Etest ) 流式细胞仪
纸片扩散法（Kirby-Bauer法）
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼 脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后 不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周 围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无 菌生长的透明圈即为抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度， 并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。
E test 法
细菌生长 区
E test 塑料 条
256
128
椭圆形
细菌生长
抑制区
8
判读抑菌浓度
微生物药敏实验报告
总结词
该文献探讨了敏感性分析在临床诊断中 的价值，并举例说明了其在不同疾病诊 断中的应用。
VS
详细描述
该文献首先介绍了敏感性分析的基本概念 和原理，然后通过具体案例详细阐述了敏 感性分析在临床诊断中的应用，如感染性 疾病、肿瘤等。同时，该文献还对敏感性 分析的优缺点进行了评价，为临床医生提 供了有益的参考。
文献二：耐药性分析方法与应用
总结词
该文献重点介绍了耐药性分析的方法及其在临床实践中的应用。
详细描述
该文献详细介绍了耐药性分析的方法，包括微生物药敏实验、基因测序等，并探讨了这些方法在临床实践中的应 用。同时，该文献还对耐药性产生的机制进行了深入探讨，为临床医生提供了耐药性分析方面的参考。
文献三：敏感性分析在临床诊断中的价值
THANKS
感谢观看
优势菌种分析
根据药敏实验结果，分析优势菌种，为临床用药提供参考。
04
结论与建议
结论总结
抗生素敏感性
实验结果显示，所测试的微生物对多种抗生 素具有敏感性或耐药性。
耐药性趋势
近年来，某些常见病原菌的耐药性呈上升趋 势，需引起关注。
病菌种类差异
不同病菌对同一种抗生素的敏感性存在差异 。
临床性分析
耐药性
实验结果显示，部分菌株对 某些抗生素产生了耐药性， 如大肠杆菌对青霉素的耐药 率为70%，金黄色葡萄球菌 对红霉素的耐药率为60%。
耐药机制
这些耐药菌株可能通过产生 灭活酶、改变药物作用靶点 或增加外排等方式，对抗生
素产生抵抗力。
耐药趋势
近年来，随着抗生素的广泛 使用，耐药菌株的数量和种 类不断增加，给临床治疗带 来了挑战。
药敏试验结果解读
解读原则
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大肠埃希菌 ATCC 35218 （为监控 β -内酰胺酶 /β -内酰胺抑制剂纸片用）
用纸片扩散法能可靠地测定分离于囊性纤维化病人的铜 绿假单菌的敏感性，但在作为敏感结果报告前，应将孵育 时间延长至24小时。
3.不动杆菌属纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
试验条件
培养基
Mueller-Hinto琼n 脂、CAMHB、Mueller-Hinto琼n 脂
细菌药敏试验及耐药机制 研究进展
安徽省细菌耐药监控中心 安徽医科大学临床检验诊断学教研室 安徽医科大学第一附属医院检验科
徐元宏
பைடு நூலகம்
一、药敏试验种类
1、 纸片扩散法 2、稀释法 稀释法包括宏量肉汤稀释法(macrodilution test)、微 量肉汤稀释法(microdilution test)、琼脂稀释法(agar dilution test)。 3、E-test法
2. 铜绿假单胞菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌株
试验条件
Mueller-Hinton 琼脂、 CAMHB 、 Mueller-Hinton 琼脂
生长法或直接菌落悬液法，相当于
0.5 麦氏标准。
35 ℃± 2 ℃；空气； 16-18 小时
大肠埃希菌 ATCC 25922 ；铜绿假单胞菌 ATCC27853 ；
useful for S. pneumoniae.
二、药敏试验基本条件
1.肠杆菌科－纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
试验条件
培养基
Mueller-Hinton琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton琼脂
接种物
生长法或直接菌落悬液法，相当0于.5 麦氏标准。
孵育
35℃±2℃；空气；16-18小时
四环素类
B 米诺环素 30μ g ≤14 15-18 ≥19 ≥16 ≤4
叶酸代谢途径抑制剂
A
甲氧苄啶 1.25/23.7 /磺胺甲 5μ g
≤10
11-15
≥16
噁唑
≥ 8/152
≤ 2/38
注释
（ 2）洋葱伯克霍尔德菌液体稀释法、琼脂稀释法解释标准
试验/
报告
抗微生物药
分组
β 内酰胺类 /β 内酰胺类抑制剂
B
替卡西林 /克拉维酸
MIC 值（ μ g/ml ）
S
I
R
≤ 16/2 32/2-64/ ≥ 128/2
2
头孢类（注射药物）（包括头孢菌素Ⅰ
,Ⅱ ,Ⅲ和Ⅳ代）
B
头孢他啶
≤8
18
≥ 32
碳青霉烯类
B
美洛培南
≤4
8
≥ 16
四环素类
B
米诺环素
≤4
8
≥ 16
氟喹诺酮类
B
左氧沙星
≤2
4
≥8
phenicols
B
细菌药敏试验-宏量稀释法
?Minimal inhibitory concentration (MIC) ?Reference method. Add standard inoculum to dilutions of antibiotic. Incubate overnight. MIC is lowest concentration that inhibits growth (can also be performed by agar dilution). Interpretation (S or R) is based on achievable drug levels
试验条件
培养基
Mueller-Hinto琼n脂、CAMHB、Mueller-Hinto琼n脂
接种物
生长法或直接菌落悬液法，相0.当5麦于氏标准。
孵育
35℃±2℃；空气；20-24小时
推荐的质控菌株大肠埃希菌ATCC 2592；2铜绿假单胞A菌TCC2785；3
大肠埃希菌ATCC 3521（8为监控β -内酰胺酶/β -内酰胺抑制剂纸片用）
接种物
生长法或直接菌落悬液法，相0当.5麦于氏标准。
孵育
35℃±2℃；空气；20-24小时
推荐的质控菌株大肠埃希菌ATCC 2592；2 铜绿假单胞A菌TCC2785；3
大肠埃希菌ATCC 3521（8为监控β -内酰胺酶/β -内酰胺抑制剂纸片用）
4.洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
（2）所有确认产ESBLs的菌株应当报告为耐所有青霉素类， 头孢菌素类和氨曲南。
（3）出于对流行性，治疗及感染控制方面的考虑，应该把 从尿中分离的所有菌株做ESBLs 筛选试验作为一个基本制度。
（4）仅当被认为与临床有关时（如菌血症）才进行奇异变 形杆菌ESBLs筛选试验
（5）肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷菌属可发展为耐药。 最初分离的敏感菌株在开始治疗3~4天内可变为耐药，因此 对重复分离菌株应重新进行药敏试验。 。
氯霉素
叶酸代谢途径抑制剂
A
甲氧苄啶 /磺胺甲噁唑
≤8
16
≤ 2/38
-
≥ 32 ≥ 4/76
注释
5.嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
104 cfu
mg/ml 4
2
1
0.5 0.25 0.12
0
微量液体稀释法
细菌药敏试验- E-test法
?E-test ?Strips containing a gradient of antibiotic are placed on lawn of bacteria and incubated overnight. MIC is determined at point where zone of inhibition intersects scale on strip. ?Combines ease of KB with an MIC method. Particularly
（1）洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法解释标准
试验/ 报告
抗微生物药纸片含药量抑菌环直径（mm）
分组
RIS
相对应MIC值 （μ g/ml）
R
S
头孢类（注射药物）（包括头孢菌,素ⅡⅠ,Ⅲ和Ⅳ代）
B 头孢他啶 30μ g ≤17 18-20 ≥21 ≥32 ≤8
碳青霉烯类
B 美洛培南 10μ g ≤15 16-19 ≥20 ≥16 ≤4
推荐的质控菌 大肠埃希菌ATCC 2592；2
株
大肠埃希菌ATCC 3521（8 为监控β -内酰胺酶/β -内酰胺抑制剂纸片用）
（1）对于从粪便中分离的沙门菌和志贺菌属，常规仅测试 和报告氨苄西林，一种喹酮类药和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑。此 外对于胃肠外分离的沙门菌属还一定要测试并报告氯霉素及 其某一种Ⅲ代头孢菌素的结果。