细菌药敏试验及耐药机制的研究

2. 铜绿假单胞菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌株
试验条件
Mueller-Hinton 琼脂、 CAMHB 、 Mueller-Hinton 琼脂
生长法或直接菌落悬液法，相当于
0.5 麦氏标准。
35 ℃± 2 ℃；空气； 16-18 小时
大肠埃希菌 ATCC 25922 ；铜绿假单胞菌 ATCC27853 ；
细菌药敏试验-宏量稀释法
?Minimal inhibitory concentration (MIC) ?Reference method. Add standard inoculum to dilutions of antibiotic. Incubate overnight. MIC is lowest concentration that inhibits growth (can also be performed by agar dilution). Interpretation (S or R) is based on achievable drug levels
细菌药敏试验及耐药机制 研究进展
安徽省细菌耐药监控中心 安徽医科大学临床检验诊断学教研室 安徽医科大学第一附属医院检验科
徐元宏
一、药敏试验种类
1、 纸片扩散法 2、稀释法 稀释法包括宏量肉汤稀释法(macrodilution test)、微 量肉汤稀释法(microdilution test)、琼脂稀释法(agar dilution test)。 3、E-test法
大肠埃希菌 ATCC 35218 （为监控 β -内酰胺酶 /β -内酰胺抑制剂纸片用）
用纸片扩散法能可靠地测定分离于囊性纤维化病人的铜 绿假单菌的敏感性，但在作为敏感结果报告前，应将孵育 时间延长至24小时。
3.不动杆菌属纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
试验条件
培养基
Mueller-Hinto琼n 脂、CAMHB、Mueller-Hinto琼n 脂
接种物
生长法或直接菌落悬液法，相0当.5麦于氏标准。
孵育
35℃±2℃；空气；20-24小时
推荐的质控菌株大肠埃希菌ATCC 2592；2 铜绿假单胞A菌TCC2785；3
大肠埃希菌ATCC 3521（8为监控β -内酰胺酶/β -内酰胺抑制剂纸片用）
4.洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
（2）所有确认产ESBLs的菌株应当报告为耐所有青霉素类， 头孢菌素类和氨曲南。
（3）出于对流行性，治疗及感染控制方面的考虑，应该把 从尿中分离的所有菌株做ESBLs 筛选试验作为一个基本制度。
（4）仅当被认为与临床有关时（如菌血症）才进行奇异变 形杆菌ESBLs筛选试验
（5）肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷菌属可发展为耐药。 最初分离的敏感菌株在开始治疗3~4天内可变为耐药，因此 对重复分离菌株应重新进行药敏试验。 。
推荐的质控菌 大肠埃希菌ATCC 2592；2
株
大肠埃希菌ATCC 3521（8 为监控β -内酰胺酶/β -内酰胺抑制剂纸片用）
（1）对于从粪便中分离的沙门菌和志贺菌属，常规仅测试 和报告氨苄西林，一种喹酮类药和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑。此 外对于胃肠外分离的沙门菌属还一定要测试并报告氯霉素及 其某一种Ⅲ代头孢菌素的结果。
B
替卡西林 /克拉维酸
MIC 值（ μ g/ml ）
S
I
R
≤ 16/2 32/2-64/ ≥ 128/2
2
头孢类（注射药物）（包括头孢菌素Ⅰ
,Ⅱ ,Ⅲ和Ⅳ代）
B
头孢他啶
≤8
18
≥ 32
碳青霉烯类
B
美洛培南
≤4
8
≥ 16
四环素类
B
米诺环素
≤4
8
≥ 16
氟喹诺酮类
B
左氧沙星
≤2
4
≥8
phenicols
B
（1）洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法解释标准
试验/ 报告
抗微生物药纸片含药量抑菌环直径（mm）
分组
RIS
相对应MIC值 （μ g/ml）
R
S
头孢类（注射药物）（包括头孢菌,素ⅡⅠ,Ⅲ和Ⅳ代）
B 头孢他啶 30μ g ≤17 18-20 ≥21 ≥32 ≤8
碳青霉烯类
B 美洛培南 10μ g ≤15 16-19 ≥20 ≥16 ≤4
氯霉素
叶酸代谢途径抑制剂
A
甲氧苄啶 /磺胺甲噁唑
≤8
16
≤ 2/38
-
≥ 32 ≥ 4/76
注释Hale Waihona Puke Baidu
5.嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
试验条件
培养基
Mueller-Hinto琼n脂、CAMHB、Mueller-Hinto琼n脂
接种物
生长法或直接菌落悬液法，相0.当5麦于氏标准。
孵育
35℃±2℃；空气；20-24小时
推荐的质控菌株大肠埃希菌ATCC 2592；2铜绿假单胞A菌TCC2785；3
大肠埃希菌ATCC 3521（8为监控β -内酰胺酶/β -内酰胺抑制剂纸片用）
四环素类
B 米诺环素 30μ g ≤14 15-18 ≥19 ≥16 ≤4
叶酸代谢途径抑制剂
A
甲氧苄啶 1.25/23.7 /磺胺甲 5μ g
≤10
11-15
≥16
噁唑
≥ 8/152
≤ 2/38
注释
（ 2）洋葱伯克霍尔德菌液体稀释法、琼脂稀释法解释标准
试验/
报告
抗微生物药
分组
β 内酰胺类 /β 内酰胺类抑制剂
104 cfu
mg/ml 4
2
1
0.5 0.25 0.12
0
微量液体稀释法
细菌药敏试验- E-test法
?E-test ?Strips containing a gradient of antibiotic are placed on lawn of bacteria and incubated overnight. MIC is determined at point where zone of inhibition intersects scale on strip. ?Combines ease of KB with an MIC method. Particularly
useful for S. pneumoniae.
二、药敏试验基本条件
1.肠杆菌科－纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
试验条件
培养基
Mueller-Hinton琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton琼脂
接种物
生长法或直接菌落悬液法，相当0于.5 麦氏标准。
孵育
35℃±2℃；空气；16-18小时