凝血酶原(PT)SOP文件

ZYYY/LJXM--B10--2015 SOP文件

附录 B

B10：血浆凝血酶原时间（PT）测定

第一页页首内容：

血浆凝血酶原时间（PT）测定（凝固法)

科左中旗中医医院检验科

操作规程文件号：ZYYY/LJXM--B10--2015

第 4 版

共 6 页

2015年9月13日起实施。

〔该SOP变动程序〕

本操作程序的改变可由使用SOP文件工作人员提出，并报告专业负责人，科主任批准签字。

本规程每2年复审一次

复审日期: 年月日

复审人：

规程编写者：李凤兰

审批者：李凤兰

批准日期：2015年9月13日

医务科保管者：包金泉

检验科保管者：李凤兰

临检实验室保管者：于庆芝

B10.1:测定原理:待测血浆加入过量的钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子X成为Xa，后者是凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆凝血酶原时间。

B10.2:标本采集与处理：

B10.2.1:受检者准备：空腹静脉取血

B10.2.2：受检者体位：坐位、静脉取血、使用止血带时间不超过1分钟。

B10.2.3:标本种类:采用血浆检测，用枸橼酸钠抗凝。

B10.2.4:使用器材：取血器材包括注射器、针头与试管，必须干燥、清洁，要使用一次性塑料注射器与塑料试管，使用真空采血管后应及时去除真空。

B10.2.5:离心条件与测定时间：必须以3000rpm的离心速度离心15分钟，血浆分离后应在2小时内完成测定。

B10.2.6：抗凝剂：必须用109mmol/L(32g/L)枸橼酸钠抗凝，抗凝液应防止霉变。

B10.2.7：抗凝比例：枸橼酸钠抗凝液1份+全血9份收集标本，及时轻轻颠倒摇匀，红细胞比积大于0.50或小于0.20时,请改变抗凝剂比例: 抗凝剂用量= 0.00185×血量(ml)×(100-病人红细胞压积)

B10.2.8:拒收标本的标准:不明身份的标本;不按要求试管收集的标本;量不足的标本;运输不当标本.

B10.3：试剂：本科所用试剂由上海太阳生物技术有限公司提供全自动血凝仪仪器配套产品，

许可证号: 沪食药监械生产许20120575号；

产品注册号：沪食药监械（准）字2013第2400797号；

产品执行标准：YZB/沪0556-40-2013。

B10.3.1：试剂盒组成：。

B10.3.1.1：包装规格：干粉剂型1

R1 1.0ml ×10 R2 20ml×1

B10.3.1.2：主要组成成分：

R1：检测试剂1

PT试剂：10瓶（含组织因子、缓冲液、0.5%BSA、防腐剂）

R2：检测试剂2

PT缓冲液：1瓶（含缓冲液、稳定剂、防腐剂）

试剂ISI值: 见瓶签标示，不同批号试剂组分不能互换。

B10.3.2：试剂的有效期及稳定性：

原装试剂2-8℃密闭保存可稳定至有效期。

试剂复溶后密闭2℃-8℃密闭保存,稳定7天;室温20℃-25℃稳定24小时；

37℃稳定1小时。试剂保存应防止冷冻。

B10.3.3：抗凝剂：0.109 mol/L(32g/L)枸橼酸钠溶液：

取含二分子结晶水的枸橼酸钠（分子量294.12)3.2g,用蒸馏水溶解,稀释至100ml。

B10.3.4：：抗凝剂的稳定性：此试剂在室温保存不得超过2周。

B10.4:仪器：CA-510全自动凝血因子分析仪，由日本东亚公司提供。

B10.5：操作步骤：

B10.5.1:样品及试剂的准备：

B10.5.1.1:制备待测血浆样品：

静脉采血，0.109 mol/L(32g/L)枸橼酸钠与全血按1：9的比例混合均匀。以2 700×g（离心半径为18cm时约3500转/分）离心10分钟分离血浆，2小时内完成检测；如不能及时检测，密闭置2℃-8℃保存，最长不超过4小时；或-20℃以下保存，最长不超过30天，检测时37℃快速融化。转移血浆时必须用塑料移液管取出。

B10.5.1.2:PT试剂：

在每瓶R1加入瓶签标示量的R2,充分溶解，颠倒混匀，即为PT应用试剂。

B10.5.2：测定：CA-510全自动凝血因子分析仪，输入患者标本序号和输入测试项目，将患者标本按批次号-管位号放入对应位置内，

进行测试。操作步骤如下：

B10.5.2.1：取PT应用试剂预温3分钟，至37℃。

B10.5.2.2：取待检血浆50ul，37℃预温3分钟。

B10.5.2.3：加入100ul已预温PT应用试剂，混匀，立即计时，记录凝固时间，即为凝血酶原时间（PT）

B10.6：计算：

CA-510全自动凝血因子分析仪，自动分析计算并打印结果。

B10.7：结果报告：

B10.7.1：时间（秒）：直接报告测定时间（秒）。

B10.7.2：凝血酶原时间比值（PTR）：

被检血浆凝血酶原时间均值

PTR =----------------------------------------------------------------

正常对照血浆凝血酶原时间均值【MNPT】B10.7.3：国际标准化比值（INR）:

INR=PTR ISI

ISI为国际敏感指数，是厂家生产的试剂和国际参考品（INP）之间的校正

指数。

B10.8：质控品：由通辽临检中心提供.每日一次质控品,并严格按质控规则对超过允许线的值,查找原因重新测定,直至在控为止,并记录其详细过程.

B10.8.1：质控血浆的试剂组成：

质控血浆（微黄色冻干粉) 10×1.0ml

B10.8.2：质控品的使用：

B10.8.2.1：每瓶加入1.0ml蒸馏水或去离子水，轻轻混匀，在室温下静置15分钟以保证完全溶解。

B10.8.2.2：根据不同检测实验，其余步骤同待测样品。

B10.8.2.3：该试剂仅用于体外诊断,避免摄入。操作时应按照病人血浆对待,谨慎小心。

B10.8.2.4：此血浆系来源于人的物质，已经过HTLV- Ⅲ/HIV抗体，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和HCV检验为阴性，但没有哪一种方法可以得到百分之百的保证，故仍应将其视为生物危险物品，象人的血液标本一样，都应严格按照实验室操作规程办事，尽量减少对人的危险性。

B10.8.2.5：保存条件：原装质控品试剂2-6℃保存,稳定至有效期。溶解后4小时内稳定，加盖保存。

B10.9: 参考范围：

B10.9.1: PT正常人群参考范围(s)：10.0-14.0s；

待测者的测定值较正常对照值延长超过3秒以上才有临床意义。

B10.9.2: 凝血酶原时间比值（PTR）：0.95-1.24

(PTR =受检者PT/正常对照PT）；

B10.9.3：国际标准化比值（INR）：0.80-1.24（正常参考范围因ISI而异）。

在对于某些特殊人群(例如:新生儿、婴幼儿），及使用其它全自动或半自动仪器时，应重新建立正常参考范围，正常参考范围应建立在该组群正常人实验室测试值的±2SD或±3SD范围内。

B10.10：操作性能：

B10.10.1：精密度：批内C V≤5%、批间相对极差≤10%

B10.10.2：不确定度≤15%。

B10.10.3：注意事项：

B10.10.3.1:采血应避免溶血，防止组织液混入。抽血时要顺利，抗凝要充分，不可有凝块；分离血浆时务必去除血小板。

B10.10.3.2: 样品血浆不可使用EDTA和肝素抗凝，应使用109mmol/L枸橼酸钠抗凝。血液和抗凝剂+的比例应准确，采血量偏差大于10%的标本不宜使用。

B10.10.3.3：如果血球压积＜20%或＞55%，需按下列公式调整血样与抗凝