大肠菌群 PPT课件

合集下载

水质粪大肠菌群的测定(共28张PPT)

水质粪大肠菌群的测定(共28张PPT)

7 适用范围
• 本标准适用于地表水,地下水及 废水中粪大肠菌群的测定。
8 原理
• 多管发酵法是以最可能数〔most probable number〕,简称MPN 来表示试验结果的。实际上 它是根据统计学理论,估计水体中的大肠杆菌密度 和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑,并且 进行大量的重复检定,可以发现这种估计有大于实 际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目 增加,这种差异便会减少,对于细菌含量的估计值 ,大局部取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释 度。因此在实验设计上,水样检验所要求重复的数 目,要根据所要求数据的准确度而定。
11
三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液: 按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。
除蒸馏水外,各组分用量增加至三倍。〔 即按上述配方比例三倍〔除蒸馏水外〕, 配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液〕
12
EC培养液: 成分: 胰胨 20克, 乳糖 5克, 胆盐三号
1.5克,磷酸氢二钾〔K2HPO4〕4克,磷酸 二氢钾〔KH2PO4〕1.5克,氯化钠5克,蒸 馏水1000毫升。 制法:将上述成分加热溶解,然后分装于含 有 玻璃倒管的试管中。置高压蒸气灭菌器 中,115℃高压灭菌器中灭菌20min,灭菌 后pH应为6.9。
28 填空题
1. 细菌采样玻璃瓶洗涤枯燥后,要在 0C干热灭菌 或高压蒸汽 0C灭菌 min。
2. 对受污染严重的水体,可选择 定其总大肠菌群数。
方法测
3. 总大肠菌群测定过程的复发酵试验中,接 种完菌落后,应将发酵管置于 0C温度 下培养 h。
4. 复发酵试验使用
培养基。
29
• 计算题:
• 某水样接种10mL 的5 管中有4管为 阳性;接种1mL 的5 管中有3 管为 阳性;接种1:10 的水样1mL 的5 管中有1管为阳性。求1L 水样中的 总大肠菌群数为多少?

霉菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌课件

霉菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌课件

金黄色葡萄球菌在B-P上的菌落特征
※检样中常见的问题:
1、 平板的状态:透明、有絮状物。 2、 凝固酶实验的观察。
※原因: 1、不同的厂家的培养基平板制好后的状态 有所不同,主要取决于亚碲酸钾卵黄增菌 液的不同。我们公司采用的鸡蛋是山鸡蛋, 卵磷脂含量较高,因此制备好的平板一般 透明度较好,接种金黄色葡萄球菌后,菌 落特征较易观察。 2、在添加亚碲酸钾卵黄增菌液时,温度的 掌握,不宜太高,过高易使卵黄变性,也 不应太低,太低琼脂易凝固。
※检样中常见的问题:
1、 不同稀释度计数结果相同。 2、 不生长或生长很好连成片无法计数。
※原因:
(1)稀释时未经反复振摇,吹吸,导致 孢子未充分散开,影响了计数的结果。 ( 2 )由于培养基不适宜, PH 值低等, 致使生长较慢。 (3)观察时间的掌握。真菌生长较慢, 故需 3d 后才能观察出结果。每天都要 观察结果。
少数种类,如黄曲霉,能产生黄曲 霉毒素,黄曲霉毒素是一种致癌物质, 危害人、畜的健康和生命。因此,霉菌 的检测对于食品的安全性很重要。
食品中常见的霉菌:毛霉属、根霉 属、曲霉属、青霉属等
霉菌在孟加拉红琼脂上的菌落特征
酵母菌在孟加拉红琼脂上的菌落特征
※检测中的注意事项:
1、 取样的代表性。 2 、取样工具的无菌。空气中霉菌的孢 子含量很高,所以,取样的工具、容器 等要经过严格的高压灭菌。 3、 检样的操作。 (1)由于霉菌易被携带,所以,检 样时操作人员应尽量避免自身携带的可 能。
※原因: 1、在分装LST、BGLB、EC时,小倒管中 有水柱;此外,高压灭菌时,需急排气, 灭菌后迅速冷却。 2、观察气泡时,要对光倾斜试管,使小倒 管紧贴在试管壁上,便于观察。 3 、熟悉大肠杆、大肠菌群在上述平板上 的特征,必要可做一些阳性的对照。有些食 物残渣会影响观察结果,这样需要我们在 培养前仔细观察平板的状态,大的食物残 渣可以做一些标记。

大肠杆菌群PPT课件

大肠杆菌群PPT课件
• 大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近,它的出现预 示着某些肠道病原菌的存在,因此该菌是国际上公认的卫生监测指 示菌。近年来,有些国家在执行HACCP管理中,将大肠杆菌检测 作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。
大肠杆菌的生物学特性
基本形态:
此菌为两端钝圆的短小杆菌,一般约 0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm,多单独存在或 成双,但不呈长链排列。约50%的菌株 有周生鞭毛,但多数只有1-4根,一般 不超过10根,故菌体动力弱。多数菌株 有菌毛,有的有荚膜或微荚膜,不形成 芽孢,对普通碱性染料着色好,革兰 氏染色阴性。
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法。 1884年由丹麦医师Gram创立。此法可将细菌分为革兰氏阴性菌 和革兰氏阳性菌两大类。
革兰氏染色的机理主要是利用两类细菌的细胞壁成分和结构 的不同。革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多的类脂质,而肽聚糖 的含量较少。当用酒精或丙酮酸脱色时,类脂质被溶解,增加了 细胞壁的通透性,使初染后的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结 果细胞被脱色,经复染后,又染上复染液的颜色。而革兰氏阳性 菌细胞壁中肽聚糖的含量多而且交联度大,类脂质含量少,经乙 醇或丙酮洗脱后,肽聚糖层的孔径变小,通透性降低,因此细胞 仍保留初染时的颜色。
大肠菌群及大肠杆菌测定 ——MPN法检验流程(FDA BAM)
检样50g+450ml稀释液
适当十倍稀释样品
选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液, 每个稀释度接种三管LST肉汤(每管9mlLST肉汤并加有导管),
每管接种1mL 35℃ ,24 ± 2h ~48 ± 2h
没有产气管
有产气管
报告阴性
接种BGLB肉汤管
大肠菌群的定义

《大肠菌群测定》PPT课件

《大肠菌群测定》PPT课件
GB4789.3-2010 大肠菌群测定
GB4789.3-2010 大肠菌群测 定
• 定义:大肠菌群:一群在36℃培养48h可发酵 乳糖、产酸产气的需氧和 兼性厌氧革兰氏染色阴性 无芽孢杆菌。该菌主要来 源自人畜粪便,作为粪便 污染指标评价食品的卫生 状况,推断 食品中肠道致 病菌污染的可能。
2
大肠菌群的食品卫生学意义
标准MPN表有64个组合,而现标准MPN表只有40个 组合。 3 报告单位不同。现报告单位为g/ml,而原报告单 位是100g/ml。
10
关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
新国标的MPN表的基准问题。
1、新国标的MPN表采用了3个稀释度,分别是十 倍-百倍-千倍,加样量是3管,每管1毫升,意 味着加入样品的量为0.333克。
大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语, 它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的 一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方 面并非完全一致。一般认为可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸
杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠杆菌是人和温血动物肠道 内普遍存在的细菌,是粪便中 的主要菌种产。气一克般雷生白活氏在菌人大 肠中并不致病,但它侵入人体 一些部位时,可引起感染 。
4
第一法 大肠菌群MPN计数法
• 初发酵:月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤(LST)替代 了乳糖胆盐发酵培基
• 确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤 (BGLB)替代了乳糖复发酵培 养基,取消了革兰氏染色实验
• 培养时间:由24h延长至48h • 单位:由MPN/100g变为
MPN/g
5
第一法 大肠菌群MPN计数法
12
关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
改变加样量的问题。 这样查表得到的数值,应该降低10倍。

微生物大肠菌群检测ppt

微生物大肠菌群检测ppt
平板分离:将产酸产气及只产酸的发酵管,接种于伊红美蓝 (紫黑色有金属光泽)或远滕氏(淡粉红色)、麦康凯 (玫瑰红色)琼脂平板上,35-37度培养24小时。
证实试验:将革兰氏染色阴性无芽孢杆菌菌落接种于单料乳 糖发酵管中, 35-37度培养24小时,产酸产气,即证实 有大肠菌群存在。
水源水 严重污染水:1,0.1,0.01,0.001mL 中度污染水:10,1,0.1,0.01mL 轻度污染水:100,10,1,0.1mL 大肠菌群变异不大的水源水:10mL10份 接种量1mL及1mL以内用单料乳糖胆盐 发酵管,接种量在1mL以上者,应保证接 种后发酵管中的总液体为单料培养液。
3.注意事项
乳糖发酵试验—分离培养—证实试验三步中,初发酵与证 实试验可能相差较大。
抑菌剂如胆盐等对大肠菌群中的某些菌株会有抑制作用。 猪、牛、羊的胆盐效果较好,去氧胆酸钠对结果影响较大, 胆盐剂量以0.5%较适宜。
挑选菌落时,EMB平板上,紫色菌落检出率较高,红色、 粉色较低;无典型菌落时,宜多挑选。
第二节 测定方法
1、测定程序
检样 稀释 乳糖胆盐发酵管
胆盐、或去氧胆酸钠
不产气 阴性 报告
革兰氏染色
产气 EMB、远腾氏等
乳糖发酵管
革兰氏阳性 革兰氏阴性无芽孢
阴性 报告
阳性 报告
产气
不产气 阴性 报告
2.多管发酵法测定方法
发酵试验:在2个装有50mL的3倍浓缩(三料)乳糖胆盐蛋 白胨培养液(含溴钾酚紫指示剂)的大试管或烧瓶中,无 菌操作加水样100mL.在10支装有5mL的三料乳糖胆盐发 酵管中(内有倒置小管),以无菌操作各加水样10mL,摇 匀后,37度培养24小时。
其它粪便污染指示菌 分支杆菌、拟杆菌、乳酸菌、梭状芽孢杆菌、粪链球菌 克雷伯菌、变形杆菌、副大肠杆菌

实验九水中总大肠菌群的测定ppt课件

实验九水中总大肠菌群的测定ppt课件

采用PP管及配件:根据给水设计图配 置好PP管及配 件,用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ,边剪 边旋转 ,以保 证切口 面的圆 度,保 持熔接 部位干 净无污 物
◆包扎
1.培养皿:以旧报纸密密包紧,一般以6套做一包,待灭菌。 2.吸管:在距其粗头顶端约0.5cm处,塞一小段1.5cm长的棉花。棉 花要塞得松紧恰当(过紧,吹吸液体太费劲;过松,吹气时棉花会 下滑),然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端,与 报纸约呈60º角,并将右端多余的报纸打一小结。 3.三角玻扒:跟包扎吸管相似,将三角部分斜放在报纸条的近左端, 与报纸约呈45º角,并将右端多余的报纸打一小结。 4. 玻璃器皿、金属器械包扎完毕后置干燥箱160-170℃灭菌2 h.
采用PP管及配件:根据给水设计图配 置好PP管及配 件,用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ,边剪 边旋转 ,以保 证切口 面的圆 度,保 持熔接 部位干 净无污 物
◆灭菌
1.灭菌器内加入一定量的水,将用防水纸包扎好的物品放入其中。
2.接通电源,进行加热。
3. 排
除高压锅内的冷空气,可将排气阀打开,待排出大气后关闭排气阀;或关闭
平板划线分离操作法示意图
采用PP管及配件:根据给水设计图配 置好PP管及配 件,用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ,边剪 边旋转 ,以保 证切口 面的圆 度,保 持熔接 部位干 净无污 物
5 复发酵试验 上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌,则挑选该菌落的另
一部分接种于装有普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中(内有倒置管),每 管可接种分离自同一初发酵管的最典型菌落1~3个,然后置于37℃恒温箱中 培养24h,有产酸、产气者,即证实有大肠菌群存在。根据证实有大肠菌群 存在的阳性管(瓶)数查附表1“大肠菌群检数表”,报告每升水样中的大肠 菌群数。

食品中大肠菌群的测定(共59张PPT)可编辑全文

食品中大肠菌群的测定(共59张PPT)可编辑全文

应增加或减少。
➢酱油〔GB/T2717-2003〕
➢细菌菌落总数: ≤30000cfu/ml
➢大肠菌群:
≤30MPN/100ml
➢肠道致病菌: 不得检出
➢全脂奶粉、脱脂奶粉〔GB5410-1999〕
➢ 二级
特级
一级
➢细菌菌落总数:≤20000 ≤30000 ≤50000
➢〔cfu/ml〕
➢大肠菌群 ≤90
2、 初发酵试验
➢ 每个样品,选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液 〔液体样品可以选择原液〕,每个稀释度接种3 管月 桂基硫酸盐胰蛋白胨〔LST〕肉汤,每管接种1mL〔如 接种量超过1mL,那么用双料LST肉汤〕, 36℃±1℃ 培养24h±2h ,观察倒管内是否有气泡产生,如未产 气那么继续培养至48h±2h 。
➢ 〔2〕 液体样品
➢ 以无菌吸管吸取25mL样品,置盛有225mL磷酸盐缓冲液 或生理盐水的无菌锥形瓶〔瓶内预置适当数量的无菌 玻璃珠〕中,充分棍匀,制成1:10 的样品匀液。
➢ 〔3〕 样品匀液的pH 值应在6.5-7.5 之间,必要 时分别用1mol/L 氢氧化钠〔NaOH 〕或1 mol/L 盐 酸〔HCI 〕调节。
➢ 2 、别离培养 将产气的发酵管分别在伊红美兰琼脂
〔EMB琼脂〕平板上划线别离。然后置 36±1℃温箱内,培养18~24小时后取出, 观察菌落形态,并作革兰氏染色和证实 试验。
➢可疑菌落特点: ➢具有金属光泽的深紫黑色菌落; ➢不带或略带金属光泽的菌落; ➢中心色较深的淡紫黑色菌落。
➢3 、证实试验 在上述平板上挑取可疑大肠菌落1~2

3、接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆
盐发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳糖胆

肠道菌群PPT课件

肠道菌群PPT课件

MPN法检测的隐性成本
产品的大肠菌群标准为30 MPN/100 g,而某个样品的 检测结果为90 MPN/100 g,那么你可能会认为你的产 品不合格。但是,让我们看一下90 MPN/100 g的置信 区间,为10 ~ 360 cfu/100g,也就是说有部分结果为90 MPN/100 g的产品,且实际菌落数在10~30 cfu/100g之 间,会被当作不合格产品处理。
用1理盐水或其它稀释液的试管内,振摇试管混 匀.作1:10的稀释液。
另取1m1灭菌吸管,按上项操作依次作10倍递增稀释 液,每递增稀释一次,换用 1支1m1灭菌吸管:
其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其 他微生物类群的干扰,并通过该生理功能的表现来判断该类 群微生物的存在和丰度。
本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群(如氨化、 硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。)的数量 和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群(如大肠菌 群)的数量,缺点是只适于进行特殊生理类群的测定,结果 也较粗放。
食品中大肠菌群数系以mL(g)检样内大肠菌群 最可能数(MPN)表示。
第一法
大肠菌群计 数MPN法
抑菌剂的选择
大肠菌群检验中常用的抑菌剂有胆盐、十二烷基硫 酸钠、洗衣粉、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。
抑菌剂的主要作用是抑制其它杂菌,特别是革兰氏 阳性菌的生长。国家标准中LST肉汤利用十二烷基硫 酸钠作为抑菌剂,BGLB肉汤利用煌绿和胆盐作为抑 菌剂。
2.培养特性:需氧或兼性厌氧菌,在普通培养基和 麦康凯培养基上生长良好,为中等大小的光滑型菌 落。有些菌在血琼平板上出现β型溶血,在液体培 养中呈均匀混浊生长。
3.生化反应:发酵葡萄糖,氧化酶阴性。生化反应 活泼,一般说来,生化反应的强弱与其致病作用成 反比。

大肠杆菌ppt课件

大肠杆菌ppt课件

(三)肠致病性大肠杆菌 (Enteropathogenic E.coli,EPEC)
婴幼儿腹泻 致病机制 黏附到小肠上皮细胞,破坏刷状缘,导致邻近微绒 毛破坏,A/E组织病理损伤,引起严重水样腹泻。
Brett Finlay, University of British Columbia
24
(四)肠出血性大肠杆菌
33343536肠杆菌科中与医学有关的常见菌属和菌种埃希菌属大肠杆菌志贺菌属痢疾志贺菌爱德华菌属迟钝爱德华菌沙门菌属伤寒沙门菌枸橼酸菌属佛劳第枸橼酸菌克雷伯菌属肺炎克氏菌肠杆菌属产气肠杆菌哈夫尼亚菌属蜂窝哈夫尼亚菌沙雷菌属粘质沙雷菌变形杆菌属普通变形杆菌摩根菌属摩氏摩根菌属普罗威登斯菌属雷氏普罗威登斯菌耶尔森菌属鼠疫耶尔菌欧文菌属草原居民欧文菌菌属菌种数代表种37
10
(二)培养特性
兼性厌氧2~3mm、灰白色S型菌落。 有的有β型溶血。能产生大肠菌素。
(三)生化反应
葡乳麦甘蔗 尿素酶 H2S IMViC 动力 ⊕⊕⊕⊕⊕ - - + + - - +
11
(四)抗原构造
有O、K、H三种抗原。 O抗原:为脂多糖,170多种,是分群的基础 K抗原:100多种,有抗吞噬和补体杀菌作用 ,与细菌毒力有关。分为L、A、B三种。一个菌 株一般只含一个型别的K抗原。 H抗原:50多种,与运动有关。 表明大肠杆菌血清型方式是按O∶K∶H排列
光滑型菌落,有的有β型溶血,在液体 培养中呈均匀混浊生长。
2
3.活泼的生化反应
肠道致病菌与非致病菌 鉴定中重要的生化反应
S-S平板
乳糖发酵试验
肠道非致病菌 (埃希菌+)
志贺菌、 沙门菌等-
3
4.抗原构造复杂
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
相关文档
最新文档