高效液相色谱仪及固定相、流动相PPT
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高效液相色谱分析法.ppt
3.固定相及分离柱
气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其 选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱 的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。
二、分离类型选择
choice of separation types
三、 HPLC的应用
application of HPLC
影响分离的因素与操作条件的选择 一、影响分离的因素
factors influenced separation
1.
•
影响分离的因素与提高柱效的途径
在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一， H=A+Cu 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。
则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即：
3. 流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂， 若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使 保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环> 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳> 环己烷>己烷>煤油(最小)
电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。
五、 离子对色谱(Ion pair chromatography)
原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（ 对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏 水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配； 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢 氧化十六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对 离子； 反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有 对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子X-进入 流动相后，生成疏水性离子对Y+ X -后；在两相间分配。
高效液相色谱流动相的选择课件
，在选择流动相时，需要综合考虑各种因素，以达到最佳的分离效果。
THANKS
感谢观看
20世纪80年代
HPLC技术进一步发展，出现了微径 柱和超高效液相色谱（UPLC），提 高了分离效率和灵敏度。
20世纪90年代至今
HPLC技术不断改进和完善，应用领 域不断扩大，成为一种重要的分离分 析手段。
02
流动相的基本知识
流动相的定义和作用
定义
流动相是高效液相色谱法中携带样品 通过色谱柱的液体，也称为载液。
案例三：分离手性化合物的流动相选择
总结词
手性化合物在高效液相色谱中的分离通常需要使用手性固定相，而流动相的选择对于分 离效果具有重要影响。
详细描述
手性流动相通常用于调节手性固定相的选择性。常见的流动相包括天然手性化合物、合 成手性化合物和手性离子液体等。这些流动相的选择应根据目标手性化合物的性质和分 离要求进行优化。此外，流动相的浓度、pH值和温度等因素也会影响分离效果。因此
准备流动相
根据实验需求，准备适量 的流动相，确保其纯度和 质量符合实验要求。
实验操作技巧
调整流动相比例
优化实验条件
通过调整流动相的比例，可以改变样 品的溶解度和分配系数，从而优化分 离效果。
在实验过程中，需要不断优化实验条 件，如温度、检测波长等，以提高分 离效果和准确度。
控制流动相流速
合适的流动相流速有助于提高分离效 果和缩短分析时间，需要根据实验需 求进行适当调整。
实验后处理
清洗和维护色谱柱
在实验结束后，需要清洗色谱柱 ，去除残留的样品和杂质，以延
长色谱柱的使用寿命。
数据处理和分析
对实验数据进行处理和分析，包括 峰识别、定量和定性分析等，以获 得准确的实验结果。
THANKS
感谢观看
20世纪80年代
HPLC技术进一步发展，出现了微径 柱和超高效液相色谱（UPLC），提 高了分离效率和灵敏度。
20世纪90年代至今
HPLC技术不断改进和完善，应用领 域不断扩大，成为一种重要的分离分 析手段。
02
流动相的基本知识
流动相的定义和作用
定义
流动相是高效液相色谱法中携带样品 通过色谱柱的液体，也称为载液。
案例三：分离手性化合物的流动相选择
总结词
手性化合物在高效液相色谱中的分离通常需要使用手性固定相，而流动相的选择对于分 离效果具有重要影响。
详细描述
手性流动相通常用于调节手性固定相的选择性。常见的流动相包括天然手性化合物、合 成手性化合物和手性离子液体等。这些流动相的选择应根据目标手性化合物的性质和分 离要求进行优化。此外，流动相的浓度、pH值和温度等因素也会影响分离效果。因此
准备流动相
根据实验需求，准备适量 的流动相，确保其纯度和 质量符合实验要求。
实验操作技巧
调整流动相比例
优化实验条件
通过调整流动相的比例，可以改变样 品的溶解度和分配系数，从而优化分 离效果。
在实验过程中，需要不断优化实验条 件，如温度、检测波长等，以提高分 离效果和准确度。
控制流动相流速
合适的流动相流速有助于提高分离效 果和缩短分析时间，需要根据实验需 求进行适当调整。
实验后处理
清洗和维护色谱柱
在实验结束后，需要清洗色谱柱 ，去除残留的样品和杂质，以延
长色谱柱的使用寿命。
数据处理和分析
对实验数据进行处理和分析，包括 峰识别、定量和定性分析等，以获 得准确的实验结果。
高效液相色谱仪优秀PPT
DNA电泳与色谱分析，生 物技术药物纯化及鉴定，生 物标志物色谱分析，蛋白质 组学研究等
紫外检测器
技术参数LC3000B
高压恒流泵
紫外检测器
自动进样器AS3100
普析LC-3000型液相色谱仪
流量范围：0.001-9.999ml/min 最高工作压力：42Mpa 流量精度：±0.5% 流量重复性：RSD≤0.1%（1ml/min）
上海普析LC3000紫外
UV3000紫外检测器性能指标： 波长范围：190-700nm 灯源：氘灯（标准配置），钨灯（可替换） 波带宽度：8nm 波长精度：±1.0 nm 波长重复性：0.2nm 基线噪音：1×10-5AU 基线漂移：2×10-4AU 检测池体积：10ul 外形尺寸：398*149*267 （深*高*宽）
耗样品少。
应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效 液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳 定性差化合物的分离分析，显示出优势。
药物分析
中药质量控制，化学药物 质量控制，抗生素质控分析， 生化药质量控制，新型高效 手性药物中手性对映体含量 的测定等
环境污染物分析
大气、水、土壤和食品中的多 环芳烃、多环联苯，阴离子表 面活性剂，有机氯农药、有机 磷农药，除草剂，酚类胺类、 黄曲霉毒素等污染物的分离与 测定
食品质量分析
食品质量分析
高效液相色谱仪适用于高沸点不易挥发的、分子量大、极性不同的有机物的定性和定量分析。
自动进样器AS3100
农药残留，兽药残留；防腐剂、 高标准的关键部件
关键部件世界知名品牌原装进口，泵头采用钛合金材质，更加耐腐蚀高温 ； 应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分 析，显示出优势。
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流量范围：0.001-9.999ml/min 最高工作压力：42Mpa 流量精度：±0.5% 流量重复性：RSD≤0.1%（1ml/min）
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食品质量分析
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《高效液相色谱仪》课件
《高效液相色谱仪》ppt课件
目 录
• 高效液相色谱仪简介 • 高效液相色谱仪的组成和工作原理 • 高效液相色谱仪的操作流程 • 高效液相色谱仪的维护与保养 • 高效液相色谱仪的实验技术与应用实例
01
高效液相色谱仪简介
定义与特点
定义
高效液相色谱仪是一种分离和分 析复杂混合物中各组分的仪器， 基于物质在固定相和流动相之间 的分配差异实现分离。
。
食品工业
用于检测食品中的添加剂、农 药残留和营养成分等。
高效液相色谱仪的发展历程
起源
20世纪50年代初，基于经典液 相柱色谱的原理，开发出了高
效液相色谱法。
发展
20世纪60年代，出现了填充柱 和柱切换技术，提高了分离效 率。
革新
20世纪70年代，出现了高效微 粒固定相和新型检测器，提高 了灵敏度和选择性。
流动相的纯化和过滤
确保流动相的纯度和清洁度，以避免对色谱柱和检测器造成污染。
流动相的脱气
使用真空脱气法或超声波脱气法去除流动相中的气泡，以避免对色 谱分离造成干扰。
色谱柱的安装与选择
安装色谱柱
按照仪器说明书正确安装色谱柱 ，确保密封性和稳定性。
色谱柱的选择
根据样品的性质和分离要求，选择 合适的色谱柱类型和规格。
检测器对流出的组分进行 检测，并将信号记录下来 ，形成色谱图。
高效液相色谱仪的分离原理
分配原理
组分在固定相和流动相之 间的分配平衡是实现物质 分离的基础。
吸附与解吸平衡
组分在固定相上的吸附与 流动相中的溶解度差异导 致分离。
分子间作用力
分子间的相互作用力（如 范德华力、氢键等）影响 组分的吸附与解吸平衡。
物的分子结构和化学键信息。
目 录
• 高效液相色谱仪简介 • 高效液相色谱仪的组成和工作原理 • 高效液相色谱仪的操作流程 • 高效液相色谱仪的维护与保养 • 高效液相色谱仪的实验技术与应用实例
01
高效液相色谱仪简介
定义与特点
定义
高效液相色谱仪是一种分离和分 析复杂混合物中各组分的仪器， 基于物质在固定相和流动相之间 的分配差异实现分离。
。
食品工业
用于检测食品中的添加剂、农 药残留和营养成分等。
高效液相色谱仪的发展历程
起源
20世纪50年代初，基于经典液 相柱色谱的原理，开发出了高
效液相色谱法。
发展
20世纪60年代，出现了填充柱 和柱切换技术，提高了分离效 率。
革新
20世纪70年代，出现了高效微 粒固定相和新型检测器，提高 了灵敏度和选择性。
流动相的纯化和过滤
确保流动相的纯度和清洁度，以避免对色谱柱和检测器造成污染。
流动相的脱气
使用真空脱气法或超声波脱气法去除流动相中的气泡，以避免对色 谱分离造成干扰。
色谱柱的安装与选择
安装色谱柱
按照仪器说明书正确安装色谱柱 ，确保密封性和稳定性。
色谱柱的选择
根据样品的性质和分离要求，选择 合适的色谱柱类型和规格。
检测器对流出的组分进行 检测，并将信号记录下来 ，形成色谱图。
高效液相色谱仪的分离原理
分配原理
组分在固定相和流动相之 间的分配平衡是实现物质 分离的基础。
吸附与解吸平衡
组分在固定相上的吸附与 流动相中的溶解度差异导 致分离。
分子间作用力
分子间的相互作用力（如 范德华力、氢键等）影响 组分的吸附与解吸平衡。
物的分子结构和化学键信息。
高效液相色谱培训ppt
有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相：
低温密封保存 防止有机相的挥发
选用适宜的容器
1．梯度洗脱的特点
（1）改善分离, 加快分析速度； （2）改善峰形, 减少拖尾, 有利于痕 量组分的检测； （3）增加峰容量； （4）强烈滞留的组分不容易残留在 柱上, 保持柱性能长期良好； （5）下次分析时, 流动相需要一段平 衡时间；不同溶剂的UV吸收程度稍有 差异, 可能会引起基线漂移
用无机盐配制的缓冲液。 脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响：
1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动
流动相的保存
有机溶剂流动相：
室温下密封，避光保存
缓冲盐流动相：
当日现配现用： 低温下密封保存，一般不超过3天 防止微生物生长
灯的保养：
在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成 后，马上关闭检测器。
样品池要保养
谢谢！
今天用的图片都为 摄影协会 王诏同学所拍摄
H20 with 0.1% TFA
50% ACN with 0.1% TFA
210.00
220.00
230.00
240.00
250.00 nm
260.00
270.00
280.00
290.00
溶剂混合的基线噪音
色谱条件
色谱柱： C18, 5 µm, 3.9x150mm at 35º C.
流动相： A: 0.1% TFA in Water. B: 0.1% TFA in Acetonitrile.
采用梯度洗脱时，柱在重复使用前，用泵把几倍于柱体 积的起始溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再 生。
低温密封保存 防止有机相的挥发
选用适宜的容器
1．梯度洗脱的特点
（1）改善分离, 加快分析速度； （2）改善峰形, 减少拖尾, 有利于痕 量组分的检测； （3）增加峰容量； （4）强烈滞留的组分不容易残留在 柱上, 保持柱性能长期良好； （5）下次分析时, 流动相需要一段平 衡时间；不同溶剂的UV吸收程度稍有 差异, 可能会引起基线漂移
用无机盐配制的缓冲液。 脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响：
1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动
流动相的保存
有机溶剂流动相：
室温下密封，避光保存
缓冲盐流动相：
当日现配现用： 低温下密封保存，一般不超过3天 防止微生物生长
灯的保养：
在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成 后，马上关闭检测器。
样品池要保养
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H20 with 0.1% TFA
50% ACN with 0.1% TFA
210.00
220.00
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250.00 nm
260.00
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280.00
290.00
溶剂混合的基线噪音
色谱条件
色谱柱： C18, 5 µm, 3.9x150mm at 35º C.
流动相： A: 0.1% TFA in Water. B: 0.1% TFA in Acetonitrile.
采用梯度洗脱时，柱在重复使用前，用泵把几倍于柱体 积的起始溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再 生。
高效液相色谱法培训PPT课件
注意事项与常见问题解答
样品处理注意事项
01
避免样品污染、损失或变质，确保处理过程的准确性和可重复
性。
常见问题及解决方法
02
针对样品处理过程中可能出现的问题，如回收率低、干扰物质
多等，提供相应的解决方法。
安全与防护
03
注意有毒有害试剂的使用安全，做好个人防护和环境保护工作。
04 方法开发与优化策略
梯度洗脱程序设计思路
初始比例确定
根据待测组分的极性差异，选 择合适的初始流动相比例。
梯度斜率设置
根据组分的分离情况，调整梯 度斜率，使各组分在合适的保 留时间内洗脱出来。
梯度时间设置
确保梯度洗脱过程中，各组分 能够充分分离，同时避免过长 的分析时间。
梯度曲线类型
根据实际需求选择合适的梯度 曲线类型，如线性梯度、凹形
梯度或凸形梯度等。
方法验证内容及标准
精密度
准确度
通过添加回收率试验，验证方法 的准确度，确保测定结果可靠。
考察方法的重复性和中间精密度， 确保测定结果的稳定性。
线性范围
确定方法的线性范围，确保待测 组分浓度在该范围内时，测定结 果准确可靠。
专属性
考察方法对待测组分的选择性， 确保其他共存物质不干扰测定。
长期稳定性
考察样品在规定的储存条件下放置一定时间后的稳定性，以确定 样品的保质期和储存条件。
方法学考察
对分析方法本身进行稳定性考察，包括方法的耐用性、重复性和 中间精密度等指标的评估。
质量控制图绘制和应用
质量控制图绘制
根据长期稳定性考察数据，绘制质量控 制图，包括平均值、标准差和控制限等 指标。
VS
发展历程及应用领域
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仪器分析课程讲义
第四节 高效液相色谱仪
1
目录
高效液相色谱仪 高效液相色谱的固定相和流动相
2
3
6.2 高效液相色谱仪
输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 数据处理系统
4
5
一、输液系统
1．贮液器 贮液罐的材料应耐腐蚀，对溶剂呈惰性，
容积约为0．5—2．0L； 贮液罐放置要高于泵体； 使用过程贮液罐应密闭； 溶剂在放入贮液罐之前必须经过0．45um
8
高压泵按其性质可分为恒压泵、恒流泵两类
1）往复式柱塞泵： 恒流 泵； 易于更换溶剂，适用于梯 度洗脱但有脉冲波动，可 以加一阻尼器抑制脉冲。
9
2）气动放大泵： 恒压泵 液缸体积大，更换流动相 不方便，不便于梯度洗脱， 无脉冲、稳定流量的输出, 现多用于装柱。
10
二、进样装置
a. 停留进样装置：
许多有机化合物，特别是芳 香族化合物、受紫外光激发 后能够辐射出荧光。
22
高灵敏度(比紫外检测器高两个数量级，达 10-11g.ml-1)
高选择性; 线性范围窄； 测量中不能使用抑制、吸收荧光的溶剂； 对不产生荧光的物质，可使其转变成荧光
物质；
广泛应用于生物化工、制药、食品和环境 监测中.
23
5. 电导检测器（electrical conductivity detector）
b. 缺点：不能承受高压，须停流进样； 无法取得精确的保留时间
b. 高压定量进样阀：（六 通阀进样装置）
c. 优点：进样准确，重 现性好，适于定量分析
d. c.自动进样器：计算机
控制，适合大量进样。
11
三、高效分离柱 色谱柱是实现分离的核心部件。发展趋 势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
12
常规液相色谱柱 1～6 mm，10～50 cm。 微孔填充柱 0.5-1mm 毛细管柱 30-50µm
滤膜过滤。
6
2．脱气装置
作用：脱去流动相中的溶解气体。
(1)吹氮脱气法 (2)加热回流法 (3)抽真空脱气法 (4)超声波脱气法 (5)在线真空脱气法(on—1ine degasser)
7
3、 高压输液泵 输送流动相 压力：150～350×105 Pa 作用：将流动相以稳定的流速或压力输送到
色谱系统。 输液泵的稳定性直接关系到分析结果 的重复性和准确性。
属电化学检测器，是离子色谱法中应用最 为广泛的检测器
作用原理：根据物质在某些介质中电离后 所产生的电导变化来测定电离物质的含 量。
24
五、液相色谱法固定相
1. 固定相的形状 （1）全多孔型
最初由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多 孔球体 100μm的大颗粒，表面涂渍固定液。 传质速度慢，柱效低。 现采用10μm以下的小颗粒 。
27
3.液-液色谱固定相
惰性载体：硅胶，无机氧化物、高分子 聚合物、脲醛树脂等，多为3—10um的全 多孔微球。
固定液：正相： 氰基柱、胺基柱等 反相 : 烷基柱、苯基柱。
28
4. 化学键合固定相
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定 相，一般用硅胶作为基体。
a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡i—C d. 硅氮键型： ≡Si—N
装柱方法：有干法和湿法，按粒度20μm 划分。
13
柱温控制
下列几种情况需要控制柱温： 法定标准分析方法中，要求保留时间具
有再现性； 必须通过改变柱温来提高分离效率； 对高分子化合物或黏度大的样品； 对一些具有生物活性的生物分子； 对一些组成复杂的样品，使用二维色谱
技术。
14
四、液相色谱检测器 1.紫外检测器: 应用最广，对大部分有机化合
25
（2）表面多孔型(薄壳型微珠)
30～40μm的玻璃微球，表面附着一 层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。
表面积小，传质速度快，但柱容量低；
26
2.液-固吸附固定相 极性：硅胶、氧化镁、分子筛 等； 非极型：高聚物微球、石墨化碳黑、聚合
物包裹固定相。 结构类型：全多孔型和薄壳型； 粒度：5～10 μm；
物有响应。 作用原理：被分析试样组分对特定波长紫外
光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关 系遵守比尔定律。
15
特点：
灵敏度高，可达10-9g.mL-1； 线性范围高； 可用梯度洗脱； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 不适用于对紫外不吸收的试样； 紫外光不透过的溶剂不能用（苯等）。
16
2. 光电二极管阵列检测器
， 称为正相液液色谱法; 4. （3）流动相的极性大于固定液的极性，
则称为反相液液色谱 。
组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 31
2. 流动相类别 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗
32
3. 流动相的选择
常用溶剂的极性顺序：水、酰胺、腈、醇、酮、 酯、醚、烃类, etc. 流动相可分为：底剂及洗脱剂 底剂：决定基本的色谱分离情况； 洗脱剂：调节试样组分的滞留并对几个组分具 有选择性的分离作用。
29
化学键合固定相的特点 （1）传质快，表面无深凹陷; （2）寿命长， 无固定液流失，耐流动相冲 击； （3）选择性好，可键合不同官能团 ； （4）有利于梯度洗脱；
30
六、液相色谱法流动相
1. 流动相特性 2. （1）流动相的种类、配比可显著改变组
分分离状况； 3. （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相
可连续检测参比池和样品池中溶液的折光 指数差值。差值与浓度呈正比；
19
特点： 通用型检测器 ; 灵敏度低（10-7g.mL-1），不能用于痕量分 析; 对温度敏感，要求使用温度恒定; 对流动相流量变化敏感，不能用于梯度洗脱。
20
21
4. 荧光检测器（fluorescence detector）
采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
紫外可见光度检测 器的重要进展； 1021个二极管阵列， 各检测某一特定波 长，无需停流扫描 而观察色谱柱流出 物的各个瞬间的动 态光谱吸收图
17
光电二极管阵列检测器
18
3. 差示折光检测器（differential refractive index detector） 除紫外检测器之外应用最多的检测器；
第四节 高效液相色谱仪
1
目录
高效液相色谱仪 高效液相色谱的固定相和流动相
2
3
6.2 高效液相色谱仪
输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 数据处理系统
4
5
一、输液系统
1．贮液器 贮液罐的材料应耐腐蚀，对溶剂呈惰性，
容积约为0．5—2．0L； 贮液罐放置要高于泵体； 使用过程贮液罐应密闭； 溶剂在放入贮液罐之前必须经过0．45um
8
高压泵按其性质可分为恒压泵、恒流泵两类
1）往复式柱塞泵： 恒流 泵； 易于更换溶剂，适用于梯 度洗脱但有脉冲波动，可 以加一阻尼器抑制脉冲。
9
2）气动放大泵： 恒压泵 液缸体积大，更换流动相 不方便，不便于梯度洗脱， 无脉冲、稳定流量的输出, 现多用于装柱。
10
二、进样装置
a. 停留进样装置：
许多有机化合物，特别是芳 香族化合物、受紫外光激发 后能够辐射出荧光。
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高灵敏度(比紫外检测器高两个数量级，达 10-11g.ml-1)
高选择性; 线性范围窄； 测量中不能使用抑制、吸收荧光的溶剂； 对不产生荧光的物质，可使其转变成荧光
物质；
广泛应用于生物化工、制药、食品和环境 监测中.
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5. 电导检测器（electrical conductivity detector）
b. 缺点：不能承受高压，须停流进样； 无法取得精确的保留时间
b. 高压定量进样阀：（六 通阀进样装置）
c. 优点：进样准确，重 现性好，适于定量分析
d. c.自动进样器：计算机
控制，适合大量进样。
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三、高效分离柱 色谱柱是实现分离的核心部件。发展趋 势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
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常规液相色谱柱 1～6 mm，10～50 cm。 微孔填充柱 0.5-1mm 毛细管柱 30-50µm
滤膜过滤。
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2．脱气装置
作用：脱去流动相中的溶解气体。
(1)吹氮脱气法 (2)加热回流法 (3)抽真空脱气法 (4)超声波脱气法 (5)在线真空脱气法(on—1ine degasser)
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3、 高压输液泵 输送流动相 压力：150～350×105 Pa 作用：将流动相以稳定的流速或压力输送到
色谱系统。 输液泵的稳定性直接关系到分析结果 的重复性和准确性。
属电化学检测器，是离子色谱法中应用最 为广泛的检测器
作用原理：根据物质在某些介质中电离后 所产生的电导变化来测定电离物质的含 量。
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五、液相色谱法固定相
1. 固定相的形状 （1）全多孔型
最初由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多 孔球体 100μm的大颗粒，表面涂渍固定液。 传质速度慢，柱效低。 现采用10μm以下的小颗粒 。
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3.液-液色谱固定相
惰性载体：硅胶，无机氧化物、高分子 聚合物、脲醛树脂等，多为3—10um的全 多孔微球。
固定液：正相： 氰基柱、胺基柱等 反相 : 烷基柱、苯基柱。
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4. 化学键合固定相
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定 相，一般用硅胶作为基体。
a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡i—C d. 硅氮键型： ≡Si—N
装柱方法：有干法和湿法，按粒度20μm 划分。
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柱温控制
下列几种情况需要控制柱温： 法定标准分析方法中，要求保留时间具
有再现性； 必须通过改变柱温来提高分离效率； 对高分子化合物或黏度大的样品； 对一些具有生物活性的生物分子； 对一些组成复杂的样品，使用二维色谱
技术。
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四、液相色谱检测器 1.紫外检测器: 应用最广，对大部分有机化合
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（2）表面多孔型(薄壳型微珠)
30～40μm的玻璃微球，表面附着一 层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。
表面积小，传质速度快，但柱容量低；
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2.液-固吸附固定相 极性：硅胶、氧化镁、分子筛 等； 非极型：高聚物微球、石墨化碳黑、聚合
物包裹固定相。 结构类型：全多孔型和薄壳型； 粒度：5～10 μm；
物有响应。 作用原理：被分析试样组分对特定波长紫外
光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关 系遵守比尔定律。
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特点：
灵敏度高，可达10-9g.mL-1； 线性范围高； 可用梯度洗脱； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 不适用于对紫外不吸收的试样； 紫外光不透过的溶剂不能用（苯等）。
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2. 光电二极管阵列检测器
， 称为正相液液色谱法; 4. （3）流动相的极性大于固定液的极性，
则称为反相液液色谱 。
组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 31
2. 流动相类别 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗
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3. 流动相的选择
常用溶剂的极性顺序：水、酰胺、腈、醇、酮、 酯、醚、烃类, etc. 流动相可分为：底剂及洗脱剂 底剂：决定基本的色谱分离情况； 洗脱剂：调节试样组分的滞留并对几个组分具 有选择性的分离作用。
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化学键合固定相的特点 （1）传质快，表面无深凹陷; （2）寿命长， 无固定液流失，耐流动相冲 击； （3）选择性好，可键合不同官能团 ； （4）有利于梯度洗脱；
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六、液相色谱法流动相
1. 流动相特性 2. （1）流动相的种类、配比可显著改变组
分分离状况； 3. （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相
可连续检测参比池和样品池中溶液的折光 指数差值。差值与浓度呈正比；
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特点： 通用型检测器 ; 灵敏度低（10-7g.mL-1），不能用于痕量分 析; 对温度敏感，要求使用温度恒定; 对流动相流量变化敏感，不能用于梯度洗脱。
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4. 荧光检测器（fluorescence detector）
采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
紫外可见光度检测 器的重要进展； 1021个二极管阵列， 各检测某一特定波 长，无需停流扫描 而观察色谱柱流出 物的各个瞬间的动 态光谱吸收图
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光电二极管阵列检测器
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3. 差示折光检测器（differential refractive index detector） 除紫外检测器之外应用最多的检测器；