4实验1-1

实验1－1 蛋白质的性质实验（一）

蛋白质及氨基酸的呈色反应

一、目的和要求：

（1）了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式

（2）了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理

（3）学习集中常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法

二、实验内容

（一）双缩脲反应

1、操作方法：取一支试管，加入卵清蛋白溶液约1毫升和10％NaOH约2毫升，摇匀，再加1％CuSO4溶液两滴，随加随摇。观察是否有紫玫瑰色的出现。

2、试剂：（1）10％NaOH （2）1％CuSO4（3）2％卵清蛋白溶液

（二）茚三酮反应

1、操作方法：

（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚三酮溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色是否由粉红色变紫红色再变蓝色。

（2）在一块小滤纸上滴一滴0.5％的甘氨酸溶液，风干后再在原处滴一滴0.1％茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察是否有紫红色斑点的出现。

2、试剂：

（1）0.5％甘氨酸溶液（2）0.1％茚三酮水溶液（3）0.1％茚三酮—乙醇溶液

（4）蛋白质溶液：2％卵清蛋白或鸡蛋清溶液（蛋清：水＝1：9）

（三）黄色反应

1、操作方法

向6个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可稍放置一会或微火加热，待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10％NaOH溶液至碱性，观察颜色变化。

2、试剂：（1）鸡蛋清溶液（2）头发（3）指甲（4）0.5％苯酚（5）浓硝酸

（6）0.3％色氨酸溶液（7）0.3％酪氨酸（8）10％NaOH

（四）坂口反应（可定性鉴定含有精氨酸的蛋白质和定量测定精氨酸）

1、操作方法：向各管中按下表加入试剂，记录出现的现象

NaOH

（4）NaBrO溶液：2克溴溶于100ml5％NaOH中，置棕色瓶中，可在暗处保存两周

（5）1％α－萘酚乙醇溶液，临用时配制

（五）乙醛酸反应

1、操作方法：取3支试管，编号，分别按下表加入蛋白质溶液，色氨酸溶液和水，然后各加入冰醋酸2毫升，混匀后倾斜试管，沿壁分别缓慢加入浓硫酸约1毫升，静置，观察各管液面间紫色环的出现，若不明显，可于水浴中微热。

2、试剂：（1）蛋白质溶液（鸡蛋清：水＝1：20）（2）冰醋酸（3）0.3％色氨酸溶液

（4）浓硫酸（分析纯）

（六）偶氮反应

1、操作方法：取三支试管，编号，按下表所示顺序和剂量加入试剂，并观察有色产物形成。

2、试剂：（1）鸡蛋清（2）0.3％组氨酸溶液（3）0.3％酪氨酸溶液（4）20％NaOH

（5）偶氮试剂：溶液A：5克亚硝酸钠溶于1000ml水中；溶液B：5克对氨基苯磺酸溶于1000ml水中，溶解后再加入5ml浓硫酸。A、B溶液分别保存在密闭瓶中，用时以等体积混合。

（七）醋酸铅反应

1、操作方法：向试管中加入10％醋酸铅溶液1毫升，再加10%NaOH至产生的沉淀完全溶解为止，摇匀。加入被水稀释一倍的鸡蛋清0.4毫升，混匀，小心加热，至溶液变黑后，加入浓盐酸数滴，嗅其味，并将湿润醋酸铅试纸置于管口，观察其颜色的变化。

2、试剂：（1）蛋白质液（鸡蛋清：水＝1：1）（2）10％NaOH （3）浓盐酸（4）醋酸铅试纸，用10％醋酸铅水溶液浸泡滤纸后晾干。

三、注意事项

1、实验内容繁多，请认真预习、操作

2、操作请按步骤进行

思考题：

1、如果蛋白质水解后双缩脲反应呈阴性，对水解作用的程度可作出什么结论？

2、茚三酮反应的阳性结果为何颜色？能否用茚三酮反应可靠鉴定蛋白质存在？

3、黄色反应的阳性结果说明什么问题？

4、为什么蛋清可作为铅或汞中毒的解毒剂？