药品生产清洁验证

接受标准： 总回收率一般（企业可以根据实际情况确定） 不低于70%，多次取样回收率的相对标准偏 差应不大于20%
淋洗法清洗回收率：淋洗溶剂选择
❖ 溶解度； ❖ 同设备内表面的相容性； ❖ 易清除性； ❖ 毒性； ❖ 环境的危害性； ❖ 获取的难易性。
清洗回收率——淋洗法
淋洗溶剂或淋洗水的淋洗速度选择：
❖ 必须建立书面的清洗方法验证通则。 ❖ 清洗方法验证通则应规定执行验证的负责人、批准
验证工作的负责人、验证标准（合格标准）、再验 证的时间。 ❖ 对各生产系统或各设备部件进行清洗验证之前，应 制定专一特定的书面验证计划，其中应规定取样规 程、分析方法（包括分析方法的灵敏度）。
内容介绍
❖ 1.标记化合物的选择及限度计算 ❖ 2.清洁方法的开发和设计 ❖ 3.清洁分析方法（HPLC）的验证 ❖ 4.HPLC法与TOC法比较
取样方法和取样点的确认：
通常设备的取样清洁验证中如何确定合适取样方法和取样点是验证 方案的关键内容之一，必须由合适的理由来确认取样点，此取样 点应能够代表设备的“最脏点”。
（1） 取样方法的选择 ❖ 直接表面擦拭 ❖ 淋洗液冲洗 ❖ 浸泡液取样
取样方法和取样点的确认：
擦拭取样优点：是能对最难清洁部位直接取样， 通过选择适当的擦拭溶剂、擦拭工具和擦拭方法， 可将清洗过程中未溶解的，已“干结”在设备表面 或溶解度很小的物质擦拭下来。检验的结果能直接 反映出各取样点的清洁状况。
可用一贮备液经精密稀释或分别精密称样， 制备一系列的供试品进行测定，至少制备5 个浓度（通常选取50%、80%、100%、 120%和150%），另外需要将定量限加入 到线性中。
精密度：
1.重复性 重复性系指在同样的操作条件下，在较短 时间间隔内，由同一分析人员测定所得结 果的接近程度。
精密度：
二、清洁方法的开发和设计:清洁剂的选择
1. 清洁剂应能有效溶解残留物，不腐蚀设备， 且本身易被清除。
2. 人用药品注册技术要求国际标准协调会(ICH) 在“残留溶剂指南”中将溶剂分为3个级别， 对其使用和残留限度有明确的要求。
3. 随着环境保护标准的提高，还应要求清洁剂 对环境尽量无害或可被无害化处理。
欧盟GMP关于清洁的要求
40.为证明方法是经过验证的，通常应在3个连 续批上使用该清洁规程，并检验合格。
42.如果实际产品是有毒物质或有害物质，在清 洁验证中，可以例外的采用物化性质相似的 无毒无害物质来模拟。
FDA的要求：
在FDA的cGMP 211.67章节 中规定了设备清洗验证的 要求。
❖ 建立书面标准操作程序（SOP），其中必须详细规 定设备各部件的清洗过程。
欧盟GMP关于清洁的要求
38.通常只有接触产品的设备表面的清洁规程需要验证。 某些场合下，还应考虑不直接接触产品的部分。应 验证设备使用与清洁的间隔时间,以及已清洁设备可 保留的时间（即清洁有效期），并通过验证确定清 洗的间隔时间和清洁的方法。
39.对于相似产品和相似工艺而言，可从相似产品及工 艺中，选择一个具有代表性的产品和工艺进行清洁 验证。可以采用“最差条件”的方法进行单独的验 证试验，在验证中应考虑关键因素（取样部位、取 样方法、清洗剂等）
一、标记化合物的选择（续）
➢ 毒性 ➢ 在清洗溶剂中的溶解度 ➢ 清洗问题如：对设备表面材质有一定的附着力 ➢ 包含色料、芳香剂或矫味剂的产品 ➢ 设备的使用率（生产频率高的产品相应的清洗频率也高） ➢ 清洗过程中如果使用清洗剂，则其残留物也应视为标记物
一、标记化合物的选择（续） 目标化合物选择：A D
4. 满足以上要求的前提下应尽量廉价。
二、清洁方法的开发和设计:清洁剂的选择（续）
❖ 根据这些标准，对于水溶性残留物，水是首选的清 洁剂。不同批号的清洁剂应当有足够的质量稳定性。 因此不宜采用一般家用清洁剂，因其成分复杂、质 量波动较大且供应商不公布详细组份。
❖ 因此，应尽量选择组份简单、成分确切的清洁剂。 根据残留物和设备的性质，企业还可自行配制成分 简单效果确切的清洁剂，如一定浓度的酸、碱溶液 等。企业应有足够灵敏的方法检测清洁剂的残留情 况，并有能力回收或对废液进行无害化处理。
检测限和定量限：
2.根据相应值的标准差和斜率 检测限：LOD=3.3δ/S+空白值 定量限：LOQ=10δ/S+空白值 其中： ❖ δ为响应值的标准差； ❖ S为校正曲线的斜率； S可从被分析物的校正曲线来估算； δ的值可由多种途径估算，如：
清洁分析方法验证 苏芳
2020/12/7
清洁验证的背景：
➢ FDA历来的检查重点：
过去FDA 总是更注意检查青霉素类与非青霉素类药物 之间的交叉污染、药品与甾类物质或激素之间的交叉污 染问题。在过去二十年间，因实际或潜在的青霉素交叉 污染问题已从市场上撤回了大量的药品。
有一位幼儿教师，怀抱着一名2小时前注射过青霉素钠 的婴儿，孩子的一泡尿撒在了幼儿教师的手臂上，1分 钟后该名幼儿教师呼吸困难、面色苍白、心慌气短，不 一会就呈现昏迷状态，经医生诊断为青霉素过敏。
专属性：
通常在进行清洁分析时，即使活性成分 的样品（如：取样棉签、淋洗溶液）中的 含量也很低，所以在进行专属性验证时无 需考虑正常产品中的杂质，降解产物的影 响，只需考虑辅料及空白溶剂的影响。
专属性的试验方法：
1.预先按处方比例配制足够量的辅料混合物， 研磨均匀。
2.按照试验方法配制一定浓度（浓度来自于： 标记化合物的理论限度浓度）的标准溶液。
3.精密称量同标准溶液中所用标准品成比例的 辅料混合物，按照标准品溶液的配制方法配 制。过滤后使用。
专属性的接受标准：
1.应当证明潜在的干扰成分不会对方法的性能 产生副作用。对于色谱检测方法，要求证实 杂质之间、杂质与主峰之间的分离度≥1.0。
2.空白对照应无干扰。
线性与范围：
线性是定量测定的基础，所以定量清洗分 析方法需要进行线性验证而定性清洗分析 方法无法进行线性验证。
化学残留限度计算：
❖ ① 浓度限度：十万分之一（10ppm） 在下一产品中的残留物数量级别应不超过十万分之 一（10ppm） 设下批产品的生产批量为B(kg)，因残留物浓度 最高为10×10－6，即10mg／kg，则残留物总量最 大为B×10×10－6＝10B(mg)；单位面积残留物的 限度为残留物总量除以测量的与产品接触的内表面 积，设设备总内表面积为SA(cm2)，则表面残留物 限度L 为10B／SA(mg／cm2)。
用选的的擦拭溶剂润湿擦拭棉签，按下图所 示进行擦拭取样；
第一步
第二步
棉签取样清洗回收率
重复以上规程3次； 将擦拭棉签分别放入棉签管中，加入预定的
溶剂5ml，超声； 依法分析，计算回收率和回收率的RSD
棉签取样方法清洗回收率
总结： 取样过程需经过验证，通过回收率试验验证 取样过程的回收率和检验方法回收率结合进 行。
定量限系指在确定的试验条件下，试样中被测 物能被准确测定的最小量，其检测结果应具 有一定准确度和精密度。
检测限和定量限：
1.信噪比法： 该方法适用于出现噪音的分析方பைடு நூலகம்。
性噪比的测定时通过比较含已知低浓度被分 析物的样品与空白样品的测试信号，确定被 分析物可被确切的检测的最小浓度，典型的 性噪比为3:1；对于定量限典型的信噪比为 10:1。
棉签取样方法清洗回收率
准备一块与设备表面材质相同的板材，如平 整光洁的316L不锈钢板；
在钢板上划出100mm×100mm的区域； 将5倍限度量的的待检测物溶液，定量装入校
验的微量注射器；
将其溶液尽量均匀的涂布100mm×100mm的 区域内；
自然干燥或用电吹风温和的吹干不锈钢板；
棉签取样方法清洗回收率
清洗回收率——淋洗法
接受标准：
回收率通常应不低于95%；
外观检查即清洗后的淋洗溶液样品同淋洗前 的淋洗液做视觉检查，确定是否有颜色差异 和异物存在；如果有上述现象发生，可直接 判断样品不合格。
注意：淋洗法样品可对冲洗液直接检测，也可 对稀释/浓缩后检测。
检测限和定量限：
检测限系指在确定的试验条件下，试样中的被 测物能被检查的最小量；
擦拭取样缺点：是很多情况下须拆卸设备后方 能接触到取样部位，对取样工具、溶剂、取样人员 的操作等都有一定的要求。
取样方法和取样点的确认：
淋洗取样法优点：是取样面大，对不便拆卸或不 宜经常拆卸的设备也能取样。因此其适用于擦拭取 样不易接触到的表面，尤其适用于设备表面平坦、 管道多且长的的生产设备。
淋洗水取样缺点：溶解与流体力学原理，当溶 剂不能在设备表面形成湍流进而有效溶解残留物时， 或者残留物不溶于水或“干结”在设备表面时，淋 洗水就难以反映真实的情况。
二、清洁方法的开发和设计：清洁方式选择
通常清洁方法分为: ❖ 手工清洁（Manual Cleaning） ❖ 在线清洁（Cleaning In Place）
在线清洁的特点： 1. 设备、容器、管道能够自动进行清洗； 2. 对容器采用喷林法清洁，对管道采用压力法清洁； 3. 极少的手工操作，重复性高。
欧盟GMP关于清洁的要求
36.为确认清洁规程的效力，应进行清洁验证。 应根据所涉及的物料，合理的确认产品的 残留、清洁剂和微生物污染的限度标准。 这个限度标准应该是可以接受的，能够被 证实的。
37.应该使用经验证、检出灵敏度高的检验方 法来检测残留或污染物。每种分析方法或 仪器的检测灵敏度应足以检测出设定合格 限度水平的残留或污染物。
一、标记化合物的选择
❖ 一般药品都由活性成分和辅料组成。对于接触多个 产品的共用设备，所有这些残留物都是必须清洁干 净的，在清洁验证中不必为所有残留物都制定限度 标准并一一检测，因为这是不切实际且没有必要的。 在一定的意义上，清洁的过程是个溶解的过程，因 此，通常的做法是从各组分中确定最难清洁(溶解) 的物质，以此作为参照物质。通常，相对与辅料， 人们最更关注活性成分的残留，因为它可能直接影 响下批产品的质量、疗效和安全性。
验证方法：同一样品每位分析人员准备6份 进样测量，计算两人之间的平均值的差异。
可接受限度：平行六份样品的RSD≤10%， 两人之间的平均值之差的相对值≤10%。
准确度试验：
❖ 棉签取样回收率试验 ❖ 淋洗取样回收率试验 ❖ 浸泡法取样回收率试验
清洗回收率：棉签取样方法验证
❖ 取样棉签种类、规格、品牌等； ❖ 溶解用溶剂； ❖ 取样人员的操作； ❖ 样品的溶出。
淋洗法清洗回收率试验方法：
选择同生产设备材质相同的平板，划出 10cm*10cm区域，在该区域内均匀涂抹一定 量（取决于分析方法的测量范围的下限乘以 清洗所有溶液的体积）的标记化合物，待干 燥后，使用一定体积的淋洗溶剂，采用一定 速度冲洗平板，收集全部淋洗液，如有必要 可以重复清洗过程。待冲洗完成后，吸取一 定体积的淋洗液进行测试，并计算回收率。
取样方法和取样点的确认：
（2） 取样点的确认 通常不可能擦拭设备的全部表面，因此应该选 择设备的最差区域作为取样点。这些区域应 在清洁难度和残留水平方面代表着对清洁规 程最大程度的挑战，例如料斗的底部、桨拌 桨桨叶底部和阀门的周围。
三、清洗分析方法验证的内容：
➢ 专属性 ➢ 线性 ➢ 范围 ➢ 准确度 ➢ 精密度（重复性、中间精密度、重现性） ➢ 检测限（LOD）和定量限（LOQ） ➢ 药品溶液的稳定性
化学残留限度计算：（续）
② 千分之一残留限度的计算
MTDa = 清洗前产品最小每日给药剂量中的活性成分含量； Nb = 清洗后产品的批量； MDDb = 清洗后产品的最大日给药剂量的活性成分含量； Sb = 清洗后产品活性成分含量的百分比(%w/w)。 数据1/1000来源：一般认为药物的十分之一处方剂量是无效的。
重复性的评价：
在方法规定的线性范围内至少测定9次（如3 个浓度级别80%，100%和120%，或者 30%，50%和100%；每个浓度级别测定3 次）或者在100%的试验浓度，至少测定6 次。
可接受标准：定量清洗分析方法验证时，活 性成分的RSD≤10%。
2.中间精密度：系指同一实验室不同日期、 不同仪器、不同分析人员对同一样品、采 用同一方法处理样品所得结果之间的接近 程度。