兽药残留的测定数据处理(精)
兽药残留的测定简化版
兽药残留的测定本实验主要目标是通过酶标仪测定水产品中的兽药残留以及其衍生物的含量1 试验试剂：95%甲醇，20倍浓缩衍生物试剂，1m盐酸，0.1m磷酸氢二钾，1m氢氧化钠，乙酸乙酯，正己烷（或庚烷），样品萃取液，样品标准液，酶标记物，停止液2 实验仪器分析天平，组织粉碎机，精密移液器，50ml离心管,均质振荡器，通风柜，离心机，10ml塑料蓝盖试管，2ml 带塞小试管，水浴锅，氮气机。
微孔计数板，酶标仪3 实验步骤样品处理：将所测水产品去头去尾，去皮去骨取可吃部位，称20克左右，放入组织粉碎机充分粉碎后待用4 1倍衍生化试剂的制备：先移取 1.9ml甲醇到2ml 带塞小试管中，再加入100ul衍生化试剂混合即可待用5 用大试管称取1克均质后的样品并加入4ml去离子水，0.5毫升1M盐酸，100ul（微升）配置好的1倍样品衍生试剂，用振荡器充分混合3分钟，在50摄氏度孵育3个小时，（主要通过水浴锅设定温度孵育或37摄氏度条件下孵育大约16个小时）6 孵育好的样品通过离心机（4200转/分钟）离心5分钟，（注意：使用离心机的时候，需要再加多一个离心管装水10ml保持离心机平衡，以免损坏离心机）7 离心好的样品移取上层乙酸乙酯溶液3ml到另外一个10ml试管，在水浴锅70摄氏度中蒸干8 在蒸干样品试管中加入1ml正己烷，再通过离心机离心5分钟9 离心后的样品试管用移液器去除上层的正己烷，（必须彻底去除正己烷，否则容易造成假阳性）在室温下放置1小时后再测试10 移取50ul（微升）去除正己烷后的下层样液到2ml试管，再加入50ul（微升）样品萃取液混合后待用11分别移取按（0，30,90,180,270,540）溶度的6个样品标准液按数值小至顺序到混合孔中，最后移取50ul（微升）混合好的样液到微孔板混合孔接着分别移取100ul（微升）酶标记物到各个混合孔中轻轻混合10秒钟12 在各个混合好后的样液分别移取100ul（微升）到从铝箔纸盒中拿出的测试孔中，震荡30秒，于25-28摄氏度孵育30分钟13 孵育后，将微孔条的测试孔中溶液倒到水槽中，再用多管移液器移蒸馏水到各个孔眼中，震荡10秒后倒掉，重复三次，总共四次洗板后，再在吸水纸上拍打微孔条，尽量将水拍干14拍干水后，在各个孔眼中加入100ul（微升）底物溶液，轻轻震荡30秒直至观察到有蓝色出现，在25-28摄氏度避光孵育30分钟15孵育好的测试孔加入100ul（微升）停止液即可进行读数16酶标仪先提早预热半个小时，再把样板微孔条放入酶标仪测试平台，再按下PLATE键送至酶标仪机内，打开电脑点击酶标仪桌面图标—点击登录—点击新建文件夹---出现新建程序---点击光度测量---选择上次测定数据（6孔眼的为孔雀石绿测定，7孔目为兽药测定）---点击运行---出现数据---记录数据---复制至另外文件夹附：通风柜的遥控器操作，A开关机 B 通风C 调风D 开关灯。
兽药残留的检测方法(定稿文件)
说明书摘要本发明提供一种兽药的检测方法，所述方法包括如下步骤：（1）样品的处理：将待测样品进行前处理，加入提取剂后经过多个步骤处理得到上清液过滤得到的滤液用于UPLC-MS/MS测定；（2）兽药残留的测定，将得到的样品在一定的测定条件下进行超高效液相色谱与质谱联用的测定。
本发明的检测方法具有灵敏度高，专属性强的特点，能够满足兽药残留的测定。
权利要求书1.一种兽药残留的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）样品的处理：将待测样品进行前处理，加入提取剂后进行匀浆，之后进行超声提取，之后进行第一次离心分离得到上清液，用氮气将上清液吹干后得到的残余物用初始流动相溶解，混匀，之后进行第二次离心分离得到上清液，取上清液进行微孔滤膜过滤得到的滤液用于UPLC-MS/MS测定；（2）兽药残留的测定将步骤（1）得到的样品进行超高效液相色谱与质谱联用的测定，测定条件如下：色谱条件：色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C18柱；流动相为甲醇和甲酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱；质谱条件：电喷雾离子源(ESI+)；源温为105℃-115℃；脱溶剂温度为340℃-360℃；脱溶剂气流速度为600L·h-1-700L·h-1；锥孔反吹气流速度为45L·h-1-55L·h-1。
2.如权利要求1所述的兽药残留的检测方法，其中所述兽药为四环素类药物、β受体激动剂类药物、喹诺酮类药物、磺胺类药物。
3.如权利要求1或2所述的兽药残留的检测方法，其中所述兽药为四环素、土霉素、金霉素、强力霉素、特步他林、西马特罗、沙丁胺醇、菲诺特罗、莱克多巴胺、氯丙那林、克伦特罗、妥布特罗、喷布洛尔、苯乙醇胺A、培氟沙星，环丙沙星，恩诺沙星，氧氟沙星，伊诺沙星、吡哌酸、萘啶酸、西诺沙星、诺氟沙星、达氟沙星、洛美沙星、二氟沙星、沙氟沙星、司帕沙星、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基噁唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺氯达嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺醋酰、磺胺二甲异噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺二甲氧嘧啶和/或磺胺喹噁啉中的一种、几种或全部。
畜禽肉中多类兽药残留的快速检测
畜禽肉中多类兽药残留的快速检测黄 立（昆明市食品药品检验所，云南昆明 650032）摘 要：建立了猪肉、牛肉、鸡肉中磺胺类、四环素类、喹诺酮类共15种兽药残留量的快速检测方法。
样品经过Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液-2.5%乙酸乙腈溶液提取，经氯化钠、无水硫酸钠除水盐析后取乙腈相用高含碳量的C18吸附粉吸附净化，再用0.1%甲酸水乙腈（75+25）定容后上机检测。
结果显示，本方法测定三类混合药物的回收率在63.9%～104.0%，RSD在1.1%～12.2%，检测快速、灵敏度高、重复性好，定性定量准确可靠，适用于猪肉、牛肉及鸡肉中磺胺类、四环素类、喹诺酮类药物残留的快速检测。
关键词：液相色谱-串联质谱法；磺胺；四环素；喹诺酮Rapid Detection of Multiple Types of Veterinary Drug Residues in Livestock and Poultry MeatHUANG Li(Kunming Institute for Food and Drug Control, Kunming 650032, China) Abstract: A rapid method was established for the determination of 15 veterinary drug residues of sulfonamides, tetracyclines and quinolones in pork, beef and chicken. The samples were extracted by Na2EDTA-Mcllvaine buffer-2.5% acetic acid acetonitrile solution, and the acetonitrile phase was purified by adsorption with high carbon content C18 adsorbent powder after dehydration salting by sodium chloride and anhydrous sodium sulfate, and then fixed with 0.1% formic acid aqueous acetonitrile (75+25) and detected on the machine. The results showed that the method determines the recovery of the three types of mixed were 63.9%～104.0%, RSD were 1.1%～12.2%, rapid detection, high sensitivity, good repeatability, accurate and reliable qualitative and quantitative, suitable for the rapid detection of sulfonamides, tetracyclines, quinolones drug residues in pork, beef and chicken.Keywords: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; sulfonamide; tetracycline; quinolone合理使用兽药可以提高畜禽养殖效率，节省成本，缩短出栏周期，进而增加收益，但越来越多的人为追求经济效益滥用药物，导致了一些兽药以残留的形式流入人体，从而对身体健康造成威胁[1]。
兽药残留测定样品的预处理(精)
二、取样
准确称取3份粉碎成肉糜的牛肉样品2±0.05g于50mL具塞离心管中，记录数据；举手示意，由裁判在样品中统一加入混合抗生素标准溶液。
三、提取
准确移取20.0mL磷酸盐缓冲液在每份已称量好的牛肉样品中；将离心管置于漩涡振荡器上，中速振荡5min；用空离心管和纯化水在托盘天平上进行配平，然后高速离心（10000r，5min）；将上清液倒入25mL烧杯中，以备过柱用。
《畜产品检测技术》单项技能实训指导书
实训项目名称
实训目的
1.熟练掌握固相萃取装置萃取样品
2..熟练规范操作移液管，并会使用涡旋器涡旋样品
一、样品前处理
样品前处理是指样品的制备和对样品中的待测组分进行提取、净化和浓缩的过程。样品前处理的目的是消除基质干扰，保护仪器，提高检测方法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。
四、净化
将固相萃取柱在固相萃取仪上安装好，用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL共6.0mL的甲醇活化，再用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL共6.0mL的水进一步活化；取离心所得上清液5.0mL过柱；用水2.0mL清洗，挤干；用流动相2.0mL洗脱；并用5mL试管收集洗脱液；用2mL的一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22μm有机系膜，直接装在样品瓶中，做好标记，供色谱测定。
43兽药残留检测标准操作规程-2008
43兽药残留检测标准操作规程-2008全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：43兽药残留检测标准操作规程-2008是国家制定的针对兽药残留检测的操作规程，旨在规范兽药残留检测工作，确保食品安全。
该规程对兽药残留检测的样品处理、方法选择、仪器设备、质控要求等方面进行了详细规定，为兽药残留检测工作提供了明确的操作指南。
一、引言兽药残留是指兽用药物在动物体内残留的物质，可能会通过食物链传播到人类体内，对人体健康构成潜在的危害。
加强对兽药残留的监测和检测是保障食品安全的重要措施。
43兽药残留检测标准操作规程-2008是在这一背景下制定的，旨在规范兽药残留检测工作，提高检测结果的准确性和可靠性。
三、样品处理1. 样品收集：收集的样品应代表性，取样时应注意避免污染，并确保样品的完整性和唯一性。
2. 样品预处理：根据检测方法的要求，对样品进行必要的预处理，如提取、净化、浓缩等。
3. 样品保存：处理完的样品需按要求保存，避免发生物质的降解和污染。
四、方法选择1. 根据检测的目的和要求选择适当的检测方法，如高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等。
2. 检测方法应具有较高的灵敏度、准确性和可靠性，且经过验证和确认。
五、仪器设备1. 使用优质的兽药残留检测仪器设备，保证检测结果的准确性和可靠性。
2. 对仪器设备进行定期维护和校准，保证其正常运行和准确性。
六、质控要求1. 建立质量管理体系，包括质检程序、质量控制方法、实验室管理、数据处理和记录等。
2. 实验操作中应严格按照标准操作程序进行，避免出现干扰和错误。
43兽药残留检测标准操作规程-2008为兽药残留检测提供了可操作的指导，确保了检测结果的可靠性和准确性，保障了食品安全和人体健康。
各兽药残留检测实验室和单位应严格依照规程执行，共同维护食品安全和公共健康。
【2000字】第二篇示例：43兽药残留检测标准操作规程-2008是中国国家标准委员会发布的标准操作规程，主要用于指导兽药残留检测的实验室操作。
禽畜类兽药残留的测定
上机检测
• 用混合标准工作溶液分别进样，以工作溶 液浓度( ng/mL)为横坐标，峰面积为纵坐 标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线 对样品进行定量，样品溶液中十六种磺胺 的响应值均应在仪器测定的线性范围内。 在上述色谱条件和质谱条件下，十六种磺 胺的参考保留时间见表2。十六种磺胺混合 标准总离子流图参见图A.1和图A.2。
• 近年来国外许多研究表明，有抗菌药物残 留的动物源食品可对人类胃肠的正常菌群 产生不良的影响，使一些非致病菌被抑制 或死亡，造成人体内菌群的平衡失调，从 而导致长期的腹泻或引起维生素的缺乏等 反应。菌群失调还容易造成病原菌的交替 感染，使得具有选择性作用的抗生素及其 他化学药物失去疗效
• 动物用药后，一些性质稳定的药物随粪便、尿被 排泄到环境中后仍能稳定存在，从而造成环境中 的药物残留。高铜、高锌等添加剂的应用，有机 砷的大量使用，可造成土壤、水源的污染。杨居 荣等研究发现，砷对土壤固氮细菌、解磷细菌、 纤维分解菌、真菌和放线菌均有抑制作用。 Wollenberger L等发现喹乙醇对甲壳细水蚤的急 性毒性最强，对水环境有潜在的不良作用。 Strong L等报道了阿维菌素、伊维菌素和美倍霉 素在动物粪便中能保持8周左右的活性，对草原中 的多种昆虫都有强大的抑制或杀灭作用。另外， 已烯雌酚、氯羟吡啶在环境中降解很慢，能在食 物链中高度富集而造成残留超标
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液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 匀质器。 旋转蒸发器 液体混匀器 离心机。 分析天平：感量0.1 mg，0.01 g。 移液器：1 mL，2 mL。 鸡心瓶：100 mL。 样品瓶：2 mL，带聚四氟乙烯旋盖。
液相色谱一串联质 谱仪
液体混匀器
鸡心瓶
• 从全部样品中取出有代表性样品约1 kg， 充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入 洁净容器内。密封作为试样，标明标记。 在抽样和制样的操作过程中，应防止样品 受到污染或发生残留物含量的变化。 • 将试样于-18℃冷冻保存
兽药残留检测样品前处理技术PPT资料优秀版
二、免疫亲和色谱(IAC)
IAC是利用连接有特异性抗体的基质做填料的一种固相萃取技术。 在定量分析上的新技术如毛细管电泳、免疫分析技术、生物传感器、各种联用技术等。
与实传现统 自的动液化-，液很萃有取取相I代A比传C，是统它液能利-液显用萃著取减连的少趋溶接势剂有。用量特，减异少性样品抗预处体理的过程基，加质快做样品填处理料速度的, 消一除种某些固干扰相杂萃质，取避免技乳术化现。象并可
前处理中纯化的工作量最大, 但一个具有强大分离效能或高选择性检测能力的测定体系可大大提高纯化的能力。 MIT在兽药残留分析领域已开始起步, 已成为该领域的一个新发展方向。
IAC是利化用连的接有工特作异性量抗体最的大基质,做填但料一的一个种固具相萃有取强技术大。分离效能或高选择性检测能力的测定
二、免疫亲和色谱(IAC) 在定量分析上的新技术如毛细管电泳、免疫分析技术、生物传感器、各种联用技术等。
MIT在兽药残留分析领域已开始起步, 已成为该领域的一个新发展方向。 二、免疫亲和色谱(IAC)
兽药残留分I析A是C复的杂混高合选物中择痕量性组和分的高分析效技性术，无无论疑筛使选性样分析本或前确证处性分理析,大残留大分简析都化需要，精通细的常微量一操次作手层段和析高灵敏的痕
量检测技术。 目前在兽药残留分析领域所取得的重要进展或发展趋势主要有：样品分离纯化技术的简单化、微来自化和自动化, 提高了提取或净化效率
随着SPE 技术逐步成熟, 其在动物性产品兽药残留检测样本处理技术中将处于主要地位。 SPE技术的出现使动物性产品兽药残留样本处理过程大为简化, 自动化SPE 的使用真正实现了样本残留的在线分析。
灵敏和准确。 研究者以氯霉素为模板分子, 甲基丙烯酰胺为功能单体, 乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂, 采用分子印迹技术, 通过光引发聚合制备了氯
兽药残留的测定概述(精)
兽药残留的测定概述一、兽药残留的测定意义（一）毒性作用急性中毒、慢性中毒、“三致”（致癌、致畸、致突变）耐药性:动物体内耐药性菌株通过食品传递给人，给治疗带来困难。
激素作用:潜在致癌、儿童性早熟等，还会造成菌群失衡。
（二）兽药分类1.抗生素类药物这类药物多为天然发酵产物，是临床应用最多的一类抗菌药物，如青霉素类、四环素类、螺旋霉素、链霉素、土霉素、金霉素等。
青霉素类最容易引发过敏反应，四环素类、链霉素有时也能引起过敏反应。
2.磺胺类药物主要用于抗菌消炎，如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等。
超标后果：长期摄入含磺胺类药物残留的动物性食品后，药物可不断在体内蓄积，造成泌尿系统损伤，引起结晶尿、血尿、管型尿。
3.硝基呋喃类药物主要用于抗菌消炎，如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。
超标主要引起胃肠反应和过敏反应。
剂量过大或肾功能不全者，可引起严重毒性反应。
4.抗寄生虫类药物主要用于驱虫或杀虫，如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等。
超标容易引起致畸和致突变，对于妊娠期的孕妇有可能发生胎儿畸形。
5.激素类药物主要用于提高动物的繁殖和加快生长发育速度，使用于动物的激素有性激素和皮质激素，超标的话，可能会影响消费者的正常生理机能，并具有一定的致癌性。
二、检测方法及原理（一）常用的方法有气相色谱法、高效液相色法、酶联免疫法、仪器联用法。
（二）检测原理样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测器检测，以保留时间定性，标准曲线法定量，也可以用标准加入法定量。
配制氟喹诺酮类药物的混合标准溶液，绘制标准曲线，根据标准曲线计算样品中各残留药物的含量。
三、兽药残留的国标解读国家标准里规定氟喹诺酮类残留限量为100ug/kg。
畜禽肉中兽药残留的测定(精)
《技能训练库》综合技能实训指导书实训项目名称畜禽肉中兽药残留的测定学时6学时实训目的1.熟练掌握高效液相色谱仪的使用方法。
2.学会NY/T 1025-14-2008测定动物性食品中氟喹诺酮类药物残留的方法。
一、原理用磷酸盐缓冲溶液提取试样中的药物，C18柱净化，流动相洗脱。
以磷酸-乙腈为流动相，用高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量。
二、仪器、物品分析天平，高效液相色谱仪（配荧光检测器），组织匀浆机，旋涡混合器，离心机，固相萃取柱，离心管，移液管。
牛肉。
试剂：1.5.0mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和液28mL，加水稀释至100mL。
2.0.03mol/L氢氧化钠溶液：取 5.0mol/L氢氧化钠液0.6mL，加水稀释至100mL。
3.0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液：取浓磷酸 3.4mL，用水稀释至1000mL。
用三乙胺调pH至2.4。
4.磷酸盐缓冲溶液：取磷酸二氢钾 6.8g，加水溶解稀释至500mL，用5.0mol/L氢氧化钠调节pH至7.0。
5.达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星标准工作液：准确量取适量标准储备液，用乙腈稀释成适宜浓度的标准工作液。
置2～8℃冰箱中保存，有效期1周。
三、操作步骤（一）称样准确称取3份牛肉样品（事先粉碎成肉糜）2±0.05g于50mL具塞离心管中，记录数据。
（二）提取准确移取20.0mL磷酸盐缓冲液在每份已称量好的牛肉样品中；将离心管置于漩涡振荡器上，中速振荡5min；用空离心管和纯化水在托盘天平上进行配平，然后高速离心（10000r，5min）；将上清液倒入25mL烧杯中，以备过柱用。
（三）净化将固相萃取柱在固相萃取仪上安装好，用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取 3.0mL共6.0mL的甲醇活化，再用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取 3.0mL共6.0mL的水进一步活化；取离心所得上清液 5.0mL过柱；用水 2.0mL清洗，挤干；用流动相 2.0mL洗脱；并用5mL试管收集洗脱液；用2mL的一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22μｍ有机系膜，直接装在样品瓶中，做好标记，供色谱测定。
兽药残留分析方法概述报告
前处理方法的建立
4、净化方法 1）液液萃取LLE 2）固相萃取SPE 3）固相微萃取（SPME） 4）制备色谱法（HPLC、TLC） 5）凝胶渗透色谱法（GPC） 6）吹扫-捕集（P&T） 7）膜分离技术 8）浸透限制固定相（RAS） 9）基质固相分散技术（MSPD） 10）免疫亲和柱（IAC） 11）分子印迹技术（MIPs) 12)其他技术
前处理方法的建立
5、浓缩与富集
-旋转蒸发浓缩 -气流吹蒸法
-浓缩器浓缩
-真空离心浓缩 浓缩过程组分最容易损失
前处理方法的建立
6、衍生化 -反应速度快 -容易重复 -定量完全、转化率稳定 -产物易纯化 -产物易于分离和检测 -GC衍生化方法 -HPLC衍生化方法 -衍生化方式： 柱前、柱后、固相衍生化、光化学衍生化
定量限：LOQ（limit of quantitation) 一般LOD≤0.2MRL LOD=B+10SD 一般CV ≤20%，回收率≥70%方法建立步骤 ຫໍສະໝຸດ
6、分析方法的评价 （4）线性范围 R≥0.9900，R2 （5）选择性 内源性物质的干扰 代谢物的干扰 其他药物的干扰 （6）与参比方法的分析结果比较 （7）实验室协同研究（collaborative study) -实际样品、添加样品 -一般3个实验室，影响方法至少8个 -考虑地域、气候、部门、行业等 7、分析方法报告 8、分析质量监控
浓度（ug/kg) 小于1 1-10 10-100 大于100
允许范围（%） 50-120 60-120 70-110 80-110
方法建立步骤
6、分析方法的评价 （3）检测限与定量限 检测限:LOD（limit of detection) 一般LOD≤0.1MRL LOD=B+3SD 不作定量可靠性要求（精密度、回收率等）
兽药残留的测定数据处理(精)
《肉品检测技术》课程教学设计项目肉制品中兽药残留的测定学时8学时任务高效液相色谱法学时4学时知识点（技能点）数据处理学时2学时教学内容结果计算、回收率及精密度计算教学目标技能目标能够准确计算出结果知识目标掌握计算结果的推导过程掌握掌握回收率和精密度的意义态度素质目标培养学生严谨认真的态度培养学生节约意识和安全意识教学重点回收率和精密度教学难点结果计算和精密度结果计算教学条件要求教材、图片、视频、技术标准教学方法与手段案例引入、讨论交流、启发引导等教学方法借助图片、视频等多媒体手段参考资料仪器分析冯建波化工出版社、百度文库教学内容设计步骤教学内容教学方法教学手段学生活动告知（教学内容、目的）介绍本次课学习重点、学习目的及本次教学内容的重要性讲授多媒体课件记录本次课重点内容引入（任务）以过度使用兽药的危害为例引入本次课内容案例引入、讨论交流课件、视频听讲、思考、讨论实施计算公式解析及回收率和精密度计算过程的讲解引导、启发、讨论图片、图谱听讲、思考、讨论深化（加深对基本能力的认识与体会）学生通过检测过程分析计算公式，并且练习计算结果、精密度和回收率讨论图谱、习题讨论、计算归纳学生总结计算过程中存在的问题引导、解答问题习题、PPT 讨论、归纳总结总结总结学生在操作过程中存在的不足、鼓励在实验过程中表现优秀的学生讲授PPT、计算结果听讲、思考作业根据兽药检测图谱及数据，计算结果，评价兽药是否超标考核与评价根据学生课堂表现及计算结果情况对本次课进行评价。
兽残检测
• 近年来国外许多研究表明，有抗菌药物残 留的动物源食品可对人类胃肠的正常菌群 产生不良的影响，使一些非致病菌被抑制 或死亡，造成人体内菌群的平衡失调，从 而导致长期的腹泻或引起维生素的缺乏等 反应。菌群失调还容易造成病原菌的交替 感染，使得具有选择性作用的抗生素及其 他化学药物失去疗效
• 动物用药后，一些性质稳定的药物随粪便、尿被 排泄到环境中后仍能稳定存在，从而造成环境中 的药物残留。高铜、高锌等添加剂的应用，有机 砷的大量使用，可造成土壤、水源的污染。杨居 荣等研究发现，砷对土壤固氮细菌、解磷细菌、 纤维分解菌、真菌和放线菌均有抑制作用。 Wollenberger L等发现喹乙醇对甲壳细水蚤的急 性毒性最强，对水环境有潜在的不良作用。 Strong L等报道了阿维菌素、伊维菌素和美倍霉 素在动物粪便中能保持8周左右的活性，对草原中 的多种昆虫都有强大的抑制或杀灭作用。另外， 已烯雌酚、氯羟吡啶在环境中降解很慢，能在食 物链中高度富集而造成残留超标
• 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行
平行试验测定。
• 空白试验 除不称取样品外，均按上述步
骤进行。
• 精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T
6379.1和GB／T 6379.2的规定确定的，其重复性 和再现性的值以95%的可信度来计算。
• 重复性 在重复性条件下，获得的两次独立测
试结果的绝对差值不超过重复性限r，畜禽肉中十 六种磺胺含量范围及重复性方程见表3。
• 是“兽药在动物源食品中的残留”的简称，根据 联合国粮农组织和世界卫生组织（FAO/WHO）食品 中兽药残留联合立法委员会的定义，兽药残留[1] 是指动物产品的任何可食部分所含兽药的母体化 合物及（或）其代谢物，以及与兽药有关的杂质。 所以，兽药残留既包括原药，也包括药物在动物 体内的代谢产物和兽药生产中所伴生的杂质 。
2016高职 氟喹诺酮类兽药残留检测数据处理操作规程(正式赛卷)
2016年全国职业院校技能大赛（高职组）农产品质量安全检测赛项畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留的检测数据处理操作规程注意事项：（1）数据处理时间为60分钟，到时立刻停止，不得作弊，否则成绩以零分处理。
（2）请根据手中的5份谱图：1份标准样品谱图、1份空白样品谱图和3份平行的未知样品谱图，对未知样品中的氟喹诺酮类抗生素进行定性及定量分析。
数据处理考核用的已有数据和谱图，与预处理操作的数据无关，请根据《畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留检测项目-数据记录表》中的已有数据和5份谱图进行计算。
（3）请将处理后的数据如实填写在《畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留检测项目-数据记录表》中。
（4）如需使用计算器，请使用windows自带的标准型计算器，不得使用科学型计算器。
（5）数据处理时，请依据本操作规程所提供的公式来进行。
1 采样（本阶段完成请举手示意裁判）准确称取3份牛肉样品（已由组委会事先粉碎成肉糜）2±0.05g于50mL具塞离心管中，记录数据；举手示意，由裁判在样品中统一加入混合抗生素标准溶液40μL。
数据记录表2 提取（本阶段完成请举手示意裁判）2.1 举手示意裁判来确认所加磷酸盐缓冲液体积，准确移取20.0mL磷酸盐缓冲液在每份已称量好的牛肉样品中；2.2 将离心管置于漩涡振荡器上，中速振荡5min；2.3 用空离心管和纯化水在托盘天平上进行配平，然后高速离心（10000r，5min）；- 3 -- 2 -2.4 将上清倒入25mL 烧杯，以备过柱用； 3 整理3.1 清洗所用器皿； 3.2 等待下半场考核。
4 净化4.1 将Waters HLB 3cc 60mg 在固相萃取仪上安装好，用5mL 的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL 共6.0mL 的甲醇活化，再用5mL 的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL 共6.0mL 的水进一步活化。
4.2 举手示意裁判来确认所加上清液体积，移取离心所得上清液5.0mL 过柱； 4.3 用水2.0mL 清洗，挤干；4.4 举手示意裁判来确认所加流动相体积，用流动相2.0mL 洗脱；并用5mL 试管收集洗脱液； 4.5 用2mL 的一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22μm 有机系膜，直接装在样品瓶中，并编号，待检。
兽药残留的测定
兽药残留的测定
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三. 兽药残留分析技术概述
兽药残留分析技术的特点
待测物质浓度低 样品基质复杂，干扰物质多 兽药残留代谢产物多样或不明 动物种类多样，对药物代谢存在差异
兽药残留的测定
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对检测方法的要求
快速 高通量(high throughput) 定量 准确度和精确度(accuracy & precision) 确证(unequinocal identification) 法定的和QC
❖ 磺胺类药物在色谱柱上的保留值不仅受流动相的极性影响， 还会受磺胺类药物的解离形式的影响，因此，流动相的 pH值对色谱分离的效果起重要作用。
❖ 检测方法主要有UV，FLD，DAD，或者MS。其中UV检 测器是最常用的检测方法，波长一般在270-280 nm，有时 用255 nm。荧光检测（FLD）的激发波长一般为405-420 nm，发射波长一般为485-495 nm。二极管阵列检测 （DAD）常采用267、268或263 nm。MS由于其高特异性， 一般用于确证实验。
兽药残留的测定
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激素样作用
➢ 对内分泌功能的影响 ➢ 对生育能力的影响 ➢ 儿童性早熟
过敏反应
➢ 青霉素类、四环素类、磺胺类等
兽药残留的测定
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对人类肠道微生物的影响
➢ 破坏或抑制人体胃肠菌群中敏感菌的生长。 ➢ 导致条件性病原菌的大量繁殖或体外病原菌侵入肠道。 ➢ 改变肠道菌群的代谢活性，使菌群改变药物和食物固有活
❖ 欧盟第675/92号令中规定了，在肉类及牛奶中磺胺的最大残 留总量不得超过100 µg·kg-1；
❖ 日本要求的最高残留限量更严格，单个磺胺残留限量为20 µg·kg-1 ，最大残留总量不得超过100 µg·kg-1；
兽药残留分析方法概述报告-PPT课件
前处理方法的建立
1、概述 目的：分离-检测 基本内容： 提取、净化、浓缩、衍生化
2、样品预处理 采集 制备 贮存
前处理方法的建立
3、提取方法 1） 样品种类 尿液、血浆、胆汁、奶、蛋、动物组织（肉、肝、
肾等）
2）提取溶剂 -相似相溶原则 -一般采用乙腈、甲醇和丙酮等水溶性溶剂 -混合溶剂，增加选择性
方法建立步骤
2、建立测定方法 紫外可见（UV/Vis)、红外（IR）、荧光（Fluor）、核磁共 振（NMR）、质谱（MS）等 3、建立样品处理方法 ——最为重要的步骤 提取、净化、浓缩、衍生化 4、标准曲线（定量手段） 外标法 内标法（质谱一般用待测物的稳定同位素标记物）
方法建立步骤
前处理方法的建立
3）提取方法 -组织捣碎法（homogenization) -振荡法(shaking) -索氏提取法(Soxhlet extraction) -超声波辅助提取（SAE） -超临界流体萃取（SFE） -强化溶剂萃取（ASE） -微波辅助萃取（MAE） -消解法：酸消解、碱消解、酶消解 -其他技术：冷冻干燥、制备干混物、起泡分离
浓度（ug/kg) 小于1 1-10 10-100 大于100
允许范围（%） 50-120 60-120 70-110 80-110
方法建立步骤
6、分析方法的评价 （3）检测限与定量限 检测限:LOD（limit of detection) 一般LOD≤0.1MRL LOD=B+3SD 不作定量可靠性要求（精密度、回收率等）
精密度的要求： 待测物浓度(mg/kg) 100 10 1 0.1 0.01 0.001 0.0001
食品中兽药残留的检测技术(常用版)
食品中兽药残留的检测技术（常用版）(可以直接使用，可编辑完整版资料，欢迎下载）一、食品中兽药残留的检测技术我国食品安全检测主要应用技术的研究及现状食品工业科技VOL24，（12），2003张志洁林清玉现状分析随着集约化畜牧业的发展，兽药的作用范围也在扩大，有的药物如抗生素、磺胺药、激素等已广泛用于促进畜禽的生长、减少发病率和提高饲料利用率、促进同期发情。
在饲料添加剂中，抗生素用量占有相当大的比重。
兽药的广泛应用使畜牧业在增产的同时，也带来了兽药残留的问题。
八十年代，欧美等国已开始建立了兽药残留检测体系，并制定了较为完善的兽药用量、休药期及有关法律法规。
我国兽药残留检测体系尚不够完备，时常发生因畜产品中药物残留超标而被外国拒绝进口的事件，给我国农产品出口造成很大的经济损失。
“十五”期间，我国将重点加强兽药监察体系和兽药残留检测体系的建设。
农业部每年投入1755 万元用于兽药残留监控，发展了近75 种单个兽药在饲料监控和动物源食品中残留的测定方法。
国家质检总局每年也投入大量资金，针对出口和欧盟监控的需要，建立一些兽药残留的检测方法。
但对于某些禁用兽药（主要是")兴奋剂和激素），其分析方法的灵敏度尚不能满足需要，或大量监控的成本难以承受。
克伦特罗（瘦肉精）的检测方法欧盟和美国FDA立法禁止克伦特罗在肉用畜禽中的使用;规定牛和马肝中的最大残留限量必须小于0.5µg/kg。
我国2001年也实施了鲜冻禽产品不准检出克伦特罗的标准。
对于克伦特罗，农业部已经颁布了采用高效液相色谱筛选和气)质联机验证的饲料测定方法（NY428-2001），但未使用国际认可的确证方法（稳定性同位素稀释技术）。
卫生部组织了肉中克伦特罗中毒控制方法的探索研究，营养与食品安全所和北京市疾病控制中心分别建立了HPLC-紫外与电化学检测方法和GC-MS 方法，正在探索HPLC-MS/MS串联检测方法。
营养与食品安全所、南京农大、华中农大和河南农科院均进行了ELISA试剂盒国产化的研究。
畜禽肉中兽药残留的测定(精)
将固相萃取柱在固相萃取仪上安装好，用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL共6.0mL
的甲醇活化，再用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL共6.0mL的水进一步活化；取离心所得上清液5.0mL过柱；用水2.0mL清洗，挤干；用流动相2.0mL洗脱；并用5mL试管收集洗脱液；用2mL的一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22μm有机系膜，直接装在样品瓶中，做好标记，供色谱测定。
三、操作步骤
（一）称样
准确称取3份牛肉样品（事先粉碎成肉糜）2±0.05g于50mL具塞离心管中，记录数据。
（二）提取
准确移取20.0mL磷酸盐缓冲液在每份已称量好的牛肉样品中；将离心管置于漩涡振荡器上，中速振荡5min；用空离心管和纯化水在托盘天平上进行配平，然后高速离心（10000r，5min）；将上清液倒入25mL烧杯中，以备过柱用。
四、注意事项
1.计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
2.空白试验：除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
二、仪器、物品
分析天平，高效液相色谱仪（配荧光检测器），组织匀浆机，旋涡混合器，离心机，固相萃取柱，离心管，移液管。牛肉。
试剂：
1.5.0mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和液28mL，加水稀释至100mL。
2.0.03mol/L氢氧化钠溶液：取5.0mol/L氢氧化钠液0.6mL，加水稀释至100mL。
（五）结果计算
式中X——试样中被测兽药残留量，ng/g；
Cs——对照溶液中相应药物的浓度，ng/mL；
A——试样溶液中相应药物的峰面积；
As——对照溶液中相应药物的峰面积；
m——试样质量，g；
兽药残留检测-操作流程.
畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留的检测操作流程
竞赛内容具体分为三个环节，第一部分 为样品预处理，侧重采样、样品提取、样品净 化；第二部分为上机检测，统一由第三方检测 机构检测，不计分；第三部分为数据处理，测 定结果由参赛人员根据仪器测定数据（打印图 谱）进行数据处理计算，填写检测记录。
畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留的检测操作流程
畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留的检测操作流程
第三环节为数据处理
项目
考核内容 样品预处理
采样 提取
考核重点
分值比 例
分析天平的正确使用；达到熟练程 度。
5%
移液管的正确使用、离心机的正确 使用；操作过程中不得污染试剂； 15% 熟练操作。
畜禽肉 中氟喹 诺酮类 兽药残 留的检
测
净化
数据处理
上机检测 其他操作
第一环节：样品预处理（侧重制样、样品提取、样品净化）
1.供试样品：根据公告（1025号公告）试料包括：供 试样品、空白样品、添加样品，样品需事先绞碎，建 议仅做供试猪肉样品，（将空白样品事先添加一定浓 度氟喹诺酮类药品，作为供试盲样）——因此中心需 事先购买试样，按照公告方法进行预实验，确定空白 样品，仪器灵敏度，选择盲样添加氟喹诺酮药品浓度 （本法检测限为20微克/千克，线性范围20微克/千克50020微克/千克）。——此步骤选手动作：称取样品 （2±0.05g） 2.样品提取：匀浆1 min--震荡5min--离心5min--残液 震荡5min--离心5min合并两次提取液，涡旋混匀。 3.样品净化：HLB小柱预洗--上样--淋洗--洗脱—滤膜 过滤
畜禽肉中氟喹诺酮类兽药 残留的检测操作流程
贮藏技术
1 样品预处理 2 上机检测 3 数据处理
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计算公式解析及回收率 和精密度计算过程的讲 解引ຫໍສະໝຸດ 、启发、讨论图片、图谱
听讲、思考、讨论
食品营养与检测专业教学资源库
耳lj»>4:山・11火除仙谢U\-icliiiiri HiwurveUm闻呻则
深化（加深对 基本能力的 认识与体会）
学生通过检测过程分析 计算公式，并且练习计 算结果、精密度和回收 率
食品营养与检测专业教学资源库
耳lj»>4：iii>l IJvije>.ii>mi UY-icliiiiriKvs^ur* IJmrN冲m
《肉品检测技术》课程教学设计
项目
肉制品中兽药残留的测定
学时
8学时
任务
咼效液相色谱法
学时
4学时
知识点（技能 点）
数据处理
学时
2学时
教学内容
结果计算、回收率及精密度计算
讨论
图谱、习题
讨论、计算
归纳
学生总结计算过程中存
在的问题
引导、解答
问题
习题、PPT
讨论、归纳总结
总结
总结学生在操作过程中 存在的不足、鼓励在实 验过程中表现优秀的学 生
讲授
PPT计算结果
听讲、思考
作业
根据兽药检测图谱及数据，计算结果，评价兽药是否超标
考核与评价
根据学生课堂表现及计算结果情况对本次课进行评价
借助图片、视频等多媒体手段
参考资料仪器分析冯建波化工出版社、教学内容设计步骤
教学内容
教学方法
教学手段
学生活动
告知（教学
内容、目的）
介绍本次课学习重点、
学习目的及本次教学内
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讲授
多媒体课件
记录本次课重点内
容
引入（任务）
以过度使用兽药的危害
为例引入本次课内容
案例引入、
讨论交流
课件、视频
听讲、思考、讨论
教学目标
技能目标
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知识目标
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掌握掌握回收率和精密度的意义
态度素质目标
培养学生严谨认真的态度
培养学生节约意识和安全意识
教学重点
回收率和精密度
教学难点
结果计算和精密度
结果计算
教学条件要 求
教材、图片、视频、技术标准
教学方法与 手段
案例引入、讨论交流、启发引导等教学方法