隐球菌实验室检测

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隐球菌病的实验室检测的临床研究进展分析

隐球菌病的实验室检测的临床研究进展分析发布时间：2021-12-24T08:47:07.857Z 来源：《健康世界》2021年21期作者：龙安[导读] 隐球菌病好发于免疫力低下人群，发病缓慢，临床表现不典型，龙安柳州市中医医院检验科，广西柳州545001【摘要】隐球菌病好发于免疫力低下人群，发病缓慢，临床表现不典型，患者感染后难以察觉，容易延误最佳治疗时机。

近年来，临床检测技术发展和进步，对隐球菌认识的增加，使隐球菌病检出率显著提升，同时该疾病实验室检测手段、药敏试验、治疗手段均有较大的进展。

对此，文章总结近几年隐球菌病的实验室检测的临床研究，以提高临床和实验室检测对隐球菌的认识，加强隐球菌病诊断和治疗效果。

【关键词】隐球菌病；实验室检测；研究进展隐球菌病是因隐球菌入侵肺部而感染人体的散播性感染性疾病，大部分病菌局限于肺部，当人体免疫能力下降时，部分病原菌会随血液传播扩散至其他组织和器官，其中皮肤和中枢神经系统是继发感染的常见部位。

目前，隐球菌传播途径尚未明确，传播媒介一般为鸽子粪，人与人之间传播少见。

隐球菌病患者临床表现主要为低热、胸痛、咳嗽、恶心、呕吐等，缺乏特异性，难以根据临床症状检出该疾病[1]。

随着病原菌扩散，会对神经细胞、皮肤、脏器和脊柱造成损伤，威胁患者的生命。

隐球菌病无特效药治疗，只能通过对症治疗缓解病情，抑制病原菌的扩散。

据报道，2014年隐球菌病性脑膜炎患者约22万例，其中死亡率为81.82%左右。

可见，隐球菌病继发感染疾病会增加患者的死亡风险。

对此，临床应加强隐球菌病早期诊断，及时发现病情，阻止病情恶化。

由于隐球菌病临床症状、影像学特征与肺癌、肺结核、肺炎具有相似性，诊断具有一定的难度。

因此，文章总结该疾病的实验室检测研究进展，为临床深入认识和诊断该疾病提供参考。

1.隐球菌的分类隐球菌是一种环境腐生菌，主要从鸽子粪和土壤中分解，隐球菌至少37个种类，其中格特隐球菌、新型隐球菌是入侵感染人体的常见隐球菌。

隐球菌的实验室鉴定方法

隐球菌的实验室鉴定方法：
隐球菌的实验室鉴定方法主要包括以下几种：
1.墨汁染色法：取新鲜标本（如脑脊液）少许，置于载玻片上，滴加印度墨汁或优质
国产墨汁并覆以盖玻片，显微镜暗视野下找见圆球形菌体，菌体周围有一圈肥厚荚膜，折光性强，即为阳性。

多次查找可提高阳性率。

2.尿素酶试验：新型隐球菌可产生尿素酶，而白色念珠菌为阴性。

3.糖同化及发酵试验：新型隐球菌、浅白隐球菌等可同化纤维二糖、肌醇等，但均不
能发酵糖类。

4.酚氧化酶试验：接种左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基，经2～5d，新型隐球菌呈
棕黑色菌落。

5.真菌培养：将新鲜标本接种于沙保弱培养基中，在适宜温度下培养3-4d可形成肉眼
可见的菌落。

可进一步挑取菌落做质谱鉴定，从而确证是否为隐球菌。

6.血清学检查：由于患者血清中可测到的抗体不多，因此检测抗体阳性率不高，特异
性不强，仅作辅导诊断。

通常检测新型隐球菌荚膜多糖体抗原，以乳胶凝集试验灵敏而特异，且有估计预后和疗效的作用。

7.病理学检查：视病期及受累器官而异。

在脑组织内可以无组织反应而仅见胶样黏液
性水肿。

脑膜呈慢性、非特异性化脓性炎症反应，伴大量淋巴细胞及浆细胞浸润。

慢性病灶中可见结核性肉芽肿样表现。

组织内可见菌体。

隐球菌的检测方案

隐球菌的检测方案引言隐球菌（Cryptococcus）是一类常见的真菌，可以在土壤、植物和鸟粪中找到。

其中一种称为隐球菌黑变种（Cryptococcus neoformans var. neoformans）是人类、动物和鸟类的常见致病菌之一。

感染隐球菌引起的疾病被称为隐球菌病，可在免疫系统受损的人群中引起严重的肺部和神经系统感染。

为了准确地检测隐球菌的存在以及了解其流行病学特征，本文将介绍一种可行的隐球菌检测方案。

材料与方法样品采集采集样品的选择是隐球菌检测方案的第一步。

可以选择多种样品来源，包括环境样品、生物样本等。

常见的环境样品包括土壤、植物表面、鸟粪等，而生物样本可以包括人体组织、体液和动物组织等。

样品处理样品采集后，需要进行适当的处理以提取隐球菌的DNA或RNA。

对于环境样品，可以采用物理方法，如抖动和离心等，来分离悬浮在样品中的菌体。

对于生物样本，可以通过离心等方式分离出菌落并进行处理。

此外，还可以使用DNA/RNA提取试剂盒来提取样品中的核酸。

PCR扩增PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，可用于扩增目标DNA 片段。

在隐球菌的检测中，可以设计引物以特异性地扩增目标隐球菌的DNA。

PCR 反应体系包括隐球菌DNA样品、引物、酶和缓冲液等。

通过PCR扩增可以获得一系列扩增产物。

凝胶电泳分析凝胶电泳是一种常用的生物分析技术，可用于分离和检测DNA分子。

将PCR 扩增产物与DNA分子大小标准品一起加载到琼脂糖凝胶上，并施加电场使DNA分子迁移。

通过观察凝胶电泳图谱，可以判断样品中是否存在目标隐球菌DNA。

测序与比对如果需要进一步确认检测结果，可以对PCR扩增产物进行测序分析。

利用测序仪对PCR产物进行测序，并将测序结果与数据库中的隐球菌序列进行比对，以确定检测到的DNA是否与隐球菌匹配。

数据分析与结果解读对于得到的测序结果，可以利用生物信息学软件进行数据处理和分析。

可以比对数据库中的序列，进行物种鉴定，并分析隐球菌的遗传变异情况。

颅内新型隐球菌感染联合检测在实验诊断中的应用

颅内新型隐球菌感染联合检测在实验诊断中的应用摘要】目的：探讨临床实验室常用的几种检测方法在早期新型隐球菌性脑膜炎诊断中的临床应用价值；方法：以脑脊液墨汁染色阳性和/或脑脊液真菌培养鉴定为新型隐球菌作为确诊新型隐球菌脑膜炎的金标准。

对37例新型隐球菌脑膜炎患者1次或多次腰穿脑脊液，同时以单纯墨汁染色、脑脊液培养、胶体金法、墨汁染色联合脑脊液培养方法分别检测脑膜炎新型隐球菌。

结果：单纯墨汁染色和单纯脑脊液培养初次腰穿检出率(48.6% vs 56.8%)比较无明显差异（P>0.05）。

墨汁染色联合脑脊液培养(81.1%)较上述两种方法单独检测初次腰穿检出率均显著增高（P<0.05），与胶体金法(94.6%)比较无明显差异（P>0.05），但胶体金法初次腰穿检出率看似更高一些。

胶体金法在2例非隐球菌性脑膜炎标本中出现假阳性。

结论：脑脊液墨汁染色联合脑脊液培养较该两种方法分别单纯检测明显提高新型隐球菌初次腰穿的检出率，该联合检测可做为颅内新型隐球菌感染灵敏、特异的实验室检测方法在临床早期诊断中应用。

胶体金法首次腰穿检出率最高，其阳性高度提示了新型隐球菌脑膜炎感染，但应注意假阳性的可能。

【关键词】颅内新型隐球菌感染；检测；应用价值【中图分类号】R742【文献标识码】A1、资料和方法1.1病例来源2010年1月～2015年10月在承德医学院附属医院住院确诊为新型隐球菌脑膜炎的37例患者。

所有检测标本为上述患者脑脊液标本。

以脑脊液墨汁染色阳性和、或脑脊液真菌培养鉴定为新型隐球菌作为确诊新型隐球菌脑膜炎的金标准。

1.2仪器试剂梅里埃VITEK 2 compact全自动细菌鉴定仪及YST酵母菌鉴定卡；梅里埃BACT/ALERT 3D全自动血培养仪及配套儿童型微生物培养瓶；IMMY公司CrAg Lateral Flow Assay隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）；珠海贝索公司印度墨汁染色试剂盒；温州康泰沙氏培养基及念珠菌鉴别琼脂。

隐球菌病确诊标准

隐球菌病确诊标准
一、临床表现
隐球菌病患者通常会出现发热、咳嗽、咳痰、胸痛、恶心、呕吐、头痛、脑膜炎等症状。

此外，患者还可能出现其他系统的表现，如皮肤损害、肺部感染等。

二、实验室检查
1. 血液培养：血液中培养出隐球菌是确诊隐球菌病的主要依据。

多次血培养阳性可提高诊断的准确性。

2. 脑脊液培养：对于怀疑有中枢神经系统感染的患者，脑脊液培养出隐球菌也是确诊的依据。

3. 痰液培养：对于怀疑有肺部感染的患者，痰液培养出隐球菌也可以作为诊断的依据。

4. 其他标本培养：如尿液、粪便、组织等也可以用于隐球菌的培养，但阳性率相对较低。

三、病理学检查
病理学检查发现组织切片中存在隐球菌也是确诊隐球菌病的重要方法。

在病理切片中，可以看到隐球菌形成的荚膜和菌体周围形成的空洞。

综合以上三个方面，如果一个患者具有临床表现，且实验室检查和病理学检查均发现隐球菌的存在，即可确诊为隐球菌病。

新型隐球菌墨汁染色步骤-概述说明以及解释

新型隐球菌墨汁染色步骤-概述说明以及解释1.引言1.1 概述隐球菌是一种普遍存在于自然环境中的真菌，它们可以引起隐球菌病，这是一种严重的感染性疾病。

隐球菌墨汁染色是一种常用的实验方法，用于快速检测和鉴定隐球菌的存在。

通过染色，可以使隐球菌在显微镜下更加清晰可见，从而提高诊断效果。

隐球菌墨汁染色步骤主要包括样本制备、染色操作和显微镜观察。

首先，需要采集合适的样本，比如体液或组织切片，然后进行固定和固化处理，以保持细胞的形态和结构。

接下来，将样本进行染色，常用的染色剂是隐球菌墨汁，它可以特异性地染色隐球菌。

在染色过程中，需注意控制染料浓度和染色时间，以确保染色效果的准确性和稳定性。

最后，利用显微镜观察染色后的样本，观察到隐球菌的形态特征，如菌落颜色和形状等，从而判断样本中是否存在隐球菌。

隐球菌墨汁染色的优点是操作简单、成本低廉且结果可靠。

然而，也有一些限制，比如可能存在假阳性结果和染色结果的主观性等。

因此，在进行隐球菌墨汁染色时，应注意控制实验条件，确保染色结果的可靠性和准确性。

总而言之，隐球菌墨汁染色是一种常用的实验方法，用于快速检测和鉴定隐球菌的存在。

在实际应用中，我们需要掌握正确的操作步骤和注意事项，以提高染色效果和准确性。

未来，随着科技的不断进步，相信隐球菌检测方法会变得更加快速、准确和可靠。

1.2文章结构文章结构部分的内容可以按照以下方式编写：文章结构部分是对整篇长文的组织和布局进行介绍。

它描述了该文本的主要节（章节）的结构和内容，以帮助读者了解文章的框架和逻辑顺序。

本文将按照以下结构来组织内容：第一节引言部分概述了本文的主要内容和目的。

将介绍什么是隐球菌墨汁染色以及其在实验或临床应用中的重要性和作用。

同时，还会对文章的整体结构和框架进行简单介绍，为读者提供整个阅读过程的指南。

第二节正文部分将详细介绍新型隐球菌墨汁染色步骤的要点。

其中，2.1节将重点介绍染色步骤的要点1，可能包括准备实验材料、处理样本、选择合适的染色方法等内容。

隐球菌的实验室鉴定方法

隐球菌的实验室鉴定方法摘要：一、引言二、隐球菌的实验室鉴定方法1.涂片镜检2.生化试验3.血清学试验4.分子生物学方法三、各种方法的优缺点及适用范围四、我国隐球菌实验室鉴定现状及展望五、结论正文：一、引言隐球菌（Cryptococcus）是一类广泛存在于自然环境中的酵母型真菌，可以在人体内引起隐球菌病。

随着近年来免疫抑制剂的应用和器官移植等医疗技术的不断发展，隐球菌病的发病率逐渐上升。

早期诊断和准确鉴定隐球菌对临床治疗和预后具有重要意义。

本文将对隐球菌的实验室鉴定方法进行综述，以期为临床实验室提供参考。

二、隐球菌的实验室鉴定方法1.涂片镜检涂片镜检是隐球菌实验室鉴定的常用方法。

通过将患者标本涂抹在载玻片上，用瑞氏染色或墨汁染色后镜检，观察菌落的形态、颜色和结构。

此方法操作简便，但准确性受染色效果和检验人员经验影响，容易出现误诊。

2.生化试验生化试验是通过对隐球菌的代谢产物进行鉴定，从而判断其种属。

常见的生化试验包括糖酵解、产氨、氧化酶试验等。

生化试验可以快速初步鉴定隐球菌，但特异性较低，难以区分同属不同种的隐球菌。

3.血清学试验血清学试验是通过检测患者血清中抗隐球菌抗体，从而判断患者是否感染隐球菌。

常用的血清学方法有免疫荧光法、酶联免疫吸附法等。

血清学试验具有较高的敏感性和特异性，但需患者血清样本，且存在假阳性或假阴性的情况。

4.分子生物学方法分子生物学方法通过对隐球菌的基因进行检测，从而实现对其种属和基因型的鉴定。

常用的分子生物学方法有PCR、实时荧光定量PCR、DNA测序等。

分子生物学方法具有较高的准确性，但操作复杂，对实验室设备要求较高。

三、各种方法的优缺点及适用范围涂片镜检适用于快速初步鉴定，但准确性较低；生化试验快速初步鉴定，但特异性较低；血清学试验具有较高的敏感性和特异性，但需患者血清样本；分子生物学方法具有较高的准确性，但操作复杂。

在实际应用中，可根据实验室条件和个人需求，选择合适的鉴定方法。

隐球菌脑膜炎的实验室检测

隐球菌脑膜炎的实验室检测首都医科大学附属北京地坛医院王慧珠一、新型隐球菌的特点新型隐球菌广泛分布于自然界中，鸽子粪是主要传染源。

圆形、卵圆形，菌体为宽厚的荚膜包裹；不形成菌丝和孢子；出芽生殖。

分 A 、 B 、 C 、 D 四个血清型。

A型最多见。

致病菌属包括 17 个种和 8 个变种，主要是新型隐球菌新生变种和格特变种，已报道引起人类疾病的还有浅黄隐球菌、浅白隐球菌和罗伦隐球菌，但是很少见。

二、致病性新型隐球菌为条件致病菌，免疫功能低下者为高发人群，但也可发生在免疫功能正常人。

白血病、恶性肿瘤、艾滋病、 SLE 、尿毒症患者。

长期广谱抗生素、激素、免疫抑制剂使用者更易感染。

隐球菌侵入肺部后，局部病变进展缓慢，病变轻微，常无临床症状，但有 20% 以上的病例可由此经血进入中枢神经系统，导致隐球菌性脑膜炎的发生。

三、临床表现（一）起病缓慢、可呈亚急性，潜伏期 2-4 周。

（二）脑膜炎的表现：意识障碍，头痛、发热（以不规则热多见）。

（三）颅内压的表现，可有颅神经损害。

（四）未经治疗病情逐渐恶化（五）血常规正常（六）腰穿：压力增高明显，脑脊液外观透明或微混，白细胞轻中度增多（ 40-400/ul) ，以淋巴细胞为主。

蛋白轻度升高，糖减低，氯化物轻中度减低。

四、其他部位隐球菌病（一）肺隐球菌病（二）皮肤隐球菌病（三）骨隐球菌病五、新型隐球菌对 CNS（中枢神经系统）具有亲和力？机理可能和脑脊液中有隐球菌所需要的天门冬酰胺、肌酸内酰胺等刺激真菌生长的营养因子有关。

六、特殊宿主的隐球菌病隐球菌病是 AIDS 病人最重要的也是致命的真菌感染并发症，在 AIDS 人群中，发病率可达 6% ～ 10% ，而在中部非洲地区可高达 15% ～ 30% ，这可能与发达国家对于AIDS 合并机会感染控制水平有关，即早发现、早治疗。

AIDS 病人患隐球菌病的临床表现与其他免疫受损的病人相似，然而，感染部位常含有更多的菌体， 80% 以上的病人在做出诊断时已有脑膜炎或脑膜脑炎，且病变更广泛。

隐球菌荚膜多糖抗原定量

隐球菌荚膜多糖抗原定量
隐球菌荚膜多糖抗原定量是指通过定量检测隐球菌荚膜多糖抗原的方法，来诊断和监测隐球菌感染的一种实验室检测手段。

隐球菌是一种常见的真菌，可引起各种器官和组织的感染，其中最常见的是肺部感染。

隐球菌荚膜多糖抗原是隐球菌的一种特异性抗原，可在感染后释放至血液中，因此通过检测该抗原的含量，可以辅助诊断隐球菌感染。

隐球菌荚膜多糖抗原定量的常见方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫分析（CLIA）和免疫荧光法等。

这些方法通过特异性抗体与抗原的结合反应，能够快速、准确地检测血液中隐球菌荚膜多糖抗原的含量。

一般来说，如果血液中隐球菌荚膜多糖抗原含量升高，可能提示存在隐球菌感染。

但需要注意的是，该项检测仅作为辅助诊断的指标之一，并不能完全确定感染的具体病原体。

确诊仍需结合临床表现、微生物学检查和其他相关检查结果进行综合分析。

最后概括起来，隐球菌荚膜多糖抗原定量是用来检测血液中隐球菌荚膜多糖抗原含量的实验室检测方法，有助于诊断和监测隐球菌感染。

CrAg+LFA操作规程SOP-170420

附3 隐球菌抗原检测（胶体金免疫层析法）操作规程1. 检验目的隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）应用免疫层析法对脑脊液（CSF）中隐球菌多个种属（包括新型隐球菌和格特隐球菌）的荚膜多糖抗原进行定性检测，隐球菌病辅助诊断的一种实验室分析方法。

2. 检测原理隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）是一种“三明治”夹心免疫层析试纸条检测试验。

样本和样本稀释液加入到合适的容器中，例如试管，并将试纸条也放入该容器中。

检测中样本通过毛细作用层析至金标抗隐球菌抗原捕获单抗和位于检测膜上的金标对照抗体。

如果样本中有隐球菌抗原存在，它将与金标抗隐球菌抗体结合。

该金标抗体- 抗原复合物继续通过毛细作用在膜上层析并与包含固定化抗隐球菌单抗的检测条带反应。

金标抗体- 抗原复合物在检测条带处形成“三明治”结构并显示一条可见的检测条带。

只要有正常的层析和试剂反应，任何阳性或阴性样本的层析都会使金标对照抗体移动至对照条带处。

对照条带处固定化的抗体将与金标对照抗体结合，形成一条可见的对照条带。

阳性检测结果将出现两个条带（检测条带和对照条带）。

阴性检测结果仅出现一条带（对照条带）。

如果未出现对照条带，则该检测无效。

3. 仪器移液器，计时器，一次性微离心管、试管或者微滴定板。

4. 标本4.1标本：为获得最理想的结果,应使用无菌非溶血的样本。

按照无菌操作收集脑脊液样本。

如果样本处理过程中出现延误,可以在2-8°C最多放置72 小时。

脑脊液在不反复冻融的情况下可以在-20°C以下保存更长时间；运输过程中应保存在2-8°C或者-20°C以下。

4.2不合格标本处理：如送检标本系非无菌、溶血标本或空管，应立即与送检病房或门、急诊电话联系，重新留取合格标本送检。

5.试剂隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）（美国IMMY公司产品：货号CR2003）6.操作步骤6.1 定性检测6.1.1将1滴或40µL样本稀释液（货号GLF025）加入到适量的容器中（如一次性微离心管，试管或微滴定板等）。

隐球菌抗原快速检测的临床应用

• 2018年5月7日外院胸部CT
结论：1.右下肺多形病变：结核？2.左侧肾上腺内侧支结节灶：腺瘤？其它？
第一次入院实验室检查（结核科2018-05-14）
• 血常规：WBC 7.49× 109/L，N 79.7%；RBC 4.42× 1012/L，Hb 125g/L；PLT 251× 109/L
收录指南
共识中声明，隐球菌荚膜多糖抗原的存在是肺侵袭性隐球菌病的的确诊证据之一。
隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）原理（美国IMMY公司）
特点
• 无需样本预处理 • 10分钟得到结果 • 定性或半定量测定 • 结果客观 • 血清，脑脊液，血浆
样本收集及制备
• 按照无菌操作收集脑脊液、血浆和血清样本。 • 样本最多可以在 2-8℃放置 72 小时。 • 不反复冻融的情况下，样本可以在-20℃以下保存更长时间。 • 样本在运输过程中应保持在 2-8℃或者-20℃以下。
1. 墨汁染色：
是诊断隐球菌脑膜炎最简便快速的方法，但敏感性差，阳性检出率很低。
2. 脑脊液或血液培养（金标准）：
阳性检出率低，培养（2-10天）及鉴定时间长，易误诊。
3. 抗原检测试验：
脑脊液和血清样本抗原检测的敏感性可达到97%和87%*，能实现早期快速诊断，但费用高。
隐球菌荚膜多糖抗原GXM (Glucuronoxylomannan, GXM) ：
病学
早期隐球菌感染临床表现缺乏特异性，脑脊液变化不典型，但是当发展为隐球菌性脑膜炎时，死亡率可达到20%。
新型隐球菌感染可发生于全身多个部位，最常见的感染主要发生在中枢神经系统、肺部、皮肤等。
早期、快速、准确地诊断很有必要！
病原1 体穿越血2脑屏障的方式3

新型隐球菌实验报告注意

一、实验目的本次实验旨在了解新型隐球菌的生物学特性，包括菌落特征、培养特性、形态学特征等，为新型隐球菌的鉴定、诊断和治疗提供实验依据。

二、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）新型隐球菌菌种：由实验室提供。

（2）实验培养基：沙保氏培养基、血琼脂培养基。

（3）实验试剂：墨汁、生理盐水、乳酸酚棉蓝染色液等。

2. 实验仪器：（1）恒温培养箱。

（2）显微镜。

（3）离心机。

（4）高压蒸汽灭菌器。

三、实验方法1. 菌落培养（1）将新型隐球菌菌种接种于沙保氏培养基和血琼脂培养基。

（2）将接种好的培养基置于37℃恒温培养箱中培养。

（3）观察菌落生长情况，记录菌落特征。

2. 形态学观察（1）将培养好的菌落用生理盐水洗下，制成悬液。

（2）取少量悬液滴于载玻片上，用墨汁染色。

（3）在显微镜下观察菌体形态、大小、出芽情况等。

3. 分离纯化（1）将新型隐球菌菌落接种于沙保氏培养基和血琼脂培养基。

（2）将接种好的培养基置于37℃恒温培养箱中培养。

（3）观察菌落生长情况，挑取单菌落进行纯化。

4. 病原学检测（1）将纯化后的菌种接种于沙保氏培养基和血琼脂培养基。

（2）观察菌落生长情况，记录菌落特征。

（3）将培养好的菌落用生理盐水洗下，制成悬液。

（4）取少量悬液滴于载玻片上，用乳酸酚棉蓝染色液染色。

（5）在显微镜下观察菌体形态、大小、出芽情况等。

四、实验结果1. 菌落培养（1）沙保氏培养基：菌落呈白色、圆形、湿润、表面光滑，边缘整齐。

（2）血琼脂培养基：菌落呈白色、圆形、湿润、表面光滑，边缘整齐。

2. 形态学观察（1）菌体呈球形，直径5-20μm，出芽繁殖，不形成假菌丝。

（2）菌体周围有肥厚的荚膜，折光性强，一般染料不易着色。

3. 分离纯化（1）沙保氏培养基：菌落呈白色、圆形、湿润、表面光滑，边缘整齐。

（2）血琼脂培养基：菌落呈白色、圆形、湿润、表面光滑，边缘整齐。

4. 病原学检测（1）菌体呈球形，直径5-20μm，出芽繁殖，不形成假菌丝。

新生隐球菌感染12例临床特点及实验室检测的回顾性分析

・
１４・５
中国真菌学杂志２１０１年６月第６卷第３期
ＣｉＭｙｏ，ｕｅ２１，ｏ６Ｎ．ｈｎＪｃｌＪｎΒιβλιοθήκη ０ｌＶｌ，ｏ３・
论著・
新生隐球菌感染１临床特点及实验室检测的２例回顾性分析
ｉｆｃｉｎｓｎｅｔｏ
ＳＮｊｍｉＷＡＧＹｎｌｇＺＵＸｕｚｅ，ＨＮｉＨＮｈ－ｅＬＵＹｎＵｉｅ，Ｎａ —ｎ，ＨＯｉ—ｈｎＺＥＧＷｅ，ＡＧＺｉｉ，Ｉｏｇ — ｉＺｊ（ｈｎｆｎｓｉｌＣｉａＭｅｉｌＵｉｒｔ，ｈｎａｇ１００，ｈｎ）ＳｅｇｇＨｏｔ，ｈｎｄｃｎｖｓｙＳｅｙｎ１０４Ｃｉａｉｐａａｅｉ
ｆｃｉｎａｄｃｍｂｎｔｄａｔｕｇｌｔｅａｙｈｓｇｏｈｒｐｕｉｅｆｃｓｅｔｎｏｉａｅｎｉｎａｈｒｐａｏｄｔｅａｅｔｆｔ．ｏｆｃｅ
【ｅｏｄ】Ｃｐｃｃｓｅｏａｓｃｎａｉｅｔｎｌｏｔｅｃｏ；ｕｓｓｉｎｓｏｆｇＫｙｗｒｓｒｔｏｕｎｏｒｎ；ｉｃｌｆｉ；ｂｒｏｄｔｔｎｄｇｅｉｅｅｆｕｉｙｏｃｆｍｌｉｃｏａａｒｅｉｒｎｔｎｙｖｓｎ
【ｂｔｃ】ＯｊｔｅｏｘｌｅｈｉｃａｃｒｔｓｎｂｒｏｅｃｏｆｒｔｏｕｎｏｒａｓｎｃｏｓｎＡｓａｔｒｂｅｉＴｐｒｔｃｎａｃｒｔｉｉｄｌｏｔｙｔｔｎｏＣｙｏｃｓｅｏｎｉｅｔｎａｄｃｖｅｏｅｌｉｈａｅｓｃａａａｒｄｅｉｐｃｃｆｍｆｉｌ

新生隐球菌性脑膜炎的脑脊液标本检验方法分析

新生隐球菌性脑膜炎的脑脊液标本检验方法分析目的分析新生隐球菌性脑膜炎的脑脊液标本检测方法，提高新生隐球菌的检出率。

方法对笔者所在医院确诊隐球菌性脑膜炎55例脑脊液标本的临床资料、实验室检查的情况作以比较，进行回顾性分析。

结果55例患者脑脊液检查结果：墨汁染色阳性42例，革兰染色阳性38例，真菌培养阳性49例，乳胶凝集试验阳性52例。

结论通过比较分析CM脑脊液标本4种不同检验方法，笔者认为对同一份标本应联合使用3种以上方法检测，使结果互相印证，从而降低误诊率。

标签：新生隐球菌性脑膜炎；脑脊液；墨汁染色；革兰染色；隐球菌抗原乳胶凝集试验；真菌培养检验科常用的新生隐球菌的检测方法有墨汁染色、革兰染色、隐球菌抗原乳胶凝集实验和真菌培养。

通过这4种方法的应用，对其阳性率进行比较，以提高检验水平。

现将笔者所在医院2011年2～11月确诊新生隐球菌（CM）的55例脑脊液（CSF）标本用以上4种方法进行检验的情况作以比较，现报道如下。

1资料与方法1.1一般资料55例患者均为AIDS合并CM，其中男36例，女19例，年龄29～62岁。

以上患者病史、症状、体征、辅助检查结果均符合CM表现；体温37.5～39.0℃39例，＞39℃2例；进行性头痛47例，伴嗜睡、昏迷等意识障碍者21例。

1.2实验室检查55例患者入院后分别抽取CSF 3管，第1管做真菌培养和生化检验，第2管作做细胞学检验和墨汁染色，第3管做隐球菌抗原乳胶凝集实验。

CSF标本中无色清晰46例，微混9例。

墨汁染色选用印度墨汁或国产优质墨汁，将CSF标本离心后取沉淀物直接染色镜检，在黑色背景下可见到透亮的菌体和宽厚荚膜；真菌培养用沙保弱培养基，将标本接种后放置于37℃孵育箱中，2～5 d后观察菌落并做酚氧化酶试验、尿酶试验等鉴定试验；革兰染液由贝索公司提供，涂片染色后菌体呈孢子样；乳胶凝集实验采用美国IMMY公司生产的新生隐球菌乳胶凝集抗原检测试剂盒，利用快速乳胶凝集反应对标本中隐球菌的荚膜多糖抗原进行定性检测，试验室温下即可观察结果，反应环中凝集颗粒的多少和大小与反应的阳性程度成正比，结果读数划分等级从阴性到4级，阳性对照应在2级（轻微小团块或块状）以上，而阴性对照应小于1级（乳状背景下细小颗粒）。

01-杨青-隐球菌实验室诊断方法探讨

ELISA方法：定量检测
丹娜公司产品：新型隐球菌荚膜多糖检测试剂盒（ELISA法） PREMIER公司产品：
17
隐球菌脑膜炎中的应用
• 李娟等报道墨汁染色涂片诊断隐球菌脑膜炎灵敏度61.1％（11/18),脑脊液真菌培养灵敏度38.9％(7/18),隐球菌抗原检测灵敏度100％(18/18)，特异度99.4%(149/150) • 刘正印等报道墨汁染色阳性23例(23/26,88%)，乳胶凝集试验抗原阳性20例(20/20，100%)，培养阳性8例(8/13,62%) • 大多数研究报道灵敏度93–100%，特异性 93–98%
阳性
阴性
胶体金法
利用免疫层析技术，以胶体金标记单克隆抗体，可以检测新型隐球菌的全部四种荚膜多糖抗原（A-D）
胶体金比乳胶凝集灵敏度更高
Clin Vaccine Immunol. 2013 ;20(4):634-5.
New Microbes New Infect. 2015 Mar; 4: 1–4
我们的结果
2013年1月至2015年6月共收到乳胶凝集试验标本684例确证隐球菌病的93人，其中隐球菌性脑膜炎 38人，隐球菌性肺炎51人，肺部合并脑膜炎患者4人。
Hale Waihona Puke 隐球菌脑膜炎（38人）荚膜抗原试验脑脊液血清培养脑脊液墨汁染色脑脊液
21/21
100
19/19
22/32 68.8
痰H7N9核酸检测提示阴性，排除禽流感入院第二天术前四项检查提示HIV阳性，送 CDC复检 4.21-4.25多次血培养皆阴性抗病毒、哌拉西林/他唑巴坦、美平、甲泼尼龙针
首先考虑PCP，但是合并其他感染。改SMZco 3片 tid+克林霉素600毫克静滴q8h抗PCP治

治疗新型隐球菌病需要做哪些化验检查

治疗新型隐球菌病需要做哪些化验检查此菌系真菌中的一种，经呼吸道吸入后，经血液进入中枢神经系统，引起隐球菌性脑膜炎，称作新型隐球菌病。

临床上以发热、头痛、呕吐、颈抵抗、出现脑膜刺激征及颅内高压症为特点。

(1)脑脊液(CSF)常规检查:细胞计数<500×106/升(/L)，分类中以淋巴细胞(L)为主，蛋白质轻度升高，糖及氧化物降低。

(2)病原体检查:脑脊液(CSF)墨汁涂片，可找到新型隐球菌;脑脊液培养，可为阳性;脑脊液免疫学测定，可找到相应隐球菌荚膜多糖抗原。

新型隐球菌病检查项:1. 脑脊液白细胞(WBC)计数2. 脑脊液白细胞分类计数(DC)3. 脑脊液涂片检查及细菌培养4. 脑脊液蛋白(PR0)定量检测5. 脑脊液葡萄糖(GLU)测定脑脊液白细胞(WBC)计数(正常值及其临床意义)【单位】个/升(个/L)【正常值】婴儿，(10～20)×106/升；儿童，(0～10)×106升；成人，(0～8)×106/升。

【临床意义】白细胞高于10×106/升(个/L)为病理指征。

轻度增加，(13～30)×106/升，常见于浆液性脑膜炎、脑水肿等；中度增加，(31～200)×106/升，常见于结核性脑膜炎；极度增加，(200～500)×106/升(最高可达1000×106/升)，常见于化脓性、流行性脑脊髓膜炎。

脑脊液白细胞分类计数(DC)(正常值及其临床意义)【临床意义】见表1-8。

表1-8脑脊液白细胞分类计数细胞分类新生儿(%)成人(%)嗜酸性粒细胞罕见罕见嗜中性粒细胞3±52±5淋巴细胞20±1862±34软膜蛛网膜间皮细胞、单核细胞72±2236±20组织细胞5±4罕见室管壁细胞罕见罕见脑脊液涂片检查及细菌培养(正常值及其临床意义)【正常值】阴性，但有时可见到一些污染菌，如枯草杆菌、葡萄球菌和类白喉杆菌等。

实验室镜检,协力诊断隐球菌性脑膜炎

实验室镜检，协力诊断隐球菌性脑膜炎【摘要】隐球菌性脑膜炎是一种严重的脑膜炎症，常见于免疫抑制患者。

实验室镜检在隐球菌性脑膜炎的诊断中起着关键作用。

本文将介绍隐球菌性脑膜炎的概述，实验室镜检技术及原理，以及实验室镜检在诊断中的应用。

探讨协力诊断策略的重要性和意义，以及实验室镜检与其他诊断方法的比较。

结论部分将强调实验室镜检在协力诊断隐球菌性脑膜炎中的重要性，并展望未来发展方向。

通过本文的阐述，读者将深入了解实验室镜检在隐球菌性脑膜炎诊断中的关键作用，为临床诊断提供更准确的依据。

【关键词】实验室镜检、隐球菌性脑膜炎、诊断、协力诊断、技术、原理、策略、比较、重要性、发展方向、展望1. 引言1.1 疾病背景介绍隐球菌性脑膜炎是由真菌隐球菌引起的一种严重疾病，主要侵犯中枢神经系统，特点是病变进展快、病情严重，常常导致患者死亡。

隐球菌是一种常见的真菌，存在于土壤、鸟类粪便等环境中。

人体感染隐球菌主要通过呼吸道或皮肤黏膜进入，而隐球菌性脑膜炎则常发生在免疫力低下的人群中，如艾滋病患者、器官移植受者等。

在接下来的内容中，我们将详细介绍隐球菌性脑膜炎的概况，以及实验室镜检在诊断中的重要性。

让我们一起深入探讨这一严重疾病，并探讨协力诊断隐球菌性脑膜炎的策略和意义。

1.2 实验室镜检在诊断中的重要性实验室镜检是一种重要的诊断方法，可以通过观察患者样本中的微生物结构和形态特征来确定疾病的病因。

在隐球菌性脑膜炎的诊断中，实验室镜检具有重要的作用。

实验室镜检可以直观地观察到隐球菌的存在及其形态特征，从而快速确认疾病的病因。

实验室镜检可以帮助医生及时制定治疗方案，提高治疗的及时性和有效性。

实验室镜检能够识别不同类型的隐球菌，从而指导治疗药物的选择，提高治疗的针对性和个性化。

实验室镜检在隐球菌性脑膜炎的诊断中扮演着重要的角色，为医生提供了重要的辅助信息和依据。

通过实验室镜检，医生可以更准确地诊断疾病，提高治疗的效果，减少误诊和延误诊的风险。

隐球菌实验室检测_图文

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隐球菌GM试验阳性
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JCM，2015,43, 2929-2931
烟曲霉GM和隐球菌GalXM的分子结构
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JCM，2015,43, 2929-2931
GM试验小结
早期、快速、高特异性、高NPV GM水平反映曲霉负荷量血清检测推荐用于恶性血液肿瘤、HSCT患者 IPA推荐同时检测BAL和血清标本曲霉脑病可同时检测CSF和血清标本动态变化指导抗真菌药物使用三唑类抗真菌药的使用可能导致假阴性
多重PCR+电喷 rRNA大亚单位; ~200 肺泡灌洗液、
雾电离质谱种真菌
全血
多重PCR
多重PCR+溶解曲线分析
6种真菌（5种念珠菌和烟曲霉）
5种念珠菌
全血阳性血培养液
T2 Candida (FDA cleared)
T2 Biosystems
微珠和T2磁力 5种念珠菌检测平台
全血
核酸提取
38
隐球菌：无症状筛查
抗原血症患者随着病程进展逐渐表现出临床症状
CrAg阳性后平均22天出现隐球菌脑炎症状（5-234天）
这此期间治疗能显著降低死亡率
Expert Opin Med Diagn. 2012; 6(3): 245-51. AIDS 2002, 16: 1031-38
CrAg试剂盒
标本类型也会影响检测的敏感度。对于侵袭性念珠菌的分子诊断，全血标本优于血清标本；而对于侵袭性曲霉菌，全血标本和血清标本有相似的敏感度[3]。
Page 44
[1]. Burgener-Kairuz P, et al. J Clin Microbiol, 1994, 32:1902–7. [2]. Kermekchiev MB, et al. Nucleic Acids Res, 2009, 37:e40. [3]. Bernal-Martinez Let al. J Clin Microbiol, 2011, 49:3596–9.

隐球菌病胶乳凝集试验

隐球菌病胶乳凝集试验
隐球菌病胶乳凝集试验介绍：
胶乳凝集试验检测新生隐球菌荚膜多糖抗原，是一种简便、快速、有效诊断隐球菌感染的实验室方法。

它以胶乳颗粒为载体，表面连接
有抗新生隐球菌抗体，形成致敏胶乳悬液，如标本(血清、胸腔积液、支气管肺泡灌洗液或脑脊液)中含有一定量的隐球菌荚膜多糖抗原，则
可产生肉眼可见的凝集反应颗粒。

该检查目前尚无确定的诊断界值，
其敏感性和特异性还有待验证，但它对早期诊断肺隐球菌病提供有益
的线索。

隐球菌病胶乳凝集试验正常值：
阴性。

隐球菌病胶乳凝集试验临床意义：
阳性：新型隐球菌感染(中枢神经系统和全身性)。

隐球菌病胶乳凝集试验注意事项：
本试验易与类风湿胶乳凝集试验出现交叉反应，必须予以排除。

隐球菌病胶乳凝集试验检查过程：
暂无相关信息。