菊花中绿原酸的含量测定

菊花中绿原酸的含量测定3

李宗　陈在敏　廖雷生33　林少山33　(福建省药品检验所　福州350001)

摘要　目的:测定菊花中绿原酸的含量。方法:HP LC法,色谱柱为Nova2Pak C18柱(4μm,416mm×250mm),流动相为甲醇20.1mol・L-1磷酸盐缓冲液(pH2.65)30∶70,检测波长为328nm。结果:20批菊花样品的绿原酸含量,以干燥品计为0.060%～0.467%。结论:绿原酸可作为菊花的质量控制指标成分。

关键词　菊花　绿原酸　含量测定

菊花为菊科植物菊Chrysanthemum mori2 folium Ramat.的干燥头状花序,含挥发油、菊甙、氨基酸、黄酮类及绿原酸等多种成分[1]。菊花为常用中药,使用量大,产地广,加工方法各异,虽有关于菊花挥发油、木犀草素的含量测定的报道[2],但尚无稳定、可靠的质量控制方法。绿原酸已广泛作为金银花及其制剂的质控指标,测定的方法有分光光度法[3]、薄层扫描法[4]、HP LC法[5]等,但关于菊花中绿原酸的含量测定尚未见报道,因此,我们建立了HP LC法测定菊花中绿原酸的含量,报告如下。

1　仪器和材料

111　仪器和试药　P E Integral4000高效液相色谱仪(带二极管阵列检测器),美国P E公司产品;Nova2Pak C18色谱柱(4μm,416mm×250mm),大连依利特公司产品;绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。

112　材料　菊花药材经鉴定均为菊科植物菊花Chrysanthemum morifolium Ramat1的头状花序。鉴定人李宗。

2　方法和结果

211　色谱条件　使用大连依利特公司的Nova2 Pak C18色谱柱(4μm,416mm×250mm)。流动相的配制:取磷酸二氢钠适量制成0.1mol・L-1的溶液,按2ml・L-1的比例加入磷酸适量,调整p H为2.65,超滤后与甲醇按70∶30的比例混合。检测波长为328nm,柱温为室温,流速0. 8ml・min21,进样量10μl。

2.2　对照品溶液的制备及线性关系考察　精密称取绿原酸对照品适量,加水配制成每1ml 约含0.1mg绿原酸的对照品溶液。取不同体积的对照品溶液注入液相色谱仪,测定峰面积值,以进样量为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),得回归方程:Y=277382+24027460X,r =0.9999。绿原酸浓度在0.2072～2.072μg内与峰面积呈良好的线性关系。

213　供试品溶液的制备　取菊花粉末(过1号筛)1g,精密称定,置干燥烧瓶中,(同时按《中国药典》1995年版一部附录水分测定一法测定水分),准确加入50.0ml甲醇,称定重量,水浴加热回流提取2h,冷却,用甲醇调至原重,摇匀,滤过,精密吸取续滤液10ml于烧杯中,水浴蒸干,残渣加入5ml氯仿浸泡3min,弃去氯仿液,残渣挥干氯仿,准确加入5.0ml蒸馏水使绿原酸充分溶解,溶液用微孔滤膜超滤,滤液作为供试品溶液备用。

214　精密度考察　取同一浓度对照品溶液,连续进样5次,进样量均为10μl,测得峰面积值为11898229,12303678,12032046,11843952, 11740327,RSD=1182%。

215　准确度考察　取同一批样品,按213项下方法制备6份供试品溶液,测得绿原酸含量分别为0.236%,0.238%,0.239%,0.250%, 0.225%,0.232%,平均值为0.237%,RSD= 3.5%。

3福建省卫生厅科研基金资助项目　No.Q9722

33福建中医学院中药系97届实习生

216　回收率考察　精密称取6份菊花样品,分别准确加入一定量的绿原酸对照品溶液,按213项下方法制备供试品溶液,测定并计算回收率。结果加样提取回收率分别为104.9%, 10018%,10019%,9516%,9615%,9717%平均回收率为9914%,RSD=315%。

217　样品测定结果　先后测定了20批菊花样品的绿原酸含量和水分含量,各批菊花的含量测定结果如表1及图1。

表1　不同产地菊花绿原酸及水分含量测定

编号商品名产地水分%

绿原酸%

I II

1杭菊　福建福州16.60.1570.188

2杭菊　福建福州16.40.1860.222

3杭菊　福建福州17.80.1940.236

4杭菊　福建福州19.60.2150.267

5杭菊　福建福州14.20.2210.258

6杭菊　浙江杭州14.80.2330.273

7杭菊　福建福州12.40.1220.136

8杭菊　浙江桐乡13.00.2520.284

9贡菊　安徽 13.00.2610.322

10贡菊　安徽黄山17.10.3880.467

11滁菊　安徽滁县21.10.3060.382

12亳菊　安徽亳州12.90.1020.117

13黄菊　云南昆明13.40.2290.264

14菊花　四川 7.60.3550.384

15菊花　河南禹州8.90.2430.267

16菊花　河南新乡7.10.0810.087

17菊花　广西南宁12.80.2800.320

18祁菊　河北安国14.80.2440.286

19甘菊　福建福州13.60.1400.162

20甘菊　福建福州12.40.0530.060

注:样品均为市售品,拉丁学名均为C1morifolium;I为干燥前商品,II以干燥品计

结果显示菊花中绿原酸的含量在0.053%～0.388%,以干燥品计则为0.060%～0.467%,菊花中绿原酸含量因产地和商品规格不同而有一定差异,含水量亦有较大差异。3　讨论

311　比较了多种流动相对绿原酸的分离效果,结果表明用0.1mol・L-1,pH2.65的磷酸盐缓冲液与甲醇混合洗脱,可较好地抑制色谱峰的拖尾现象,使用了4μm粒径的Nova2Pak C18色谱柱,使绿原酸与杂质得到良好的分离。

312　由于菊花产地多而分散,加工方法各异,如阴干法(亳菊)、硫黄蒸晒法(滁菊)、烘干法(贡菊)、蒸透法(杭菊)等

[6]。从实验结果来看,贡菊含量最高,滁菊、川菊次之,杭菊普遍较低,甘菊仅为0.060%。提示加工方法对绿原酸的含量有一定的影响。有必要就加工方法对菊花的影响作进一步的考察。

图1　菊花(滁菊)供试液HP LC色谱图

C1绿原酸

313　由于菊花成分复杂,木犀草素含量仅0.031%～0.066%,挥发油含量仅为0.1074%～～0.2144%[2]。其他有效成分的含量分析尚未见报道,而绿原酸的药理活性与菊花的功用是相符的[7],根据所收集样品的性状分析,绿原酸含量相对较低者,香气一般偏弱,花序多破碎,色泽偏暗,多呈浅棕色或浅棕褐色。可能为加工方法不佳或储存条件不良所致,因此用绿原酸含量作为菊花的质量控制指标是可行的。4　参考文献

1　黄泰康.常用中药成分与药理手册1北京:中国医药科技出版社,1994.1565

2　陈发奎.常用中草药有效成分含量测定1北京:人民卫生出版社,1997.606

3　张广强,粱生旺,姜玉凤,等.三波长分光光度法测定清热解毒注射剂中绿原酸的含量.中国中药杂志,1990,15(8): 33

4　刘伟,杜天信,郑松波,等.小儿清热解毒口服液中绿原酸的薄层扫描测定.中成药,1989,11(8):14

5　潘扬,马国祥,郭立玮,等.RP.HP LC法测定紫金解毒饮中绿原酸的含量.中国药科大学学报,1995,26(4):217

6　徐国均,徐珞珊,何宏贤,等.中国药材学(下册).北京:中国医药科技出版社,1996.993

7　季宇彬.中药有效成分药理与应用.哈尔滨:黑龙江科学技术出版社,1995.110

致谢　部分菊花样品由浙江、安徽、昆明等地药检所和其它有关单位提供。

1998208226收稿