柱层析实验报告
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用. 2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
柱层析和薄层层析实验报告
柱层析和薄层层析实验报告篇一：柱层析实验报告柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂6．饱和氯化钠溶液3．丙酮7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃）8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
柱层析实验报告.doc
柱层析实验报告.doc
柱层析实验是一种分离和纯化混合物的技术，利用不同物质在柱层析填料上的吸附性能差异，通过逐步洗脱来获得纯品。
本实验以小麦胚芽中的皂苷为主要研究对象，通过柱层析方法提取和纯化皂苷。
实验步骤：
1. 制备填料溶液：将0.5克硅胶和正己烷按1：10的比例配制成1%的硅胶溶液。
2. 准备样品：将10毫克小麦胚芽粉末加入10毫升甲醇中，超声提取30分钟，离心10分钟，取上清液作为实验样品。
3. 柱层析操作：使用玻璃柱装填1.5毫升硅胶填料，以极性小的正己烷为移液相，以甲醇为静相，样品用滴定管加入玻璃柱，分别收集不同分离峰的组分。
4. 进行TLC鉴别：将分离峰组分涂于TLC板上，以正己烷和甲醇为展开剂，在紫外灯下观察其色谱带。
实验结果：
实验得到了3个分离峰组分，分别对应TLC上的3个色谱带。
经过比较和鉴别，第1个分离峰为脂肪酸甲酯，第2个分离峰为皂苷，第3个分离峰为芦丁。
实验中使用的柱层析操作可在短时间内对小麦胚芽中的皂苷进行有效分离和纯化。
柱层析方法可以用于许多化学研究和工业生产中，例如生物化学、制药和化妆品等领域。
实验中需要注意的是，柱层析操作时不应以过量样品洗脱柱层析填料，否则可能引起柱塞，而且应适当控制移液相和静相的选择和比例，以达到较好的分离和纯化效果。
总之，本实验通过柱层析的方法成功分离和纯化了小麦胚芽中的皂苷，为后续研究和应用提供了基础支持。
柱层析实验报告
柱层析实验报告1. 实验目的本实验的主要目的是通过柱层析实验，掌握柱层析的基本原理和操作方法，并实现对混合物中各组分的分离和定量分析。
具体实验目的包括： - 了解柱层析技术的原理和应用 - 学会柱层析实验的操作方法和步骤 - 利用柱层析分析仪测定样品中主要成分的含量 - 掌握数据处理的方法和结果分析的基本技能2. 实验原理柱层析是一种静相分离技术，基于不同物质在固定相和流动相中的亲和力差异，将物质分离的过程。
该技术主要包括一系列步骤：1.装置柱层析柱：选择合适的柱层析柱，固定相填充于柱内，并保持良好的流动性和分离效果。
2.选择柱层析流动相：根据被分离物质的亲和力特性，选择合适的流动相，并调节流动相的流速和压力。
3.样品进样：将待分离的混合物样品经过前处理后，通过进样装置导入柱层析柱中。
4.分离与定量：样品通过柱层析柱时，不同组分会与固定相发生相互作用来实现分离。
通过检测不同组分的保留时间和峰面积来定量分析各组分含量。
5.数据处理：根据分离得到的峰面积和所选的标准样品进行定量计算并分析结果。
3. 实验步骤1.准备工作：检查柱层析系统的硬件设备是否正常，检查柱子的流动性，并检查流动相是否满足实验要求。
2.样品前处理：根据实验要求，对样品进行预处理，如提取、浓缩和纯化等步骤。
3.准备样品溶液：将预处理后的样品溶解于适当的溶剂中，制备成所需要的浓度。
4.装置柱层析柱：选择合适的柱层析柱，并保证柱层析柱内部没有气泡和杂质。
5.进行柱层析实验：将样品进样到柱层析柱中，调节流动相的流速和压力，使得样品以合适的速率通过柱层析柱。
记录不同组分的保留时间和峰面积，以便后续数据处理。
6.数据处理：根据标准样品建立标准曲线，利用样品的峰面积和标准曲线进行定量计算，得到样品中各组分的含量。
7.结果分析：分析不同样品的柱层析数据，对实验结果进行解释和讨论，总结实验的优缺点，并提出改进的建议。
4. 实验结果与讨论在柱层析实验中，我们成功分离了混合样品中的各组分，并利用峰面积和标准曲线进行了定量分析。
柱层析分离实验报告
柱层析分离实验报告柱层析分离实验报告导言：柱层析分离是一种常用的分离技术，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
本实验旨在通过柱层析分离方法，分离混合物中的化合物，并通过实验结果探讨柱层析分离的原理和影响因素。
实验目的：1. 掌握柱层析分离的基本原理和操作技巧；2. 了解柱层析分离中的影响因素及其作用机理；3. 分离混合物中的目标化合物，并对其进行鉴定和分析。
实验原理：柱层析分离是一种基于化合物在固定相和流动相之间的差异分离的方法。
在实验中，我们使用了硅胶柱作为固定相，以正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂作为流动相。
混合物中的化合物在流动相的作用下，根据其在固定相上的亲和性和相对溶解度的差异，以不同的速度通过柱子，实现了分离。
实验步骤：1. 准备工作：准备好所需的实验器材和试剂，检查柱子是否干净；2. 样品制备：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，制备样品溶液；3. 柱装填：将硅胶填充到柱子中，保持柱子竖直，并使用适当的填充剂将硅胶固定在柱子底部；4. 柱平衡：用流动相预先洗涤柱子，使柱子内的固定相均匀分布；5. 样品进样：使用微量注射器将样品溶液缓慢地注入柱子顶部；6. 柱洗脱：根据不同化合物的亲和性和溶解度，通过调整流动相的组成和流速，使化合物在柱子中以不同的速度洗脱；7. 收集分离物：根据洗脱曲线和检测结果，收集分离出的化合物；8. 鉴定和分析：使用适当的分析方法对收集到的化合物进行鉴定和分析。
实验结果：根据实验操作和分析结果，我们成功地分离了混合物中的目标化合物，并得到了纯净的化合物样品。
通过红外光谱分析、质谱分析等方法，我们对化合物进行了鉴定，并得到了化合物的结构和性质信息。
讨论与结论：柱层析分离是一种有效的分离技术，可以根据化合物的特性和需求调整操作条件，实现高效的分离和纯化。
在本实验中，我们通过调整流动相的组成和流速，成功地分离了混合物中的目标化合物，并对其进行了鉴定和分析。
实验结果表明，柱层析分离是一种可靠的分离方法，对于复杂混合物的分离和纯化具有广泛的应用前景。
柱层析分离实验报告
柱层析分离实验报告实验目的：1. 了解常规柱层析实验法；2. 掌握柱层析法的操作方法；3. 初步了解分离纯化技术；实验原理：柱层析法是一种物理分离方法，它利用溶质在流动相和固定相之间的相互作用差异，使混合物中各组分得以分离纯化的方法。
实验步骤：1. 将样品溶液注入柱中，通过注射器；2. 在柱壁附近加入定量的溶剂，让样品在柱内产生分离现象；3. 通过收集每份柱顶样液，分析各组分的化学性质。
实验结果：我们操作了柱层析实验法，并将样品分离纯化。
最后得出我们想要的纯化物质。
实验结论：柱层析分离实验法是一种非常有效的物理分离方法，它可以用于分离多种样品，对于分离纯化化合物非常有帮助。
此次操作的结果表明，柱层析法的操作非常简便，成本低，且分离效果较好。
参考文献：1. Kavaka, A., & Hjartarson, K. (2017). A comparative study of the suitability of partial least squares regression (PLSR) and artificial neural networks (ANNs) for proteomics data analysis. Analytical and bioanalytical chemistry, 409(24), 5753-5768.2. Levenberg, K. (1944). A method for the solution of certain non-linear problems in least squares. Quarterly of applied mathematics, 2(2), 164-168.3. Zhang, Y., Zhu, Y., Li, L., Bai, R., Chen, C., & Wang, M. (2018). Analysis of the bacterial community in the water of a deep south china sea gas hydrate site. Frontiers in microbiology, 9, 127.。
柱层析实验报告范文
柱层析实验报告范文一、实验目的1.学习柱层析法的基本原理和方法；2.掌握柱层析法的操作技能；3.了解柱层析法的应用领域和意义。
二、实验原理层析法是一种物质分离和纯化的常用方法，其基本原理是根据待分离物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，实现物质的分离。
柱层析法是层析法的一种常见形式，通过将样品溶液首先加到柱中，然后加入流动相，待流动相在柱中流动时，不同成分会发生差异的溶解和吸附行为，继而实现分离。
三、实验步骤1.准备工作：a.根据实验要求，选择适当的柱和固定相材料；b.准备好流动相和样品溶液。
2.柱层析操作：a.按照实验要求，将固定相充填到柱中，注意保持柱底均匀；b.预先在柱床上加入一小层纯流动相，使其保持湿润；c.加入样品溶液至柱中，待完全吸附后，加入流动相；d.注意调整流动相的流速，避免过快或过慢；e.当待分离物质出现不同的峰时，即可停止实验。
3.实验记录：a.记录各组分的流速、保留时间和峰面积等信息；b.绘制柱层析曲线，观察各峰的形态和相对峰面积。
四、实验结果和分析通过柱层析实验，我们成功地分离了样品溶液中的不同成分，并得到了明显的峰。
根据峰面积，我们可以计算出各组分在样品中的含量，进一步分析样品的组成。
实验结果表明，柱层析法在物质分离和纯化方面具有很大的潜力。
通过选择不同的固定相和流动相，我们可以实现对各种物质的高效分离，从而提高样品的纯度和分析结果的准确性。
经过实验，我们也发现了柱层析法的一些局限性，如对样品量、溶剂选择和柱层析条件的敏感性较大。
这就要求我们在实际应用中对柱层析法进行合理的优化和调整，以获得更好的实验结果。
五、实验总结通过本次柱层析实验，我们进一步了解了柱层析法的基本原理和操作方法。
柱层析法作为一种常用的分离和纯化技术，在化学分析、制药工业、生物学等领域的应用非常广泛，具有重要的科学研究和工业生产价值。
同时，我们也认识到柱层析实验的复杂性和技术要求。
在实验过程中，我们需要严格控制操作条件，如柱床的充填均匀性、流速的把握、固定相和流动相的选择等，才能获得准确可靠的实验结果。
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用. 2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用. 2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
分配柱层析实验报告
一、实验目的1. 理解分配柱层析的原理及其在混合物分离中的应用。
2. 掌握分配柱层析的操作步骤，包括样品制备、层析柱的准备、样品点样、溶剂选择及层析操作。
3. 通过实验观察并分析分离结果，验证分配柱层析的有效性。
二、实验原理分配柱层析是一种基于物质在固定相和流动相之间分配系数差异进行分离的色谱技术。
在分配柱层析中，固定相和流动相的极性差异是导致分离的关键因素。
混合物中的各组分在固定相和流动相中的溶解度不同，从而在层析过程中实现分离。
三、实验材料与仪器- 仪器：层析柱、紫外灯、玻璃棒、滴管、烧杯、量筒、滤纸等。
- 材料：混合样品、固定相（如硅胶）、流动相（如正己烷/乙酸乙酯混合溶剂）、显色剂等。
四、实验步骤1. 样品制备：将待分离的混合样品溶解在适当的溶剂中，制成一定浓度的溶液。
2. 层析柱的准备：将固定相（如硅胶）装入层析柱，使其填充均匀，避免气泡。
3. 样品点样：用滴管将样品溶液滴加在层析柱的顶部，确保样品点在固定相表面。
4. 溶剂选择与层析操作：选择合适的流动相（如正己烷/乙酸乙酯混合溶剂），用滴管缓慢加入层析柱中，控制流速，使溶剂沿固定相表面均匀下流。
5. 观察与分析：在紫外灯下观察分离情况，记录各组分在固定相上的位置，并计算各组分的保留值（Rf值）。
6. 显色与鉴定：用显色剂对分离后的组分进行显色，观察颜色变化，鉴定各组分。
五、实验结果与分析1. 层析分离效果：根据实验结果，观察混合样品中各组分在固定相上的分离情况，分析分离效果。
2. Rf值计算：根据实验数据，计算各组分的Rf值，分析其分离程度。
3. 显色与鉴定：根据显色结果，鉴定各组分，验证分配柱层析的有效性。
六、实验讨论1. 固定相与流动相的选择：固定相和流动相的选择对分离效果有重要影响。
本实验中，选择硅胶作为固定相，正己烷/乙酸乙酯混合溶剂作为流动相，能够较好地实现混合样品中各组分的分离。
2. 层析柱的制备：层析柱的制备对分离效果也有一定影响。
柱层析和薄层层析实验报告
柱层析和薄层层析实验报告实验目的：1.了解柱层析和薄层层析的原理和方法；2.掌握柱层析和薄层层析的操作技能；3.熟悉柱层析和薄层层析在不同化合物分离和纯化过程中的应用。
实验原理：柱层析是基于分子在固体填充柱层析柱中的分配系数不同，使得溶液中的化合物能够以不同的速率通过柱层析柱，并在柱中相互分离的一种技术。
薄层层析是将待检样品加载在薄层层析板上，通过毛细作用使得样品在薄层上上升，并在薄层上相互分离的一种技术。
实验仪器和试剂：柱层析仪、薄层层析仪、柱层析柱、薄层层析板、溶液样品、色谱柱填充物、色谱溶剂、染色剂等。
实验步骤：1.柱层析（1）将填充好色谱柱的柱层析仪放置于实验台上并连接好流动相系统；（2）用适当的色谱溶剂预洗柱层析柱；（3）将样品加入柱层析柱并开启流动相系统，实时监测溶液流出；（4）根据溶液流出的情况和实验要求，采集柱层析柱流出的不同组分。
2.薄层层析（1）准备薄层层析板，标记好起点；（2）在薄层层析板上加载待测样品，并使其干燥；（3）将薄层层析板置于薄层层析仪中，并加入适当的色谱溶剂，使其与薄层层析板产生足够的接触；（4）升级薄层层析板，使样品在薄层上上升；（5）取出薄层层析板，根据实验要求，在带有紫外光源下观察色谱斑点，并记录下色谱斑点的相对迁移距离。
实验结果：1.柱层析实验结果展示了分离出的不同组分的溶液，并标记了每个组分的相对迁移时间和相对含量；2.薄层层析实验结果展示了在薄层上分离出的样品斑点，并根据相对迁移距离判断样品的相对含量和分离效果。
实验讨论：1.柱层析和薄层层析在实验过程中的优缺点；2.实验结果是否符合预期，若不符合预期，可能的原因和改进方法；3.模拟实际应用场景，讨论柱层析和薄层层析在不同化合物分离和纯化过程中的应用。
实验结论：通过本次实验，我们掌握了柱层析和薄层层析的原理和实验方法，熟悉了柱层析和薄层层析的操作技能。
柱层析和薄层层析是分离和纯化化合物常用的技术手段，在生物医药、食品安全等领域都有广泛应用。
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
几种金属离子的柱层析实验报告
几种金属离子的柱层析实验报告
柱层析实验报告(Fe,Mn,Zn离子检测)
实验目的：
通过柱层析的方法，检测饮料中的Fe,Mn,Zn三种金属离子含量，得到结果，以用于饮料质量检测。
实验原理：
柱层析实验是利用色谱柱中特殊的吸附层，对目标物质进行分离和检测的一种色谱技术。
在此实验中，Fe,Mn,Zn三种金属离子分别通过三种不同的柱色谱柱分离，并由分光光度计检测结果。
实验材料：
1.主机：高效色谱仪；
2. 柱色谱柱：Fe柱：250 mm * 4.6 mm I.D.，10 μm C18层析柱；Mn柱：250 mm * 4.6 mm I.D.，5 μm C18层析柱；Zn柱：250 mm * 4.6 mm I.D.，15 μm C18层析柱；
3.谱头：发射型光电检测头；
4.旋光仪：数字式；
5. 光度计：激发源320 nm；
6.样品：待测饮料样品；
7.试剂：稀盐酸、钠水平缓冲液；
8.其他：洗涤剂、质量稀释液等。
实验步骤：
1.将钠水平缓冲缓液加入待测样品中，进行配制；
2.根据检测要求浓度，准备Fe,Mn,Zn三种金属离子标准溶液；
3.将样品和标准溶液均匀的分布到四个检测柱中；
4.将柱色谱柱放入主机中，根据参数调节，打开电源，进行检测；
5.观察打印结果，得出相应的含量；。
柱层析实验报告
柱层析实验报告柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇5.三氧化二铝2．石英砂6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃）8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
柱层析间硝基苯胺实验报告
柱层析间硝基苯胺实验报告一、实验目的本实验旨在通过柱层析法分离纯化间硝基苯胺。
二、实验原理柱层析法是一种常用的分离纯化技术，其原理是利用不同物质在固定相上的吸附性质和移动性质的差异，使它们在柱中逐渐分离。
柱层析法的固定相可以是硅胶、活性炭、聚合物等，而流动相可以是有机溶剂、水等。
间硝基苯胺是一种有机化合物，其分子中含有硝基和氨基基团。
在柱层析法中，可以选择硅胶作为固定相，以正己烷和乙酸乙酯为流动相，通过调整流动相的比例和流速，使间硝基苯胺逐渐分离纯化。
三、实验步骤1.准备硅胶柱：将硅胶填充到玻璃柱中，用正己烷洗涤至无色透明，然后用乙酸乙酯洗涤至无色透明，最后用流动相洗涤至无色透明。
2.样品制备：将间硝基苯胺样品溶解在流动相中，制备成浓度为0.1mol/L的溶液。
3.样品进样：将样品溶液注入硅胶柱中，待样品进入柱床后，关闭进样口。
4.柱层析：调整流动相的比例和流速，使间硝基苯胺逐渐分离纯化。
当柱床中出现两个以上的色带时，停止柱层析。
5.收集分离纯化后的间硝基苯胺：将分离纯化后的间硝基苯胺收集起来，用旋转蒸发仪除去流动相，得到纯净的间硝基苯胺。
四、实验结果经过柱层析分离纯化后，得到了纯净的间硝基苯胺。
通过红外光谱仪检测，证实了样品为间硝基苯胺。
五、实验分析本实验采用柱层析法分离纯化间硝基苯胺，通过调整流动相的比例和流速，使间硝基苯胺逐渐分离纯化。
柱层析法具有分离效率高、分离纯度高、操作简便等优点，是一种常用的分离纯化技术。
六、实验结论本实验通过柱层析法成功分离纯化了间硝基苯胺，得到了纯净的间硝基苯胺。
柱层析法是一种常用的分离纯化技术，具有分离效率高、分离纯度高、操作简便等优点。
柱层析实验报告
一、实验目的1. 了解柱层析的基本原理和操作技术。
2. 掌握利用柱层析分离植物叶片中叶绿素的方法。
3. 通过实验，加深对植物叶绿素成分和结构的认识。
二、实验原理柱层析是一种利用固定相和移动相之间的相互作用，将混合物中的组分进行分离的技术。
本实验采用吸附柱层析法，利用叶绿素能溶于有机溶剂的特性，将植物叶片中的叶绿素提取出来，并通过吸附剂（如氧化铝或硅胶）的吸附作用，使不同成分的叶绿素在柱层析柱中分离。
三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜植物叶片、无水乙醇、硅胶、氧化铝、洗脱剂（如乙酸乙酯）、层析缸、毛细管、烧杯、玻璃棒、滤纸、剪刀、镊子等。
2. 仪器：柱层析柱、抽滤瓶、电子天平、移液器、显微镜等。
四、实验步骤1. 提取叶绿素：将新鲜植物叶片剪碎，加入无水乙醇，用玻璃棒充分研磨，使叶绿素充分溶解。
过滤，收集滤液。
2. 准备柱层析柱：将硅胶或氧化铝均匀铺在柱层析柱底部，用玻璃棒轻轻压紧。
3. 加入样品：用移液器将提取的叶绿素滤液加入柱层析柱，待滤液自然流出。
4. 洗脱：在柱层析柱顶部加入适量洗脱剂，待洗脱剂自然流出。
观察并记录不同颜色成分的流出顺序。
5. 收集分离的叶绿素：将收集到的各组分分别倒入烧杯中，用无水乙醇洗涤，过滤，干燥，得到分离的叶绿素。
五、结果与分析1. 通过柱层析实验，成功分离出植物叶片中的叶绿素，观察到四种主要成分：叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素。
2. 根据实验结果，叶绿素a和叶绿素b在柱层析柱中的吸附能力较强，先被洗脱出来；胡萝卜素和叶黄素吸附能力较弱，后被洗脱出来。
3. 通过观察分离得到的叶绿素，可以进一步了解植物叶片中叶绿素的成分和结构。
六、实验总结1. 通过本次实验，掌握了柱层析的基本原理和操作技术，为今后进行相关实验奠定了基础。
2. 柱层析是一种有效分离混合物中各组分的色谱技术，广泛应用于植物化学、药物分析等领域。
3. 在实验过程中，注意操作规范，确保实验结果的准确性和可靠性。
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用. 2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
凝胶柱层析实验报告
1. 理解凝胶柱层析的基本原理和操作步骤。
2. 掌握凝胶柱层析在分离和纯化生物大分子中的应用。
3. 分析实验结果，验证实验原理。
二、实验原理凝胶柱层析是一种常用的分离技术，主要用于分离分子量不同的生物大分子。
其原理是利用凝胶的分子筛效应，将混合物中的大分子、中分子和小分子进行分离。
凝胶是一种具有三维网状结构的物质，其孔径大小不同，大分子无法进入孔径较小的凝胶颗粒，而小分子则可以自由进出。
在实验中，样品溶液通过凝胶柱，不同分子量的物质将在凝胶柱中形成不同的洗脱峰，从而实现分离。
三、实验材料与仪器1. 材料：蛋白质样品、标准分子量蛋白质、凝胶柱、洗脱液、缓冲液等。
2. 仪器：凝胶柱层析仪、离心管、移液器、微量注射器、凝胶柱等。
四、实验步骤1. 准备凝胶柱：将凝胶柱垂直固定在凝胶柱层析仪上，用缓冲液平衡凝胶柱，使其达到稳定的操作状态。
2. 样品制备：将蛋白质样品与缓冲液混合，用移液器取适量样品加入凝胶柱。
3. 洗脱：用洗脱液缓慢洗脱凝胶柱，收集不同洗脱峰的样品。
4. 样品分析：将收集到的洗脱峰样品进行SDS-PAGE电泳分析，观察蛋白质分子量的变化。
五、实验结果与分析1. 凝胶柱层析分离结果：通过凝胶柱层析实验，成功地将蛋白质样品中的大分子、中分子和小分子分离。
洗脱峰1主要包含大分子蛋白质，洗脱峰2主要包含中分子蛋白质，洗脱峰3主要包含小分子蛋白质。
2. SDS-PAGE电泳分析结果：将不同洗脱峰的样品进行SDS-PAGE电泳分析，结果显示洗脱峰1的蛋白质分子量最大，洗脱峰3的蛋白质分子量最小，与凝胶柱层析分离结果一致。
1. 凝胶柱层析是一种有效的分离技术，可以用于分离分子量不同的生物大分子。
2. 通过凝胶柱层析实验，成功地将蛋白质样品中的大分子、中分子和小分子分离，并验证了实验原理。
3. 实验结果表明，凝胶柱层析与SDS-PAGE电泳分析相结合，可以实现对蛋白质分子量的准确测定。
七、实验注意事项1. 在进行凝胶柱层析实验时，应注意凝胶柱的平衡和操作状态，以保证实验结果的准确性。
柱层析和薄层层析实验报告
柱层析和薄层层析实验报告Pleasure Group Office【T985AB-B866SYT-B182C-BS682T-STT18】柱层析和薄层层析实验报告篇一：柱层析实验报告柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
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柱层析实验报告柱层析分离色素一、【实验目的】1.了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2 .熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时,就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离二、【实验材料】原料:新鲜的菠菜叶试剂：1 . 无水乙醇或95%乙醇5.三氧化二铝2.石英砂6 .饱和氯化钠溶液3.丙酮7.水硫酸钠4.石油醚(60-90 C )8洗脱液：丙酮：石油醚=1 : 9器材：层析柱(1 x 30cn), 研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1 .色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中，再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2 .样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
3.层析拄的制备：15克碱性三氧化二铝加入30毫升石油醚搅拌，浸泡10min.。
在层析拄内加入一团棉花在底部，再加入石英砂0.5cm以上，然后用石油醚半充满柱子，再将浸泡好的三氧化二铝倒入柱内，倒时应该缓慢，重复使用下面的石油醚，直到装完。
用石油醚洗柱内壁，顶部加一小团棉花，然后再填入石英砂0.5 厘米高3•样品的分离层析：吸附层析分离色素打开层析拄下部开关，向拄内加入2毫升浓缩液，至液体没入砂内，再加入石油醚冲洗拄壁，液体浸入砂内，加洗脱液开始层析，可以看到不同色带如图片1,直至第一条色带洗脱完毕，在拄下面用试管接收第一条色带的洗脱液，如图片2。
五、【实验结果】实验结果如下图：图一：层析柱中出现黄色带图二：提取出的黄色胡萝卜素结果分析：洗脱过程中，首先有一条黄色的色带圈沿着层析柱下移，色带圈的各个方向的移动速度并不是完全相同，原因在于层析柱的制作过程并不完全均一,使层析柱内部不均匀，以至于色带各方向的移动速度不同。
最后收集得到亮黄色的胡萝卜素。
七、【注意事项】1、萃取时不要剧烈振荡，以防止发生乳化现象。
2、为了保持柱子的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的，否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗透和显色的均一性。
因此要保证整个装样过程中溶剂要高于三氧化二铝的表面。
3、在吸附剂上端加入脱脂棉（或滤纸）是使加样品时不致把吸附剂冲起；在吸附柱下端加脱脂棉（或沙子）可以防止吸附剂细粒流出。
4、层析柱填装紧密与否，对分离效果很有影响，若各部分松紧不匀，会影响渗透速度和显色的均匀。
6、洗脱流速不宜过快，避免因此压紧凝胶，色素分离不开；也不要过慢，使柱装得太松，导致层析过程中，凝胶床高度下降，色素洗脱很慢。
因此应控制洗脱流速，以每分钟60~80滴为宜。
7、样品一定要足够浓缩，加样量不要过大，过大，分离条带过宽，如果层析拄不够长，各组分不易分开，易同时洗脱下来；加样量过少，色带不是很清楚，不易观察，效果不好。
&层析柱粗细必须均匀，柱管大小可根据试剂需要选择。
一般来说，细长的柱分离效果较好。
若样品量多，最好选用内径较粗的柱，但此时分离效果稍差。
柱管内径太小时，会发生管壁效应”，即柱管中心部分的组份移动慢，而管壁周围的移动快。
柱越长，分离效果越好，但柱过长，实验时间长，样品稀释度大，分离效果反而不好。
八、【实验小结】在该柱层析分离色素实验中，我了解了柱层析技术的相应方法和原理，学会了层析柱的制作和准备，进一步了解绿叶中色素的组成及各色素的颜色和性质、洗脱液的配比、层析柱的制作及洗脱液的流速是本实验成功与否的三大关键因素。
知识拓展：1、溶剂的选择：（1）吸附剂要求较纯,否则会影响样品的吸附和洗脱。
（2）溶剂和吸附剂不能起化学反应。
（3）溶剂的极性应比样品小，如果大了，样品不宜被吸附剂吸附。
（4）溶剂对样品的溶解度不能太大，否则影响吸附，但也不能太小，溶液的体积增加，易使色谱分散。
（5）可使用混合溶剂，如有的组分含有较多的极性基团，在极性小的溶剂中溶解度太小。
也可选用极性大的溶剂溶解，然后加入一定量的非极性溶剂。
这样既降低了极性，又减少了溶液的体积。
2、洗脱剂的选择：样品吸附在氧化铝柱上后，用合适的溶剂进行洗脱，这种溶剂称为洗脱剂。
如果原来用于溶解样品的溶剂冲洗柱不能达到分离的目的，可以改用其他溶剂，一般极性较强的溶剂影响样品和氧化铝之间的吸附，容易将样品洗脱下来,达不到分离的目因此常用一系列极性渐次增强的溶剂,既先使用极性最弱的溶剂，然后加入不同比例的极性溶剂配成洗脱溶剂。
常用的洗脱溶剂的极性按如下次序递增。
己烷和石油醚V环己烷V四氯化碳V三氯乙烯V二硫化碳V甲苯V二氯甲烷V氯仿V乙醚V乙酸乙酯V丙酮V丙醇V乙醇V甲醇V水V吡啶V乙酸。
篇二：实验六：薄层层析与柱层析实验六薄层层析与柱层析实验目的1. 了解偶氮苯的光学异构反应,加深对光化学反应的理解。
2. 掌握薄层层析的基本操作，薄层层析分离顺、反式偶氮苯。
3. 了解柱层析分离有机化合物的原理，初步掌握层析柱装填和洗脱的操作方法4. 采用柱层析分离反式偶氮苯与靛红的混合物实验原理偶氮苯是最简单的芳香偶氮化合物，众多偶氮染料的母体结构。
含有两个苯基分别与偶氮基-n=n -两端相连的结构。
偶氮苯有毒，易燃。
偶氮苯有顺（z）-反（e）-异构体。
反式为橙红色棱形晶体，蒸气为深红色，溶于乙醇、乙醚、醋酸和水。
反式的热力学性质稳定。
当溶于乙醇的偶氮苯用一定强度的紫外光照射时，顺式的比例逐渐增大，直至达到平衡，形成顺反异构体的混合物。
偶氮苯的光致异构是很多偶氮类功能材料光响应的基础。
顺式为橙红色片状晶体，不稳定，在加热或可见光照射下能够变成反式。
色谱方法是通过在固定相和流动相间分配的不同而将物质分离开。
待分离混合物各组分在固定相上的吸附强度不同，与流动相一起移动的速度也不同，因此被分离开。
薄层色谱属于固-液吸附色谱。
薄层色谱板中的固定相中的微孔结构使得溶剂在毛细管作用下能够沿着色谱板向上移动。
由于混合物中各组分对吸附剂（固定相）的吸附能力不同，当展开剂（流动相）流经吸附剂时发生无数次吸附解附过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组分具有不同的移动速度，最终在固定相薄层析上分离。
tic 除了用于分离外，还可以通过与已知结构的的化合物比对，鉴定少量有机混合物的组成，它也是柱色谱寻求最佳展开剂的手段。
上图中红色化合物的rf等于竖直红线的长度除以竖直蓝线的长度。
柱层析也属于固-液吸附色谱。
在一根玻璃分离柱"中进行。
管中装上适当的粉末作为国定相。
待分离或纯化物质的溶液（流动相）在重力作用下流经吸附剂时，不同物质对溶剂和吸附剂的亲和力不同，因而被吸附的程度不同，从而以不同速度流动，使化合物得以分离。
靛红与偶氮苯在极性上具有较大差异，从而可以使用极性适中的展开剂，通过柱层析将二者分离。
仪器与试剂分析天平，tic，锥形瓶，毛细管，层析柱，棉花，量筒，硅胶，蒸发皿，展缸；etoac, ch2cl2, 石油醚，靛红；请自带尺子（用于计算rf值）颜老师在实验开始之前已经准备好的试剂：a. 偶氮苯的溶液（15 mg in 1ml etoh ）； b.靛红的溶液（15 mg in 1ml ch2cl2 ）； c. 靛红与偶氮苯的均匀混合物（靛红1.4 g +偶氮苯 3.5 g ）o实验内容a）光照异构化取0.1 g 反式偶氮苯溶于5 ml无水乙醇中，将此溶液放于试管中，密封，置于可见光下二星期，以便与光照前的溶液进行对比。
b）薄层层析取管口平整的毛细管吸取光照后的偶氮苯溶液，在离薄层板边沿约0.5 cm的起点线上点样再用另一毛细管吸取未经光照的反式偶氮苯溶液点样。
待乙醇挥发后，将点好样品的薄层板放入内衬滤纸的展缸中。
展缸内已放置展开剂（乙酸乙酯/石油醚=1/40 ）。
薄层板的点样端在下方，浸入展开剂，展开剂不要没过起点线，也不要碰到样品点。
待展开剂前沿上升到离板的上端约1 cm处时，取出薄层板，立即用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，置于空气中晾干。
可观察到薄层板上经光照后的偶氮苯溶液点样处上端有两个黄色斑点（哪一个斑点是顺式的？哪一个斑点是反式的？）。
计算异构体的rf值。
用上述相同的方法，采用ethyl acetate : petroleum ether = 1:1 为展开剂，对靛红与偶氮苯的混合物进行tlc，为下面的柱层析选择展开剂c）柱层析1.将层析柱固定在铁架台上,一定要保持柱子竖直、八——亠2.将层析柱洗净后在柱底部放入一小团脱脂棉花。
3.在锥形瓶中称重7g硅胶（sio2），并用ethyl acetate : petroleum ether（1:40）调匀。
在层析柱的下方放置一个锥形瓶，以收集流下的液体。
加入少量洗脱剂于层析柱中，以润湿棉花，使其贴在柱子下端。
4.打开层析柱活塞，控制溶剂下流，将硅胶悬浊液沿柱子侧壁加入，并用少量的溶剂洗去残余的硅胶，并加入柱中。
用装有橡皮管或塞子由下向上轻轻敲击柱子外壁，将气泡赶出，使硅胶填装均匀。
并加压使硅胶紧密，以获得较好的分离效果。
轻轻敲击，使硅胶最上层成均匀平面，然后用药匙沿柱子侧壁，轻轻地、慢慢地在硅胶表面覆盖一层海砂（注意：不要破坏硅胶的上平面）。