无菌检查法药品无菌检查规程
中国药典2020版无菌检查法
中国药典2020版无菌检查法中国药典（2020版）是中华人民共和国国家药品监督管理局发布的一部重要药学法规，其中涵盖了药品质量控制的各个方面。
无菌检查法是药品生产过程中至关重要的环节之一，下面是相关参考内容（不包含链接）。
无菌检查是一种评估药品无菌状态的方法，对于注射剂、眼用制剂、口服液等非口服制剂等其它无菌制剂，都需要进行无菌检查。
1. 测试样品的选择：无菌检查的样品应根据药品特点进行选择。
例如，对于注射剂和眼用制剂，往往需要每种药品样品至少选择20个，对于其他制剂需要至少选择5个样品。
每个样品应从不同的批次中随机选择，以确保整个生产过程的无菌性。
2. 检查设备：无菌检查需要使用无菌操作台、无菌器具和应无菌化的培养基等设备。
检查设备要定期进行校验和维护，以保证其正常工作状态和准确性。
3. 环境要求：无菌检查需要在无菌环境下进行。
检查人员应穿戴无菌操作衣、戴无菌手套，确保检查操作不受外界微生物的污染。
4. 检查方法：常用的无菌检查方法包括培养法和观察法。
培养法是指将样品接种到培养基上进行培养，观察是否有微生物生长。
观察法是通过目视观察、显微镜观察等手段，直接检查样品中是否有微生物存在。
5. 结果判定：对于培养法，通常需要在相应的培养条件下培养一定的时间，观察培养基是否有菌落的生长。
如果培养基上有菌落，则说明样品不符合无菌要求。
对于观察法，检查结果应根据相关标准或规定进行判定。
6. 记录和报告：检查过程中应详细记录各项操作和结果，包括样品信息、检查方法、操作员等。
检查后，应根据相关规定填写相应的检查报告，并将报告保存备查。
无菌检查是确保药品质量和安全的重要环节，对于非口服制剂尤为重要。
药品生产企业应按照国家药典的要求，建立完善的无菌检查体系，进行规范化的检查操作和记录。
同时，应不断关注无菌检查技术的更新和发展，提高检查方法的准确性和可靠性，确保药品无菌状态的准确评估。
无菌检查操作规程
无菌检查操作规程文件编号：版本：编制/日期：审核/日期：批准/日期：受控状态:批准实施1 目的为了规范产品无菌检查操作，编制本规程。
2 适用范围本规程适用于产品无菌检查。
3 职责3.1 检验室负责对产品无菌检查的取样和化验，并填写报告；3.2 品管部经理负责签发检查报告。
4 工作程序（见《中国药典》2015年版）4.1 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
4.2 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
4.3 培养基及其制备方法硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4.3.1 硫乙醇酸盐流体培养基（用于培养好氧菌、厌氧菌）酪胨（胰酶水解） 15.0g 氯化钠 2.5g葡萄糖 5.0g 新配制的0.1％刃天青溶液 1.0mlL-胱氨酸 0.5g 硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸0.3ml） 0.5g琼脂 0.75g 酵母浸出粉 5.0g水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节 pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
GMP-无菌检查操作规程
1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。
2.范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。
3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。
4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。
5.内容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。
5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。
在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。
5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。
在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小时。
5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。
取直径90mm双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100 级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。
5.1.4无菌室内应准备好盛有消毒用5％甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、75％酒精棉及拖鞋等。
5.2仪器、用具：5.2.1真空泵、恒温培养箱、生物显微镜、托盘天平（精度0.1g）、抽滤瓶（500ml）、三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求规格）、试管、双碟（9cm）、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉）、不锈钢吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约5cm），孔径应在0.45±0.02μm )载玻片、洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。
无菌检查法标准操作规程
无菌检查法标准操作规程目的：建立无菌检查的基本操作，为无菌检查人员提供正确的操作规程。
2.依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
3.范围：本标准适用于QC无菌检查的操作。
4. 职责：QC无菌检查人员对本标准的实施负责。
5.程序：5.1. 定义：无菌检查法：系指检查药品、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否无菌的一种方法。
5.2. 无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控（18~26）℃及除湿装置，操作室或工作台应保持空气正压。
5.2.1. 无菌室的清洁与消毒应符合QC洁净室清洁、消毒规程（SOP ZL0014）。
5.2.1.无菌室无菌程度的检查应符合规定：见沉降菌监测规程（SOP ZL0006）、悬浮粒子监测规程（SOP ZL0005）。
实验设备及用具：5.3.1.电热干燥箱、电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热恒温培养箱、试管、注射器、针头、试管架、刻度吸管、手术剪、手术镊、砂轮、注射器盒、搪瓷托盘、双碟、75%酒精棉球、无菌工作服（衣、裤、帽、口罩等）。
5.3.2.微孔滤膜：直径50mm、孔径0.45μm，应符合规定。
5.3.3.除菌滤器：除菌滤器采用的是HTY-2000型全封闭式薄膜过滤器。
5.3.4. 所有进入无菌室的物品必须经过消毒或灭菌，应严格按照进入QC无菌室物品清洁、消毒、灭菌规程（SOP ZL0015）进行操作。
5.4. 稀释剂：灭菌注射用水。
5.5. 培养基：5.5.1.需气菌、厌气菌培养基（流体硫乙醇酸盐培养基）；真菌培养基。
5.5.2. 培养基的使用，配制、管理及灵敏度检查应按照培养基管理规程（SMP ZL0036）、培养基灵敏度检查规程（SOP ZL0019）、培养基配制规程（SOP ZL0016）进行操作。
5.6. 对照用菌液：5.6.1. 金黄色葡萄球菌（Staphyoccus sureus）菌液：取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30~35℃培养16~18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。
无菌检查标准操作规程
无菌检查标准操作规程无菌检查法是检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。
事实上，若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。
无菌检查法有薄膜过滤法、直接接种法两种方式。
细菌培养温度32.5℃±2.5℃，真菌培养温度25.5℃±2.5℃。
1 无菌检查的环境无菌检查的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可考性，对洁净室（区）的环境质量采取合理的控制措施和评价方法是必要的。
无菌检查应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向留空气区域内或隔离系统中进行，其全过程笔削严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。
面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。
由1～2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间与缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。
在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。
墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。
操作间内不应安装下水道。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18～26℃，相对湿度45%～65%。
缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。
中国药典2020无菌检查法
中国药典2020无菌检查法无菌检查法是药品生产中非常重要的一项质量控制方法，其目的是检验药品是否符合无菌要求，以确保药品的安全性和有效性。
中国药典2020中规定了无菌检查的方法，本文将对无菌检查法进行详细介绍。
无菌检查法是指对药品样品进行无菌试验，以确定是否存在细菌、真菌或其它微生物。
无菌试验包括原料药、制剂和生物制品的无菌试验。
在中国药典2020中，无菌检查法主要分为两种：直接接种法和膜过滤法。
直接接种法是指将待检样品直接接种在培养基上，观察一定时间后是否有微生物生长。
直接接种法适用于液体制剂和原料药的无菌试验。
在进行直接接种无菌试验时，应先将试样用无菌方法处理，使细菌、真菌等微生物减少或清除。
然后将处理后的试样分别接种在含有适当培养基的培养皿上，然后密封培养皿，适当灭菌。
在培养箱中适当温度下培养一定时间，观察培养皿是否有微生物生长。
若有微生物生长，则说明样品不符合无菌要求。
膜过滤法是指将待检样品通过0.45μm孔径的膜过滤器，将微生物截留在膜上，然后将膜放置在含有适当培养基的培养皿上，观察一定时间后是否有细菌或真菌生长。
膜过滤法适用于不易接种的样品，如含固体颗粒的液体制剂和大体积原料药等。
在进行膜过滤无菌试验时，应先将膜过滤器用无菌方法处理，使膜过滤器无菌。
然后将待检样品通过膜过滤器，过滤到含有适当培养基的培养皿中，然后在适当条件下培养一定时间，观察培养皿是否有微生物生长。
若有微生物生长，则说明样品不符合无菌要求。
对于无菌试验中的阴性对照，应分别对无菌生理盐水和培养基分别进行直接接种法或膜过滤法试验，确保试验条件和操作技术正确，并且无菌生理盐水和培养基无污染。
在进行无菌检查法试验时，应严格操作，避免试验污染。
应在无菌操作台上操作，使用无菌培养皿、无菌吸头、无菌吸滤器等。
同时，应严格遵守无菌技术操作规程，确保操作正确、无菌。
总之，无菌检查法是药品生产中非常重要的一项质量控制方法。
中国药典2020中规定了无菌检查法的方法，包括直接接种法和膜过滤法。
无菌检验标准操作规程(SOP)
目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。
范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。
责任者：质管部、化验室主任、QC佥验员内容：1、标准依据：《中国药典》2015年版二部附录XI H。
2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。
检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查。
若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。
3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作。
防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。
操作前环境洁净度应经验证。
日常检验需对试验环境进行监控。
5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。
4、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
6检验数量及检验量：6.1、接种每种培养基所需的最少检验数量：2%或10个（取较少者），供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。
6.2、每支供试品接入每种培养基的最少量：半量（100ml w V< 200ml），采用薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
7、细菌培养温度为30〜35C,真菌培养温度为23〜28C。
8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、75%酒精棉球、紫外光灯365nm真空泵、一次性使用集菌培养器。
9、消毒剂配制：9.1、75%乙醇溶液（配制酒精棉球用）。
9.2、0.2 %新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。
9.3、2%来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。
中国药典2020无菌检查法
中国药典2020无菌检查法《中国药典2020》是中国药典委员会颁布的一部关于药物质量和药品标准的权威性指南。
其中，无菌检查法是一项重要的内容。
本文将从无菌检查法的定义、目的、步骤、设备和评价标准等方面进行详细阐述，以使读者对该法有更深入的了解。
一、无菌检查法的定义无菌检查法是指对药品或其他生物制品是否存在微生物污染的一种检查方法。
通过对样品进行无菌条件下的培养和观察，判断样品中是否有病原微生物或其他有害的微生物存在。
二、无菌检查法的目的无菌检查法的目的是确保药品在生产和使用过程中的无菌状态，保证药品的质量和安全性。
通过检查药品是否受到任何微生物污染，能有效预防细菌感染、交叉感染和其他相关疾病的发生。
三、无菌检查法的步骤1.准备工作：无菌检查需要准备一批无菌培养基、试管、平板和其他无菌实验器具。
2.取样：按照规定的取样方法，从待检测样品中取相应的样品量。
3.培养：将样品转入无菌培养基中，放入培养箱或孵化器中进行培养。
4.观察：培养一定时间后，对培养基进行观察。
根据培养基上是否有生长的微生物形态，判断样品是否存在微生物污染。
5.结果评价：根据无菌检查法所规定的评价标准，对观察结果进行判断，并作出相应的结论。
四、无菌检查法所需设备1.培养箱或孵化器：用于提供适宜的培养温度和湿度条件，以促进微生物的生长。
2.无菌工作台：提供无菌的工作环境，防止外界微生物的污染。
3.试管、平板、培养基：用于收集样品、培养微生物和观察微生物生长情况。
4.显微镜：用于观察培养基上的微生物形态。
五、无菌检查法的评价标准无菌检查法根据不同药品的要求，采用不同的评价标准来判断检查结果。
主要有以下几个方面：1.无菌：表示样品中不含有任何生长的微生物。
2.无菌状态：表示无菌状态有可能受到微生物污染，但在检查时没有检出任何微生物生长。
3.微生物计数：表示检查结果中存在一定数量的微生物，但其数量在可接受范围内，不会对药品的质量和安全产生影响。
中国药典2020无菌检查法
中国药典2020无菌检查法摘要：I.引言- 简述中国药典2020 无菌检查法的重要性II.无菌检查法的定义和作用- 解释无菌检查法的含义- 说明无菌检查法在药品生产中的重要性III.中国药典2020 无菌检查法的内容- 介绍中国药典2020 中无菌检查法的基本要求- 详述无菌检查法的具体步骤IV.无菌检查法的应用- 说明无菌检查法在药品生产过程中的应用- 阐述无菌检查法在药品质量控制中的作用V.结论- 总结中国药典2020 无菌检查法的重要性- 强调无菌检查法在保障药品安全有效方面的重要性正文：中国药典2020 无菌检查法是一种在药品生产过程中对无菌状态进行检查的方法，对于确保药品的安全性和有效性具有重要意义。
无菌检查法是指通过检测药品中微生物的存在，判断其是否符合无菌要求。
在药品生产过程中，无菌状态的保持对于避免药品污染和保证药品质量至关重要。
根据中国药典2020 的规定，无菌检查法需要遵循一系列基本要求。
首先，检查前应确保实验环境、实验设备和实验材料的洁净度。
其次，取样时要注意避免样品受到污染。
接着，采用适当的方法对样品进行处理，使其符合检测要求。
最后，通过显微镜观察或生化试验等方法对样品进行检测，判断其是否符合无菌标准。
在药品生产过程中，无菌检查法被广泛应用于原料药、辅料、中间产品和最终产品的质量控制。
通过无菌检查法，可以及时发现药品中的微生物污染，从而采取相应的措施进行处理。
这有助于降低药品的微生物污染风险，提高药品的安全性和有效性。
总之，中国药典2020 无菌检查法在药品生产过程中具有重要作用。
通过这一方法，可以有效保障药品的安全性和有效性，为患者提供质量可靠的药品。
无菌检查法标准操作规程
将废液和实验物品及已操作完毕的含培养基的集菌培养器等移至 传递窗并拿出，擦拭工作台面，检查电源是否关闭，是否有遗留物品 等。按照《人员进出实验室的净化更衣规程》脱掉无菌服并装入配套 的袋中，开启无菌室紫外灯半小时，将无菌服送至特定的洗衣机进行 清洗灭菌。实验完毕的样品按照《检验用样品管理规程》进行销毁处 理。 4.1.4阳性对照
关闭紫外灯10分钟后，进入缓冲间，按照《人员进出实验室的净化 更衣规程》进入，并按照此规程穿戴无菌服、口罩。
4.操作
4.1薄膜过滤法 4.1.1操作前准备
检查无菌室电源和仪器是否完好，标示状态卡是否正确，是否有前 次遗留物品及废液等，戴上无菌手套将供试品及所需物品移入无菌操作 室，开启超净工作台并擦拭工作台面。 4.1.2操作 4.1.2.1根据药液性质选用不同型号的培养器，对于普通药液选用型号
菌检查法的要求。 （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。 （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所
使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。 试验若经确认无效，应重试。重试时，必须重新取同量供试品，依
法重试，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符 合规定。
否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品 在该检验条件下未发现微生物污染。无菌检查法包括薄膜过滤法和直接 接种法。 1.2 检验数量
指一次检验所用供试品最小包装容器的数量。除另有规定外，按表 1规定的最少检验数量进行，最少检验数量不包括阳性对照试验的供试 品用量。采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量做阳性对照用； 采用直接接种法，增加每个培养基容器接种的样品量作为阳性对照用。
无菌检查.操作规程
无菌检查.操作规程无菌检查是指对无菌状态的物品、器械、培养基等进行检查，以确定其是否具有无菌性的一种操作。
无菌检查主要是为了保证医疗器械和药品的质量，防止传播致病菌和交叉感染。
下面是无菌检查的操作规程，共1200字。
一、仪器与试剂准备1. 玻璃器皿：无菌检查中常使用的玻璃器皿应先清洗，然后用高压蒸汽高温灭菌。
确保玻璃器皿表面没有任何污物和细菌。
2. 培养基：根据需要选择适当的培养基，如营养琼脂、肉膏琼脂等。
使用前应检查培养基包装是否完好，是否过期，如有问题应废弃，以免影响检测结果。
3. 培养皿：无菌培养皿应提前准备好，如果有无细菌培养基的培养皿，最好优先选择使用。
4. 培养皿贴壁：无菌贴壁是为了避免液体滴入培养皿内引起细菌污染，使用前应检查贴壁是否完好。
5. 双口试管：用于无菌培养物的传递，提前准备好。
二、人员准备工作1. 手部卫生：进行无菌检查前，操作人员应进行手部卫生，包括洗手和消毒。
先用流动水清洗手部，然后使用75%酒精进行消毒。
2. 穿戴无菌操作服：无菌检查需要穿戴无菌操作服，操作服要求干净、整洁，且经过高温蒸汽灭菌。
穿戴手套前，应先检查手套是否完整、无损。
3. 工作台表面消毒：将工作台表面用70%酒精进行擦拭消毒，确保无菌操作环境。
三、操作步骤1. 取一份待检物品：如医疗器械或药品，然后进行外观检查。
确保物品包装完好，无明显损伤和破损。
2. 打开培养皿：将培养皿的盖子拉开一些，方便后续操作。
3. 将待检物品放入培养皿：用镊子或无菌力ps，将待检物品放入培养皿内，尽量避免让待检物品直接接触培养皿的边缘。
4. 培养皿倒置：将培养皿倒置放于工作台上，检查物品是否有菌落生成。
5. 灭菌培养皿口：用长火柴将培养皿上的边缘逐一燃烧，防止细菌飞溅和传播。
6. 检查结果：观察培养皿上是否有菌落生成。
如果有菌落，则证明待检物品不符合无菌要求；如果无菌皿上没有菌落生成，则证明待检物品具有无菌性。
7. 结果记录：将无菌检查结果记录在检验记录表格上，包括待检物品的名称、批号、检查日期等信息。
无菌检查标准操作规程
无菌检查标准操作规程1 目的明确无菌检查法的过程，保证产品质量。
2 适用范围使用薄膜过滤法或直接接种法，检查要求无菌的产品及其原、辅料等是否无菌。
3 定义无。
4 职责与权限检验员：按本标准判定产品质量并出具报告。
负责人：监督执行情况，审批最终结果。
5 内容及流程5.1 实验说明5.1.1 TSB为“胰酪大豆胨液体培养基”。
5.1.2 所用材料及用具（待检品、菌株除外）应经过灭菌处理；检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
5.1.3 直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试品。
5.2 检验量最少检验量（生物制品原液或半成品）：每个容器（每个容器制品）的取样量为总量的0.1%或不少于10mL，每开瓶一次，应如上法抽验。
5.3 实验材料与用具5.3.1 待检品（供试品）。
5.3.2 菌悬液（浓度≤100cfu/mL）：应根据供试品特性选择阳性对照菌。
①无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌作对照；②抗革兰阴性菌为主的供试品，以大肠埃希菌作对照；③抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌作对照；④抗真菌的供试品，以白色念珠菌作对照。
5.3.3 薄膜过滤法：无菌封闭式薄膜过滤器、无菌滤膜（孔径≤0.45μm，直径约50mm）、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、硫乙醇酸盐流体培养基（400mL/瓶）、TSB培养基（400mL/瓶）、无菌吸头、移液器。
5.3.4 直接接种法：0.9%无菌氯化钠溶液、硫乙醇酸盐流体培养基（15mL/支）、TSB培养基（10mL/支）、无菌吸头、移液器。
5.4 薄膜过滤法5.4.1 供试品处理：打开包装前，先用75%乙醇对供试品容器表面进行彻底消毒，再以无菌操作拆开每个包装。
如有需要可将供试品混合不少于100mL的稀释液中再进行操作。
5.4.2 润湿：取10mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液注入滤筒，过滤，使整个滤膜表面湿润。
无菌检验标准操作规程
目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。
范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。
责任者：质管部、化验室主任、QC检验员内容：1、标准依据：《中国药典》202X年版二部附录XI H。
2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。
检查工程包含需气菌、厌气菌及真菌检查。
假设供试品符合该项检查方法的有关规定，仅说明了在该检验条件下未发觉微生物污染。
3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级〔C级〕背景下的局部百级〔A级〕的单向流地域内或隔离系统中进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作。
预防微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。
操作前环境洁净度应经验证。
一般检验需对试验环境进行监控。
5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。
4、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
6、检验数量及检验量：6.1、接种每种培养基所需的最少检验数量:2%或10个〔取较少者〕，供试品无菌检查假设采纳薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对比用；假设采纳直接过滤法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对比用。
6.2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量〔100ml≤V≤200ml〕，采纳薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性同意，应将全部容器内的全部内容物过滤。
7、细菌培养温度为30～35℃，真菌培养温度为23～28℃。
8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器〔针头〕、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、一次性使用集菌培养器。
9、消毒剂配制：9.1、75％乙醇溶液〔配制酒精棉球用〕。
9.2、0.2％新洁尔灭溶液〔配制消毒棉球用〕。
9.3、2％来苏尔溶液〔配制消毒棉球用〕。
无菌检查法药品无菌检查规程
无菌检查法药品无菌检查规程一、目的：阐述无菌检查规程。
二、适用范围：适用于无菌检查规程。
三、责任者：品控部。
四、正文：1 概述无菌检查是检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于中国兽药典要求无菌检查的其它品种是否染有活菌的一种方法。
无菌检查的操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作。
该检查法根据供试品有无抑菌作用而采用薄膜过滤法或直接接种法两种方式。
2 仪器、设备和用具无菌室分无菌操作室和缓冲间。
在缓冲间应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控(25±2)℃及除湿装置。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外灯和照明灯，操作室或工作台应保持正压。
2.1.1 无菌室应每周和每次操作前用%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外灯杀菌半小时。
在每次操作完毕，同样上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌半小时。
2.1.2 无菌室的无菌程度检查无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90mm双碟，在接种室内点燃乙醇灯，在乙醇灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板，在30～35℃培养48小时，取出检查，100级清洁度要求:3个平板上生长的菌落数平均不得超过1个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100级(一般用尘埃粒子计数仪)检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过个/升；空气流量应控制在～S；细菌菌落数平均＜1个，可根据无菌状况必要时置换过滤器。
恒温培养箱及可调20～25℃的生化培养箱。
离心机、显微镜、蒸汽灭菌器、标准PH比色器%酚磺酞指示液和溴钾酚蓝指示液)、恒温烤箱。
玻璃器皿试管、量筒、三角瓶、移液管、刻度吸管(1、5、10ml)、注射器(2、5、10ml)、双碟等，用玻璃洗涤剂或清洁液浸泡，水洗3次。
中国药典 无菌检查法
中国药典无菌检查法在当今的医药行业中，无菌检查法是确保药品安全性和有效性的重要手段。
中国药典作为我国药品质量标准的权威法规，对于无菌检查法的规定和实践具有极其重要的指导意义。
本文将详细阐述中国药典中无菌检查法的相关内容，以期为药品生产和质量控制提供有益的参考。
一、中国药典无菌检查法概述中国药典无菌检查法是针对药品中微生物污染进行检查和评估的标准方法。
该方法通过对样品进行适当的处理、培养和观察，以确定样品中是否存在微生物。
无菌检查法对于保证药品质量和安全性具有至关重要的作用，因为微生物污染可能导致药品失效、不良反应甚至危害患者健康。
二、无菌检查法的实践操作1.样品采集与处理在进行无菌检查之前，必须对样品进行适当的采集和处理。
采集的样品应当具有代表性，能够反映药品的整体质量。
处理过程中应避免交叉污染和外界微生物的引入。
2.培养基的选择与制备无菌检查中使用的培养基必须符合中国药典的规定，具有良好的选择性、灵敏度和特异性。
培养基的制备过程需严格按照配方进行，确保质量和稳定性。
3.接种与培养将处理后的样品接种于适宜的培养基中，按照规定的温度和时间进行培养。
接种过程中要保证无菌操作，防止污染。
4.观察与结果判定在规定的培养期结束后，对培养基进行仔细观察，记录任何可见的微生物生长情况。
根据观察结果进行无菌检查的判定，确定药品是否符合无菌要求。
三、无菌检查法的质量控制为确保无菌检查法的准确性和可靠性，必须加强实验室的质量控制。
这包括对实验人员的培训、实验设备的维护与校准、实验环境的监控以及实验过程的规范化和标准化。
同时，应定期进行内部审核和外部质量评估，以确保无菌检查法的执行符合中国药典的要求。
四、结论与展望无菌检查法作为药品质量保证的重要环节，在医药行业中具有举足轻重的地位。
中国药典作为我国药品质量的法规性文件，对于无菌检查法的规定和实践提供了明确的指导。
通过深入理解和严格执行中国药典的相关要求，我们能够更好地保障药品的安全性和有效性，为公众健康事业做出积极贡献。
无菌检查标准操作规程
范围：无菌检查法包括直接接种法和薄膜过滤法。
前者适用于非抗菌作用的供试品，后者适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。
职责：检验室对本规程的实施负责正文：1.操作前准备1.1试验设备、仪器用具1.1.1开放式滤器、真空泵、抽滤瓶1.1.2恒温培养箱(30℃~35℃)、生化培养箱(20℃~25℃)恒温水浴1.1.3高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱(250℃)1.1.4显微镜1.1.5玻璃器皿：试管、锥形瓶、量筒、培养皿(φ90mm)、刻度吸管(1、5、10ml)、注射器(5、10、20、30ml)、针头——洗净、晾干，用牛皮纸包扎严密，121℃蒸汽灭菌30分钟。
1.1.6手术镊、剪——160℃～180℃干烤2h。
1.2供试品等的处理供试品试验用盘、试管架等进入无菌室之前用消毒剂擦试。
1.3按无菌衣服的着装程序穿戴好无菌衣、帽、鞋。
2.检查2.1直接接种法2.1.1供试品的制备，按规定量取供试品混合。
2.1.2接种——取备妥的供试品，以无菌操作将该供试品分别接种于需、厌气菌培养基6管，其中1管接种金黄色葡萄球菌对照用菌液1ml作阳性对照，另接种于真菌培养基与5管，轻轻摇动，使供试品与培养基混合。
2.1.3培养——需、厌气菌培养基管置30-35℃培养箱中培养7日、真菌培养基管置20-25℃培养箱中培养7日，在培养期间应观察并记录是否有菌生长，阳性对照管在24小时内应有菌生长，如在加入供试品后，培养基出现浑浊，培养7天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或斜面培养基上继续培养，细菌培养2日真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长，或用接种环取培养液涂片、染色，用显微镜观察是否有菌。
——有轻微抑菌性的供试品可加入扩大量的每种培养基中，使供试品稀释至不含抑菌活性的。
2.2薄膜过滤法2.2.1抽滤——按该药品项下规定的方法处理后，加入0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶液至少100ml的适当容积的容器中混合后，通过装有孔径不大于0.45μm的薄膜过滤器，然后用0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶液冲洗滤膜至阳性对照菌正常生长为度。
无菌检查标准操作规程
无菌检查标准操作规程无菌检查法是检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。
事实上，若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。
无菌检查法有薄膜过滤法、直接接种法两种方式。
细菌培养温度32.5℃±2.5℃，真菌培养温度25.5℃±2.5℃。
1 无菌检查的环境无菌检查的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可考性，对洁净室（区）的环境质量采取合理的控制措施和评价方法是必要的。
无菌检查应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向留空气区域内或隔离系统中进行，其全过程笔削严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。
面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。
由1～2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间与缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。
在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。
墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。
操作间内不应安装下水道。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18～26℃，相对湿度45%～65%。
缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。
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无菌检查法药品无菌检查规程一、目的：阐述无菌检查规程。
二、适用范围：适用于无菌检查规程。
三、责任者：品控部。
四、正文：1 概述无菌检查是检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于中国兽药典要求无菌检查的其它品种是否染有活菌的一种方法。
无菌检查的操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作。
该检查法根据供试品有无抑菌作用而采用薄膜过滤法或直接接种法两种方式。
2 仪器、设备和用具2.1 无菌室分无菌操作室和缓冲间。
在缓冲间应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控(25±2)℃及除湿装置。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外灯和照明灯，操作室或工作台应保持正压。
2.1.1 无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外灯杀菌半小时。
在每次操作完毕，同样上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌半小时。
2.1.2 无菌室的无菌程度检查无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90mm双碟，在接种室内点燃乙醇灯，在乙醇灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板，在30～35℃培养48小时，取出检查，100级清洁度要求:3个平板上生长的菌落数平均不得超过1个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100级(一般用尘埃粒子计数仪)检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个/升；空气流量应控制在0.75～1.0m3/S；细菌菌落数平均＜1个，可根据无菌状况必要时置换过滤器。
2.3 恒温培养箱及可调20～25℃的生化培养箱。
2.4 离心机、显微镜、蒸汽灭菌器、标准PH比色器(0.02%酚磺酞指示液和溴钾酚蓝指示液)、恒温烤箱。
2.5 玻璃器皿试管、量筒、三角瓶、移液管、刻度吸管(1、5、10ml)、注射器(2、5、10ml)、双碟等，用玻璃洗涤剂或清洁液浸泡，水洗3次。
使用过后如与细菌接触，应先灭菌倒出内容物后再清洗，晾干。
凡无菌操作过程中所用的器皿，都应用牛皮纸包扎严密，121℃灭菌30分钟，或置于耐热容器中盖妥160℃干热灭菌2小时。
2.5.1 移液管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞少许棉花，然后放于吸管筒内或牛皮纸袋内，盖严，灭菌备用。
2.5.2 试管、离心管、三角瓶等在管(瓶)口塞上海棉胶专用塞或纱布棉塞，塞子应塞进管口内2/3之处，用牛皮纸将管口(包括塞子)包扎严，灭菌备用。
2.5.3 将注射器、针头(9号、11号、12号)配对，检查针头是否畅通后，将注射芯、管和针头分别放在双层纱布(或布)内，包扎严密，置带盖容器(瓷盘或铝制饭盒)内，盖严，用牛皮纸包扎后，灭菌备用。
2.6 无菌衣、裤、帽、口罩等洗净晾干，配套，用牛皮纸包严，灭菌备用或用一次性的无菌物品代替。
2.7 长柄取样匙，放于长的玻璃筒内(或不锈钢长筒内)，盖严，干热灭菌备用。
2.8 微孔滤膜直径50mm、孔径0.45μm。
购得一批滤膜，需进行孔径大小的测试，一般有三种方法，选其中一种方法即可。
气泡法先将滤膜浸入水中，使完全湿润，然后用镊子夹住一片滤膜放于气泡点测定装置或滤膜孔径测定仪上，膜上放一块与滤膜大小相同的尼龙筛网，再加上多孔板，将螺旋固定圈旋紧，在多孔板上加3～5mm深的水(注意排除气泡)关闭放气阀，启动空压机或氮气瓶阀，使压力缓缓上升，注意观察水面上产生第一个气泡时，记录压力表的压力，气泡点压力不应小于2.2kg/cm2(0.2MPa)水流量法将滤膜装于除菌滤器上，开动真空泵，压力在700mmHg(93kPa)下，抽滤已滤清的水约500ml，计算出每1min的滤速。
1995年版中国兽药药典对滤膜的滤速明确规定，而USP(XXⅢ)规定在700mmHg(93kPa)压力下，滤膜直径47mm；流速55～75ml/min。
细菌过滤法常用的细菌为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens CMCC(B)41002)，将该菌的新鲜营养琼脂斜面培养物，接种于营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～20小时，用无菌0.9%氯化钠溶液稀释至10－3（约相当于7×105CFU/ml），取此菌液1ml加至50ml无菌0.9%氯化钠溶液中，按薄膜过滤法过滤，取该滤液5ml接种于营养肉汤培养基40ml中，30～35℃培养24小时，应无菌生长。
不符合规定的滤膜不得使用。
2.9 除菌滤器目前有多种滤器；如STV2型无菌检查薄膜器及封闭式滤器的准备分述如下：2.9.1 STV2型无菌检查薄膜滤器是由除菌过滤器和底座排液架两部分组成。
新购置的滤器，需用毛刷将该滤器的各部件用水刷净，除去垢物，用水冲洗4～5次，蒸馏水冲洗1次。
玻璃筒放于玻璃洗涤液或清洁液中过滤，再用水、蒸馏水洗净、晾干。
除菌过滤器的装配在滤器的漏斗部上面置1个橡胶圈，圈上加多孔垫板，在垫板上垫一个四氯乙烯薄膜垫圈，放上乙浸湿的微孔滤膜1片，在其上垫一个四氯乙烯薄膜圈及橡胶圈，安装玻璃筒，套上金属固定架，拧上底部螺母，漏斗底部套上橡皮塞。
将已装配妥的滤器放于带盖的瓷盒（或饭盒）中，盖严，外用牛皮纸包扎灭菌备用。
底座排液架的排液管口接一耐压橡胶管，将管口用纱布，牛皮纸包扎灭菌备用。
该架经灭菌后放于无菌室内可反复使用。
2.9.2 封闭式滤器一般由电脑集菌仪和一次性使用集菌培养器组成。
前者放于无菌操作区台面上。
2.10 手术镊、手术剪洗净、擦干。
用双层纱布将1把剪和1个镊间隔包扎在一起2.11 抽滤瓶一般为1000～2000ml，用水及蒸馏水洗净，晾干。
瓶口用已配有两个玻璃管（一个通至瓶底，一个短些）的橡皮塞盖紧，短的玻璃管上套一个短耐压橡胶管。
抽气口用耐压橡胶管与空气过滤玻璃器（内充填以棉花）相连，空气过滤玻璃器的另一管口用纱布、牛皮纸包扎严紧，抽气瓶的全部装置用牛皮纸包扎，灭菌备用。
2.12 用具的灭菌将包扎妥的用具（除另有规定外）在（121±0.5）℃蒸气灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，易致染菌。
应置恒温培养箱中烘干。
适于高温灭菌的器皿也可采用160℃干热灭菌2小时。
3 试液3.1 75%乙醇溶液配制酒精棉球用。
3.2 碘酊溶液配制碘酒棉球用。
3.3 无菌0.9%氯化钠溶液，分装于试管、三角瓶或玻璃瓶中，瓶口用棉塞、橡胶塞或海绵胶专用塞塞紧并用牛皮纸包扎，灭菌备用。
也可用氯化钠注射液。
3.4 新洁尔灭（1：1000）溶液。
3.5 3～5%甲酚磺溶液或其他适宜消毒溶液。
3.6 0.02%酚磺酞指示液PH6.8～8.4系列比色液管。
3.7 溴甲酚蓝指示液PH6.0～7.6系列比色液管。
3.8 2mol/L盐酸溶液。
3.9 2mol/L氢氧化钠溶液。
3.10 无菌的青霉素酶溶液。
4 培养基4.1 一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的PH 值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。
4.2 新鲜配制的培养基，应按中国兽药典规定的处方，对培养基的原材料要进行挑选，化学药品均需用CP试剂规格。
4.2.1 除葡萄糖和指示液外，将处方中各成分加水后置有石棉网的电炉或适宜的加热设备中，使微温溶解。
用2mol/L氢氧化钠溶液调节PH，使其比规定的PH值略高0.4～0.6，煮沸，用棉(纸)浆减压抽滤或以脱脂棉，滤纸等滤材过滤，使培养基澄清。
4.2.2 加入葡萄糖和指示液，摇匀，补足水量，调节PH值(比规定的PH值略高0.2～0.4)，使灭菌后为7.1±0.2，分装，装量不宜超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。
4.3 培养基灵敏度检查新购的脱水培养基或采用不同品牌原材料的配制的新鲜培养基，其质量均应符合灵敏度检查要求。
4.3.1 菌种（1）腾黄微球菌[Micrococcus luteus CMCC(B)28001]（2）生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B)64941]（3）白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F)98001]4.3.2 操作需气菌、压气菌培养基用腾黄微球菌和生孢梭菌两种菌检查。
取藤黄微球菌的营养琼脂斜面新鲜培养物，加无菌0.9%氯化钠溶液3ml，制成均匀的菌悬液，再以无菌0.9%氯化钠溶液稀释至与细菌浊度标准管相同的浓度，然后作10倍系列稀释，制成1ml中含10～100个菌（CFU）并计数。
取生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基的新鲜培养物，用灭菌毛细管将其吸至灭菌离心管内，离心，弃去上清液，取沉淀菌体用无菌0.9%氯化钠溶液制成均匀菌悬液，吸取上述菌悬液，用无菌0.9%氯化钠溶液稀释，照上述方法制成1ml中含10～100个菌并计数。
真菌培养基用白色念珠菌检查取白色念珠菌的真菌琼脂斜面新鲜培养物，加无菌0.9%氯化钠溶液3 ml，制成均匀的菌悬液，照藤黄微球菌项下方法稀释制成1ml中含10～100个菌并计数。
取藤黄微球菌的营养肉汤，生孢梭菌的需气菌厌气菌培养基的新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物各1ml，用无菌0.9%氯化钠溶液作10倍系列稀释，制成1ml 中含10～100个菌并计数。
将藤黄微球菌的上述之一的稀释液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的需气菌、厌气菌培养基3管，生孢梭菌的上述之一的稀释液各1ml，分别接种至每管装量为12ml的需气菌、厌气菌培养基3管，以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天，并逐日记录结果。
4.3.3 结果判断以每株菌接种后的培养基不得少于2管呈现生长，即该培养基的灵敏度检查符合要求。
4.4 配制的培养基应保存在凉暗处，一般不得超过2周，临用前细菌和真菌培养基分别经30～35℃和20～25℃培养不少于48小时和72小时，证明无菌生长后方可使用。
4.5 需气菌、厌气菌培养基的指示剂氧化层不得超过培养基深度的1/5，否则经水溶煮沸10分钟，但只限加热一次。
无菌试验培养时间结束时，指示剂氧化层应不超过培养基深度的1/2。
5 对照用菌液的制备5.1 试验用菌种、菌种的复苏、转种与保存等均应按照“抗生素微生物检定法”标准操作规程项下操作。
5.2 金黄色葡萄球菌菌液用接种环取金黄色葡萄球菌[Staphylococcus auteus CMCC （B）26003]的营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至需气菌、厌气菌培养基内，在30～35℃培养16～18小时，用无菌0.9%氯化钠溶液稀释制成每1ml中含1～100个菌。
5.3 生孢梭菌菌液用接种环取生孢梭菌[Clostridium sporogones CMCC(B)64941]的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物少许，接种至相同的培养基内，在30～35℃培养18～24小时，用无菌0.9%氯化钠溶液稀释制成每1ml中含1～100个菌。