蛋白质热变性

实验1 蛋白质热变性DSC测试实验

一、实验目的与要求

了解用差示扫描量热法(DSC)测量蛋白质热变性的方法，用差扫描量热法研究白蛋白在纯水和乙二醇溶液中的热变性行为,比较在这些体系中蛋白质变性的差异，并测量分析新鲜蛋清的热变性行为。

二、实验装置

1．差示扫描量热仪（Pyris Diamond DSC）。

2．标定物质：高纯度铟（>99.99％），高纯度锌（>99.99％）。

3．高纯度氮气。

5．标准液体铝皿。

6．被测样品。

7．压样机。

8．高精度电子天平。

9．DSC取样附件。

三、实验方法与步骤

1、原理

一般认为，凡是能引起蛋白质天然构象的变化、而不涉及肽键断裂的任何过程，都叫变性。由于加热而产生的蛋白质变性称为热变性。变性会使物理性质、化学性质和生物性能发生改变。蛋白质在生命活动中表现出的种种生物功能,完全取决于其特定的构象,一旦这种特定的构象受到破坏,其生物功能就会随之消失。因此研究蛋白质在不同条件下的热变性规律具有非常重要的意义。示差扫描量热法能直接给出蛋白质热变性过程的温度和能量变化,是研究蛋白质构象变化和结构稳定性的一种非常有效的方法。

2、操作方法

（1）配制溶液，制备样品；

（2）按照仪器使用手册，在指导教师的指导下对仪器进行基线优化、温度标定、炉子标定和热流标定；

（3 ）称取被测样品5-10mg，装入样品皿，用压样机封样；

（4）编制温度程序，以10K/min速率在30—90℃范围内升温，记录实验曲线；

（5）换其他不同样品，进行相同的操作。

四、实验注意事项

1、试样放入样品皿时，要保证试样充分摊开，和样品皿的底部充分接触；

2、加样和取样时要规范操作，不能用力过大，以免损坏仪器。

3、因为蛋白质的构象转变和热历史有关，所以测量要在相同的实验条件下进行。

五、实验记录

1、白蛋白在纯水中的浓度、热流曲线；

2、白蛋白在乙二醇溶液中的浓度、热流曲线；。

3、实际蛋清的热流曲线。

六、实验数据处理

和变化焓通过实验记录的热流曲线，利用仪器自带软件，计算变性温度T

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△H

。比较不同样品在相同溶剂中的异同和相同样品在不同溶剂中的异同。

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