荧光分光光度法测定食品中叶酸的含量
叶酸测定
1.原理叶酸是酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei, L. C,ATCC7469）生长所必需的营养素。
在一定条件下，L.C的生长繁殖与培养基中叶酸含量呈正比关系，细菌增殖的量以光密度值计，通过与标准曲线相比较，计算出样品中叶酸的含量。
2.适用范围参考《Methods of Vitamin Assay》，第4版。
本方法适用于各类食物中叶酸的测定。
检测限为0.1ng。
3.仪器与设备（1）恒温培养箱（2）离心机（3）高压消毒锅（4）震荡器（5）接种针和接种环（6）分光光度计4.试剂除特殊说明外，本实验中所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
（1）菌种：酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei, L.C, ATCC 7469）（2）磷酸缓冲液(0.05mol/L, pH6.8):称取4.35gNa3PO4·12H2O,10.39gNa2HPO4·7H2O溶解于800ml水中。
临用前用约5g抗坏血酸调节pH至6.8。
（注：叶酸对光、热敏感，易被氧化破坏，抗坏血酸有助于保护叶酸被氧化。
）（3）鸡胰酶溶液：称取100mg干燥的鸡胰酶（Difco公司）（注：含有叶酸轭合酶，用于水解叶酸多谷氨酸盐），加入20ml磷酸缓冲液制成匀浆，3000rpm离心10min,取上清液备用。
临用前现配。
（4）蛋白酶-淀粉酶溶液：分别称取200mg蛋白酶（Sigma公司）和淀粉酶（Sigma公司），加入20ml磷酸缓冲液制成匀浆，离心3000rpm10min,取上清液备用。
临用前配制。
（5） 2+8乙醇溶液：量取20ml无水乙醇溶液，加入80ml水混匀。
（6） 0.1mol/L NaOH: 称取0.4g氢氧化钠，加2+8乙醇溶液溶解并稀释至1L。
（7） 10mol/L NaOH。
称取400g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L。
（8）叶酸标准储备液（200mg/ml）：准确称取200mg叶酸标准品（Sigma公司，纯度大于98%），用0.01mol/LNaOH溶解并定容至1L。
食品中叶酸的测定方法
中南大学食品分析课程论文题目：食品中叶酸的测定方法学生姓名：毛慧悦所在学院：化学化工学院专业班级：应用化学1105班学生学号：1505110706指导老师: 张泰铭目录1叶酸 (1)1.1叶酸的化学结构 (1)1.2叶酸的理化性质 (1)1.3叶酸的作用效果 (2)2 果蔬中叶酸含量的测定方法 (2)2.1化学发光测定法 (2)2.2离子捕获法 (3)2.3F ENTON试剂氧化-荧光分析法 (3)2.4催化氧化荧光法 (3)2.5衍生荧光法 (4)2.6间接原子吸收光谱法 (4)3 保健品中叶酸的测定方法 (5)3.1铽一环丙沙星稀土敏化荧光猝灭法 (5)3.2表面等离子共振技术（SPR） (5)3.3高效液相色谱法（HPLC）法 (5)3.4高分离度快速液相色谱法（RRLC） (6)3.5氨基硅油修饰碳糊电极阳极伏安法 (6)3.6发光免疫法 (7)3.7PEI修饰的量子点作为叶酸荧光探针 (7)4结论与展望 (7)4.1结论 (7)4.2展望 (8)食品中叶酸的测定方法毛慧悦（中南大学，湖南长沙 410012）摘要：叶酸，又称为维生素B9，是维生素B9的水溶形式。
叶酸是一种重要的一碳载体，在核苷酸合成等重要生理代谢功能方面有非常重要的作用。
因此叶酸在细胞分裂和生长过程（如婴儿发育、怀孕）中有着重要的作用。
叶酸的检测已成为食品研究中的热点，本文从叶酸的结构和检测几个方面展开研究，并重点阐述了果蔬和保健品中叶酸的几种测定方法。
关键词：叶酸；测定方法；果蔬；保健品Testing of folic acid in foodsMAO Hui-yue（Central South University，Hunan Changsha 410012，China）Abstract:Folic acid, also known as vitamin B9 or B c, a water-soluble form of vitamin B9. Folic acid is an important one-carbon carrier in nucleotide synthesis, metabolism of many important physiological functions of homocysteine re methylation plays an important role. Therefore, there is a particularly important role of folic acid in the rapid cell division and growth (such as infant development, pregnancy) in. Folic acid food testing has become a hot research paper from the structure, preparation of folic acid, extraction and detection aspects of a study, and focuses on the determination of several fruits and vegetables and health supplements of folic acid.Key words：folic acid；testing；vegetables and foods；health products.1叶酸1.1 叶酸的化学结构叶酸(Folic acid)，是维生素B9的水溶形式，也被称为蝶酞谷氨酸。
叶酸的检测方法
叶酸的检测方法作者：王娜娜来源：《教育周报·教育论坛》2020年第11期摘要：目前已经发展的一些叶酸检测的方法各不相同，主要根据测定式样来决定其测定方法，最早发展的是微生物法，灵敏度高，但重复性相对较差，主要有比色法、紫外分光光度法、荧光分析法等等。
关键词：叶酸检测方法微生物法微生物法的检测原理为酪乳酸杆菌的生长必需叶酸，培养基中若缺乏叶酸则该细菌不能生长。
在一定的条件下，酪乳酸杆菌的生长及其代谢产物的浓度与培养基中叶酸的含量成正比关系，可测定细菌代谢物或菌体的浓度，即用酸度或浑浊度测定试样中叶酸的含量。
荧光法超声氧化荧光法叶酸自身荧光很弱，在中性介质中经超声照射后，能被氧化成喋呤羧酸，其荧光强度在462 nm波长处比叶酸自身有显著提高。
基于以上现象，建立了一种超声氧化预处理，荧光检测叶酸的方法。
荧光分光光度法本法利用高锰酸钾在酸性介质中氧化叶酸为1-氨基-4-羟基喋吮-6-叶酸后，其荧光强度可以测定复方制剂中叶酸的含量，其他维生素可用硅藻土吸附除去，本法灵敏度较高，可测得0. l ug/ml的叶酸。
衍生荧光法在酸性条件下，用强氧化剂氧化叶酸，并于254 nm紫外光下照射30 min，其氧化产物均具有强的荧光性质，因此荧光强度大大增强，比叶酸自身灵敏度提高2-3个数量级。
实验结果表明：高锰酸钾氧化一光照体系检出限为3.2 x10 -9mol/L，过氧化氢氧化一光照体系检出限为6. 5 x 10 -9mol/L。
离子捕获法1995年，wilson等提出了离子捕获法检测叶酸。
即在实验中，样品中加入变性剂后，叶酸与内源性结合蛋白分离，释放后的叶酸再与带有大量阴离子的亲合试剂结合，合成产物经过离子捕获池而与阳离子纤维结合，最后通过碱性磷酸酶与喋酸（叶酸的类似物）结合物对叶酸结合蛋白上游离结合位点的探测，定量分析样品中叶酸的含量。
色谱法高效液相色谱法在薄膜强阴离子交换树脂（0.01 *300cm pellicular）柱上用氯化钾一磷酸盐缓冲液（pH = 7.5）在40℃的温度下进行梯度洗脱，可将三经基叶酸（THF）， N5-甲基一三经基叶酸（N5-CH3， -THF），去氢叶酸（DHF）、叶酸（FA）等异构体的混合物分离，洗脱的顺序是：THF， N5- CH3 -THF， DHF， FA。
液相色谱-串联质谱法测定强化食品中叶酸的含量
液相色谱-串联质谱法测定强化食品中叶酸的含量王敬;马育松;刘彩虹;艾连峰;郭春海;陈瑞春【摘要】采用液相色谱-电喷雾电离串联质谱法测定强化食品(饮料、大米、奶粉、含乳饮料、饼干及果冻)中的叶酸含量.采用多种方法确保叶酸检测的准确性:①优化前处理操作步骤,并使用铝箔避光保存;②加入二丁基羟基甲苯(BHT)作为叶酸的抗氧化保护剂;③加入甲氨蝶呤作为内标物,抵消复杂基质的干扰.方法系统考察了提取条件对回收率的影响,并采用Waters HSS T3(2.1 mm×50mm,1.7 μm)反相色谱柱,以甲醇-10 mmol/L醋酸铵(pH 6.3)为流动相进行梯度洗脱分离,多反应监测(MRM)正离子扫描模式,以内标法进行定性和定量分析.该方法在0.05 ～ 100ng/mL浓度范围内线性关系良好,定量下限为0.01～0.5 mg/kg,回收率为72.0％～109％,相对标准偏差(RSD)为3.8％～11.8％.该方法简单快速,灵敏度、准确度和精密度均能满足强化食品中叶酸的测定要求.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2014(033)011【总页数】7页(P1224-1230)【关键词】液相色谱-串联质谱;叶酸;强化食品【作者】王敬;马育松;刘彩虹;艾连峰;郭春海;陈瑞春【作者单位】河北出入境检验检疫局,河北石家庄050051;河北出入境检验检疫局,河北石家庄050051;中国检验检疫科学研究院,北京100123;河北出入境检验检疫局,河北石家庄050051;河北出入境检验检疫局,河北石家庄050051;河北出入境检验检疫局,河北石家庄050051【正文语种】中文【中图分类】O657.63;Q563.8叶酸是一种重要的B族维生素，是人和动物为维持正常的生理功能必须从食物中获得供给的微量物质[1]，若人体内叶酸不足会引起巨幼红细胞贫血、智力退化、心脏病、癌症、胃肠功能异常和新生儿神经管畸形等疾病[2-3]。
食品检测方法中荧光光度法的运用
食品检测方法中荧光光度法的运用作者：钱海锋蔡方浩来源：《名城绘》2019年第02期摘要：随着社会经济的不断发展以及人们生活水平的提高，使得人们对于食品安全问题越来越重视。
但是，很多食品生产厂家为了牟取自身的利益，致使食品中的金属元素、维生素等含量超标，对人民群众的身体健康造成极大的威胁。
因此，必须要加强对食品的检验检测工作，使用科学的检测方法明确食品元素含量，以保证食品健康。
荧光光度法在食品检测中的运用能够提高检测的准确性和灵敏度，并且这种方法在食品检测时更加便利、快捷。
关键词：食品检测方法；荧光光度法；运用1、荧光光度法概述简单来讲，荧光光度法就是一种利用物质散发出来的荧光而对其实施检测的方法。
当然，被检测物质是否能散发出荧光，主要取决于物质的分子结构，同时还受被检测物质所处环境的影响。
荧光光度法的光谱范围一般处于X光谱区，再者，还有红外光谱区。
荧光光度法的优势有很多，包括灵敏度高、取样少、准确度高、选择性强、具重现性等。
据相关研究表明，利用荧光光度法实施食品检测的灵敏度最高可达ng/mL，且少量食品样本就能得到准确结果。
另外，荧光光度法所具有的重现性还可为检测人员提供更多参考数据。
荧光光度法也存在一定缺陷。
如，利用荧光光度法对食品进行检测时，其要求被检测食品可散发出荧光方能检测，然而在实际生活当中，有部分食品是无法散发出荧光的，因此，在进行实际检测时，检测人员需依食品的实际情况，适当加入相关试剂，以使食品能够散发出荧光，再对其实施检测，这样就会导致检测所需时间延长，影响检测效率。
2、食品检测方法中荧光光度法的运用2.1检测食品中的金属元素及硒人体内铝的过量蓄积会妨碍正常钙、磷代谢，扰乱中枢神经生理活动，引发骨质疏松，促发老年性痴呆症。
采用微波消解—荧光光度法测定面制食品中铝，灵敏度高，操作简单，基体干扰少，分析速度快。
铝—环丙沙星—十二烷基硫酸钠荧光体系测定微量铝的方法，也可测定面制食品中铝的含量。
保健食品中叶酸的高效液相色谱测定法
[ 6 ]夏元洵,主编1 化学物质毒性全书1 上海: 上海科学技术文献出版社,19911104 - 107. (收稿:2003 - 02 -26) (本文编辑:张军)保健食品中叶酸的高效液相色谱测定法罗建波(广东省疾病预防控制中心,广州市510300)关键词高效液相色谱法;保健食品;叶酸中国图书资料分类号:R115 文献标识码:B 文章编号:1004 - 1257 (2003) 09 - 0036 - 02叶酸是一种重要的B 族维生素, 其化学名称为碟酰谷氨酸,具有促进泌乳、健美皮肤、防止白发、增进食欲和防治口腔溃疡的功效,除了天然存在于绿叶蔬菜和动物肉蛋奶、肝脏中,其中在肝脏中含量最为丰富。
除了天然存在以外,叶酸作为添加剂被适量加入到一些营养强化食品、保健食品中,准确测定叶酸含量对产品的生产加工、功效评价等有重要意义。
叶酸测定目前多采用分光光度法[ 1 ] 和微生物测定法[ 2 ] ,微生物测定法具有设备简便、灵敏度高的特点,但需要时间长,分光光度法的方法选择性较差,特别对复杂成分的样品,干扰较大,检测结果准确性较差。
高效液相色谱法利用C18 色谱柱对样品进行进一步分离,采用紫外检测器,具有选择性好、灵敏度高的优点,特别对复匀,再加入15 ml 氯仿并置于旋涡均质器上振荡均匀25 min ,再离心 6 min(8 000 转/ min) ,用0145μm 滤膜过滤,取过滤液的上层清液5 ml ,用萃取液稀释至50 ml 用于高效液相色谱仪测试。
粉末:直接称取012 g 样品进行萃取分离,其余操作方法同片剂。
液体:吸取110 ml 用萃取液和氯仿混合萃取后直接取上层清液用于液相色谱仪测定。
116 测定通过色谱仪工作站设定程序,自动进样量10 μl ,分别测试标准系列和样品液的吸收光谱图、保留时间、吸收峰面积并进行比较,用外标法定量。
计量公式如下:样品中叶酸含量( mg/ g) = 样品峰面积×标准液浓度(μg/ g)×杂组分样品中叶酸测定更显示其优越性,在国外得到广泛应用, 500 (ml)30 (ml)标准峰面积样品量(g)国内有关的详细报道较少。
荧光分光光度计法测定叶酸的含量
荧光分光光度法测定食品中叶酸的含量叶酸〔1〕是一种重要的B 族维生素,其化学名称为蝶酰谷氨酸。
叶酸的测定方法主要有微生物法〔2〕、HPLC 法〔3〕、荧光法和放射免疫法〔4〕等。
国标法〔5〕测定叶酸是微生物法,选用的菌种可利用培养基中叶酸单谷氨酸和双谷氨酸盐进行生长,灵敏度较高,但是检测需要的时间较长。
由于食品成分复杂,试样处理烦琐费时,而测定的是叶酸盐活性,需制备各种培养基和菌种,步骤多且试剂用量大,微生物法叶酸衍生物繁多,标准品来源有限,存在多种干扰因素,分析方法受到限制。
本文采用超声波提取荧光分光光度法测定食品中的叶酸含量,方法简便、快速,取得满意结果。
现报告如下。
1 材料和方法111 原理叶酸中具有吡嗪- 嘧啶环,它具有特殊的吸收光谱及氧化还原特性。
在紫外光的照射下产生强的兰色荧光。
其荧光强度与标准溶液浓度成线形关系,用磷酸缓冲溶液超声波提取品中的叶酸,提取液经净化后除去其他荧光物质,测定其荧光强度,通过与标准曲线比较,求出样品中叶酸的含量。
112 试剂(1) 叶酸标准贮备液(100μg/ ml) :准确称取10mg 叶酸标准品(CHEMSERVICE 公司,纯度> 98 %) ,加入几滴氢氧化钠溶液助溶,用蒸馏水定容至100.00 ml 。
(2) 叶酸标准工作液(2μg/ ml) :准确吸取2.00 ml 叶酸标准贮备液,用水定容至100.00 ml 。
(3) 20 %冰乙酸溶液。
(4) 磷酸缓冲溶液:pH = 6.8 。
(5) 4 %高锰酸钾溶液。
(6) 3 %H2O2 。
(7) 蛋白酶一淀粉酶溶液:分别称取200 mg 蛋白酶和淀粉酶,加入20ml 磷酸缓冲液制成匀浆,离心,取上清液备用。
临用前配制。
113 仪器RF - 5000 荧光分光光度计,日本岛津。
狭缝宽度5 nm;Ex = 370 nm;Em = 455 nm。
114 标准曲线的绘制准确吸取0.00 ,0.50 ,1.00 ,2.00 ,3.00 ,4.00 ,5.00 ml 叶酸标准工作液,分别置于10.00 ml 的比色管中,加20 %冰乙酸0.1 ml ,4 %高锰酸钾逐滴加至高锰酸钾色不褪色为止,将混合物静置10 min ,然后逐滴向溶液中滴加3 %过氧化氢溶液,直至高锰酸钾的颜色褪掉,用蒸馏水定容至刻度。
分光光度法测定饲料添加剂叶酸含量的方法研究
101.0
95.0~102.0
101.3
96.7
从表 2 可以看出，用两种方法分别测定饲料
添加剂叶酸含量，最大标准偏差≤0.3%，证明本
97.1
0.2
0.3
0.1
0.2
分册,2009,36(03):158-161.
[3] 叶晓利,康文怀,李巧玲,等.高效液相色谱-串联质谱法
测定水果中叶酸及其稳定性[J].食品工业,2020,41(01):
波长 281nm 处用分光光度计测定各溶液吸光度。
20min、30min、40min、50min、60min 后 测 定 其 结
Байду номын сангаас
2.1 标准曲线及相关系数
相对稳定。静置时间≥50min 时，测定结果较之
2
结果与讨论
准确移取 1.2.2 中叶酸标准工作液 0.05mL、
果，测定结果表明静置时间≤40min 时测定结果
叶酸一种水溶性 B 族维生素，是动物机体必
粉、血浆、叶酸片等基质，鲜有用于饲料添加剂叶
需的一种维生素，是脂肪代谢不可或缺的辅酶，
酸的分光光度法。本研究采用简单、快捷的分光
对氨基酸代谢和蛋白质、核酸的生物合成有重要
光度法测定饲料添加剂叶酸的主成分含量，该方
[1]
影响 。在动物机体中，叶酸缺乏会引起巨幼红
[11] 马景宏,张旭,王为黎.微生物分析法测定保健食品中
叶酸[J].中国微生态学杂志,2007(06):576-577.
[12] 柳琪,滕葳,王利民,等.氨基酸分析仪测定饲料添加剂
作者（通信作者）简介：霍艳杰，
（1979-），女，陕西渭
南人，主要从事食品、农产品、环境等常规理化项目的测
微生物法快速测定食品中叶酸含量范围
微生物法快速测定食品中叶酸含量范围田浩;王志伟;顾文佳;曲勤凤【摘要】本实验旨在提出一种使用鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus casei) ATCC 7469快速估算食品中叶酸含量范围的测定方法.利用鼠李糖乳杆菌生长过程中对叶酸需求的特异性,使用一次性离心管代替玻璃试管作为培养该菌的容器,将整个培养体系从10 mL缩小到1 mL,将培养时间从24 h缩短为8～12 h.在对得到的吸光度数据简单换算后,得到待测样品叶酸含量范围,并进行方法学考察,与国标法GB 5009.211-2014进行对比,判断其是否具有可行性结果表明,本实验室条件下,该方法的检出限范围为0.4～0.8 μg/100 g,线性范围为0.01～0.08 ng,回收率范围为82.1％～108.0％.本方法检出限范围可估算出叶酸含量下限范围,线性区间范围可估算出叶酸含量上限范围相对于国标方法需要2～3 d时间测定,本方法只需1d时间即可得到叶酸含量范围,其步骤简洁且节约试剂材料.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2019(040)001【总页数】5页(P229-233)【关键词】叶酸;鼠李糖乳杆菌;快速测定;方法建立【作者】田浩;王志伟;顾文佳;曲勤凤【作者单位】上海市质量监督检验技术研究院,上海200233;上海市质量监督检验技术研究院,上海200233;上海市质量监督检验技术研究院,上海200233;上海市质量监督检验技术研究院,上海200233【正文语种】中文【中图分类】TS201叶酸，是一种重要的水溶性B族维生素，作为一碳单位的重要前体物质，参与到人体内许多重要的细胞通路循环中，包括DNA、RNA和蛋白质的甲基化和DNA 合成、修复等［1］。
居民膳食中的新鲜水果、蔬菜和肉类等食品富含天然叶酸，然而天然叶酸并不稳定，容易在食物的储存、烹饪过程中损失［2］。
人工合成的叶酸性质稳定，被广泛用作营养强化剂［3］。
学界普遍认为，叶酸强化食品可以降低神经管缺陷风险［4］，并推荐孕产妇群体补充叶酸［5－6］。
蔬菜中叶酸的催化氧化荧光法测定
蔬菜中叶酸的催化氧化荧光法测定周福林;宋少飞;弓巧娟;张稳婵;王天娇【摘要】建立了催化氧化荧光法间接测定叶酸的新方法.在pH 5.0的HAc-NaAc 缓冲溶液中,Co~(2+)催化KIO_4氧化叶酸产生强荧光,以262 nm为激发波长,在445 nm处测定叶酸的氧化产物蝶呤-6-羧酸的荧光强度,研究了反应的适宜条件及动力学参数,并探讨了反应机理.在优化实验条件下,叶酸浓度在1.0×10~(-8) ～1.0×10~(-5) mol/L范围内与荧光强度呈良好线性关系,回归方程为ΔI_F=10.82c(μmol/L)+2.867,相关系数r=0.998 5,方法的检出限为5×10~(-9) mol/L.对5×10~(-7) mol/L叶酸标准溶液进行11次平行测定,相对标准偏差(RSD)为0.1%.该法使用Co~(2+)为催化剂,大大提高了方法的灵敏度.方法用于蔬菜中叶酸的测定,加标回收率为93% ～104%,6次测定的相对标准偏差为0.98% ～2.1%,结果令人满意.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2010(029)003【总页数】4页(P272-275)【关键词】催化氧化;荧光光度法;叶酸;蔬菜【作者】周福林;宋少飞;弓巧娟;张稳婵;王天娇【作者单位】运城学院,应用化学系,山西,运城,044000;运城学院,应用化学系,山西,运城,044000;运城学院,应用化学系,山西,运城,044000;运城学院,应用化学系,山西,运城,044000;运城学院,应用化学系,山西,运城,044000【正文语种】中文【中图分类】O433.4;Q563.8叶酸 (Fo lic acid)是由喋啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸残基组成的一种水溶性 B族维生素,亦称维生素BC。
叶酸有助于蛋白质的代谢,是机体细胞生长和繁殖的必需物质,并与维生素 B12共同促进红细胞的生成和成熟,是制造红血球不可缺少的物质。
食品中叶酸的测定方法
中南大学食品分析课程论文题目：食品中叶酸的测定方法学生姓名：毛慧悦所在学院：化学化工学院专业班级：应用化学1105班学生学号：1505110706指导老师: 张泰铭目录1叶酸 (1)1.1叶酸的化学结构 (1)1.2叶酸的理化性质 (1)1.3叶酸的作用效果 (2)2 果蔬中叶酸含量的测定方法 (2)2.1化学发光测定法 (2)2.2离子捕获法 (3)2.3F ENTON试剂氧化-荧光分析法 (3)2.4催化氧化荧光法 (3)2.5衍生荧光法 (4)2.6间接原子吸收光谱法 (4)3 保健品中叶酸的测定方法 (5)3.1铽一环丙沙星稀土敏化荧光猝灭法 (5)3.2表面等离子共振技术（SPR） (5)3.3高效液相色谱法（HPLC）法 (5)3.4高分离度快速液相色谱法（RRLC） (6)3.5氨基硅油修饰碳糊电极阳极伏安法 (6)3.6发光免疫法 (7)3.7PEI修饰的量子点作为叶酸荧光探针 (7)4结论与展望 (7)4.1结论 (7)4.2展望 (8)食品中叶酸的测定方法毛慧悦（中南大学，湖南长沙 410012）摘要：叶酸，又称为维生素B9，是维生素B9的水溶形式。
叶酸是一种重要的一碳载体，在核苷酸合成等重要生理代谢功能方面有非常重要的作用。
因此叶酸在细胞分裂和生长过程（如婴儿发育、怀孕）中有着重要的作用。
叶酸的检测已成为食品研究中的热点，本文从叶酸的结构和检测几个方面展开研究，并重点阐述了果蔬和保健品中叶酸的几种测定方法。
关键词：叶酸；测定方法；果蔬；保健品Testing of folic acid in foodsMAO Hui-yue（Central South University，Hunan Changsha 410012，China）Abstract:Folic acid, also known as vitamin B9 or B c, a water-soluble form of vitamin B9. Folic acid is an important one-carbon carrier in nucleotide synthesis, metabolism of many important physiological functions of homocysteine re methylation plays an important role. Therefore, there is a particularly important role of folic acid in the rapid cell division and growth (such as infant development, pregnancy) in. Folic acid food testing has become a hot research paper from the structure, preparation of folic acid, extraction and detection aspects of a study, and focuses on the determination of several fruits and vegetables and health supplements of folic acid.Key words：folic acid；testing；vegetables and foods；health products.1叶酸1.1 叶酸的化学结构叶酸(Folic acid)，是维生素B9的水溶形式，也被称为蝶酞谷氨酸。
_国标《食品中叶酸的测定》的标准曲线绘制与计算
[基金项目] 浙江省卫生高层次创新人才培养、浙江省151人才培养、浙江省医学科学院青年基金[作者简介] 唐靓(1979-),男,本科,助理研究员,主要从事微生物检测与研究工作。
＊通讯联系人,E-m a i l :w y 3333@163.c o m【经验交流】国标《食品中叶酸的测定》的标准曲线绘制与计算唐靓,李跃中,王晗,陆明旸,李昉贇,王茵＊(浙江省医学科学院,杭州 310013)[关键词] 微生物法;叶酸;标准曲线;E X C E L[中图分类号] R 155.5 [文献标识码] C [文章编号] 1004-8685(2009)07-1682-02 中华人民共和国国家标准G B /T 5009.211-2008《食品中叶酸的测定》于2008-11-21发布,2009-03-01正式实施[1]。
标准7.6结果计算中说明:以标准系列管叶酸含量为横坐标、透光率为纵坐标,绘制标准曲线。
从标准曲线查得试样管或酶空白管中叶酸的相应含量,如果每个试样的三支试样管中有两支叶酸含量落在0.20～1.0n g 范围内,则可继续进行计算。
1 标准曲线建立笔者参与标准的起草,对微生物法测定食品中叶酸含量的准确度、精密度和重复性做了验证与评价。
在实验过程中,发现干酪乳杆菌A T C C 7469标准管的O D 值随着叶酸浓度增加而增长趋缓,略呈S 形。
若使用线性方程,数据点分布在方程两侧,求得的叶酸浓度不准确(见表1与图1)。
表1 叶酸标准系列管的O D 值C (n g )0.00.050.10.20.3O .D 0.0000.0350.0920.2210.333O .D 0.0060.0280.0850.2020.319均值0.0030.0320.0890.2120.326C (n g )0.40.50.60.81.0O .D 0.4180.4990.5930.7360.839O .D 0.4090.5030.5800.7010.837均值0.4140.5010.5870.7190.838图1 叶酸1阶线性方程标准曲线标准曲线:y =0.8693x +0.0284r 2=0.984若使用E X C E L 的功能,可以建立4阶曲线方程,该方程与实验数据的拟合程度较好。
基于碳量子点荧光分光光度法检测叶酸
基于碳量子点荧光分光光度法检测叶酸邓小燕;李佳渝;谭克俊【摘要】在pH7.3磷酸盐缓冲介质中,通过静电作用,叶酸能猝灭碳量子点在384 nm处的荧光.其猝灭的荧光信号强度与叶酸浓度呈一定线性关系,据此建立了检测叶酸的荧光分光光度法.线性范围为0.025～2.0μmol/L,相关系数为0.9947,检出限为2.5 nmol/L.表征了体系的荧光光谱,吸收光谱及荧光寿命,探讨了体系的反应机理,优化了实验条件.本方法用于模拟血清中叶酸含量的检测,加标回收率为97.3％～101.6％,RSD≤4.9％.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2014(042)004【总页数】5页(P542-546)【关键词】荧光分光光度法;叶酸;碳量子点【作者】邓小燕;李佳渝;谭克俊【作者单位】发光与实时分析教育部重点实验室,西南大学化学化工学院,重庆400715;发光与实时分析教育部重点实验室,西南大学化学化工学院,重庆400715;发光与实时分析教育部重点实验室,西南大学化学化工学院,重庆400715【正文语种】中文叶酸（Folic acid,FA）作为一种水溶性B族维生素,是细胞分裂、生长不可缺少的物质。
所有生长发育或新陈代谢旺盛的组织也均需要有足够的叶酸[1]。
若叶酸不足,细胞的再生就会受到阻碍,引起巨幼红细胞贫血;此外,还会导致头发变灰、舌头发炎、肠胃不适、智力退化。
而孕妇缺乏叶酸,可能引起胎儿宫内发育迟缓、早产和低体重出生等。
叶酸在生命体中扮演着如此重要的角色,因此对叶酸的分析检测具有十分重要的意义。
现有对叶酸的检测方法主要包括分光光度法[2]、微生物法[3]、等离子发射光谱法[4]、气相色谱法[5]、高效液相色谱法[6]等,在众多检测方法中,荧光分光光度法由于其简单、灵敏及成本低等优点,广泛用于体系中待测物质的分析检测[7]。
到目前为止,通过合成各种纳米材料（NPs）用于检测叶酸的报道并不多,其中Geszke等[8]合成了水溶性的Mn:ZnS/ZnS量子点（QDs）,基于FA与QDs作用导致其荧光强度降低实现了叶酸含量的测定;Gudarzy等[9]报道了基于Y2O3:Eu纳米材料来检测叶酸; Liu等[10]合成了水溶性的CuInS2量子点,基于荧光猝灭-恢复实现对叶酸含量测定。
叶酸的光化学行为及其应用
叶酸的光化学行为及其应用赵慧春3,张田蕾,张铁莉,冯瑞琴(北京师范大学化学系,北京100875)摘要 目的:研究叶酸的光化学行为并提出测定叶酸的光化学荧光分析方法。
方法:叶酸在六次甲基四胺2盐酸介质中,经365nm紫外光照射后,发生光化学反应,产物的荧光强度(λex280nm,λem443nm)较叶酸本身的增大了25倍。
根据光化学反应产物的荧光强度测定叶酸的含量。
结果:叶酸的浓度在110×10-5～110×10-7mol・L-1范围内,荧光强度与浓度呈良好的线性关系,检出限为115×10-9mol・L-1,相对标准偏差为116%。
结论:本方法适用于片剂中叶酸的测定。
关键词 光化学荧光光度法;叶酸 叶酸(folic acid)亦称维生素Bc,蝶呤的衍生物,其分子由蝶啶、对氨基苯甲酸及谷氨酸组成,是抗贫血药,主要用于巨幼红细胞性贫血,也可用于恶性贫血的辅疗药物。
本品在人体内参与氨基酸及核酸的合成,并能与维生素B12共同促进红细胞的生成。
用高效液相色谱法[1,2]、分光光度法[3]、吸附溶出伏安法[4]、微生物放射法[5]、荧光衍生法[6,7]测定叶酸的含量已见报道,但用光化学荧光法测定叶酸的含量至今未见报道。
叶酸稀溶液的荧光较弱,直接荧光法测定灵敏度很低,但叶酸在六次甲基四胺2盐酸介质中经紫外光照射后,荧光强度增大了25倍,极大地提高了荧光法测定的灵敏度。
此法突出的特点是简便、无需外加试剂、稳定性及重现性好、灵敏度高。
实验部分仪器及试剂 日立850荧光分光光度计,岛津UV2250紫外分光光度计,p HS22型酸度计(上海第二分析仪器厂),ZF2I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。
叶酸(中国药品生物制品检定所)标准溶液(1100mmol・L-1):称取纯叶酸44114mg加0110 mol・L-1NaOH溶液数滴溶解,于100ml量瓶中定容。
避光(0～4℃)冷藏保存。
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作者单位:11辽宁省疾病预防控制中心理化科,沈阳110005;21辽
宁省卫生监督所;31沈阳市疾病预防控制中心
作者简介:郭健(1969-),女,辽宁沈阳人,副主任技师,本科,主要从
事卫生理化检验工作。
文章编号:100120580(2003)1021259201 中图分类号:R15515 文献标识码:B
【检验技术】
荧光分光光度法测定食品中叶酸的含量
郭健1,李敏1,孟妍2,张秀丽3
叶酸〔1〕是一种重要的B 族维生素,其化学名称为蝶酰谷
氨酸。
叶酸的测定方法主要有微生物法
〔2〕
、HPLC 法
〔3〕
、荧光法和放射免疫法〔4〕等。
国标法〔5〕
测定叶酸是微生物法,选用
的菌种可利用培养基中叶酸单谷氨酸和双谷氨酸盐进行生长,灵敏度较高,但是检测需要的时间较长。
由于食品成分复杂,试样处理烦琐费时,而测定的是叶酸盐活性,需制备各种培养基和菌种,步骤多且试剂用量大,微生物法叶酸衍生物繁多,标准品来源有限,存在多种干扰因素,分析方法受到限制。
本文采用超声波提取荧光分光光度法测定食品中的叶酸含量,方法简便、快速,取得满意结果。
现报告如下。
1 材料和方法
111 原理 叶酸中具有吡嗪-嘧啶环,它具有特殊的吸收光
谱及氧化还原特性。
在紫外光的照射下产生强的兰色荧光。
其荧光强度与标准溶液浓度成线形关系,用磷酸缓冲溶液超声波提取样品中的叶酸,提取液经净化后除去其他荧光物质,测定其荧光强度,通过与标准曲线比较,求出样品中叶酸的含量。
112 试剂 (1)叶酸标准贮备液(100μg/ml ):准确称取10mg 叶酸标准品(CHEMSERV ICE 公司,纯度>98%),加入几
滴氢氧化钠溶液助溶,用蒸馏水定容至100100ml 。
(2)叶酸
标准工作液(2μg/ml ):准确吸取2100ml 叶酸标准贮备液,用水定容至100100ml 。
(3)20%冰乙酸溶液。
(4)磷酸缓冲溶液:p H =618。
(5)4%高锰酸钾溶液。
(6)3%H 2O 2。
(7)蛋白酶一淀粉酶溶液:分别称取200mg 蛋白酶和淀粉酶,加入20
ml 磷酸缓冲液制成匀浆,离心,取上清液备用。
临用前配制。
113 仪器 RF -5000荧光分光光度计,日本岛津。
狭缝宽
度5nm ;E x =370nm ;E m =455nm 。
114 标准曲线的绘制 准确吸取0100,0150,1100,2100,3100,4100,5100ml 叶酸标准工作液,分别置于10100ml 的比
色管中,加20%冰乙酸011ml ,4%高锰酸钾逐滴加至高锰酸钾色不褪色为止,将混合物静置10min ,然后逐滴向溶液中滴加3%过氧化氢溶液,直至高锰酸钾的颜色褪掉,用蒸馏水定容至刻度。
在E x =370nm ,E m =455nm 处测荧光强度,以荧光强度为纵坐标,叶酸的含量为横坐标,绘制标准曲线。
回归方程为y =111578x -11141,相关系数为r =019997。
115 样品测定 (1)样品的制备:强化剂型样品:取适量经研细的样品0105～012g (约含叶酸50～200μg ),加入磷酸缓冲溶液(p H =618)10ml ,超声波提取10min ,调节至p H =5,用蒸馏水定容至50100ml 过滤。
含有蛋白、淀粉的样品(取样量015～2g )经超声波提取后,调节p H =5,加入酶溶液1ml ,充分混合,置于(37±015)℃恒温箱内酶解16～20h 。
酶解后定容至50100ml 过滤。
(2)样品的净化:取滤液1100ml 置于
10100ml 的比色管中,加20%冰乙酸011ml ,4%高锰酸钾逐
滴加至高锰酸钾色不褪色为止。
将混合物静置10min ,然后逐滴向溶液中滴加3%过氧化氢溶液,直至高锰酸钾的颜色
褪掉,用蒸馏水定容至刻度。
(3)样品的测定:在Ex =370
nm ,Em =455nm 处测定样品的荧光强度。
在标准曲线上找
出对应的含量,以此求出相应的叶酸含量。
2 结果与讨论
211 激发波长与发射波长的选择 对叶酸标准溶液进行荧
光光谱扫描,在Ex =370nm ,Em =455nm 处有最佳的荧光强度,因此选用在波长Ex/Em =370nm/455nm 。
212 叶酸的提取 叶酸主要来源于天然食物,食品中天然存
在的叶酸一般是结合形式,与磷酸和蛋白等结合成复合化合
物。
对热也相对不稳定,本试验加入磷酸缓冲溶液(p H =
618),超声波提取的方法代替以往沸水浴提取法,简便、快速,
减少叶酸的损失;含有蛋白、淀粉的样品,加入蛋白酶一淀粉酶,将包裹于蛋白、淀粉之间或与蛋白结合的叶酸释放出来,提高了叶酸的水解率。
213 p H 的确定 叶酸在酸溶液中不稳定,中性及碱性溶液
中相对稳定。
提取液调节p H =5,样品净化时加入20%冰乙酸011ml ,此时荧光强度最高且稳定。
214 干扰物质的消除 用高锰酸钾与其他荧光物质反应,消
除其他物质的干扰。
经实验结果表明,应逐滴加至高锰酸钾不褪色为止,将混合物静置10min ,然后逐滴向溶液中滴加
3%过氧化氢溶液至高锰酸钾的颜色褪掉。
过量的过氧化氢
对实验结果有影响。
215 线性范围 经实验得知叶酸的线性范围为0105～5μg/ml 。
216 方法的精密度、准确度 精密称取10份珍奥核酸样品(0125g ),测定叶酸含量分别为35614,31416,34712,36611,32312,34012,29615,35918,37719,32613,RSD 为7147%。
精密称取珍奥核酸样品0125g ,加入2100ml 叶酸标准溶液(100μg/ml ),技试样测定步骤测定8次,平均回收率为
(75192±3135)%,RSD 为4142%。
217 应用测定结果 叶酸含量:珍奥核酸337181μg/g ,清水
大米21660μg/g ,101营养液9159μg/ml 。
参考文献:
〔1〕 A H 恩斯明格.美国《食物与营养百科全书》
(4)营养素[M ].北京:农业出版社,1989.161-165.〔2〕 王竹.部分食物中叶酸含量和北京居民叶酸摄入量[J ].营养学
报,2001,23(1):88-90.〔3〕 黄宏南,陈宏靖.高效液相色谱荧光法快速测定保健食品中的叶
酸[J ].中国卫生检验杂志,2002,12(1):70.〔4〕 黄伟坤.食品检验与分析.北京:中国轻工业出版社,2000.135-137.〔5〕 G B/T5413.16-1997.婴幼儿配方食品和乳粉叶酸(叶酸盐活
性)的测定[S].1997.67-68.
收稿日期:2003204213(任旭红编辑 张亚莲校对)
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521中国公共卫生2003年第19卷第10期 Chi n J Public Health 2003V ol.19No.10。