生物化学--实验七邻甲苯胺法测定血糖
邻甲苯胺法测定血清
邻甲苯胺法测定血清（浆）葡萄糖[原理] 在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺缩合、脱水，生成希夫氏碱（Schiff base ），经分子重排生成蓝绿色化合物，其颜色深浅在一定范围内与血糖浓度成正比。
[试剂]1．邻甲苯胺试剂 称取硫脲(AR)2.5g ，溶于冰醋酸(AR)750ml 中。
将此液转入1 L 容量瓶内，加邻甲苯胺150ml ，2.4%硼酸溶液100ml ，用冰醋酸定容至刻度。
此溶液应置棕色瓶内室温保存，至少可应用2个月。
新配制试剂应放置24h 后待“老化”使用，否则反应产物的吸光度低。
2．100mmol/L 葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g ，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml 中，以12mmol/L 苯甲酸溶液定容至100ml 。
2h 以后方可使用。
3．5.0mmol/L 葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml 放于100ml 容量瓶中，用12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
4．0.3mol/L 三氯醋酸溶液 称取三氯醋酸5g ，溶于蒸馏水70ml 中，然后用蒸馏水定容至100ml ，混匀即可。
[主要器材]1．试管及试管架 2．刻度吸量管 3．721型分光光度计 [操作步骤]1． 血清、血浆、脑脊液及清亮的胸腹水按表8操作。
CHOH —CHOH CHOH —CHO HO —CH 2葡萄糖 羟甲基糠醛 HC CHOC C CHOOH —CH 2 2 羟甲基糠醛 邻甲苯胺 醛亚胺（蓝绿色）HC CHOC C CHO OH —CH 2HC CHOC C CH= OH —CH 2 N+ H 2N表8加入物(ml)空白管 标准管 测定管 蒸馏水0.1 － － 葡萄糖标准应用液（5.0 mmol/L ） － 0.1 － 血清(血浆、脑脊液) － － 0.1 邻甲苯胺试剂3.03.03.0混匀，置沸水中煮沸12min ，取出置冷水中冷却3min ，在630nm 处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。
葡萄糖氧化酶法与邻甲苯胺法作血糖测定方法对比试验
葡萄糖氧化酶法与邻甲苯胺法作血糖测定方法对比试验.txt台湾一日不收复，我一日不过4级！如果太阳不出来了，我就不去上班了；如果出来了，我就继续睡觉！葡萄糖氧化酶法与邻甲苯胺法作血糖测定方法对比试验更新日期：2010-10-15 点击：农嵩摘要以生物化学方法—葡萄糖氧化酶法(GOD法)为对比方法，有机化学方法—邻甲苯胺法(O-T法)为候选方法作血糖浓度测定对比试验，考察分析两法的相关性及其优缺点，为将来改进教学实验及临床应用提供参考。
实验结果表明，回归方程表达出系统误差不明显，相关系数r=0.985，两法相关性比较密切。
关键词血糖；GOD法；O-T法；相关分析Contrast test on determination of blood sugar withmethods of glucose-oxidase (GOD) and o-toluidine(O-T)Nong SongDept. of Biochemistry, Youjiang Medical college for National Minorities (Bose 533000)Abstract Contrast test was made with GOD(contrast method) and O-T(candidate solution method) for determining blood sugar contents. The correlation and advantages and disadvantages of the two methods were observed and analyzed for the reference of improving teaching experiments and clinical application. Results showed that the systematic error expressed by regression equation was not obvious, correlation coefficient r=0.985. Correlation of the two methods was comparatively closed. Key words blood sugar; GOD method; O-T method; correlation analysis血糖测定法大体分为四种：无机化学方法、有机化学方法、生物化学方法及近代科学技术，各存在不同的优缺点。
血糖测定-邻甲苯胺
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糖尿病的分类
①IDDM：也称Ⅰ型糖尿病，好发于青春期，对胰岛 素敏感。
结果偏高10%
同上 G+Fe(CN)6-3 →Fe(CN)6-4 历史意义
黄色
无色 Technicon曾用
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（二）有机化学法（缩合法）
方法
类型
原理
用途及备注
邻甲苯胺 定量 G+邻甲苯胺→G基胺 操作简便、
法
（630nm） 无需滤液、
特异性较高，
中小医院使
用普遍，很
少用于自动
4.高脂血的标本最后显色有时会出现浑浊，影响测定结果。可先制备血滤液 后再行测定。
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类型
原 理 用途及备注
班氏法 半定量 G+Cu+——→Cu2O↓ 尿糖测定 （Benedict）
磷钼酸法 定量 G+Cu+——→Cu2O↓ 历史意义 （Folin-Wu）分光 Cu+ 磷（砷）钼酸盐 操作复杂、
需制滤液、
砷钼酸法 同上 蓝色络合物
特异性差、
新铜试剂法
碱性高铁 氰化物法
（660nm）
受还原物质影响
手工、自动化分析
葡萄糖氧 同上 G+O2 → GA+H2O2 推荐常规方法
化酶（POD） H2O2 + 染料→有色染料
用鸡血清取代人血清进行血糖浓度的测定
『 ２ １张清严， 马 思杰。 不 同剂量右 美托 咪啶时冠心痛 惠者气管插 管血流动 力学
的 影响 ｍ． 临床 医 学 ， ２ ０ １ ２ ， ３ ２ （ ２ ） ： １ ９ －２ ０ ． 『 ３ ］梁敏 运 ， 潘学文， 熊照 东等 ， 视 可尼 喉 镜 与 直接 喉 镜 对 高 血 压 患 者 气 管插 管
参 考 文献 ：
『 １ １李 玄 英 ， 薛 富善 ， Ｇ ｌ ｉ ｄ ｅ Ｓ ｃ ｏ ｐ ｅ视 频 喉 镜 、 直 接 喉 镜 和 光 导 纤 维 气管 镜 经 鼻 气 管插 管 时血 流 动 力 学反 应 的 比较 Ⅱ １ ． 中 国 医 学科 学 院 学报 ， ２ ０ ０ ７ ， ２ ９ （ １ ） ： １ ２ ３ ．
医学信 息 ２ ０ １ ３ 年４ 月第 ２ ６ 卷第 ４ 期（ 下半月） Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｉ ｎ ｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ａ ｐ ｒ ． ２ ０ １ ３ ． Ｖ ｏ １ ． ２ ６ ． Ｎ ｏ ． ４
为了保持麻 醉诱 导气管插管期间血流动力学指标的平稳 ， 本文分别 使用 了视可尼喉镜与直接喉镜下行气 管插管 ， 统计结果显示 ， 两组插管时间对比差 异 不显 著 ， 但两组插管后咽喉疼 痛的并 发症 发生率 ， 存在显著 差异， 主要是 由 于前 者是从口角人路 ， 可 以减 少喉镜对 于咽部的黏膜肌肉 ， 舌根 ， 会厌部 的感 受器进行机械性刺激 ， 避免 了后者直接将声门暴露下， 直接使用喉镜通过 口 进 行气管插 管． 对咽喉与 口腔 的结构均进行直接 刺激 ， 因此 ， 视可尼喉镜下行气 管插管可 明显减轻 患者的痛苦。相关研究中指出Ｄ Ｉ ， 也正 由于上述 区别 ， 直接 喉镜插入容易造成插入后 心率增快 、 血压升高， 而视可尼喉镜下行气 管插 管可 有助于避免气管导 管插 入气管中的操作过程中最强烈刺激 ， 最大限度地减少 气管导管与 口腔 ， 咽喉部黏膜发生摩擦， 从而减少血流动力学指标 的变化 。本 研究中统计可见 ， Ｓ Ｂ Ｐ 、 Ｄ Ｂ Ｐ 、 Ｈ Ｒ两组 们 、 Ｔ ４ 时段与 Ｔ １ 相 比， 观察组变化差异 无统计学意义（ Ｐ Ｍ ） ． ０ ５ ） ， 而对照组均升高 ， 差异显著（ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 与文献 中结论基
血糖实验
题目激素对血糖浓度的影响及血糖浓度的测定系部医学院专业临床班级临床1004学号200909155140姓名刘兴志指导教师赵雪花完成日期2011 年9 月16日【摘要】目的:（1）掌握血糖测定的原理和方法。
（2）掌握血糖正常的范围和意义。
（3）熟记胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响，并解释其作用机制。
方法：取正常家兔两只，饥饿14-16小时，各空腹取血10ml，在相同的实验条件下，其中一只注射胰岛素（5单位/公斤），另一只注射肾上腺素（0.5mg/只），半个小时后再次取血。
测量血糖浓度。
结果：注射胰岛素的家兔，血糖浓度降低，注射肾上腺素的家兔，血糖浓度升高。
结论：胰岛素可以降低血糖，肾上腺素可以升高血糖。
【关键词】胰岛素，肾上腺素，血糖浓度。
材料与方法1.实验材料与试剂正常家兔两只。
肾上腺素（1mg/ml）,胰岛素（5单位/ml）,碘酒，消毒酒精，棉球，饱和硼酸溶液（6g溶于100ml蒸馏水中摇匀后放置过夜后过滤即可），邻甲苯胺-硼酸，5%三氯醋酸溶液，饱和苯甲酸溶液，标准葡萄糖贮存液，标准葡萄糖应用液。
2.实验对象正常家兔3.实验方法步骤3.1取正常家兔两只。
实验前预先饥饿14-16h，称其体重并记录（2-3公斤为宜）。
3.2药前取血。
先用剪刀剪去家兔耳缘的兔毛，然后用酒精擦拭，使其耳缘静脉充血，再用干棉球擦干。
碘酒，酒精消毒后用7号针头穿刺耳缘静脉，然后用盛有抗凝剂（草酸钠，2mg/ml血）的小烧杯收集10ml左右的血液。
收集时注意摇匀以防血液凝固。
取血完毕，用干棉球压迫止血。
3.3 注射胰岛素和肾上腺素。
取血完毕后，给其中一只家兔注射胰岛素（5单位/公斤为宜），另一只注射肾上腺素（0.5mg/只为宜）。
注射完毕后，稳定家兔情绪，放回兔笼。
3.4药后取血。
药后半小时，再次从耳缘静脉取血。
方法同3.2。
3.5制备无蛋白学滤液。
用微量加样器取抗凝血0.4ml，滤纸擦净粘附于吸管尖端外表的血液，缓慢注入洁净小试管。
实验十 血糖的测定
实验十血糖的测定实验十血糖的测定实验十血糖的测定实验十血糖的测量血液中的葡萄糖称血糖。
正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol／l～6．1mmol／l 之间。
血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。
其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。
因此，血糖的测量就是临床生化检验实验室的常规检测项目。
血糖测量按其发展过程及反应原理的相同，大致分后三类：水解还原法，变小合法（主要存有西南边甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。
下边了解两种方法供选择。
一、葡萄糖氧化酶法1.介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能够展开血糖测量的操作方式。
2.掌控血糖测量的临床意义。
【原理】葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，god)能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。
后者在过氧化物酶(peroxidase，pod)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即trinder反应。
其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。
反应式如下：葡萄糖+o2+2h2o2h2o22h2o2+4-氨基安替比林+酚红色醌类化合物试管、液体、试管架、恒温水浴箱、分光光度计【试剂】1.0.1mol/l磷酸盐缓冲液（ph7.0）称取浓硫酸磷酸氢二钠8.67g及浓硫酸磷酸二氢钾5.3g溶800ml蒸馏水中，用1mol/l氢氧化钠（或1mol/l盐酸）调节ph至7.0，然后用蒸馏水吸收至1l。
2.酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/lnaoh调ph至7.0，加磷酸缓冲液至100ml。
复置冰箱留存，4℃可以平衡3个月。
邻甲苯胺法测定血糖实验报告
邻甲苯胺法测定血糖实验报告
一、实验目的
实验旨在使用邻甲苯胺法测定血糖水平。
二、实验原理
邻甲苯胺法是一种常用的血糖测定方法，它是一种光敏催化方法，可以用来测定和分析人血液中的血糖含量。
在这个过程中，一种名为邻甲苯胺的特殊分子会实现光敏催化，将血液中的血糖原子转化为光，根据转换出的光强度可以确定血液中血糖的含量。
三、实验材料
（1）血液标本；
（2）50mL蒸馏水；
（3）邻甲苯胺；
（4）吸光度测量仪；
（5）20mL分离管。
四、实验步骤
（1）将20mL分离管中放入50mL蒸馏水，加热至100℃；
（2）在分离管内加入4mg邻甲苯胺，搅拌均匀；
（3）将血液标本以1:1的比例加入分离管中，然后搅拌均匀；
（4）将分离管中的混合液放入吸光度测量仪，在660nm波长下进行测定；
（5）根据测量出的光强度可以计算出血液中的血糖浓度。
五、实验结果
根据测量出的光强度，可以计算得出血液中的血糖浓度为6.0 mmol/L。
六、实验结论
本次实验使用邻甲苯胺法测定血液中的血糖浓度，结果显示血液中的血糖浓度为6.0 mmol/L，结果合理有效。
胰岛素对血糖浓度的影响实验报告
胰岛素对血糖浓度的影响实验报告实验五胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响实验六胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响实验五葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖课程名称：生物化学与分子生物学实验课年级：2004专业、层次：临床医学本科授课教师：汪宗桂职称：助教学时：3学时基本教材：自编《生物化学与分子生物学实验指导》教学目的与要求：1、观察胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响。
2、掌握血糖浓度的测定方法。
3、掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理和方法。
4、掌握血糖浓度的正常参考值，了解血糖测定的临床意义。
大体内容与时间安排：1、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的原理5min2、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的注意事项5min3、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理5min4、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的操作改动及注意事项5min5、学生做实验100min教学方法：讲授式+启发式教学重点、难点：重点：1、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理2、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项难点：葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项一、实验原理（一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响激素是调节机体血糖浓度的重要因素。
胰岛素能降低血糖，肾上腺素等激素能升高血糖。
本实验给两只家兔分别注射胰岛素或肾上腺素，取注射前、后兔的静脉血，测定血糖含量，观察注射前后血糖浓度变化，从而了解胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响。
（二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖本实验是葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化物酶(POD) 相偶联发生的偶联反应。
第一步：葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
第二步：过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物(苯醌亚胺非那腙)。
二、操作步骤（一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响1、动物准备：取正常家兔两只，实验前预先饥饿16小时，称体重(—般为2-3kg)。
生化实验试题参考
生化实验试题参考生物化学实验二、填空题：1. 测定蛋白质含量的方法有(双缩脲法)， (紫外吸收法)，( Folin-酚试剂法（或Lowry法） )和（考马斯亮蓝G-250染色法）。
2. CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以（以一定时间内分解的H2O2量）来表示，当CAT与H2O2反应结束，再用（碘量法）测定未分解的H2O2。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以（聚丙烯酰胺凝胶）作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由（Acr）和交联剂（Bis）在催化剂作用下聚合而成。
化学聚合法一般用来制备（分离）胶，其自由基的引发剂是（Ap），催化剂是（TEMED）；光聚合法适于制备大孔径的（浓缩）胶，催化剂是（核黄素）。
4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：（吸附层析），（分配层析），（离子交换层析），（凝胶层析）和（亲和层析）。
5. 使用离心机离心样品前，必须使离心管（等重）且对称放入离心机。
6. 米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S 的亲合力愈（大），Km愈大，表示E对S的亲合力愈（小）。
7. 分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须__（打开）____（打开、合上）样品池翻盖。
8. CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的（抗逆性）密切相关。
9. 纸层析实验中，____________形成固定相，____________流动相。
10. 聚丙烯酰胺凝胶是是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成的，在具有自由基团体系时，两者就聚合。
引发产生自由基的方法有两种：（化学法）和（光聚合法）。
11. 层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：（柱层析），（纸层析），（薄层层析）和（薄膜层析）。
参考答案：生物化学实验一、名词解释：1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。
2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。
生化血糖调节实验报告
1. 了解血糖调节的生化过程。
2. 掌握血糖测定的原理和方法。
3. 熟悉胰岛素和胰高血糖素对血糖浓度的影响。
4. 通过实验验证血糖调节机制。
二、实验原理血糖调节是人体维持正常生理功能的重要环节。
胰岛素和胰高血糖素是调节血糖的主要激素。
胰岛素能降低血糖浓度，而胰高血糖素则升高血糖浓度。
血糖浓度的变化可通过血糖测定实验进行检测。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：正常家兔两只、胰岛素（5单位/公斤）、肾上腺素（0.5mg/只）、碘酒、消毒酒精、棉球、血糖测定仪等。
2. 实验试剂：邻甲苯胺-硼酸、5%三氯醋酸溶液、饱和苯甲酸溶液、标准葡萄糖贮存液、标准葡萄糖应用液。
四、实验步骤1. 预先饥饿正常家兔14-16小时，记录体重并称重。
2. 对一只家兔进行胰岛素注射（5单位/公斤），另一只家兔进行肾上腺素注射（0.5mg/只）。
3. 注射后30分钟，分别从两只家兔体内抽取血液。
4. 使用血糖测定仪检测两只家兔的血糖浓度。
5. 对比注射胰岛素和肾上腺素前后血糖浓度的变化。
五、实验结果1. 注射胰岛素的家兔血糖浓度明显降低，注射肾上腺素的家兔血糖浓度明显升高。
2. 注射胰岛素的家兔血糖浓度降低至正常范围内，注射肾上腺素的家兔血糖浓度升高至正常范围以上。
1. 胰岛素能降低血糖浓度，这是由于胰岛素能促进葡萄糖进入细胞内，抑制糖原分解，抑制非糖物质转化为葡萄糖等作用。
2. 胰高血糖素能升高血糖浓度，这是由于胰高血糖素能促进糖原分解，促进非糖物质转化为葡萄糖等作用。
3. 实验结果验证了血糖调节机制，即胰岛素和胰高血糖素在血糖调节中的重要作用。
七、实验讨论1. 本实验通过注射胰岛素和肾上腺素，模拟了人体血糖调节过程，验证了胰岛素和胰高血糖素在血糖调节中的重要作用。
2. 实验结果表明，胰岛素能降低血糖浓度，而胰高血糖素能升高血糖浓度。
3. 本实验结果与血糖调节的生化过程相符，为理解血糖调节机制提供了实验依据。
八、实验小结1. 本实验成功验证了血糖调节机制，即胰岛素和胰高血糖素在血糖调节中的重要作用。
测血糖目的实验报告
一、实验目的1. 了解血糖测定的原理和方法。
2. 掌握血糖测定的操作步骤。
3. 掌握血糖的正常范围及其临床意义。
4. 学会使用血糖仪进行血糖测定。
二、实验原理血糖测定是通过测定血液中的葡萄糖浓度来评估糖代谢状况的一种方法。
常用的血糖测定方法有氧化酶法、葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法等。
本实验采用葡萄糖氧化酶法进行血糖测定，其原理为：葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下，被氧化成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，将邻甲苯胺氧化成蓝色物质，通过比色法测定吸光度，从而计算出血糖浓度。
三、实验材料1. 实验仪器：血糖仪、采血针、采血管、血糖试纸等。
2. 实验试剂：葡萄糖标准液、葡萄糖氧化酶试剂盒、邻甲苯胺-硼酸溶液、5%三氯醋酸溶液、饱和苯甲酸溶液等。
3. 实验对象：志愿者。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：取6个试管，分别加入不同浓度的葡萄糖标准液，按实验方法测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血糖测定：志愿者空腹抽取静脉血，立即将血液滴入采血管中，摇匀后待测。
按照血糖仪说明书操作，将血糖试纸浸入血液中，待试纸颜色变化后，将试纸放入血糖仪中测定血糖浓度。
3. 结果记录与分析：将测定的血糖浓度与标准曲线进行对比，得出血糖浓度。
五、实验现象与结果1. 标准曲线绘制：根据实验数据绘制标准曲线，得到标准曲线方程。
2. 血糖测定结果：志愿者血糖浓度分别为：A组（正常组）5.8mmol/L，B组（糖尿病患者）8.2mmol/L。
六、数据处理及分析1. 标准曲线方程：y=0.038x+0.014（R²=0.998）2. 血糖测定结果分析：根据标准曲线方程，计算出志愿者血糖浓度分别为：A组（正常组）5.8mmol/L，B组（糖尿病患者）8.2mmol/L。
七、实验结论1. 本实验通过葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度，结果表明，血糖测定方法准确可靠。
2. 实验结果显示，正常组血糖浓度为5.8mmol/L，糖尿病患者血糖浓度为8.2mmol/L，说明血糖测定可以有效地评估糖代谢状况。
对邻甲苯胺测定血糖方法学评价
对邻甲苯胺测定血糖方法学评价
王晓滨;刘兴武
【期刊名称】《哈尔滨医药》
【年(卷),期】1993(013)003
【摘要】血糖测定,目前国内应用的方法主要有2种:一是应用酶法:有全酶法(已糖激酶法)和半酶法(氧化酶法),常用的是葡葡糖氧化酶法,此法测糖确实、干扰少、无害,可上机使用,但目前应用尚不普遍。
二是利用葡葡糖在加热的有机酸中能与某些芳香胺类,如苯胺、联苯胺、氨基联苯胺、邻甲苯胺等生成有色衍生物。
其优点是不用血滤液,特异性强,干扰少,简便快速。
【总页数】2页(P65-66)
【作者】王晓滨;刘兴武
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
【相关文献】
1.固相萃取富集-高效液相色谱分离和测定邻甲苯胺和邻硝基甲苯 [J], 李金昶;周济舟;辛暨华;褚莹;于艳春;盛有山
2.右旋糖酐致邻甲苯胺法测定血糖结果偏高的体外研究 [J], 姜蕾;李庆华
3.葡萄糖氧化酶法与邻甲苯胺法作血糖测定方法对比试验 [J], 农嵩
4.邻甲苯胺中微量邻硝基甲苯测定方法研究 [J], 赵明;徐巧明;等
5.从N-乙基邻甲苯胺合成过渡液中分离N,N-二乙基邻甲苯胺 [J], 张越;刘桂兰;李静
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生化实验：激素对血糖的影响
7.血糖含量测定
试剂（ml)
0
1
2 血浆 激素注射后 血浆
0.1 0.1 0.1
蒸馏水
0.1
邻甲苯胺
5.0
5.0
5.0
5.0
混匀，37度保温15 min，冷却到室温检测
注意事项
1.注意安静，防止动物惊吓，操作过程防止动 物窒息
2.兔毛放在盛水的废液缸里 3.取血速度快，针头蘸肝素
激素对血糖的影响
一、实验目的 • 1.掌握血糖测定的原理与方法 • 2.掌握血糖含量的正常范围及生理意义 • 3.熟悉血糖含量的调节机制
6. 邻甲苯胺法原理
胰前/肾前 (1 ml)
4.注射激素 皮下注射胰岛素（1U/kg)
肾上腺素 （0.4 mg/kg) 5.取血（1 ml) 胰岛素 注射后30 min (胰后） 肾上腺素 注射后15 min （肾后） 6.离心 3000r/min 5 min 取上层血浆到新的EP管备用
激素对血糖浓度影响及血糖浓度的测定
生物化学实验实验名称：激素对血糖浓度影响及血糖浓度的测定时间：2014年6月9日星期一姓名：学号：201312201202003指导老师：毛水龙老师一，实验目的掌握血糖的测定原理和方法；掌握血糖的正常范围及意义；熟悉调节血糖的激素对血糖浓度的影响。
二，实验原理家兔动物实验。
获取家兔注射激素前后的血液样本并对其；进行血糖测定。
邻苯甲胺方法测定血糖浓度。
实验采取前后对照的方法，对家兔注射肾上腺素和胰岛素，并通过耳缘静脉采血，获取激素注射前后的血液样本，采用邻甲苯胺法处理样本，最终与标品比色得出结论。
1.调节血糖的激素有：胰岛素、肾上腺素、胰高血糖素、肾上腺皮质激素、生长素和甲状腺素等。
胰岛素是体内唯一能使血糖降低的激素，其他激素均使血糖升高。
2.肾上腺素升高血糖的机制主要作用于肝细胞膜受体，通过cAMP-蛋白激酶系统激活肝磷酸化酶，同时抑制糖原合成酶，导致肝糖原分解加速。
胰岛素降低血糖的机制是：降低肝细胞cAMP水平，从而抑制肝磷酸化酶，激活糖原合成酶，促进肝糖原的合成；胰岛素诱导糖酵解关键酶类的合成，阻遏糖异生关键酶的合成；胰岛素促进葡萄糖进入红细胞、肌肉等组织的异化扩散，促进糖的利用。
3.血液中的葡萄糖，在热的冰醋酸溶液中可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛（或称羟甲基糠醛）。
后者在与邻甲苯胺缩合，生成蓝绿色的西夫式碱（Schiffbase）。
其色泽的深浅与葡萄糖浓度成正比。
与同样处理的标准葡萄糖溶液比色，即可求得待测血液中葡萄糖的含量。
三，实验材料1.材料：家兔两只,刀片，草酸钠，小烧杯。
2.试剂：①肾上腺素(1mg／lml)②胰岛素(20单位／ml)③碘酒、消毒酒精④饱和硼酸溶液⑤邻甲苯胺-硼酸⑥5％三氯醋酸溶液⑦饱和苯甲酸溶液⑧标准葡萄糖贮存液⑨标准葡萄糖应用液四，实验方法1.取健康正常家兔一只，实验前饥饿14~16h左右，称体重。
2.耳缘静脉采血。
小刀刮去耳缘的毛，用酒精棉球擦拭使其充血，再用干棉球擦干。
生物化学--实验七邻甲苯胺法测定血糖
生物化学--实验七邻甲苯胺法测定血糖实验七邻甲苯胺法测定血糖【目的要求】1.掌握邻甲苯胺血糖测定法的基本原理及操作方法。
2.熟悉邻甲苯胺血糖测定法的影响因素及控制方法。
3.了解邻甲苯胺血糖测定法的临床意义及应用。
【实验原理】血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺(Schiff硷)。
血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。
将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在680nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。
邻甲苯胺法测得正常空腹血糖值为3.9,5.6mmol / L (70,100mg %)。
CHOH——CHOH HC——CH 酸中? CHOH CHOH—CHO C C—CHOHOHC 2HOHC O 2 HO 2 己醛糖羟甲基糠醛CH3 CH 3HC———CHHN— 2 C C—CH ,N—HOHC O 2邻甲苯胺醛亚胺(兰色) 【实验准备】一、器材1. 721型分光光度计、沸水浴。
2. 5×15cm试管、刻度吸量管。
二、试剂1.邻甲苯胺试剂称取硫脲(AR)级2.5g,溶于750ml冰醋酸(AR级)中，将此溶液转移入1L容量瓶内，加入刚蒸馏过的邻甲苯胺150ml，2.4, 硼酸溶液100ml及冰醋酸至1000ml刻度，置棕色瓶中至少可用两个月。
2.葡萄糖标准储存液(10 mg / ml) 用0.25,苯甲酸溶液配制。
3.葡萄糖标准应用液(1mg / ml) 取贮存液10ml放入100ml容量瓶中，用0.25,苯甲酸溶液稀释至100ml。
【实验操作】1.采得待测血样(抗凝)后立即离心以分离血浆(3,000转离心15分钟)。
2.取干燥试管3支，分别标出号码，按下表添加试剂。
邻甲苯胺法测血糖操作表管别测定管标准管空白管试剂(ml)血清(浆) 0.20ml ?? ??葡萄糖标准液 ?? 0.20ml ??蒸馏水 ?? ?? 0.20ml邻甲苯胺试剂 6.0ml 6.0ml 6.0ml 3.混匀各管内容物置沸水浴中加热15分钟后取出用流水冷却。
血糖的测定PPT课件
5%~8%
【临床意义】
• 评价糖尿病控制程度
• GHb增高提示近2~3个月来糖尿病控制不良，GHb愈高，血糖水平愈 高，病情愈重。故GHb可作为糖尿病长期控制的良好观察指标。 • 糖尿病控制良好者，2~3个月检测1次，控制欠佳者1~2个月检测1次。 • 妊娠期糖尿病、1型糖尿病应每月检测1次，以便调整用药剂量。
4.4~6.7mmol/L或80-120mg/dL
葡萄糖 氧化酶法
邻甲苯胺法
Folin-Wu法
特异性高，反应 条件温和，能反 映血中葡萄糖的 真实含量，且已 推广出试剂盒， 广泛应用于临床 。
涉及强酸、加热等 反应条件，不便于 大规模检测，且使 用的试剂具有毒性 ，临床和科研上已 很少采用。
对葡萄糖无特异性 ，一切还原物质均 可产生同样的反应 。虽血液中葡萄糖 为主要还原物质， 但仍存在其他非糖 还原物质，故该法 其参考值较其他方 法略高。
• 口服葡萄糖后血糖急剧升高，提早出现峰值，且大于 11.1mmol/L，而2hPG又低于空腹水平。 • 常见于胃切除或严重肝损伤。由于胃切除后胃肠道迅速吸 收葡萄糖或肝脏不能迅速摄取和处理葡萄糖而使血糖急剧 增高，反应性引起胰岛素分泌增高，进一步导致肝外组织 利用葡萄糖增多，而使2hPG明显降低。
• 鉴别高血糖
• 糖尿病高血糖GHb水平增高，而应激性高血糖GHb则正常。
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YOU
SUCCESS
2019/4/12
• 其他
肥胖、肝功能损伤、肾功能不全、肢端肥大症、巨人
Байду номын сангаас
症等 血清胰岛素水平增高；腺垂体功能低下，肾上腺皮质功能不全或饥饿， 血清胰岛素减低。
血清C-肽检测
• C-肽(connective peptide)是胰岛素原(proinsulin)在蛋 白水 解酶的作用下分裂而成的与胰岛素等分子的肽类物。 • C-肽不受肝脏和肾脏胰岛素酶的灭活，仅在肾脏中降解和 代谢。 • C-肽与外源性胰岛素无抗原交叉，且其生成量不受外源性 胰岛素的影响，检测C-肽也不受胰岛素抗体的干扰。 • 因此，检测空腹C-肽水平、C-肽释放试验可更好地评价胰 岛B细胞分泌功能和储备功能。
实验三血糖测定
目的要求
掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法
血液中所含的葡萄糖，称为血糖。它是糖在体内的 运输形式。 目前国内医院多采用葡萄糖氧化酶法和邻甲苯胺法 测定血糖。前者特异性强、价廉、方法简单,其正常 值：空腹全血为3.6～5.3毫摩尔/升（65～95毫克/ 分升），血浆为3.9～6.1毫摩尔/升。后者由于血中 绝大部分非糖物质及抗凝剂中的氧化物同时被沉淀下 来，因而不易出现假性过高或过低, 结果较可靠, 其 正常值：空腹全血为3.3～5.6毫摩尔/升（60～100 毫克/分升），血浆为3.9～6.4毫摩尔/升（70～ 115毫克/分升）。
基本原理
本实验采用邻甲苯胺法测定血糖。其原
理是葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应
生成5－羟甲基－2－呋喃甲醛，分子中
的醛基与邻甲苯胺缩合成青色（蓝绿色）
的薛夫氏碱，通过比色可以定量。
CH2OH （CHOH）4 CHO
H+
△
HOH2C─
O
─CHO
+ 3H2O
葡萄糖
NH2 HOH2C─ ─CHO +
羟甲基糠醛
注意事项
邻苯甲胺法测定血糖具有操作简单,特异性较高
的优点, 试剂成本也较低,。但该法一般在浓酸高
温条件下发生反应, 因此在做血糖测定时须多加 注意。
思 考 题
血糖的来源和去路有哪些？
简述测定血糖在临床上的意义。
O
CH3 邻甲苯胺
HOH2C─
O
─CH = N
CH3
Schiff 碱
操作方法
1、标准曲线的制作 2、血糖浓度测定
取干燥试管7支，编号后，按下表顺序加入试剂
试剂 管号 血清（ml）
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生物化学--实验七邻甲苯胺法测定血糖实验七邻甲苯胺法测定血糖
【目的要求】
1.掌握邻甲苯胺血糖测定法的基本原理及操作方法。
2.熟悉邻甲苯胺血糖测定法的影响因素及控制方法。
3.了解邻甲苯胺血糖测定法的临床意义及应用。
【实验原理】
血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺(Schiff硷)。
血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。
将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在680nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。
邻甲苯胺法测得正常空腹血糖值为3.9,5.6mmol / L (70,100mg %)。
CHOH——CHOH HC——CH 酸中? CHOH CHOH—CHO C C—CHO
HOHC 2HOHC O 2 HO 2 己醛糖羟甲基糠醛
CH3 CH 3
HC———CH
HN— 2 C C—CH ,N—
HOHC O 2
邻甲苯胺醛亚胺(兰色) 【实验准备】
一、器材
1. 721型分光光度计、沸水浴。
2. 5×15cm试管、刻度吸量管。
二、试剂
1.邻甲苯胺试剂称取硫脲(AR)级
2.5g,溶于750ml冰醋酸(AR级)中，将此溶
液转移入1L容量瓶内，加入刚蒸馏过的邻甲苯胺150ml，2.4, 硼酸溶液100ml及冰醋酸至1000ml刻度，置棕色瓶中至少可用两个月。
2.葡萄糖标准储存液(10 mg / ml) 用0.25,苯甲酸溶液配制。
3.葡萄糖标准应用液(1mg / ml) 取贮存液10ml放入100ml容量瓶中，用0.25,苯甲酸溶液稀释至100ml。
【实验操作】
1.采得待测血样(抗凝)后立即离心以分离血浆(3,000转离心15分钟)。
2.取干燥试管3支，分别标出号码，按下表添加试剂。
邻甲苯胺法测血糖操作表
管别测定管标准管空白管试剂(ml)
血清(浆) 0.20ml ?? ??
葡萄糖标准液 ?? 0.20ml ??
蒸馏水 ?? ?? 0.20ml
邻甲苯胺试剂 6.0ml 6.0ml 6.0ml 3.混匀各管内容物置沸水浴中加热15分钟后取出用流水冷却。
4.以空白管校正零点，读取各管680nm处吸光度值。
5.计算
测定管吸光度 100/0.2血糖mg%,× 葡萄糖标准液值× 标准管吸光度
【注意事项】
1.本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与糖醛起反应，不与血中其他还原物质起反
应。
故测定值较Folin-吴宪法为低。
2.显色反应与水的含量有关，故应使标准管和测定管的含水量一致。
3.温度
对显色反应有明显影响，煮沸时间和温度应准确控制。
4.显色后颜色不稳定，室
温每放置1分钟，颜色降低0.15,。
5.邻甲苯胺试剂中冰醋酸浓度很高，使用不当容易损坏比色仪器。
6.邻甲苯胺是致癌剂，测定过程中应小心使用。
【思考题】
1.试讨论血糖测定的临床意义及应用。
2.哪些因素影响邻甲苯胺法测定血糖的显色反应,操作过程中如何减少这些因素对测
定结果的影响,。