平板菌落计数法
平板菌落计数法
平板菌落计数法农资101 1031240125 周瑶实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验方法1、样品稀释液的制备准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml 无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。
放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液，否则稀释不准确，结果误差较大。
用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。
样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。
通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。
平板菌落计数法测定菌落总数的原理
平板菌落计数法测定菌落总数的原理1.准备琼脂培养基：将琼脂溶解在适当的营养液中，调整pH值，加热使其融化，然后冷却到约45-50℃。
2.预培养：将培养物从深层培养基中接种到含有一定营养液的试管中预培养，为后续培养做准备。
3.稀释：将预培养液根据菌落数量的预估结果进行适当稀释，使菌落分散。
4.接种：取适量稀释液，均匀地倒入装有琼脂的培养皿中，使培养基均匀铺满。
5.均匀涂布：将接种液均匀涂布于琼脂表面，避免产生气泡和划痕。
6.培养：将培养皿倒置，放在恒温箱中适当温度下培养一定时间，通常为24-48小时。
7.计数：在培养后的琼脂表面，用裸眼或放大镜观察并计数菌落，然后根据稀释倍数计算出原始菌落的总数。
1.琼脂培养基：通过熔化琼脂和添加适当的营养物，可以提供菌落生长所需的碳源、氮源等营养物质，以及适当的pH值和培养温度，使菌落能够在琼脂表面生长。
3.琼脂的稀释：通过适当的预估或实际试验，将预培养液稀释到合适的程度，使得在琼脂表面上的每个菌落之间有足够的距离，以防止菌落间的交叉叠加。
4.菌落计数：在培养后的琼脂表面，可以用裸眼或放大镜观察，计算出每个培养皿上的菌落数量。
根据稀释倍数，可以推算出原始菌落的总数。
1.简单易操作：操作方便，不需要复杂的设备和技术。
2.适用范围广：可用于测定各种微生物菌落总数，如细菌、真菌等。
3.直观准确：直接观察和计数菌落，结果客观准确。
4.含量测定：可以用于测定菌落的含量，有助于了解微生物的数量变化。
然而，平板菌落计数法也存在一些限制和注意事项：1.培养条件：受到琼脂培养基成分和条件的限制，一些微生物可能无法在琼脂表面生长。
2.杂菌干扰：在一些情况下，培养基表面可能有一些自然存在的杂菌或非细菌生物，这些杂菌可能会干扰菌落计数结果的准确性。
3.受限于稀释倍数：琼脂培养基的稀释倍数对菌落数量的计算有一定影响，过高或过低的稀释倍数可能会导致计数结果的误差。
4.菌落大小：一些微生物菌落较小或较大，可能会对计数结果产生一定的影响，需要注意估算和计数的准确性。
平板菌落计数法水中微生物的检测
钟，每个平板上生长得到的菌落不超过15 个——无菌室
1、采样： 四、实验步骤
1）自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼 烧灭菌，再开水龙头使水流5min，以灭菌 采样瓶接取水样备用。
(2)池水、河水或湖水等地面水源水：在距岸边5米处， 取距水面10—15cm的水样，先将灭菌的带塞的采样瓶， 瓶口向下浸入水层中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水 即流入瓶中，盛满后，将平塞盖好，从水中取出，若不 能在2h内检测的，需放入4℃冰箱中保存。
1、样品充分混匀，稀释时一个稀释度要换一支无 菌移液管（放菌液时 吸管尖不要碰到液面
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
295
46
1.6
3 2890
271
60
2.2
4 无法计数 4650 513
___
5 27
11
5
___
6 无法计数 305
12
___
7 无法计数 无法计数 无法计数 ___
16400 37750 27100
1.6×104 3.8×104 2.7×104
513000 270 30500
5.1×105 2.7×102 3.1×104 10-3 无法计数
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
平板菌落计数法名词解释
平板菌落计数法名词解释
平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，用于测定样品中微生物的数量。
下面将对每个步骤进行详细的名词解释：
1. 样品处理：在进行平板菌落计数前，需要对样品进行处理。
样品处理包括对样品的粉碎、研磨、匀浆等操作，以使样品中的微生物充分分散。
2. 培养基制备：平板菌落计数需要使用特殊的培养基，以便为微生物提供适宜的生长环境。
培养基制备包括按照一定的配方和比例将各种成分混合在一起，制备出适合微生物生长的培养基。
3. 接种：将处理过的样品接种到培养基上，以便使样品中的微生物在培养基上生长繁殖。
接种时需要保证样品均匀地分布在培养基上，并确保无菌操作以避免污染。
4. 培养：将接种后的培养基放置在适宜的温度和湿度条件下进行培养。
在培养过程中，微生物会在培养基上生长繁殖，形成肉眼可见的菌落。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数。
计数时需要注意区分不同种类的菌落，并根据菌落的形态、大小、颜色等因素进行分类和统计。
6. 计算：最后，根据统计的菌落数量和稀释倍数，计算出样品中微生物的数量。
通过以上步骤，可以准确地测定样品中微生物的数量。
平板菌落计数法广泛应用于食品、药品、环境等领域的质量控制和卫生检测等方面。
平板计数法
平板菌落计数法平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。
方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
目录一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明展开但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
[1]编辑本段一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
编辑本段二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
平板菌落计数法
平板菌落计数法（一）目标请求进修平板菌落计数的基起源基础理和办法.（二）基起源基础理平板菌落计数法是将待测样品经恰当稀释之后,个中的微生物充分疏散成单个细胞,取必定量的稀释样液接种到平板上,经由造就,由每个单细胞发展滋生而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞.统计菌落数,依据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数.但是,因为待测样品往往不轻易完整疏散成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞.是以平板菌落计数的成果往往偏低.为了清晰地阐述平板菌落计数的成果,如今已偏向应用菌落形成单位(colony-forming units,cfu)而不以绝对菌落数来暗示样品的活菌含量.平板菌落计数法固然操纵较繁,成果须要造就一段时光才干取得,并且测定成果易受多种身分的影响,但是,因为该计数办法的最大长处是可以获得活菌的信息,所以被普遍用于生物成品磨练(如活菌制剂),以及食物.饮料和水(包含水源水)等的含菌指数或污染程度的检测.（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液.2．造就基牛肉膏蛋白陈造就基.3．仪器或其他器具1mL无菌吸管,无菌平皿,盛有4.5ml无菌水的试管,试管架,恒温造就箱等.（四）操纵步调l．编号取无菌平皿9套,分离用记号笔标明10-4.10-5.10-6.(稀释度)各3套.另取6支盛有4.5mL无菌水的试管,依次标是10-1.10-2.10-3.10-4.10-5.10-6.2．稀释用lmL无菌吸管汲取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品),准确地放0.5mL至10-1的试管中,此即为10倍稀释.将过剩的菌液放回原菌液中.将10-1试管置试管振荡器上振荡,使菌液充分混匀.另取一支lml吸管拔出10 1试管中往返吹吸菌悬液三次,进一步将菌体疏散.混匀.吹吸菌液时不要太猛太快,吸时吸管伸人管底,吹时分开液面,以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢.用此吸管汲取10-1菌液lmL,准确地放0.5mL至10-2试管中,此即为100倍稀释.其余依次类推.放菌液时吸管尖不要碰着液面,即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液,不然稀释不准确,成果误差较大.3．取样用三支1mL无菌吸管分离汲取10-4.10-5和10-6的稀释菌悬液各lmL,对号放入编好号的无菌平皿中,每个平皿放0.2mL.不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀释菌液放入平皿臼,如许轻易加大统一稀释度几个反复平板间的操纵误差.4．倒平板尽快向上述盛有不合稀释度菌液的平皿中倒入熔化后冷却至45℃阁下的牛肉膏蛋白胨造就基约15mL/平皿,置程度地位敏捷旋动平皿,使造就基与菌液混杂平均,而又不使造就基荡出平皿或溅到平皿盖上.因为细菌易吸附到玻璃器皿概况,所以菌液参加到造就皿后,应尽快倒入熔化并于已冷却至45℃阁下的造就基,立刻摇匀,不然细菌将不轻易疏散或长成的菌落连在一路,影响计数.待造就基凝固后,将平板倒置于37℃恒温造就箱中造就.5．计数造就48h后,掏出造就平板,算出统一稀释度三个平板上的菌落平均数,并按下列公式进行盘算,每毫升中菌落形成单位(cfu)=统一稀释度三次反复的平均菌落数×稀释倍数×5一般选择每个平板上长有30~300个菌落的稀释度盘算每毫升的含菌量较为适合.统一稀释度的三个反复对比的菌落数不该相差很大,不然暗示实验不准确.现实工作中统一稀释度反复对比平板不克不及少于三个,如许便于数据统计,削减误差.由10-4.10-5.10-6三个稀释度盘算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不该相差太大.平板菌落计数法,所选择倒平板的稀释度是很主要的.一般以三个持续稀释度中的第二个稀释度倒平板造就后所消失的平均菌落数在50个阁下为好,不然要恰当增长或削减稀释度加以调剂.平板菌落计数法的操纵除上述倾泻倒平板的方法以外,还可以用涂布平板的方法进行.二者操纵基底细同,所不合的是后者先将牛肉膏蛋白胨造就基熔化后倒平板,待凝固后编号,并于37℃阁下的温箱中烘烤30min,或在超静工作台上恰当吹干,然后用无菌吸管汲取稀释好的菌液对号接种于不合稀释度编号的平板上,并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布平均,平放于实验台上20～30min,使菌液渗入造就基表层内,然后倒置37℃的恒温箱中造就24～48h.涂布平板用的菌悬液量一般以0.1mL较为合适,假如过少菌液不轻易涂布开,过多则在涂布完后或在造就时菌液仍会在平板概况流淌,不轻易形成单菌落.。
教你一招丨标准平板菌落计数法
教你一招丨标准平板菌落计数法检测食品中微生物数量，一般采用标准平板菌落计数法(SPC)对食品中的活的微生物进行菌落形成单位(CFU)数量的检测，即将部分样品取出混合均匀，用适当的稀释液进行梯度稀释，取一定量的稀释液涂布或倾注琼脂平板，在合适的温度下培养一定的时间，然后通过肉眼观察或电子计数器对所有可见菌落进行计数。
虽然日常检测大多采用倾注平板的方法，但是涂布法在检测热敏性菌体方面更有优势，能取得更好的计数结果，而且更适合于严格好氧菌。
涂布法的缺点是涂布时琼脂表面不干燥和培养后菌落蔓延导致无法计数。
(一)菌落计数器平板上的菌落个数可用肉眼直接观察进行计数，也可以借助仪器进行。
菌落计数器是一种数字显示式自动细菌检验仪器。
由计数器、探笔、计数池等部分组成，计数器采用CMOS集成电路精心设计， LED数码管显示，字高13mm,清晰明亮，配合专用探笔，计数灵敏准确。
黑色背景式计数池内，荧光灯照明，菌落对比清楚，便于观察。
菌落计数器分手动、半自动和全自动三种类型，可根据对精确度的要求，选择不同的计数器。
使用方法： (1)接通电源，平板去盖，皿底朝下放入计数器后开始计数，从平板的顶部开始计数，用方格线标记防止重复计数，利用这种机械式手动计数器，计数每一个菌落，无论多小或不典型。
(2)将探笔插入仪器上的探笔插孔内。
打开计数器，接通电源，计数池也内灯亮，并且显示窗内显示明亮，可以进行计数。
把待检的培养皿皿底朝上放入计数池内，并用探笔在培养皿底面对菌落进行计数，点到的菌落处被标上颜色，显示窗内数字会自动累加。
用放大镜仔细检查，确认点数无遗漏后，显示窗内的数字即为该培养皿内的菌落数。
使用注意事项：仪器要放在平整牢固的试验台上，点数时，探笔不要过于倾斜，轻点至有弹跳感，数字即可显示。
仪器应防尘，放大镜表面的灰尘，要用纯化水清洗后，再用镜头纸擦拭干净即可，另外还应防潮、防剧烈震动、防日光曝晒、防酸碱等，使用完后加防护罩。
平板菌落计数法计算公式 例题
平板菌落计数法计算公式例题平板菌落计数法计算公式例题一、引言平板菌落计数法是微生物学实验室中常用的一种微生物计数方法，通过在琼脂平板上培养微生物，并根据菌落的形成情况来进行微生物数量的估算。
在本文中，我将介绍平板菌落计数法的计算公式，并通过一个具体的例题来加深理解。
二、平板菌落计数法的计算公式在进行平板菌落计数法时，通常使用以下计算公式来计算微生物的数量：N = n/d * 1/V其中，N 代表菌落总数（CFU/g或CFU/mL）n 代表在某一平板中被计数的菌落数d 代表对数稀释倍数V 代表每次接种的体积（mL）这个计算公式是通过对每个平板上的菌落数进行统计，并根据稀释倍数和接种体积来进行微生物数量的推算。
三、例题分析假设我们在实验室中进行了一次细菌计数实验，以确定某一食品样品中的细菌数量。
我们首先进行了系列的稀释，并将不同稀释倍数的样品接种在琼脂平板上。
在我们观察到的一张平板上，我们发现了以下菌落数：- 在1:10稀释倍数下，菌落数为30- 在1:100稀释倍数下，菌落数为18- 在1:1000稀释倍数下，菌落数为5假设每次接种的体积为1mL，则根据上述数据，我们可以进行如下的计算：N = (30/10) * 1/1 + (18/100) * 1/1 + (5/1000) * 1/1= 3 + 0.18 + 0.005= 3.185根据计算，我们可以认为在此食品样品中的细菌数量为3.185 CFU/mL。
四、总结与回顾通过这个例题的分析，我们加深了对平板菌落计数法的理解。
通过对不同稀释倍数下的菌落数进行计数，并根据计算公式进行推算，我们可以较为准确地确定样品中微生物的数量。
在实际操作中，我们需要注意稀释倍数和接种体积的准确控制，以避免出现较大误差。
五、个人观点和理解平板菌落计数法作为一种常用的微生物计数方法，在实验室中具有重要的应用价值。
通过对菌落的形态和数量进行观察，我们可以快速、准确地了解样品中微生物的数量，为食品安全、药品生产等领域提供了有力的数据支持。
《药学微生物》2-2-3 实训 平板菌落计数法
3、取样
平板菌落计数法
用三支1mL无菌吸管分别吸取10-4、 10-5和10-6的稀释菌悬液各lmL， 对号放入编好号的无菌平皿中。
各取1ml
4、倒平板
平板菌落计数法
尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入融化后冷却至45℃左右 的牛肉膏蛋白胨培养基约15mL/平皿，置水平位置迅速旋动平皿，使培 养基与菌液混合均匀，而又不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上。
五、实训结果
平板菌落计数法
1．结果 2．将培养后菌落计数结果填入下表
稀释度
10-4
10-5
10-6
1
2
3
平 均
1
2
3
平 均
1
2
3
平 均
菌落数
每mL样品 活菌数
六、思考题
平板菌落计数法
1、为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板? 试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点及 应用。 2、当平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时， 问题出在哪里? 3、用倒平板法和涂布法计数，其平板上长出的菌落有何不 同?为什么要培养较长时间(48H)后观察结果?
待培养基凝固后，将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养。
5、计数
平板菌落计数法
培养24h后，取出培养平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落平均 数，并按下列公式进行计算。
每毫升中菌落形成单位(cfu)=同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀 释倍数
一般选择每个平板上长有30～300个菌落的稀释度计算每毫升的含 菌量较为合适。
谢 谢！
实训 平板菌落计数法
一、实训目的
学习平板菌落计数的基本原理和方法。
平板菌落计数法
平板菌落计数法操作方法
平板菌落计数法操作方法
平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，可用于定量测定空气、水、食品、药品等样品中的微生物菌落数量。
下面是平板菌落计数法的操作方法：
1. 准备培养基：选择适合待测微生物培养的培养基，如琼脂培养基、营养琼脂等。
按照培养基说明书的方法制备好培养基，并进行无菌处理。
2. 样品处理：将待测样品进行适当的预处理，如对液体样品可进行稀释，对固体样品可进行悬浮、研磨等处理，以保证样品均匀分散。
3. 平板接种：取适量的样品处理液，将其均匀地倒入已经凝固的培养基平板上，并用无菌棉签进行均匀涂抹，使样品和培养基充分接触。
4. 培养条件：将接种好的平板在适当的温度和湿度条件下进行培养，一般为37下培养24-48小时。
5. 统计菌落：培养结束后，观察平板上的菌落形成情况，对于较多菌落的平板，可以选择在菌落较少的区域进行计数。
使用放大镜或更高倍数显微镜对菌落进行统计。
6. 计算菌落数：根据统计的菌落数，可以根据所用的稀释倍数和接种体积计算出样品中的微生物菌落数量。
需要注意的是，平板菌落计数法需要仔细控制培养条件和接种技术，以减少误差。
同时，对于存在过多重叠菌落的情况，可能需要进行进一步的稀释和计数。
平板计数法
稀释平板计数法实验目的学习稀释平板菌落计数的基本原理和方法。
实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。
实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验器材酿酒酵母菌悬液马铃薯培养基1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。
实验步骤1．无菌器材的准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。
(2) 无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1.5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面的微生物吹入。
棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。
然后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45º角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。
(3) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。
2．样品稀释液的制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
《平板菌落计数法》课件
02
稀释时需使用精确的稀释比，并 确保无菌操作，避免交叉污染。 稀释后的样品应尽快进行平板涂 布，以免菌落过度生长。
菌落计数的标准与误差控制
菌落计数是平板菌落计数的核心环节 ，需要遵循一定的标准。
计数时应选择菌落数在30-300之间的 平板进行计数，以减小误差。同时， 应定期对计数结果进行质量控制，确 保计数的准确性。
实验过程中的质量控制
质量控制是保证实验结果可靠性的重要手段。
实验前应对所有器具进行灭菌处理，确保无菌环境。实验过程中应定期对培养基、稀释液、样品等各 环节进行质量检查，及时发现并纠正问题。同时，应定期对实验人员进行培训和考核，提高实验技能 和素质。
04
平板菌落计数法的应用实例
在食品微生物检测中的应用
限制
平板菌落计数法对于一些特殊微生物的计数可能存在困难，如厌氧微生物、营 养要求较高的微生物等。此外，该方法需要较长时间的培养和计数，对于一些 快速繁殖的微生物可能不适用。
02
平板菌落计数法操作流程
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 培养基制备
总结词
培养基是菌落生长的温床，其制备是平板菌落计数法的第一 步。
详细描述
根据实验需求选择合适的培养基配方，按照比例称取所需的 成分，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀后调节pH值，然后进行 灭菌处理。灭菌后的培养基倒入无菌平板中，冷却备用。
THANKS
感谢观看
样品稀释
总结词
样品稀释是为了将菌落分散开来，便于计数。
详细描述
将待测样品进行稀释，通常选用生理盐水或磷酸盐缓冲液作为稀释液。按照适当 的稀释比例，将样品与稀释液混合均匀，确保每个菌落都能独立分散开来。
平板菌落计数法实验报告
平板菌落计数法实验报告实验目的，通过平板菌落计数法，对水样中的细菌进行计数，了解水质的微生物污染情况。
实验原理，平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，通过将待测水样在琼脂平板上平铺，培养后观察并计数菌落数量，从而得出水样中细菌的数量。
该方法适用于较为清澈的水样，能够较为准确地反映水样的微生物污染情况。
实验步骤：1. 准备琼脂平板和待测水样。
2. 将琼脂平板在恒温箱中加热至液态状态后取出，待稍微冷却至手持温度。
3. 取出待测水样，用移液器吸取一定体积的水样，滴于琼脂平板表面。
4. 用平板旋转器使水样均匀分布在琼脂平板表面。
5. 将琼脂平板倒置放置在恒温箱中，进行培养。
6. 培养后观察琼脂平板上的菌落情况，并进行计数。
实验结果：经过培养后，观察到琼脂平板上出现了多个菌落，通过放大镜进行计数，得出了水样中细菌的数量。
根据实验结果，可以初步判断水样的微生物污染情况。
实验分析：通过平板菌落计数法，我们可以对水样中的细菌数量进行快速、准确的估计。
然而，需要注意的是，该方法只能对能够在琼脂平板上生长的细菌进行计数，对于一些特殊菌种可能无法准确反映其数量。
因此，在实际应用中，需要结合其他方法进行综合分析。
实验总结：平板菌落计数法是一种简单、直观的微生物计数方法，适用于对水样等液体样品中的微生物进行快速检测。
在实际操作中，需要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性。
同时，结合其他检测方法，可以更全面地了解样品的微生物污染情况。
通过本次实验，我们对平板菌落计数法有了更深入的了解，也增加了对水质微生物污染检测方法的掌握。
希望能够通过这些实验，为今后的科研工作和实际应用提供一定的参考和帮助。
平板菌落计数法
平板菌落计数法(一)目得要求学习平板菌落计数得基本原理与方法。
(二)基本原理平板菌落计数法就是将待测样品经适当稀释之后,其中得微生物充分分散成单个细胞,取一定量得稀释样液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见得菌落,即一个单菌落应代表原样品中得一个单细胞、统计菌落数,根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中得含菌数。
但就是,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以,长成得一个单菌落也可来自样品中得2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数得结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数得结果,现在已倾向使用菌落形成单位(cｏlony－ｆormiｎg uｎits,ｃfu)而不以绝对菌落数来表示样品得活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁,结果需要培养一段时间才能取得,而且测定结果易受多种因素得影响,但就是,由于该计数方法得最大优点就是可以获得活菌得信息,所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂),以及食品、饮料与水(包括水源水)等得含菌指数或污染程度得检测、(三)器材1.菌种大肠杆菌菌悬液、2、培养基牛肉膏蛋白陈培养基、３.仪器或其她用具１mL无菌吸管,无菌平皿,盛有4.5ml无菌水得试管,试管架,恒温培养箱等、(四)操作步骤ｌ.编号取无菌平皿9套,分别用记号笔标明10—4、10—5、10－6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有4。
5mL无菌水得试管,依次标就是１０-1、10-2、10－3、10－４、10—5、1０—6。
2.稀释用lmL无菌吸管吸取ｌmL已充分混匀得大肠杆菌菌县液(待测样品),精确地放０、5mL至10-1得试管中,此即为1０倍稀释。
将多余得菌液放回原菌液中。
将10－1试管置试管振荡器上振荡,使菌液充分混匀。
另取一支ｌmｌ吸管插入10 1试管中来回吹吸菌悬液三次,进一步将菌体分散、混匀、吹吸菌液时不要太猛太快,吸时吸管伸人管底,吹时离开液面,以免将吸管中得过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。
平板菌落计数法
平板菌落计数法平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。
方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
平板菌落计数法e
平板菌落计数法〔一〕目的要求学习平板菌落计数的根本原理和方法。
〔二〕根本原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
〔三〕器材1．菌种大肠杆菌菌悬液。
2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基。
3．仪器或其他用具1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
〔四〕操作步骤l．编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
将多余的菌液放回原菌液中。
将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。
另取一支lml吸管插入10 1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸人管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。
用此吸管吸取10-1菌液lmL，精确地放至10-2试管中，此即为100倍稀释。
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2．稀释
用1ml无菌吸管精确地吸取1mL原菌悬液放入10-2的三 角瓶中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，容 器内液体外溢。然后仍用此吸管将瓶内悬液来回吸吹三 次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。另 取一支吸管自10-2三角瓶中吸1mL放入10-3试管中，吸吹
三次，……其余依次类推。整个稀释过程如图。
灭菌:轮流值守 摆放斜面试管:
土壤及细菌原液稀释:土壤稀释分离
倒平板:每人3个,分离用2个,计数用1个.
接种:平板菌落计数每人一只平板.土壤稀释分离:
每人划2个平板,放线菌和霉菌各一个. 培养:细菌37℃;放线菌,霉菌28℃(分开放置) 观察,分离和计数:平板菌落计数48小时后;放线菌和霉
菌接种3天后开始 形态观察:一周后.
殊，如相差较大，表示试验不精确。
配制（每组400mL） 第一台:牛肉膏蛋白胨固体培养基: 平板菌落计数法
用.
第二台:高氏一号固体培养基: 分离放线菌 第三台:土豆蔗糖培养基: 分离霉菌
分装:三角瓶(装99mL水(加玻璃珠)，每台1只) 斜面试管(装土豆蔗糖培养基,每人2只) 稀释用试管(事先装无菌水4.5mL,每组3只) 相关材料.
3．取样
用4支1mL无菌吸管分别精确地吸取10-5、10-6、10-7、 10-8的稀释菌液1ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。
4．倒平板
于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化 后冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基约10— 15mL，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒 置于37℃温室中培养。
一、目的要求
学习平板菌落计数的基本原理和方法。
二、基本原理
平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基 上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成 的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个 单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释， 再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其 均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由 单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目， 即可换算出样品中的含菌数。
三、器材
酵母菌悬液， 牛肉膏蛋白胨培养基， 1mL无菌吸管 无菌平皿 盛有9 mL无菌水的试管
四、操作步骤
1．编号：
▪取无菌平皿 8套，在皿底分别标记10-5、10-6 、10-7、10 8各2套。（不得开盖，）
▪取1只装有99mL无菌水的三角瓶1只，标明10-2。
▪另取6支盛有9mL无菌水的试管，排列于试管架上，依次 标记10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8。
5．计数
培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度 两个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算：
每毫升中总活菌数=同一稀释度两次重复的菌落 平均数×稀释倍数
四 实验结果
填表
➢ 一般选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫 升的菌数最为合适。
➢ 同一稀释度的两个重复的菌数不能相差很悬殊。 ➢ 不同稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差悬