菌落总数的测定方法讲解
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• 做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要 时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平板 的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌 落总数。
2、菌落总数的快速测定方法
1. 适用范围用于各类食品及饮用水中菌落总数的测 定。
2. 方法原理 将培养基、凝胶和酶显色剂等加载在试纸片，经加样、
培养后，细菌菌落在纸片上显现出红色菌斑，通过技 数报告结果。 3. 操作方法 （1）无菌称取样品25g（或25mL）放入含有225mL无菌水 的玻璃瓶（均质袋）内，经充分振摇（均质）做成 1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL， 注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，用1mL灭菌吸管 反复吸吹制成1:100的稀释液、。以此类推，做出 1:1000等稀释度的稀释液，每个稀释度更换一支灭菌 吸管。
菌落总数的测定方法
目录:
食品微生物检验的指标 菌落的概念 菌落总数的概念 菌落总数的测定意义 菌落总数的测定方法
食品微生物检验的指标
• 食品在食用前的各个环节中，被微生物污 染往往是不可避免的。评价食品被微生物 污染的程度，要采用微生物检验指标采进 行。常采用的微生物检验指标为三项细菌 指标，即细菌数量(主要是菌落总数)、大肠 菌群最近似数和致病菌。
三﹑菌落总数的测定方法
• 菌落总数的测定方法有国家标准测定方法和菌落总数的快速测定 法。 1.国家标准测定方法： （一）原理： 菌落总数的测定是根据微生物在固体培养基上所生产的菌落 的生理及培养特征进行的。即一个菌落代表一个单细胞。 测定时，首先将待测培养样品制成均匀的，一系列不同稀释 度的稀释液，并尽量是样品中的微生物细胞分散，是指单个细胞 状态存在再取一定稀释倍数的一定稀释液接种到培养基上，使其 均匀分布。菌落由单个细胞生长繁殖而成，因此通过统计菌落的 数目，可计算出样品中的含菌数。 我们计算出菌落数是培养基上 长出来的活的菌落数。
• (5) 稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养 基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL,并转 动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有 1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
• (6) 待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养 48±2h。
(二)、 菌落计数方法
（4）将加了样的检验纸片每6片叠放在仪器，放入 自封袋中，平放在37℃培养箱内培养15~24h。取 出纸片观察结果。
ppt制作：xxxx 学号：xxxxxx
│ 每皿内加入适量营养琼脂 │
└─────────────┘
36±1℃ 48±2h
菌落计数
报告│
(五)操作步骤 （一）、 检样稀释及培养
（1）以无菌操作,将检样25g(或mL)剪碎放于含有 225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内或 灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后,最好置均质器中以8 000～10 000r/min的速度处理1min,做成1∶10的均匀稀释液。 （2） 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL,沿管壁徐 徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内 (注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均 匀,做成1∶100的稀释液。
• 菌落总数的检验程序如下
• ┌─────┐ │检样 │
└─────┘
↓
┌─────────────┐
Baidu Nhomakorabea
│ 做成几个适当倍数的稀释液 │
└─────────────┘
↓
┌──────────────┐
│ 选择2～3个适宜稀释度
│
│ 各以1mL分别加入灭菌平皿内 │
└──────────────┘
↓
┌─────────────┐
一﹑菌落总数的概念
• 1.菌落总数
菌落：指细菌在固体培养基上生长繁 殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是 由数以万计相同的细菌集合而成。
菌落总数：指一定数量或面积的食品 样品，在一定条件下进行细菌培养，使每 一个活菌只能形成一个肉眼可见的菌落， 然后进行菌落计数所得的菌落数量。通常 以lg或1ml或lcm2样品中所含的菌落数量来 表示。
（二）仪器设备
培养基箱，恒温水浴锅，天平，三角瓶，灭菌培 养皿，灭菌皿试管，玻璃珠，均质机，灭菌刀，镊 子;酒精灯。
（三）培养基和试剂
1.营养琼脂培养基：按GB 4789.28中4.7规定。 2.磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28中3.22规定。 3.生理盐水。 4.75%乙醇。
(四)检验程序
二﹑菌落总数的测定意义
• 菌落总数是食品卫生指标中的重要项 目，主要作为判定食品被污染程度的指标。 检测食品中的菌落总数，可以了解食品在 生产中，从原料加工到成品包装受外界污 染的情况，从而反映食品的卫生质量。
• 菌落总数越多，说明食品的卫生质量 越差，食品被病原菌污染的可能性越大。 而菌落总数越少，说明食品的卫生质量越 好，食品被病原菌污染的可能性越小。
（2）一般食品选3个稀释度进行检测，含菌量少的 液体样品（如食用纯水和矿泉水等）可直接用原 液检测。将检验纸片放在水平台面上，揭开上面 的透明薄膜，用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液 1mL,均匀加到中央的圆圈内，轻轻将上盖膜放下， 精置5min
（3）从中间向周围轻轻推刮，使水分在圆圈内均 匀分布，并将气泡赶走。
• (3) 另取1mL灭菌吸管,按上条操作顺序,做10倍递增稀 释液,如此每递增稀释一次即换用1支1mL灭菌吸管。
• (4) 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选 择2～3个适宜稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,即 以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每 个稀释度做两个平皿。
2、菌落总数的快速测定方法
1. 适用范围用于各类食品及饮用水中菌落总数的测 定。
2. 方法原理 将培养基、凝胶和酶显色剂等加载在试纸片，经加样、
培养后，细菌菌落在纸片上显现出红色菌斑，通过技 数报告结果。 3. 操作方法 （1）无菌称取样品25g（或25mL）放入含有225mL无菌水 的玻璃瓶（均质袋）内，经充分振摇（均质）做成 1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL， 注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，用1mL灭菌吸管 反复吸吹制成1:100的稀释液、。以此类推，做出 1:1000等稀释度的稀释液，每个稀释度更换一支灭菌 吸管。
菌落总数的测定方法
目录:
食品微生物检验的指标 菌落的概念 菌落总数的概念 菌落总数的测定意义 菌落总数的测定方法
食品微生物检验的指标
• 食品在食用前的各个环节中，被微生物污 染往往是不可避免的。评价食品被微生物 污染的程度，要采用微生物检验指标采进 行。常采用的微生物检验指标为三项细菌 指标，即细菌数量(主要是菌落总数)、大肠 菌群最近似数和致病菌。
三﹑菌落总数的测定方法
• 菌落总数的测定方法有国家标准测定方法和菌落总数的快速测定 法。 1.国家标准测定方法： （一）原理： 菌落总数的测定是根据微生物在固体培养基上所生产的菌落 的生理及培养特征进行的。即一个菌落代表一个单细胞。 测定时，首先将待测培养样品制成均匀的，一系列不同稀释 度的稀释液，并尽量是样品中的微生物细胞分散，是指单个细胞 状态存在再取一定稀释倍数的一定稀释液接种到培养基上，使其 均匀分布。菌落由单个细胞生长繁殖而成，因此通过统计菌落的 数目，可计算出样品中的含菌数。 我们计算出菌落数是培养基上 长出来的活的菌落数。
• (5) 稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养 基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL,并转 动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有 1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
• (6) 待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养 48±2h。
(二)、 菌落计数方法
（4）将加了样的检验纸片每6片叠放在仪器，放入 自封袋中，平放在37℃培养箱内培养15~24h。取 出纸片观察结果。
ppt制作：xxxx 学号：xxxxxx
│ 每皿内加入适量营养琼脂 │
└─────────────┘
36±1℃ 48±2h
菌落计数
报告│
(五)操作步骤 （一）、 检样稀释及培养
（1）以无菌操作,将检样25g(或mL)剪碎放于含有 225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内或 灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后,最好置均质器中以8 000～10 000r/min的速度处理1min,做成1∶10的均匀稀释液。 （2） 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL,沿管壁徐 徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内 (注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均 匀,做成1∶100的稀释液。
• 菌落总数的检验程序如下
• ┌─────┐ │检样 │
└─────┘
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Baidu Nhomakorabea
│ 做成几个适当倍数的稀释液 │
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│ 选择2～3个适宜稀释度
│
│ 各以1mL分别加入灭菌平皿内 │
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一﹑菌落总数的概念
• 1.菌落总数
菌落：指细菌在固体培养基上生长繁 殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是 由数以万计相同的细菌集合而成。
菌落总数：指一定数量或面积的食品 样品，在一定条件下进行细菌培养，使每 一个活菌只能形成一个肉眼可见的菌落， 然后进行菌落计数所得的菌落数量。通常 以lg或1ml或lcm2样品中所含的菌落数量来 表示。
（二）仪器设备
培养基箱，恒温水浴锅，天平，三角瓶，灭菌培 养皿，灭菌皿试管，玻璃珠，均质机，灭菌刀，镊 子;酒精灯。
（三）培养基和试剂
1.营养琼脂培养基：按GB 4789.28中4.7规定。 2.磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28中3.22规定。 3.生理盐水。 4.75%乙醇。
(四)检验程序
二﹑菌落总数的测定意义
• 菌落总数是食品卫生指标中的重要项 目，主要作为判定食品被污染程度的指标。 检测食品中的菌落总数，可以了解食品在 生产中，从原料加工到成品包装受外界污 染的情况，从而反映食品的卫生质量。
• 菌落总数越多，说明食品的卫生质量 越差，食品被病原菌污染的可能性越大。 而菌落总数越少，说明食品的卫生质量越 好，食品被病原菌污染的可能性越小。
（2）一般食品选3个稀释度进行检测，含菌量少的 液体样品（如食用纯水和矿泉水等）可直接用原 液检测。将检验纸片放在水平台面上，揭开上面 的透明薄膜，用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液 1mL,均匀加到中央的圆圈内，轻轻将上盖膜放下， 精置5min
（3）从中间向周围轻轻推刮，使水分在圆圈内均 匀分布，并将气泡赶走。
• (3) 另取1mL灭菌吸管,按上条操作顺序,做10倍递增稀 释液,如此每递增稀释一次即换用1支1mL灭菌吸管。
• (4) 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选 择2～3个适宜稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,即 以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每 个稀释度做两个平皿。