急性皮肤刺激试验
《动物毒理实验》课件：实验3 皮肤刺激性试验
皮肤刺激强度分级
皮肤局部反应
无刺激性 轻度刺激性
无异常改变 充血、红斑
中等刺激性
红斑，少量小出血点，水肿， 少量丘疹以及小水疱
强刺激性
红斑，皮下出血，水肿，有很 多小水疱并有可能合并成大水 疱，糜烂，表皮剥落，有溃疡 形成等
评分 0 <2
2~6
>6
方法评价
皮肤刺激试验的结果不仅与检测技术有关， 也与试验过程中的质量控制相关。
经4~8h后，除去斑贴物，每24h观察一次各小区皮肤的局部 反应，连续观察4d，按皮肤刺激反应评分（表1），定量地 评定受试化学物对皮肤局部刺激作用的强度。红斑通过肉眼 观察，水肿通过轻轻触摸的方法来评分。
表1 皮肤刺激强度反应评分
皮肤反应强度
评分
无红斑
极轻微红斑（勉强可见）
1
A.红斑和 边界清晰的红斑（明显红斑，淡红至鲜红色） 2
本法与局部全封闭斑贴法不同之处在于： 1.每组的白色家兔数不应少于3只； 2.采用纱布作斑贴物，在无刺激作用的前提下，用半封
闭敷料固定； 3.斑贴不需要在擦伤皮肤上进行； 4.斑贴4h，然后去掉斑贴并清洗皮肤，观察0.5h、1h、
24h、48h和72h后的皮肤反应。 皮肤刺激反应评分同全封闭法。
结果分析
皮肤刺激试验又称皮肤原发性刺激试验。
试验目的
了解受试化学物对皮肤的直接刺激作 用以及刺激强度。
试验材料——实验动物
实验动物：成年白色家兔或白色豚鼠， 首选白色家兔。
在皮肤刺激试验中，动物品种的选择 很重要。目前多选用兔和豚鼠，对于 强刺激或无刺激作用的化学物选用家 兔检测效果好，但对作用缓和的刺激 性化学物，选用豚鼠所获得的试验结 果较准确。
草酸钾溶液(250g／L)急性毒理、皮肤刺激实验的研究
实用 口腔医学杂志 （ ｒｔ Ｓ ｍ ｔ１２０ ｒ１ （ ） Ｊ ａｔ ｔ ａｏ）０ ２Ｍａ．８ ２ Ｐ ｅ
草酸钾 溶 液 （５ ／ ） ２０ｇ Ｌ 急性 毒理 、 肤刺激 实验 的研 究 皮
张广耘 徐 秦
（ 要】 目的 ： 摘 为临床 安全应用草酸钾 溶液 （５ ／ ） ２ｏ ｇＬ 治疗牙本质 敏感症提供基础依据。方法 ： 采用 昆明小
Ｋｅ ｒ ｓ Ｐ ｔｓ ｌｍ ｘ ｌ ｔ ； ｕ ｅ ｔｘｃ ｔｓ ： ｋ ｎ ｔｓ ｙ ｗｏ ｄ ｏａ ｓ ｕ ｏ ａａ ｅ Ａｃ ｔ ｏ ｉ ｅ ｔ Ｓ ｉ ｅ ｔ
中图分类 号 ： ７１２ 文献标识 码 ： 文章 编 号 ：０ １３３ （０２ －２ １６ ２ Ｒ ８． Ａ １０ －７３ ２０ ） － ４ － ００ ０
ａ ｄ ａ ｕ ｅ ｓ ｉ ｔ ｌ ｔ ｎ ｔ ｓ ｗｅ ｅ ｃ ｒ ｅ ｕ ｎ Ｋｔ ｎ ｃ ｔ ｋ ｎ ｓ ｍｕａ ｌ ｅ ｔ ｒ ａｒ ｄｏ ｔ ｍｍｉ ｃ ｎ ａ ｂ ｔ Ｒｅ ａｔ ： ｏａ ｓｕ ｏ ａａｅ ｓ ｌ ｔ ｎ ｍ ｉ ｏ ｉ ｏ ｎ ｍｉ ａ ｄ ｒｂ ｉ ｓ ｌ Ｐ ｔｓ ｉ ｍ ｒ ｌ ｔ ｏｕｉ ｅ ｓ ｓ ｏ
牙根暴 露和 颈部 楔缺 等是导致 牙本 质 敏感症 的主 要原 因 ， 也是 牙周 病 学 研究 的重 要课 题 之 一 近年 来
口一次性灌胃， 与空 白对照组相 比较连续观察 ｌ ｄ计 ４ ， 算各组动物的 Ｌ （ Ｄ 半数致死量 ） 。
１３ 急种新型脱敏药物在临床上取得较好的疗 效” 。草酸钾 本属 化学 试 剂 ， 毒 ） 有 。采 用 ２０ ＳＬ ５ ／ 的浓度作为局部治疗牙本质敏感症的药物， 口腔粘 对 膜及其他组织有无 毒 、 副作 用 ， 事关 临床用 药的安全
最新急性皮肤刺激试验
急性皮肤刺激试验1 目的确定化学品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用及程度，为制定化学品对皮肤的保护措施提供依据。
2 制定依据《化妆品卫生规范（2007版）》。
3试验方法3.1受试样品处理液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。
若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。
使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。
需稀释后使用的产品，先进行产品原型的皮肤刺激性/腐蚀性试验，如果试验结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试物再进行皮肤刺激性/腐蚀性试验。
受试物为强酸或强碱（pH 值≤2 或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。
此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50 小于200 mg/kg 体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为2000 mg/kg 体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。
3.2实验动物和饲养环境多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。
应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。
实验动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需增加实验动物数。
实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d 时间。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用常规饲料，饮水不限制。
3.3急性皮肤刺激性试验步骤3.3.1试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。
3.3.2 取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。
另一侧皮肤作为对照。
采用封闭试验，敷用时间为4h。
对化妆品产品而言，可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。
对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2h 敷用试验。
试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。
急性毒性试验
试验步骤和操作要点
1
试验设计
2
确定试验物质的给药途径、剂量和
暴露时间，合理设计试验组和对照
组，以确保试验数据的可比性。
3
数据分析
4
收集和整理试验数据，进行统计分 析和结果解读，评估化学物质的毒
性潜力和危害等级。
试验准备
准备动物和试验物质，并遵守试验 室安全和伦理规定，保证试验过程 的准确性和可靠性。
试验操作
按照设定的方案进行实验操作，严 格控制剂量和暴露时间，记录动物 的毒性反应和不良效应。
试验结果的解读和评价标准
急性毒性试验结果一般以LD50值为指标进行解读，在国际上有一系列评价标准，用于评估化学物 质的毒性程度和危害等级。
试验的局限性和改进方向
1 动物模型的局限性 2 测试方法的改进
动物模型不能完全代 表人类生物反应，因 此在试验结果的解读 和评估时需要谨慎考 虑。
急性毒性试验
急性毒性试验是一种评价化学物质对生物体的短期毒性潜力的试验方法，通 过暴露一定剂量的物质给实验动物，观察其对动物的毒性反应以及产生的不 良效学物质对生物体的毒性程度及其可能产生的危害， 为了规范评估过程，国际上制定了一系列的试验方法和评价标准。
常用的试验方法和原理
需要进一步发展和改 进更精准、准确的试 验方法，以提高试验 结果的预测性和可比 性。
3 替代和替补模型
发展替代和替补模型， 例如体外细胞实验和 计算机模拟，以减少 对动物实验的依赖。
试验的应用领域和意义
急性毒性试验在化学品安全评估、药物研发、环境保护等领域具有重要意义， 为保障人类健康和环境安全提供科学依据。
LD50试验 通过确定半数致死剂量（LD50）来评估化学物质的毒性，以毫克/ 千克体重作为单位。 急性口服毒性试验 通过将一定剂量的物质通过口服给予 动物，观察其对动物的毒性反应，用于评估化学物质的毒害程度。 急性皮肤 毒性试验 通过将一定剂量的物质涂抹于动物皮肤上，观察皮肤反应和毒性症 状，用于评估化学物质的皮肤刺激和毒害作用。
急性皮肤刺激性或腐蚀性试验.doc
四、皮肤刺激性/腐蚀性试验Dermal Irritation/Corrosion Test1 范围本规范规定了动物皮肤刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。
2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No.404, July 1992)USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines (Series 870. 2500, Aug. 1998 )3 试验目的确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。
4 定义4.1 皮肤刺激性(Dermal irritation)：皮肤涂敷受试物后局部产生的可逆性炎性变化。
4.2 皮肤腐蚀性(Dermal corrosion)：皮肤涂敷受试物后局部引起的不可逆性组织损伤。
5试验的基本原则将受试物一次(或多次)涂敷于受试动物的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。
采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺激作用。
急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价该作用的可逆性或不可逆性。
6 试验方法6.1 受试物液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。
若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。
使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。
受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。
此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50小于200mg/kg体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为5000mg/kg体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。
6.2 实验动物和饲养环境多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。
应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。
GBZ240.6-急性皮肤刺激试验
无红 斑 轻微 红 斑 红斑 和焦痂形成 明显 红 斑
1
72h各 观察时点最高积分均值 ,按 表 2判 定皮肤刺激强度 。
1
皮肤刺激反应评分
评 分
2
中等程度到重度程度 红斑 严重红斑至焦痂形成
GBz/T240.6-2011
表 1(续 )
皮 肤 反 应 无水肿 很轻微水肿 水肿形成
1
评
分
6.4.2 染毒
取受试样 品 0.5mL(g)直 接涂布在皮肤 上 ,用 4层 纱 布 (2.5cm× 2.5cm)和 一层玻璃 纸或类似物 覆盖 ,再 用无刺激性胶布和绷带加 以固定 。对侧皮肤作 为对 照 。采用封 闭试 验 ,敷 用 时间为 4h。 试 验 结束后 ,用 温水或无刺激性溶剂清除残 留受试样 品 。 如怀疑受试样 品可能引起严重刺激或腐蚀作用 ,可 采用分段试验 ,将 三个涂布受试样 品的纱布块 同 时或先后敷贴于一 只家兔背部脱 毛区皮肤上 ,分 别 于涂敷后 3min、 60min和 4h取 下一块纱 布 ,皮 肤涂 敷部位在任 一时间点积分等于 8分 ,即 可停 止试验 。
限 内观察 和评 价 刺激 反 应 的程
作详细的记录 。
1犭
以进行 可 逆 或不 可逆效 应 的观 察 ,以
便进行完整 的评价 ,但 一般不超过
强碱物质 (pH≥ 11),由 于可预见其腐蚀特
性 ,不 必做本试验 ;若 已知受试样 品有很强 的经皮 吸收毒性 (LD5。 ≤ zOO mg/kg体 重 )的 物质不必进行本 试验 ;在 充分并公认 的体外试验结果 中确定可能产生腐蚀或刺 激 毒性 的物质不必进 行体 内试 验 。如果 从受试样 品的结构活性构效关系可 以预见 潜在 的腐蚀毒性 ,则 不必做本试验 。
急性皮肤实验报告
一、实验目的本次实验旨在通过急性皮肤刺激试验，评估受试物质对皮肤的直接刺激作用，了解其在接触皮肤后可能引起的急性损伤情况。
实验依据《消毒技术规范》（2002年版）和相关标准进行。
二、实验材料1. 受试物质：[受试物质名称]，[受试物质浓度]。
2. 实验动物：豚鼠，体重200-250g，雌雄各半。
3. 实验设备：皮肤刺激试验箱、皮肤刺激试验板、分析天平、计时器、显微镜等。
4. 实验试剂：生理盐水、蒸馏水、棉签、酒精棉球、纱布等。
三、实验方法1. 实验动物分组：将豚鼠随机分为三组，每组10只，分别为受试物质组、溶剂对照组和生理盐水对照组。
2. 皮肤准备：将豚鼠置于皮肤刺激试验箱中，去除体毛，使皮肤暴露。
用酒精棉球清洁皮肤，待酒精挥发后，用纱布轻轻擦拭。
3. 受试物质涂抹：将受试物质[受试物质名称]按[受试物质浓度]要求，均匀涂抹于豚鼠皮肤上，面积为2cm×2cm。
溶剂对照组涂抹相同浓度的溶剂，生理盐水对照组涂抹等量生理盐水。
4. 涂抹时间：将受试物质涂抹于豚鼠皮肤后，用敷料覆盖固定，粘贴时间为4小时。
5. 观察与记录：涂抹受试物质后，每隔24小时观察豚鼠皮肤情况，记录红斑、水肿等皮肤刺激反应。
观察期为14天。
6. 结果评价：根据观察结果，按照皮肤刺激试验评价标准对受试物质进行评价。
四、实验结果1. 受试物质组：在涂抹受试物质后，豚鼠皮肤出现明显红斑、水肿，程度随时间逐渐加重。
在第7天时，红斑面积最大，水肿程度最严重。
2. 溶剂对照组：在涂抹溶剂后，豚鼠皮肤无明显变化。
3. 生理盐水对照组：在涂抹生理盐水后，豚鼠皮肤无明显变化。
五、讨论本次实验结果显示，受试物质[受试物质名称]对豚鼠皮肤具有明显的急性刺激作用。
涂抹受试物质后，豚鼠皮肤出现红斑、水肿，程度随时间逐渐加重。
这与受试物质的化学性质有关，可能与其释放的活性物质或对皮肤的直接刺激作用有关。
根据实验结果，受试物质[受试物质名称]的急性皮肤刺激强度为[评价等级]，建议在使用过程中加强防护措施，避免直接接触皮肤。
药物毒理学实验
重程度，中毒死亡的情况等，根据各组动物死亡数计
算半数致死量（LD50）。据此分析受试动物毒性反应 与剂量的关系，并根据LD50值对药物进行毒性分级。
三.实验材料
（1）器材
（2）药品
1ml注射器、电子天平、记号笔、镊子、剪刀等。
盐酸赛拉嗪注射液。
（3）动物
实验一
急性毒性试验
•
（一） 药物LD50的测定
一、实验目的
（1）理念——是药三分毒;
（2）了解一些常规药物毒理学的试验方法， 及评价指标; （3）掌握药物急性毒性试验的试验设计方 法、LD50的测定及计算方法。
二. 实验原理
选择健康的实验动物，根据体重按随机分组方法，
根据LD50计算的设计原则将动物分成数个染毒组。一
死试验。
（2） 致癌实验： 短期致癌实验和长期致癌实验。
（3） 致畸胎试验：于孕鼠或孕兔胚胎的器官形成期给药，观察对子代的影响。
最大耐受剂量(MTD)
指在外来化合物急性毒性实验中,化学物质不引起
受试对象(实验动物)出现死亡的最高剂量,故可缩写为LD0。一般不用最大耐 受剂量来比较两种外来化合物的毒性。 治疗指数 为药物的安全性指标。通常将半数中毒量（TD50）/半数有
察受试区皮肤的变化，有无红斑、水肿等现象。
如为多次给受试物实验则一般每日涂抹一次，连续一周， 其余均与一次给受试物的方法和要求一致。
2、结果判断与评价
每只动物实验结果按表1进行刺激反应评分，
计算出平均分值按表2进行刺激强度评价：
表1 皮肤刺激反应评分
红斑形成
无红斑 勉强可见 明显红斑 中等-严重红斑
急性毒性试验
急性皮肤眼刺激实验报告
一、实验背景化妆品、药物、化工产品等在使用过程中，可能会对皮肤和眼睛产生刺激作用。
为了评估这些物质的安全性，本实验对某化妆品进行了急性皮肤眼刺激试验，以观察其对皮肤和眼睛的刺激反应。
二、实验目的1. 评估某化妆品对皮肤和眼睛的急性刺激作用；2. 为该化妆品的安全性评价提供依据。
三、实验材料1. 实验动物：成年白色家兔，体重2.0-2.5kg，共8只；2. 受试化妆品：某品牌化妆品，生产批号：20231201；3. 赋形剂：无刺激性乳液；4. 实验仪器：皮肤刺激试验箱、电子天平、滴管、纱布、胶布、绷带等。
四、实验方法1. 急性皮肤刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。
（2）皮肤准备：实验前24小时，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，去毛范围各约3cm×6cm，不可损伤表皮。
（3）涂抹受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴在2.5cm×2.5cm大小的四层纱布上，敷贴在一侧皮肤上；对照组将相同体积的赋形剂敷贴在另一侧皮肤上。
然后用一层油纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。
（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察涂抹部位皮肤反应，按照表1和表2进行皮肤反应积分和刺激强度评价。
2. 急性眼刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。
（2）眼刺激准备：实验前24小时，将实验动物眼部用生理盐水清洗，去除分泌物。
（3）滴加受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴入每只实验动物的一侧眼结膜囊内；对照组将相同体积的赋形剂滴入另一侧眼结膜囊内。
（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察眼睛刺激反应，按照表1和表2进行刺激强度评价。
五、实验结果1. 急性皮肤刺激试验实验组：1只家兔在试验结束后1小时出现轻微红斑，24小时后红斑消退；2只家兔在试验结束后24小时出现轻微红斑和水肿，48小时后症状消失；1只家兔在试验结束后48小时出现轻微红斑和水肿，72小时后症状消失。
《动物毒理实验》课件：实验3 皮肤刺激性试验
目录
试验原理 试验目的 试验材料 试验方法 结果分析 方法评价
试验原理
局部刺激试验是毒理学试验中的一项重要内 容，对可能具有局部刺激作用的化学物必须 进行此项试验，但对具有强酸（pH≤2 ）或 强碱（pH≥11.5 ）性质的化学物不需做本 试验，因为这些化学物属于腐蚀性物质。另 外，已知具有高毒性的化学物也不必进行皮 肤刺激试验。
凡是杀虫剂、杀真菌剂、杀鼠剂以及具有刺 激性的兽药等化学物均需进行局部皮肤刺激 试验，以保护接触人员的健康。
试验药物的量一般以0.5ml或0.5g为宜，评 价固体受试化学物时不一定要将其配成溶液， 具体可酌情而定。
将表1中A项和B项评分结果相加，凡总分低 于2分者可视为无刺激性或轻度刺激性； 2~6分之间者具有中等刺激性；6分以上者 具有强刺激性。
刺激性极强的物质，试用前需经适当稀释后 再进行斑贴，如稀释用的溶剂本身具有刺激 作用，则需作溶剂对照试验。
另外，也可按表2中的标准来判断试验结果。
表2 皮肤刺激强度分级标准
皮肤刺激强度分级
ห้องสมุดไป่ตู้
皮肤局部反应
无刺激性 轻度刺激性
无异常改变 充血、红斑
中等刺激性
红斑，少量小出血点，水肿， 少量丘疹以及小水疱
强刺激性
红斑，皮下出血，水肿，有很 多小水疱并有可能合并成大水 疱，糜烂，表皮剥落，有溃疡 形成等
评分 0 <2
2~6
>6
方法评价
皮肤刺激试验的结果不仅与检测技术有关， 也与试验过程中的质量控制相关。
皮肤刺激试验又称皮肤原发性刺激试验。
试验目的
了解受试化学物对皮肤的直接刺激作 用以及刺激强度。
试验材料——实验动物
[医疗药品管控]农药登记毒理学试验方法
![[医疗药品管控]农药登记毒理学试验方法](https://img.taocdn.com/s3/m/5db34e8977232f60dccca1b6.png)
（医疗药品管理）农药登记毒理学试验方法中华人民共和国国家标准GB15670-1995农药登记毒理学试验方法ToxicologicaltestmethodsofPesticidesforregistration1主题内容和适用范围本标准规定了农药登记毒理学试验的方法、条件的基本要求。
本标准适用于为农药登记而进行的毒理学试验。
2急性经口毒性试验2．1目的求出试验农药对试验动物的半数致死剂量（LD50）；通过观察急性毒性效应的临床表现，初步估测毒作用的靶器官和可能的毒作用机理；为亚慢性、慢性和其他毒性试验的剂量水平设计提供参考；为急性毒性分级和制定安全防护措施提供依据。
2．2试验农药原药和制剂。
2．3试验动物2．3．1主要选用品系、遗传背景明确的初年大鼠。
各剂量组内同性别动物体重差异应小于平均体重的10%，组间同性别动物体重均值差异应小于5%。
2．3．2每壹剂量组的大鼠8~10只（雌雄各半），试验前要对动物观察壹周，确认健康后，方可使用。
2．4剂量分组2．4．1至少应设4~5个剂量组，各剂量组之间要有适当的剂量间距。
以便各组出现不同程度的毒性效应（死亡率），求得剂量效应曲线及LD50。
2．4．2如剂量达5000mg/kg体重之上，动物仍不出现死亡，则不需要进行更高剂量的试验。
2．5给药方法及观察时间2．5．1动物给药前应隔夜禁食但不禁水，称重后，壹次灌胃给药，给药后至少间隔2h进食。
2．5．2灌胃量大鼠按100g体重给1mL，小鼠按20g体重给0.4mL计算，灌胃可用水溶液、油溶液或悬液。
2．5．3给药后立即观察且记录动物的中毒表现，症状出现和消失的时间及死亡时间。
给药当日应连续观察，其后，每日至少观察2次，观察期为14d。
如于给药96h后出现迟发性新效应，则应延长观察期至3周或4周。
2．6观察指标2．6．1中毒症状全面观察中毒的发生、发展过程和规律以及中毒特点和毒作用的靶器官。
观察的系统包括：a．中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应过敏或迟钝；b．植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪；c．呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、呼吸深缓、呼吸过速、蜂腰；d．泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房肿胀；e．皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽；f．眼：眼球突出、结膜充血、角膜混浊；g．消化系统：腹泄、厌食。
(仅供参考)实验7-皮肤刺激实验
实验材料：
剃毛器、剪毛剪、记号笔、 医用胶带、称量纸、洗瓶、大烧杯、 棉签、静脉注射针头（5号或7号）、 一次性静脉注射器、麻醉剂（戊巴比 妥钠或其他）、兔子保定器等。
实验方法：
◆ 实验动物和饲养环境
多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白 色家兔（皮肤变态反应实验多选用豚鼠）；应使 用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性 均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的；实验 动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需 增加实验动物数；实验动物应单笼饲养，试验前 动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间；实 验动物及动物房应符合国家相应规定；选用常规 饲料，饮水不限制，豚鼠需注意补充适斑和焦痂形成
无红斑 轻微红斑（勉强可见） 明显红斑 中度~重度红斑 严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成
水肿形成 无水肿 轻微水肿（勉强可见） 轻度水肿（皮肤隆起轮廓清楚） 中度水肿（皮肤隆起约） 重度水肿（皮肤隆起超过，范围扩大） 最高积分
积分
0 1 2 3 4
0 1 2 3 4 8
结果评价：按下列公式计算每天每只动物平均 积分，以表2判定皮肤刺激强度。
每天每只动物平均积分＝ ∑红斑和水肿积分/受试动物数×14
试验报告
应包括如下内容： （1）受试物名称、理化性状、配制方法和用量。 必要时说明受试物的 pH值； （2）实验动物的种属、品系、性别、体重和来 源（注明合格证号和动物级别） ； （3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、 相对湿度、实验动物房合格证号； （4）每个动物在每一观察时点的皮肤刺激反应 积分； （5）具体描述除刺激性以外的其它毒性作用； （6）结论。
注意：如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐 蚀作用，可采取分段试验，将三个涂布受试 物的纱布块同时或先后敷贴在一只家兔背部 脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、60min 和4h 取下一块纱布，皮肤涂敷部位在任一 时间点出现腐蚀作用，即可停止试验。
化妆品急性毒性试验
化妆品急性毒性试验什么是化妆品急性毒性试验？化妆品急性毒性试验指采用动物试验的方式来评价化妆品对人体产生近期毒性危害的试验。
化妆品急性毒性试验做什么项目的？化妆品急性毒性试验包括急性皮肤毒性试验与急性经口毒性试验两项内容。
（一）急性皮肤毒性试验：1.试验目的急性皮肤毒性试验可确定受试物能否经皮肤吸收和短期作用所产生的毒性反应，可为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其他毒理学试验剂量提供依据。
试验方法受试物液体受试物一般不需稀释。
若受试物为固体，应研磨成细粉状，并用适量水或无毒、无刺激性、不影响受试物穿透皮肤、不与受试物反应的介质混匀，以保证受试物与皮肤有良好的接触。
常用的介质有橄榄油、羊毛脂、凡士林等。
实验动物和饲养环境可选用健康成年大鼠、家兔或豚鼠作为实验动物，也可使用其他种属动物进行试验。
使用雌性动物应是未孕和未曾产仔的。
建议实验动物体重范围为：大鼠200g—300g；家兔2kg—3kg；豚鼠350g—450g。
实验动物皮肤应健康无破损。
试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d—5d 时间。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用标准配合饲料，饮水不限制。
剂量水平根据所选用的方法要求，原则上应设4—6 个剂量组，每组动物一般为10 只，雌雄各半。
各剂量组间距大小以兼顾产生毒性大小和死亡为宜，通常以较大组距和较少量动物进行预试。
如果受试物毒性很低，可采用一次限量法，即用10 只动物（雌雄各半）皮肤涂抹2000mg/kg 体重剂量，当未引起动物死亡，可考虑不再进行多个剂量的急性经皮毒性试验。
（二）急性经口毒性试验：试验目的急性经口毒性试验是评估化妆品原料毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。
试验结果可作为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其他毒理学试验剂量的依据。
试验方法受试物受试物应溶解或悬浮于适宜的介质中，建议首选水，其次是植物油(如玉米油)，或考虑使用其他介质（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）。
急性皮肤刺激实验报告
一、实验目的本实验旨在评估某种化学物质对哺乳动物皮肤的急性刺激性，通过进行急性皮肤刺激试验，为该化学物质的安全使用提供科学依据。
二、实验材料1. 实验动物：成年雌性昆明种小鼠，体重20-25g。
2. 受试化学物质：某化学物质，纯度≥98%。
3. 对照溶剂：蒸馏水。
4. 实验器材：皮肤刺激试验仪、皮肤刺激试验板、无菌棉球、生理盐水、剪刀、剪刀、酒精灯、显微镜等。
三、实验方法1. 实验动物分组：将实验动物随机分为两组，每组10只，分别为实验组和对照组。
2. 皮肤刺激试验：在实验组小鼠的背部皮肤上涂抹0.5ml的受试化学物质，对照组小鼠涂抹等量的对照溶剂。
涂抹后用无菌棉球轻轻擦拭，使受试化学物质均匀分布在皮肤上。
3. 观察与记录：在涂抹受试化学物质后，分别在1小时、4小时、24小时、48小时、72小时观察皮肤反应，记录皮肤红斑、水肿、脱皮等反应程度。
4. 数据分析：采用SPSS软件对实验数据进行统计分析，比较实验组和对照组皮肤反应的差异。
四、实验结果1. 实验组小鼠在涂抹受试化学物质后，皮肤出现明显的红斑、水肿，部分小鼠出现脱皮现象；对照组小鼠皮肤无明显反应。
2. 对实验数据进行统计分析，结果显示实验组小鼠的皮肤红斑、水肿程度与对照组小鼠相比，具有显著性差异（P<0.05）。
五、实验结论根据实验结果，某化学物质对哺乳动物皮肤具有明显的急性刺激性，涂抹后可引起皮肤红斑、水肿、脱皮等反应。
建议在使用该化学物质时，采取适当的安全防护措施，以降低其对皮肤的潜在危害。
六、讨论1. 实验过程中，受试化学物质的浓度和涂抹面积对实验结果有一定影响。
本实验中，受试化学物质的浓度为0.5ml，涂抹面积为小鼠背部皮肤，实验结果具有一定的参考价值。
2. 实验结果表明，某化学物质对哺乳动物皮肤具有明显的急性刺激性，可能与该化学物质的化学性质有关。
建议进一步研究该化学物质的化学结构、分子量等因素，以期为该化学物质的安全使用提供更全面的科学依据。
皮肤用药毒性试验
皮肤急性毒性试验一.试验目的观察动物完整皮肤及破损皮肤短期内接触受试物所产生的毒性反应。
二.实验材料1.动物：选用成年健康家兔(2kg)、白色豚鼠(300g)、白色小型猪(7kg)或大鼠(200g)。
家兔或小型猪每组4只，豚鼠或大鼠每组10只。
受试动物应皮肤光滑、无损伤、无皮肤病。
2.受试物：膏剂、液体或粉末。
前两者可直接试验，后者需用适宜赋形剂(如羊毛脂、凡士林等)混匀，以保证受试物与皮肤良好接触。
三试验方法1 受试动物皮肤制备：①完整皮肤制备：动物在给药前24h，将背部脊柱两侧去毛，可采用剪、剃或适宜的脱毛剂，如8%Na2S等。
去毛范围约相当于体表面积的10%左右，即家兔约150cm2左右，豚鼠、大鼠约40cm2左右，小型猪约300cm2。
去毛后24小时检查去毛皮肤是否因去毛而受伤，受伤的皮肤不宜做完好皮肤的毒性试验。
②破损皮肤准备：按上述方法将受试动物去毛，消毒皮肤后，用消毒手术刀做井字形划破表皮，或用砂布纸摩擦打毛皮肤等，以皮肤出现轻度渗血为度。
2 剂量选择和分组：分对照组和试验组。
对照组应设赋形剂组或空白组。
试验组分为完整皮肤组和破损皮肤组，各2～3个剂量组。
每组动物数为家兔或小型猪4只，大鼠或豚鼠10只，雌雄各半。
低剂量组以临床用制剂(含辅料)用量不低于1g或1ml，高剂量组为低剂量组的2～4倍，或各剂量组间间距根据受试物毒性大小和预试结果而定，一般以0.65～0.85为宜。
根据中药具体特点，可以提高浓度或增加24小时内用药次数。
若用受试物剂量超过有效浓度20倍以上，仍未出现异常反应或死亡，则只设一个高剂量组3 给药方法及观察时间：试验时，将受试物均匀的涂敷于动物背部脱毛区，破损皮肤则在脱毛区划破皮肤后再涂敷受试物，并用无刺激性砂布、胶布或网孔尼龙绷带加以固定。
给受试物24小时后，可用温水或适当溶剂去除残留的受试物或赋形剂，每日观察，连续观察7天。
给受试物时应注意，若受试物是固体粉末或中药散剂，则需加适量水或赋形剂(如羊毛脂、凡士林、橄榄油等)混匀，以保证受试物与皮肤的良好接触。
急性毒性试验
急性毒性试验
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二、试验准备
试验应在符合GLP试验室内进行，试验样品质量和稳定性应符合要求，与药效学及 临床试验一致。
(一)样品液配制
中药材町用浓缩煎剂或浸膏，中药制剂可用不含辅料提取物加水或用o．5％羧基纤 维素钠，0．5％吐温—80，5％阿拉伯胶等混悬剂、增溶剂配成混悬液等，尽可能配成 水溶液，水不溶性成份可用植物汕配成油溶、乳浊液。也有用乙醇、聚乙醇等溶剂配 成样品液者，但溶剂本身急性毒性能干扰试验结果，所以，急性毒性试验汇报中应对 样品液配制方法加以详细说明，必要时设溶剂对照组。
急性毒性试验
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第二节 急性毒性试验方法
一、LD50测定
最小致死量是使动物刚好致死药品剂量，但因为药品性质，给药方法和个 体差异，每只动物最小致死量确很大差异，试验和统训学原理表明一群动物 最小致死量平均值相当于半数致死量。半数致死量测定方法很多，但试验没 计大同小异，所不一样者为算方法不一样，其试验方法以下：
急性毒性试验
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(二)安全性评价
(1)依据急性毒性试验结果判断供试药品毒性强弱、类型。我国尚无统—要求。
(2)急性毒性试验结果对临床研究有指导意义，能够为临床研究时探索安全有 效剂量防止出现急性不良反应提供依据。
不过，鉴于人体与各种动物对各类化合物吸收、分布、代谢、排泄以及各类 型毒性反应差异，尚无规律可循，现有化学药品统计数据表明，在进行临床研 究时，仍应依据试验结果参考文件资料报道进行由低到高安全治疗剂量探索。
(二)样品液浓度及给药容量
为了求得最低致死且或半数致死量，需要设不一样剂量组，使个别组反应率在50％ 以上，个别组反应率在50％以下。不一样剂量设定有两种方式，—是浓度一定不一样 给药容量，另—种是容量一定不一样给药浓度，二者各有所长。
农药登记中的急性毒理学实验
然 后记 录排 皮 肤反 应级 别 。如果 在 这三 个步 骤 中的任何 一 步
试验 目的：确定化学物对哺乳动物皮肤局部是否有刺激 发现有腐蚀作用，则立即停止试验。 作用或腐蚀作用及其程度，为制定防护化学物对皮肤的刺激
保 护措施 提供 依 据 。
在没有腐蚀性 而只有刺激性作用时，Байду номын сангаас需要进行单只动
液体药物一般需要稀释后使用。固体药物 （ 必要时可 以 立即进行刺激分级。如果皮肤受到损伤，而在 ７ ２ 小时 内还
粉 碎 后使 用 ）需 要 用最 小量 的 水 或其它 溶媒 湿 润后 使 用 ， 以 无法断定是刺激还是腐蚀作用造成的，就需要继续观察到第 保 证 与动 物 皮肤 更好 接触 。使 用其 它溶 媒是 要 求溶 媒对 皮 肤 ｌ ４ 天 以确定 皮肤 是否 能够 恢 复 。除 了观察 红斑 和 水肿 之外 ， 的刺 激性 必须 很 小 。
溶 剂洗 去 残 留药 物 。
试验药物用量一般是 ０ ． ５ ｍｌ 液体 ，或 ０ ． ５ ｇ固体或膏 。
初步试验 （ ｉ ｎ ｉ ｔ ｉ ａ ｌ ｔ ｅ ｓ ｔ ） ：一般要求首先采用一只动物进 料的 Ｗｅ ｉ ｇ ｈ ｔ — ｏ ｆ － ｅ ｖ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅ 分析 ，包括顺序试验策略得到的 行初步试验 ，尤其是当供试药物可能具有腐蚀性时。如果根 结 果 。 据有 充分证据 （ ｗｅ ｉ ｇ ｈ ｔ ～ ｏ ｆ — ｔ ｈ ｅ — ｅ ｖ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ）证 明 ２ ． 试验材料 ：材料来源、Ｃ Ａ Ｓ编号、纯度、 已知 的杂
并没有受到伤害的动物皮肤 才能参 与试验。 试验动物应单 便 有 足够 时 间观 察 到被 处 理 动 物 皮 肤 的恢 复 性 和 不 可 恢 复 独饲养，饲养家兔 的室 内温保持为 ２ ０ ￣ Ｃ （ ±３ ℃）。相对湿 性 。如果在 ｌ ４天以内发现动物 已经恢复，则可在恢复之时 度以５ ０ — ６ ０ ％为宜，人工灯光 ｌ ２ 小 时明暗交替 。
丁香酚急性毒性和皮肤刺激试验
个 复杂 的过程 ， 包括 肿瘤 细胞 脱离原 发部 位 ， 穿越基 质组 织和 血管壁 ， 进 入循环 系统 ， 形 成远端 转移 ［ ５ ］ 。细胞 凋亡是 一个 受
到严密调控 的程 序性 细胞 自杀过程 ， 目前认凋 亡在调控 细胞增
ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ［ Ｊ ］ ．Ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，２ ０ １ １ ， ４ ３ （ ７ ） ：６ ９ ７ －７ ０ １ ．
ｈ ｅ ａ ｌ ｃ ｈｅ ｍｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙ ｆ ｏ ｒ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎｔ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｓ ｅ ｒ ｏｓ ａ ｌ ｉ ｎ ｖ ａ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｉ ｃ ｃ ｌ ｆ ｎ ｃ —
诱 导肿瘤细胞 的凋亡 ， 对 肿瘤 细胞增 殖也有 一定 作用 ， 但 是积
１ Ｌ ｕ ｏ ＧＱ，Ｌ ｉ Ｊ Ｈ，Ｃ ａ ｏ Ｌ，ｅ ｔ ａ １ ．Ａｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｏ ｒ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ — ｌ ｉ ｎ ｖ ｏ ｌ ｖ ｅ ｍｅ ｎ ｔ ｉ ｎ
ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏｎ ｉ ｎ ｈｉ ｂｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｙ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｌ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ Ｔｗ ｉ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｉ ｃ ｃ ａｎ ｃ ｅ ｒ
四川生 理科学 杂 志 ２ ０ １ ５ ； ３ ７ （ ２ ）
楚， 值得进一步探讨 。
参 考பைடு நூலகம்文献
４ ９
３ 讨 论
胃癌是我 国最 常见 的恶性肿瘤之一 ， 确诊 时多 已经 出现转 移， 胃癌转 移是 胃癌 最重要 的恶 性特 征 ， 也 是导 致患者 死亡 的 最 主要原因之一 ， 目前 尚缺乏有效 治疗手段［ ４ ３ 。肿 瘤转移 是一
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急性皮肤刺激试验
1 目的
确定化学品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用及程度，为制定化学品对皮肤的保护措施提供依据。
2 制定依据
《化妆品卫生规范（2007版）》。
3试验方法
3.1受试样品处理
液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。
若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。
使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。
需稀释后使用的产品，先进行产品原型的皮肤刺激性/腐蚀性试验，如果试验结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试物再进行皮肤刺激性/腐蚀性试验。
受试物为强酸或强碱（pH 值≤2 或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。
此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50 小于200 mg/kg 体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为2000 mg/kg 体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。
3.2实验动物和饲养环境
多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。
应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。
实验动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需增加实验动物数。
实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d 时间。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用常规饲料，饮水不限制。
3.3 急性皮肤刺激性试验步骤
3.3.1 试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。
3.3.2 取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。
另一侧皮肤作为对照。
采用封闭试验，敷用时间为4h。
对化妆品产品而言，可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。
对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2h 敷用试验。
试验结束后用温水或无刺激性溶剂
清除残留受试物。
如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐蚀作用，可采取分段试验，将三个涂布受试物的纱布块同时或先后敷贴在一只家兔背部脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、60min 和4h 取下一块纱布，皮肤涂敷部位在任一时间点出现腐蚀作用，即可停止试验。
3.3.3 于清除受试物后的1、24、48 和72h 观察涂抹部位皮肤反应，按表1 进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，根据24、48 和72 h 各观察时点最高积分均值，按表2 判定皮肤刺激强度。
3.3.4 观察时间的确定应足以观察到可逆或不可逆刺激作用的全过程，一般不超过14d。
3.4 多次皮肤刺激性试验步骤
3.4.1 试验前将实验动物背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围各为3cm×3cm，涂抹面积
2.5cm×2.5cm。
3.4.2 取受试物约0.5mL（g）涂抹在一侧皮肤上，当受试物使用无刺激性溶剂配制时，另一侧涂溶剂作为对照，每天涂抹1 次，连续涂抹14d。
从第二天开始，每次涂抹前应剪毛，用水或无刺激性溶剂清除残留受试物。
一小时后观察结果，按表1 评分，对照区和试验区同样处理。
3.4.3 结果评价：按下列公式计算每天每只动物平均积分，以表2 判定皮肤刺激强度。
表1 皮肤刺激反应评分
皮肤反应评分
红斑和焦痂形成无红斑0轻微红斑1明显红斑2中等程度到重度程度红斑3严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成4
水肿形成无水肿0微水肿（勉强可见）1
轻度水肿（皮肤隆起轮廓清晰）2
中度水肿（皮肤隆起约1mm）3
重度水肿（皮肤隆超过1mm，范围扩大）4
最高积分8分 8
4 试验报告
试验报告应以表格形式总结，包括如下内容：
（1）受试物名称、理化性状、配制方法和用量。
必要时说明受试物的pH 值；
（2）实验动物的种属、品系、性别、体重和来源（注明合格证号和动物级别）；
（3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物房合格证号；
（4）每个动物在每一观察时点的皮肤刺激反应积分；
（5）具体描述除刺激性以外的其它毒性作用；
（6）结论。
5 试验结果的解释
急性皮肤刺激试验结果从动物外推到人的可靠性很有限。
白色家兔在大多数情况下对有刺激性或腐蚀性的物质较人类敏感。
若用其它品系动物进行试验时也得到类似结果，则会增加从动物外推到人的可靠性。
试验中使用封闭式接触是一种超常的实验室条件下的试验，在人类实际使用化妆品过程中很少存在这种接触方式。
表2 皮肤刺激强度分级
积分均值强度分级
0～﹤0.5无刺激性
0.5～﹤2.0轻度刺激性
2.0～﹤6.0中等刺激性
6.0～﹤8.0强刺激性
表3__________ 对家兔急性皮肤刺激性试验结果
动物编号性
别
体
重
k
g
1h 24h 48h 72h 样品对照样品对照样品对照样品对照红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
1
2
3
4
总积分均值
刺激强度分级
表4______________对家兔多次皮肤刺激性试验结果
涂抹天数动物数（只）刺激反应积分
样品对照
红斑水肿总分红斑水肿总分14
24
34
44
54
64
74
84
94
104
114
124
134
144
14天每只动物积分均值
每天每只动物积分均值
. .。