抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA比色法)
各种酶活性测定方法
抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定过氧化氢酶（CAT）活性测定过氧化物酶（POD）测定方法超氧化物歧化酶（SOD）活性测定小组第一次讨论结果：一、抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定1.原理APX 是植物体内重要的抗氧化酶, 主要功能是分解H2O2, 此过程通过抗坏血酸- 谷胱甘肽循环来完成。
此外, 它还直接参与抗坏血酸的氧化还原代谢, 而抗坏血酸能有效地清除多种活性氧自由基。
因此，APX被认为与果实的抗热性直接相关。
2.所用方法（1）采用碘液滴定法:称取新鲜材料1 g，剪碎置研钵中，加少量石英砂及pH值6.0 的磷酸盐缓冲液，迅速研磨成浆，20 ℃下浸提30 min，中间摇动数次，3000 r /min 离心后保留上清液即为酶液。
反应底物为抗坏血酸，加入酶液2 mL，20 ℃下反应10 min 后，立即加入偏磷酸1 mL，终止酶的活动，抗坏血酸被消耗的量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸来进行测定，加淀粉溶液几滴作指示剂，以碘液滴定出现浅蓝色为止，记录滴定值，用底物被消耗的量来表示APX 的活性。
每个处理设3 个重复。
（2）紫外吸收法：称取1g芥蓝叶片组织，加入1.6 mL预冷的磷酸缓冲液（PBS-K）（pH 7.8）提取液（含1 mmol·L-1 AsA，3 mmol·L-1β-巯基乙醇，0.5 mmol·L-1PMSF，2% PVP，1 mM EDTA）。
用液氮研磨，提取液于4℃，12000×g离心20 min，上清液用于酶活性的测定。
取0.10 ml 酶液（可视情况调整），加入1.70 ml 含0.1 mM EDTA-Na的PBS（0.05 mol/L，pH7.0），再加入0.10 ml 5 mM的AsA，最后加入0.10 ml 220mM H2O2，立即在20℃下测定D290（紫外）值在一定时间内的变化，计算单位时间内AsA减少量，并求酶活性（室温下测定，缓冲液调零）。
南京建成 产品目录及价格表 17-3-22
抗坏血酸过氧化物酶（APX）测试盒（紫外 比色法） 抗坏血酸氧化酶（AAO）活性测试盒（比色 抗坏血酸（AsA）含量测试盒（紫外比色 γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）测试盒 （比色法） 硫氧还蛋白氧化还原酶（TrxR）测试盒（比 色法） 硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）测试盒（紫 外比色法） NAD激酶（NADK）测试盒（比色法） NADH氧化酶（NOX）测试盒（比色法） 辅酶ⅡNADP（H）含量测试盒（比色法） 辅酶ⅠNAD（H）含量测试盒（比色法） 腺苷脱氨酶（ADA）测试盒（酶比色法） （微板法） 游离脂肪酸（NEFA）测试盒（酶法，双试 剂）（微板法） 5’－核苷酸酶（5’-NT）测试盒（酶比色法） （微板法） 糖化血清蛋白（GSP）试剂盒（NBT法） （微板法） 胆碱酯酶（CHE）测试盒（速率法）(微板 白蛋白（ALB）测定试剂盒（带标准：溴甲 酚绿法） 柠檬酸合成酶（CS）测定试剂盒（微板法） 柠檬酸合成酶（CS）测定试剂盒（微板法） 植物提取液 蔗糖测定试剂盒（国标法） 蔗糖测定试剂盒（紫外比色法） γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）测定试剂 盒（速率法） 糜蛋白酶测定试剂盒 谷氨酸测定试剂盒（紫外比色法） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+－ ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+－ ATP酶）
植物生理学中各项生理指标的测定方法
一.实验内容实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂：考马斯亮蓝G-250 95%乙醇 85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：PBS（PH=7.0） 30% H2O2实验五：Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：ASA（分子量167.12） (乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6： ASA(维生素C)含量测定偏磷酸 95%乙醇磷酸 4% 2,2-二联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）实验7：GSH(谷胱甘肽, 媚力肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（二硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：磺基水杨酸甲苯茚三酮冰乙酸 85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。
80%丙酮试验9：GR活性测定试验10：过氧化氢含量测定。
三氯乙酸试验11：超氧阴离子含量测定二．酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容）2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）↓4℃冷冻15000g离心20分钟↓上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存）2．ASA . GSH母液提取：0.1g叶片加入3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离心10分钟↓上清液即为母液（5℃下保存备用）（偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护ASA）酶液提取所需试剂：PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml水），1000ml需称取10g，此处用PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏水)，此处用PBSPBS（缓冲液）配制方法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O取① 71.64g，蒸馏水定容至1L，取② 31.21g定容至1L，放置4℃冰箱备用PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释至400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）母液提取所需试剂：5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容至100 ml蒸馏水（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得用研钵提前研碎，后用磁力搅拌器溶解一到两天后再定容）（现所用为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容至500ml）三．实验步骤实验1：MDA含量测定1.1所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯）称10g定容至100ml0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g用10%TCA定容至100ml（配制时，可一次完成，先配TCA，不要定容，再加入硫代巴比妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁力搅拌器上微热）1.2步骤：取0.3g叶片，加4ml磷酸缓冲液研磨，加入 4ml 0.25%的硫代巴比妥酸（溶于10%的三氯乙酸）溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离心15分钟↓取上清测定 OD532，OD600，OD450值↓按公式求 MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (μmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算 MDA含量（μmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1（用多波长测定，在测定之前一定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输入）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空白调零MDA含量测定的改进1.可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，用量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）1、试剂的配制（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。
参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。
（2）14.5mM甲硫氨酸溶液：取2.1637g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至1000ml。
（3）30μM EDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。
（4）60μM核黄素溶液：取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。
（5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。
酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。
2、酶活性测定（1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液0.6ml，磷酸缓冲液5.4ml，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀；（2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中（3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min；同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。
过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒使用说明
3、细菌或细胞 POD 活性
（1）按样本蛋 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活 力单位。
POD（U/mg prot）＝245μL（反应体系）÷1000μL×提取酶液总体积（1000μL）÷样 本体积（5μL）÷0.01×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）=4900×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）
2、组织 POD 活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个酶 活力单位。
POD（U/mg prot）＝245μL（反应体系）÷1000μL×提取酶液总体积（1000μL）÷样 本体积（5μL）÷0.005×ΔA 测定÷蛋白质浓度（mg/mL）=9800×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）
用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）POD 活性
单位的定义：每 mL 血清（浆）在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个 酶活力单位。
POD（U/mL）＝245μL（反应体系）÷1000μL×血清（浆）总体积（1000μL）÷样本 体积（5μL）÷0.005×ΔA =9800×ΔA
（2）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一 个酶活力单位。
POD（U/104 cell）＝245μL（反应体系）÷1000μL×提取酶液总体积（1000μL）÷样 本体积（5μL）÷0.01×ΔA÷细菌或细胞密度（104 cell /mL）=4900×ΔA÷细菌或细胞密 度（104 cell /mL）
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织在每 ml 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活力单 位。
植物生理学中各项生理指标的测定方法
一.实验内容实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂：考马斯亮蓝G-250 95%乙醇 85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：PBS（PH=7.0） 30% H2O2实验五：Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：ASA（分子量167.12） (乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6： ASA(维生素C)含量测定偏磷酸 95%乙醇磷酸 4% 2,2-二联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）实验7：GSH(谷胱甘肽, 媚力肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（二硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：磺基水杨酸甲苯茚三酮冰乙酸 85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。
80%丙酮试验9：GR活性测定试验10：过氧化氢含量测定。
三氯乙酸试验11：超氧阴离子含量测定二．酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容）2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）↓4℃冷冻15000g离心20分钟↓上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存）2．ASA . GSH母液提取：0.1g叶片加入3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离心10分钟↓上清液即为母液（5℃下保存备用）（偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护ASA）酶液提取所需试剂：PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml水），1000ml需称取10g，此处用PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏水)，此处用PBSPBS（缓冲液）配制方法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O取① 71.64g，蒸馏水定容至1L，取② 31.21g定容至1L，放置4℃冰箱备用PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释至400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）母液提取所需试剂：5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容至100 ml蒸馏水（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得用研钵提前研碎，后用磁力搅拌器溶解一到两天后再定容）（现所用为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容至500ml）三．实验步骤实验1：MDA含量测定1.1所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯）称10g定容至100ml0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g用10%TCA定容至100ml（配制时，可一次完成，先配TCA，不要定容，再加入硫代巴比妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁力搅拌器上微热）1.2步骤：取0.3g叶片，加4ml磷酸缓冲液研磨，加入 4ml 0.25%的硫代巴比妥酸（溶于10%的三氯乙酸）溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离心15分钟↓取上清测定 OD532，OD600，OD450值↓按公式求 MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (μmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算 MDA含量（μmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1（用多波长测定，在测定之前一定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输入）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空白调零MDA含量测定的改进1.可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，用量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。
抗坏血酸_总抗坏血酸含量检测试剂盒(比色法)说明书__微量法UPLC-MS-6014
抗坏血酸/总抗坏血酸（AsA/T-AsA）含量检测试剂盒（比色法）说明书微量法货号：UPLC-MS-6014规格：100T/48S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体70mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶-20℃保存试剂二液体10mL×1瓶4℃保存试剂三液体2mL×1瓶4℃保存试剂四液体20mL×1瓶4℃保存试剂五液体15mL×1瓶4℃保存试剂六粉剂×1瓶4℃保存试剂七液体10mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入2mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂-20℃分装避光保存；2、试剂六：临用前加入10mL70%乙醇溶液（V/V）溶解；3、标准品：临用前配制，加入1.136mL提取液充分溶解；吸取0.02mL上述溶液，加入0.98mL提取液，混匀，即1000nmol/mL AsA标准溶液。
产品说明:抗坏血酸（AsA）是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。
作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
脱氢抗坏血酸（DHA）是AsA的可逆的氧化型，在生物体内，与抗坏血酸共同组成氧化还原系统，具有电子受体作用。
AsA具有还原性，能将Fe3+还原成Fe2+，Fe2+与2,2’-联吡啶形成粉红色络合物，在525nm处有特征性吸收峰。
DTT可还原DHA生成AsA，可用于检测样本总抗坏血酸（AsA+DHA）含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：研钵/匀浆器、冰、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液器、乙醇和蒸馏水。
抗氧化酶活性等测定方法
叶绿体的提取一、试剂配置1、PBS提取液：每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl （0.010×58.5=0.585g）、MgCl（0.002×95=0.19g）、EDTA（292.25×0.002=0.5845g）、KH2PO4（200×0.0005=0.1g）；使用时加入ASA-Na（198.1×0.002=0.3962g）;2、悬浮液：将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES（238.3×0.05=11.915g）；3、80%Percol：80ml原液+20ml水；40%Percol：40ml原液+60ml水；实际配制：PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),悬浮液100ml（3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml）;80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.（3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml）二、提取步骤1、10g鲜样加20ml提取PBS（50mM MES PH6.1，含0.33M山梨糖醇，10mM NaCl，2mM MgCl2，2mM EDTA，0.5 mMKH2PO4，2mM ASA-Na，ASA-Na使用前现配现加）2、快速研磨，使叶片碎成绿豆粒大小，4层纱布过滤，去除残渣（注意过滤时不可用力挤压，以免叶绿体膜破碎）3、滤液2000g 3min，小心倒出上清液，将离心管放入离心机后，使离心机的加速很快上升到预定值(水平转头，加速度调到9)，约经30s后很快使其下降停止，整个离心持续大约2-3min左右完成；4、沉淀用1ml提取液漂洗表面悬浮物；5、用1ml悬浮液（50mM HEPES pH 7.6，含0.33 mM山梨糖醇，10mM NaCl，2mM MgCl2，2mM EDTA，0.5 mMKH2PO4，2mM ASA-Na，ASA-Na使用前现配现加）将沉淀悬浮，在分散叶绿体时宜用毛笔轻轻刷，或者用手握住离心管在冰块之间搅动，使叶绿体由于震动分散开来，不要用棉球吸滤，以防被膜压破。
抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)含量测定试剂盒使用说明
抗坏血酸（ascorbic acid,AsA）含量测定试剂盒使用说明货号:BC1230产品简介：抗坏血酸（AsA）又称维生素c，是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体以及草酸盐和酒石酸盐生物合成的底物等。
作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，抗坏血酸在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
抗坏血酸氧化酶（AAO）能将AsA氧化成DHA，通过测定AsA的氧化速率，即可计算出AsA含量。
试验中所需的仪器和试剂：研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、蒸馏水产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃保存；试剂二：液体×1瓶，4℃保存；试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
临用前加入5mL试剂二，混匀；标准品：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。
临用前配置，加入5.679mL蒸馏水充分溶解；吸取0.1mL上述溶液，加入0.9mL蒸馏水，混匀，即100μmol/L AsA。
操作步骤：一、AsA提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
10000rpm，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
二、测定操作：1.分光光度计预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
2.试剂二在25℃水浴锅中预热30min以上。
3.标准管：依次在比色皿中加入100μL标准液、800μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀后于265nm测定，记录30s和150s的吸光值A1和A2。
△A标准管=A1-A2。
4.测定管：依次在比色皿中加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀后于265nm测定，记录30s和150s的吸光值A3和A4。
△A测定管=A3-A4。
AsA含量计算：（1）按蛋白浓度计算：AsA(μmol/mg prot)=(C标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准)÷(Cpr×V样) =0.1×△A测定管÷△A标准管÷Cpr（2）按样本质量计算：AsA(μmol/g mass)=(C标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准)÷(W×V样÷V 样总)=0.1×△A测定管÷△A标准管÷WC标准液:100μmol/L；V标准：标准液体积，0.1mL；V样总：上清液总体积，1.0mL=0.001L；V样：加入反应体系中上清液体积，0.1mL；W：样品质量，g。
植物生理指标--最新实验原理与方法
1、氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物岐化酶（SOD）2、POD（过氧化物酶）活性的测定——愈创木酚法3、CAT(过氧化氢酶)测定4、抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定5、谷胧甘肽还原酶(GR)的活力测定:6、O2-产生速率的测定7、过氧化氢(H2O2)含量的测定——碘化钾分光光度法8、丙二醛（MDA）含量的测定9、还原型抗坏血酸（ASA）和脱氢抗坏血酸（DHA）的测定10、谷胱甘肽还原酶测定11、MDAR(单脱氢抗坏血酸还原酶)活性的测定12、可溶性总糖的测定13、考马斯亮蓝G-250染色法测定可溶性蛋白含量14、叶绿素含量的测定15、石蜡制片的制作16、激素Indole-3-Acetic Acid（IAA）、Abscisic Acid（ABA）、GA3和ZA的测定17、cDNA扩增片段长度多态性技术（cDNA-AFLP）18、3′/5′RACE 扩增基因全长19、根系活力的测定（TTC法）一氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物岐化酶（SOD）【实验原理】SOD是含金属辅基的酶。
高等植物含有两种类型的SOD：Mn－SOD和Cu.Zn－SOD，它们都催化下列反应：由于超氧自由基（O2.－）为不稳定自由基，寿命极短，测定SOD活性一般为间接方法。
并利用各种呈色反应来测定SOD的活力。
核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O2.－，当加入NBT后，在光照条件下，与超氧自由基反应生成单甲月替（黄色），继而还原生成二甲月替，它是一种蓝色物质，在560nm波长下有最大吸收。
当加入SOD时，可以使超氧自由基与H+结合生成H2O2和O2，从而抑制了NBT光还原的进行，使蓝色二甲月替生成速度减慢。
通过在反应液中加入不同量的SOD酶液，光照一定时间后测定560nm 波长下各液光密度值，抑制NBT光还原相对百分率与酶活性在一定范围内呈正比。
反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低。
【仪器、材料与试剂】（一）仪器1. 分光光度计2. 台式离心机（二）材料1. 磷酸氢二钠2. 磷酸二氢钠3. 甲硫氨酸4. EDTA-Na25. 核黄素6. 氮蓝四唑(NBT)7. 陶瓷小研钵8. 4-5ml 离心管9. 10ml 玻璃试管（三）试剂1. 0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。
抗氧化酶活性等测定方法
一、试剂配置 1、PBS 提取液:每 L 水依次加入 MES(195、2x0. 05=9、76g)、山梨糖醇(0、33x182. 2=60、126g). NaCl(0、010x58、5=0. 585g)、MgCI(0、002x95=0、19g)、EDTA(292. 25x0. 002=0. 5845g). KH2PO4(200x0. 0005=0. Ig)；使用时加入 ASA-Na(!98. 1x0. 002=0. 3962g);2、悬浮液:将 PBS 提取液中得 MES 换为 238、3x0、05=11、915g 得 HEPES(238、3x0、05=1 k 915g);3、80%PercoI;80ml 原液+20ml 水：40%Percol:40ml 原液+60ml 水;实际配制:PBS 提取液20001111（3个处理*2个品种*3个靈复*20m!*3次=1080ml ）.悬浮液1001111（3个处理*2个品种*3个重复次=54n 】l ）;80%Percol 200ml; 40%Percol 200nik (3 个处理*2 个品种*3 个重复*3ml*3 次=162ml)二、提取步骤 1、lOg 鮮样加 20ml 提取 PBS(50mM MES PH6、1,含O 、33M 山梨糖醇JOmM NaCL2mM MgCkfmM EDTA.O 、5 mMKH2POj ・2mM ASA ・Na ・ASA ・Na 使用前现配现加) 2、快速研曆，使叶片碎成绿豆粒大小4层纱布过滤，去除残渣（注意过滤时不可用力挤压，以免叶绿体膜破碎） 3、滤液2000g 3min •小心倒出上淸液，将离心管放入离心机后,使离心机得加速很快上升到预崔值（水平转头.加速度调到9）,约经30s 后很快使加下降停止，整个离心持续大约2・3min 左右完成;4、沉淀用1ml 提取液漂洗表面悬浮物;5、用 1ml 悬浮液（50mMHEPES pH7. 6•含0. 33 mM 山梨糖醇」0NaCl ・2mM MgCb2mM EDTA.O 、5 niMKH2PO4-2mM ASA-Na.ASA-Na 使用前现配现加）将沉淀悬浮，在分散叶绿体时宜用毛笔轻轻刷，或者用手 握住离心管在冰块之间搅动，便叶绿体由于震动分散开来，不要用棉球吸滤，以防被膜压破。
抗坏血酸过氧化物酶测定方法
抗坏血酸过氧化物酶测定方法一、目的要求学习果蔬组织中抗坏血酸过氧化物酶活性的测定原理和方法。
二、基本原理抗坏血酸过氧化物酶（Ascorbate peroxidase，APX；AsA-POD）是以抗坏血酸为电子供体的专一性强的过氧化物酶。
APX能催化抗坏血酸与H2O2反应而被氧化形成单脱氢抗坏血酸。
随着抗坏血酸被氧化，溶液在波长290 nm处的吸光度值下降，根据单位时间内吸光度值的减少，可以计算出APX活性。
三、材料、仪器及试剂（一）材料梨、桃、番茄等。
（二）仪器及用具高速冷冻离心机、紫外分光光度计、研钵、试管、计时器、容量瓶（100 mL、200 mL、1 000 mL）、电子天平。
（三）试剂：1．100 mmol/L、pH 7.5磷酸钾（K2HPO4-KH2PO4）缓冲液母液A（1 mol/L K2HPO4）：称取174.18 g磷酸氢二钾，用蒸馏水溶解、定容至1 000 mL。
母液B（1 mol/L KH2PO4）：称取136.09 g磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解、定容至1 000 mL。
取83.4 mL母液A和16.6 mL母液B，混合，调节pH值至7.5，稀释、定容至1 000 mL。
2．提取缓冲液（含0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L抗坏血酸和2% PVPP）称取2.9 mg EDTA，17.6 mg抗坏血酸和2 g PVPP，用100 mmol/L、pH7.5磷酸钾缓冲液溶解、定容至100 mL。
4℃预冷保存。
3．反应缓冲液（含0.1 mmol/L EDTA和0.5 mmol/L抗坏血酸）称取2.9 mg EDTA和8.8 mg抗坏血酸，用50 mmol/L、pH7.5磷酸钾缓冲液溶解、定容至100 mL。
4℃预冷保存。
4．2 mmol/L H2O2取1.14 mL 30% H2O2，用蒸馏水稀释至100 mL，混匀，即得200 mmol/L H2O2溶液。
再取1.0 mL该溶液，稀释至100 mL，即为2 mmol/L H2O2溶液。
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书一、测定原理：利用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢反应的原理，通过测定420nm 处吸光度的变化得出其酶活性。
二、实际的组成和配置试剂一：液体60ml×4瓶，4℃保存6个月试剂二：粉剂×3瓶，4℃保存6个月试剂二应用液的配置：临用每瓶粉剂加入10ml 的双蒸水溶解，4℃避光保存试剂三：液体5ml×1瓶，4℃保存6个月试剂三应用液的配制：临用前用双蒸水15倍稀释，使得1cm 光径，双蒸水调零时A240保持在0.4左右，现用现配。
若A 值太高，则加双蒸水稀释，若A 值太低，则加入适量试剂三。
（一般在25倍左右稀释）试剂四：液体50ml×2瓶，4℃保存6个月。
三、操作步骤：1、前处理：植物组织匀浆的制备：准确称取组织重量，按照重量(g):体积(ml)=1:9的比列加入9倍体积的匀浆介质(推荐使用生理盐水或磷酸盐缓冲液:0.1 mol/L pH 7-7.4)，冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液，3500r/min 离心10min ，取上清液进行测定。
混匀后，3500r/min 离心10min ，取上清于波长420nm 处，1cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
四、计算及举例1、定义：在37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化1ug 底物的酶量定义为一个酶活力单位。
2、植物组织中过氧化物酶(POD)活力计算公式：10)/()min 30()()()1(12-)/(⨯÷÷⨯⨯=ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD 匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力 3.计算举例取新鲜桑叶，制备成10%匀浆，取100ul 匀浆上清，按照操作表进行操作，测得数据如下：对照OD 0.237；测定OD 0.665；同时测得10%桑叶匀浆蛋白浓度是1.80mgprot/ml 根据公式计算如下:mgprotU ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD / 26.42010001.80300.14.01120.237-0.6651000)/()min 30()()()1(12-)/(=⨯÷÷⨯⨯=⨯÷÷⨯⨯=匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力。
几种抗氧化剂含量的测定
几种抗氧化剂含量的测定一、实验目的1.掌握抗坏血酸（AsA）含量的测定。
二、实验原理抗坏血酸（AsA）测定的原理：（1）AsA生理生化作用抗坏血酸是植物细胞重要的抗氧化剂，通过清除体内的自由基和活性氧（H2O2）等，使机体免受氧化损伤。
（2）AsA含量的测定方法a、2, 6-二氯靛酚滴定法b、2, 4-二硝基苯肼分光光度法c、荧光分光光度法d、近红外分光光度法e、电位滴定法f、钼蓝比色法g、2,2-联吡啶分光光度法（3）二联吡啶法测定AsA含量的原理三、实验材料和主要试剂实验材料：菠菜叶片实验试剂：5%TCA溶液、150mmol/L NaH2PO4(PH7.4)溶液、10%TCA溶液、44% H3PO4、4% 2, 2-二联吡啶；3% FeCl3。
四、实验步骤（一）AsA含量的测定1、标准曲线的制作配制浓度为1mmol/L的AsA标准母液，分别配制成0、0.1、0.2 、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mmol/L 的AsA标准液。
分别取0.2ml AsA标准液，分别加入0.2ml NaH2PO4（PH7.4）溶液、0.2ml H2O，混匀，30s后，分别加入0.4ml 10% TCA溶液、0.4ml H3PO4溶液、0.4ml 2, 2-二联吡啶溶液，0.2ml 3%FeCl3溶液，37℃，60min，测A525nm。
以AsA浓度为横坐标，以OD值为纵坐标，制作标准曲线。
2、提取称2.5g菠菜叶片1份，将样品剪碎加入10ml 5% TCA, 研磨，15000xg离心10min，上清液定容至25ml。
3、测定分别取0.2ml上述制备的上清液和去离子水，分别加入0.2ml NaH2PO4（PH7.4）溶液、0.2ml H2O，混匀，30s后，分别加入0.4ml 10% TCA溶液、0.4ml H3PO4溶液、0.4ml 2, 2-二联吡啶溶液，0.2ml 3%FeCl3溶液，37 ℃，60min，在525nm下测定OD值。
生理指标测定方案
一氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力一、原理超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶，它催化下列反应： 2O2-+ 2H →H2O2+O2。
本反应产物H2O2可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。
本实验依据超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。
在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。
而SOD可清除超氧阴离子自由基，从而抑制了甲腙的形成。
于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。
据此可以计算出酶活性大小。
（一个酶活单位定义为将NBT的还原抑制到对照的一半（50%）时所需的酶量。
）二、材料、仪器设备及试剂（一）材料水稻或小麦叶片。
（二）仪器设备高速冷冻离心机，紫外分光光度计，日光灯（反应试管处照度为4000lx），试管数支。
（三）试剂（1）0.05mol/L（pH7.8）磷酸缓冲液 (PBS)。
配制方法：①母液A（0.2mol/L Na2HPO4）:称取71.64g Na2HPO4·12H2O,用蒸馏水定容至1000ml 。
(配置溶液时需要用磁力搅拌器搅拌才能溶解。
)②母液B(0.2mol/L NaH2PO4)：称取31.21g NaH2PO4·2H2O,用蒸馏水定容至1000ml 。
③配0.05mol/L（pH7.8）磷酸缓冲液：取91.5mlA母液+8.5mlB母液+蒸馏水定容到400ml （2）提取介质0.05mol/L（pH7.8）磷酸缓冲液，内含1%聚乙烯吡咯烷酮（PVP）: 称取1g PVP用0.05mol/L（pH7.8）磷酸缓冲液 (PBS)定容到100ml（3）130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml。
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）1、试剂的配制（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。
加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。
（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液：取1.399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。
网上说定容到100ML我也不懂。
拜托（3）100μmol/L EDTA-Na2溶液：取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml；（4）100μM核黄素溶液：取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100ml，避光保存，随用随配，并稀释10倍（5）750μmol/L氮蓝四唑（NBT）溶液：称取0.06133g NBT用磷酸缓冲液定容至100ml 避光保存；酶液制备：取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，加2ml 磷酸缓冲液在冰浴下研磨成浆，加缓冲液使终体积为10ml。
取5ml于10000r/min下离心10min，上清液即为SOD粗提液。
提取酶液时如何保存;如果没有测完的需要放在4℃的冰箱里。
2、酶活性测定2．显色反应取试管（要求透明度好）5支，3支为样品测定管，1支为对照管，另外1支作为空白，按表39-1加入各溶液。
过氧化物酶类活性测定药品配制
1、可溶性蛋白含量的测定（1）考马斯亮蓝G250染色液：称取考马斯亮蓝50mg，用25ml 95%乙醇溶解，加50ml 85%磷酸，加水稀释至500ml，储于棕色瓶中。
（2）标准蛋白溶液（0.1mg/ml）：称取10mg牛血清蛋白，用0.9%的氯化钠溶解，定容至100ml。
2、APX、CAT、POD、GR和IAA氧化酶的提取和酶活的测定（1）50mM磷酸缓冲液（pH7.8，含1%的PVP）：A液：Na2HPO4•12H2O：Mr=358.22，0.2mol/L溶液为71.64g/L;B液：NaH2PO4•2H2O：Mr=156.03，0.2mol/L溶液为31.21g/L;取A液（Na2HPO4 溶液）91.5mL加B液（NaH2P O4溶液）8.5mL，再加300mL蒸馏水，再加入4g的PVP。
（2）50 mM磷酸缓冲液（pH 7.8,内含0.1 mM EDTA-Na2,5 mM MgCl2）：取50mM磷酸缓冲液（pH7.8）100ml，称取加入 3.7224mg的EGTA-Na2，再加入101.65mg的MgCl2。
（3）20mM 磷酸缓冲液（pH6.0）pH6.0的，取Na2HPO4 溶液12.3mL加NaH2PO4 87.7mL，再加900mL 蒸馏水。
（4）EGTA-Na2+ASA溶液（0.1mM EDTA-Na2，0.5mM AsA）：称取3.7224mg的EGTA-Na2和8.8065的ASA加蒸馏水溶解，定容至100ml。
（5）9mMH2O2：称取30.618mg，加蒸馏水溶解定容至100ml。
（6）15mMH2O2：称取51.03mg，加蒸馏水溶解定容至100ml。
（7）l20mM愈创木酚：称取1.48968g愈创木酚蒸馏水溶解定容至100ml。
（8）10 mM NADPH2：（9）10 mM GSSG：（10）1mM2,4-二氯酚：称取16.3mg2,4-二氯酚，用蒸馏水溶解并定容至100ml. (11)1mM氯化锰：称取19.8mgMeCl2·4H2O,用蒸馏水溶解定容至100ml。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA 比色法)
产品：
过氧化物酶(peroxisome ，POD)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢，氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)是叶绿体中的专一性清除过氧化氢的酶，能够催化抗坏血酸(又称维生素C ，Vitamin C 或AsA)与过氧化氢反应。
Leagene 抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA 比色法)检测原理是以AsA-POD 催化AsA 与H 2O 2的反应，使前者被氧化成单脱氢抗坏血酸(MDAsA)，随着AsA 被氧化，吸光度不断下降，处测定吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。
该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中过抗坏血酸过氧化物酶活性，尤其适用于测定植物中AsA-POD 活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 蒸馏水
2、 研钵或匀浆器
3、 离心管或试管
4、 低温离心机
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：
①植物样品：取0.5g 水稻、小麦叶片，加入预冷的AsA-POD Lysis Buffer 研磨或匀浆， 离心，留取上清液，即为AsA-POD 粗提液，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。
编号 名称
TE1123 50T Storage
试剂(A): AsA-POD Lysis Buffer 250ml 4℃ 试剂(B): AsA-POD Assay Buffer 100ml 4℃ 试剂(C): AsA 氧化剂 2×1ml RT 试剂(D): AsA Buffer 5ml 4℃ 试剂(F): 蛋白标准(BSA) 20mg RT 试剂(G): G250染色液 100ml
RT 使用说明书
1份
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AsA-POD Lysis Buffer进行适当匀浆，离心，留取上清液，即为AsA-POD粗提液，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的过氧化物酶，可以使用POD Lysis buffer进行恰当的稀释。
2、配制AsA氧化工作液：取适量AsA-POD Assay Buffer和AsA氧化剂，按AsA-POD
Assay Buffer：AsA氧化剂=混合，即为AsA氧化储存液，该液可密闭保存1-2周；
取适量AsA-POD Assay Buffer和AsA氧化储存液，按AsA-POD Assay Buffer：AsA 氧化储存液=混合，即为AsA氧化工作液，即配即用，不宜久置。
3、AsA-POD加样：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避
免产生气泡。
如果样品中的AsA-POD活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。
加入物(ml) 对照管测定管
AsA-POD Assay Buffer 2.7 2.7
AsA氧化工作液0.1 0.1
AsA Buffer 0.1 0.1
AsA-POD Lysis Buffer 0.1 －
4、AsA-POD测定：在测定管加入AsA-POD粗提液，立即以分光光度计，比色杯光径
1.0cm，以对照管为对照，测定处测定管的吸光度(A测定0)。
反应60s时立即处测定管
的吸光度(A测定1)。
注意：测定时，时间控制恰当至关重要，因其是计算1min内吸光度变化。
5、AsA-POD蛋白测定：
①配制蛋白标准：取1ml AsA-POD Lysis Buffer完全加入到含有20mg的蛋白标准(BSA)中，充分溶解，配制成20mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，配制的蛋白标准溶液应-20℃保存。
取适量的20mg/ml蛋白标准溶液稀释至终浓度为1000μg/ml，如取20mg/ml蛋白标准溶液，加入AsA-POD Lysis Buffer，充分混匀，即配制成1000μg/ml 蛋白标准溶液，-20℃长期保存。
②配制标准曲线：将1000μg/ml蛋白标准溶液，加至离心管中，对于不足35μl的，加入AsA-POD Lysis Buffer补足至35μl。
③G250测定：准确吸取待测AsA-POD粗提液，向各标准管、待测管加入G250染色液，室温放置，分光光度计或酶标仪(分别取200μl加入至96孔板)测定595nm波长处的吸光度，以蛋白标准浓度μg/ml为横坐标、以对应的吸光度为纵坐标，根据标准曲线计算出待
测样品中的蛋白浓度。
计算：
AsA-POD活性单位的定义：在该实验条件下，每1min吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。
组织样本POD(U/mg)={(A测定0-A测定1)×V T}/(W×V S×0.01×t×P)
液体样本POD(U)=(A测定0-A测定1)/(0.01×t×P)
注意事项：
1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、即为AsA-POD粗提液提取时，注意低温操作，防止酶活性。
3、AsA氧化剂具有一定腐蚀性，请小心操作。
4、AsA氧化剂易挥发，请密闭保存，否则检测效率下降。
5、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，每次检测指标不宜过多，否则
操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
DC0032 Masson三色染色液
DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)
NR0001 DEPC处理水(0.1%)
PS0013 RIPA裂解液(强)
TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。