紫外分光光度计测蛋白核酸及使用方法

认识 紫外分光光度计
认识 紫外分光光度计
认识 紫外分光光度计
紫外分光光度计使用方法
开机自检，预热
紫外分光光度计使用方法
将对照及样品依次放入比色池中 选择“光度测量”模式
紫外分光光度计使用方法
输入测量所需的波长
紫外分光光度计使用方法
比色池推到对照组对准光源， 调100%透过 率
（2）测量吸光度时，比色皿要保持洁净， 切勿用手玷污其光面。
紫外分光光度计测定核酸含量
目的和要求 1、学习紫外吸收法测定核酸含量的原理。 2、掌握利用紫外分光光度计测定核酸含量
的方法
实验原理
DNA和RNA都有吸收紫外线的性质，最大 吸收峰在260nm波长处。紫外吸收是嘌呤环 和嘧啶环的共轭双键系统所具有的性质， 所有嘌呤和嘧啶的物质，都具有吸收紫外 线的性质。
3、仪器与试剂 紫外可见光分光光计。
未知蛋白质标准溶液，可用结晶牛血清蛋 白或酪蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定 蛋白质含量，根据其纯度配制成 1~2.5mg/mL 的溶液。
0.9%NaCl溶液。
4、实验步骤
在紫外分光光度计上，将未知的蛋白质溶 液小心盛于石英比色皿中，以生理盐水为 对照，测得280nm和260nm两种波长的吸光 度（A280和A260）。将A280及A260波长处测得 的吸光度按下列公式计算蛋白质弄高度
紫外分光光度计使用方法
比色池拉到样品组对准光源， 测试。测量 结果依次显示在屏幕上。记录数据。
紫外分光光度计使用方法
切换波长，同样程序再测量其他波长处样 品的光吸收值。。
关机 实验结束，关闭电源，清洗比色皿。
实验步骤
将样品配置成每毫升含5~50μg的核酸溶液， 于紫外分光光度计上测定260nm处的吸光度 ，按下式计算核酸浓度和两者的吸收比值 ：
DNA浓度（ug/ml)=A 260/0.02 RNA浓度（ug/ml)=A 260/0.024
实验记录及数据处理Βιβλιοθήκη Baidu测定未知浓度RNA溶液的浓度
紫外分光光度计使用方法
用1cm光径的比色杯测定核酸的A260nm时， 1ug/ml的DNA溶液吸光度为0.020，同样 浓度的RNA吸光度为0.024.因此，可以用 下列公式计算样品的核酸含量
DNA浓度（ug/ml)=A 260/0.02 RNA浓度（ug/ml)=A 260/0.024
实验器材 紫外分光光度计 实验材料及试剂 RNA或DNA样品
C=1.45A280-0.74A260 式中，C为蛋白质质量浓度（mg/ml）；
本法对微量蛋白质的测定既快又方便， 它还适用于硫酸铵或其他盐类混杂的情况 ，这时用其他方法测定往往较困难。
5、实验记录及数据处理 测定未知浓度蛋白质溶液的浓度
6、实验注意事项
（1）石英比色皿比较贵重，且易碎，使用 时要小心。
紫外分光光度法测定蛋白质含量
1、实验目的 （1）学习紫外分光光度法测定蛋白质含量
的原理； （2）掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量
的实验技术； （3）掌握紫外分光光度计的的使用方法。
2、实验原理
蛋白质组成中常含有酪氨酸和色氨酸等芳香 族氨基酸，在紫外光280nm波长处有最大吸收峰 ，一定浓度范围内其浓度与吸光度呈正比，故可 用紫外分光光度计通过比色来测定蛋白质的含量 。由于核酸在280nm波长也有光吸收，对蛋白质 测量有一定的干扰作用，但核酸的最大吸收峰在 260nm。如同时测定260nm的光吸收，通过计算 可以消除其对蛋白质测定的影响。因此如溶液中 存在核酸时必须同时测定280nm及260nm的吸光 度，才能通过计算测定溶液中的蛋白质浓度。