紫外分光光度法检测标准操作规程
分光光度法检测标准操作规程
紫外分光光度法检测标准操作规程1 目的建立紫外分光光度法检测标准操作规程，保证正确操作。
2 范围适用本公司紫外分光光度法检测标准操作规程。
3 责任质量管理部4 内容4.1引用标准《中华人民共和国药典》（2015年版）四部4.2 概述4.2.1 紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
4.3 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
4.3.1对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
4.3.2 原理物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200-400nm）或可见光区（400-850nm）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190—900nm，因此又称紫外—可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert—Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为:A=lg 1=ECL T式中：A 为吸收度T 为透光率E 为吸收系数C 为溶液浓度L 为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E１％１ｃｍ表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
4.4仪器：4.4.1紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
T6新世纪紫外可见分光光度计操作规程
一、开机自检：打开仪器主机电源，仪器开始初始化；约3分钟时间初始化完成。
初始化完成后，仪器进入主菜单界面。
二、进入光度测量状态：按 键，进入光度测量界面。
三、进入测量界面：按 键进入样品测定界面。
四、设置测量波长：按 键，输入测量的波长，按 键确认，仪器将自动调整波长。
如果需要测量下一个样品，取出比色皿，更换为下一个测量的样品按 键既可读数。
如果需要更换波长，可以直接按 键，调整波长。
如果每次使用的比色皿数量是固定个数，下一次使用仪器时可以跳过第五、六步骤直接进入样品测量。
注意：更换波长后必须重新按 进行空白校正。
八、结束测量：
测量完成后记录数据,退出程序或关闭仪器后测量数据将消失。确保已从样品池中取出所有比色皿，清洗干净以便下一次使用。按 键直到返回到仪器主菜单界面后再关闭仪器电源.
3.2吸收曲线的绘制
准确吸取未知液5mL，于100mL容量瓶中配成浓度约为10 的待测溶液，以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内测定吸光度，作吸收曲线，从曲线上查得最大吸收波长（230nm和297nm附近）。
3.3标准曲线的绘制
准确吸取水杨酸标准溶液若干体积，稀释成一系列不同浓度的标准溶液（0~16 ），于最大吸收波长分别测出其吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制出标准曲线。
1.2石英比色皿（1cm）：2个
1.3容量瓶（100mL）：7只
1.4吸量管（1mL、2mL、5mL、10mL）：各1只
2.试剂
2.1水杨酸标准溶液（1mg/mL）;
2.2未知液：浓度约为50~55 。
3.实验操作
3.1吸收池配套性检查
石英吸收池在220nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节 为100%，测定另一吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录第二比色皿的吸光度值作为校正值。
紫外分光光度法测定绿茶提取物中茶多酚含量的操作规程
绿茶提取物中茶多酚含量测定方法（UV）
一、仪器与试剂
仪器：移液管（1ml）；容量瓶（100、25ml）；分析天平（1/10000）；紫外分光光度计
试剂：超纯水；硫酸亚铁（AR）；酒石酸钾钠（AR）；磷酸氢二钠（AR）；磷酸二氢钾（AR）
二、试剂的配制
酒石酸亚铁溶液：称取1g（精确至0.0001g）硫酸亚铁和5g酒石酸
钾钠（精确至0.0001g）用水溶解并定容至
1000ml。
PH7.5磷酸盐缓冲液：称取23.377g磷酸氢二钠，加水溶解并定容至
1000ml；称取9.078g磷酸二氢钾（磷酸二氢
钾在110℃干燥2h）加水溶解柄定容至1000ml;
二溶液按85：15（V/V）混合均匀。
三、样品处理
称取本品40-45mg，置于50ml容量瓶中，加水，振摇使溶解，定容至刻度，摇匀，取5ml至25ml置容量瓶中，加水4ml，酒石酸铁溶液5ml，用PH7.5磷酸盐缓冲液定容至刻度，摇匀，即得。
四、紫外条件
检测波长：540nm
以试剂空白溶液对照
五、含量计算
茶多酚的含量按下式计算 X(%)=%1001000
50.0957.121⨯⨯⨯⨯⨯⨯M V V A A ：供试液吸光度；
1V ：供试品提取液；
2V ：测定时的取用量；
M ：供试品的称样量（g ）；
1.957:当吸光度等于0.50时，1ml 供试品溶液中含茶多酚相当于
1.957mg 。
紫外分光光度计使用方法
紫外分光光度计使用方法
紫外分光光度计是一种用于测量样品紫外吸收特性的仪器。
以下是使用紫外分光光度计的步骤：
1. 准备工作：将紫外分光光度计放置在平稳的台面上，确保仪器平衡。
检查光度计的光源和检测器是否处于正常工作状态。
2. 校准：使用标准溶液校准光度计。
选择适当的标准溶液，并按照仪器使用说明书中的步骤进行校准。
3. 准备样品：根据需要，将待测样品制备成溶液或固体。
确保样品处于透明状态，以便紫外光可以透过。
4. 装载样品：打开仪器的样品室，将样品放置在适当的位置上，并关闭样品室。
确保样品与光束的路径在同一直线上。
5. 设定参数：根据样品的特性和所需的测量范围，设置光度计的相关参数。
例如，选择适当的波长范围、光程长度和检测器灵敏度等。
6. 开始测量：启动光度计，开始测量。
仪器将通过发射紫外光并测量透射或吸收的光强，得到样品的光谱图或吸光度值。
7. 记录和分析数据：根据测量结果，记录并分析数据。
可以使用仪器自带的软件或其他外部软件进行数据处理和分析。
8. 清洁和保养：测量完成后，及时清洁样品室和其他附件。
定
期进行仪器的维护和保养，以确保其正常工作。
请注意，具体使用方法和步骤可能会因不同的紫外分光光度计型号而有所不同。
建议在使用前详细阅读仪器的操作手册，并按照其指示进行操作。
T6紫外可见分光光度计操作规程
T6紫外可见分光光度计操作规程T6紫外可见分光光度计操作规程⼀、开机⾃检：打开仪器主机电源，仪器开始初始化；约3分钟时间初始化完成。
初始化完成后，仪器进⼊主菜单界⾯。
⼆、进⼊光度测量状态：按键，进⼊光度测量界⾯。
三、进⼊测量界⾯：按键进⼊样品测定界⾯。
四、设置测量波长：按键，输⼊测量的波长，按键确认，仪器将⾃动调整波长。
五、进⼊设置参数：按键进⼊参数设定界⾯，按键使光标移动到“试样设定”，按键确认，进⼊设定界⾯。
六、设定使⽤样品池个数：按键使光标移动到“使⽤样池数”，按键循环选择需要使⽤的样品池个数。
七、样品测量：按键返回到参数设定界⾯，再按键返回到光度测量界⾯。
在1号样品池内放⼊空⽩溶液，2号池内放⼊待测样品。
关闭好样品池盖后按键进⾏空⽩校正，再按键进⾏样品测量。
如果需要测量下⼀个样品，取出⽐⾊⽫，更换为下⼀个测量的样品按键既可读数。
如果需要更换波长，可以直接按键，调整波长。
如果每次使⽤的⽐⾊⽫数量是固定个数，下⼀次使⽤仪器时可以跳过第五、六步骤直接进⼊样品测量。
注意：更换波长后必须重新按进⾏空⽩校正。
⼋、结束测量：测量完成后记录数据, 退出程序或关闭仪器后测量数据将消失。
确保已从样品池中取出所有⽐⾊⽫，清洗⼲净以便下⼀次使⽤。
按键直到返回到仪器主菜单界⾯后再关闭仪器电源.【引⼊】⽔杨酸（2-羟基苯甲酸；2-Hydroxybenzoic acid）：存在于⾃然界的柳树⽪、⽩珠树叶及甜桦树中，为⽩⾊结晶性粉末，⽆臭，味先微苦后转⾟。
熔点157-159℃。
⽔杨酸⽔溶液的pH值为2.4。
⽔杨酸与三氯化铁⽔溶液⽣成特殊的紫⾊。
紫外分光光度法测定⽔杨酸的含量1.仪器1.1紫外分光光度计（T6）1.2⽯英⽐⾊⽫（1cm）：2个1.3容量瓶（100mL）：7只1.4吸量管（1 mL、2 mL、5 mL、10mL）：各1只2.试剂2.1⽔杨酸标准溶液（1mg/mL）;2.2未知液：浓度约为50~55。
3.实验操作3.1吸收池配套性检查⽯英吸收池在220nm装蒸馏⽔，以⼀个吸收池为参⽐，调节为100%，测定另⼀吸收池的透射⽐，其偏差应⼩于0.5%，可配成⼀套使⽤，记录第⼆⽐⾊⽫的吸光度值作为校正值。
紫外分光光度法检测标准操作规程完整
1. 目的：建立用紫外分光光度法检测药品质量的标准操作规程，保证标准操作。
2. 引用标准：《中华人民国药典》（2015年版四部）通则。
3. 围：本标准适用于用紫外分光光度法进行的检测。
4. 责任人： QC检验员对本标准的实施负责，QC主管负责检查监督。
5. 容：5.1定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长围光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数计算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处该化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
5.2 原理：物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200~400nm）或可见光区（400~760nm）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长围为190~900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert-Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：A=lg 1=ECL T式中：A 为吸光度T 为透光率E 为吸收系数C 为溶液浓度L 为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E１％表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，１ｃｍ则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
5.3. 仪器：5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
紫外分光光度法检测标准操作规程
1. 目的：建立用紫外分光光度法检测药品质量的标准操作规程，保证标准操作。
2. 引用标准：《中华人民共和国药典》（2015年版四部）通则。
3. 范围：本标准适用于用紫外分光光度法进行的检测。
4. 责任人： QC检验员对本标准的实施负责，QC主管负责检查监督。
5. 内容：定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数计算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处该化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
原理：物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200~400nm）或可见光区（400~760nm）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190~900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert-Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：1式中：A 为吸光度T 为透光率E 为吸收系数C 为溶液浓度L 为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
. 仪器：5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
紫外分光光度法标准操作规程
紫外分光光度法标准操作规程文件类型质量检验仪器SOP文件文件编码SOP-QC-7038-00 执行日期执行部门质量部起草人：起草日期：审核人：审核日期：批准人：批准日期：修订号批准日期执行日期变更原因及目：目的：建立紫外分光光度法标准操作规程。
适用范围：紫外分光光度法测定。
责任：质检员实施本操作规程，检验室主任负责监督本规程正确执行。
程序：1.仪器的校正和检定由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。
常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm与576.96nm，或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm与637.5nm波长处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同会有微小的差别，使用时应注意。
波长/nm 235(最小)257(最大)313(最小)350(最大)吸收系数1%124.5 144.0 48.62 106.6 1cm吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。
取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，如上表，相对偏差应在±1%以内。
杂散光的检查可按下页表的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。
E2.对溶剂的要求测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即用1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）操作标准----质量管理文件名称紫外分光光度标准操作规程编码SOP-QC-7038-00 页数3-2测定其吸收度。
紫外分光光度法及uv759s紫外可见分光光度计操作规程
紫外-分光光度法及UV759S紫外-可见分光光度计操作规程*****公司GMP文件一、紫外—可见分光光度法仪器的校正和检定1 波长由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所有的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。
常用汞灯中的较强谱线237.83nm,253.65nm, 275.28nm, 296.73nm, 313.16nm, 334.15nm, 365.02nm, 404.66nm, 435.83nm,546.07nm与576.9nm；或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在波长279.4nm, 287.5nm,333.7nm, 360.9nm,418.5nm,460.0nm,484.5nm, 536.2nm与637.5nm处有尖锐吸收锋，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化，使用时应注意。
近年来，常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器，以10％的高氯酸为溶剂，配制含4％氧化钬（Ho2O3）的溶液，该溶液的吸收峰波长为241.13nm，278.10nm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm，485.29nm，536.64nm 和640.52nm。
仪器波长的允许误差为：紫外区±1nm，500nm 处±2nm，700nm 处±4.8nm。
2 吸光度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。
取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。
3 杂散光的检查可按下表所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。
对溶剂的要求含有杂原子的有机溶剂，通常均有很强的末端吸收。
紫外-可见分光光度法(2010药典一部)检验标准操作规程
1.目的：建立紫外-可见分光光度法(一部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。
2. 依据：2.1. 《中华人民共和国药典》2010年版一部。
3. 范围：适用于所有用紫外-可见分光光度法(一部)测定的供试品。
4. 责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。
5. 正文：5.1. 仪器的校正和检定。
5.1.1. 波长：由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。
常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm与576.96nm，或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正；钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm与637.5nm波长处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化，使用时应注意；近年来，常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器，以10%高氯酸溶液为溶剂，配制含氧化钬（Ho2O3）4%的溶液，该溶液的吸收峰波长为241.13nm，278.10nm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm，485.29nm，536.64nm和640.52nm。
仪器波长的允许误差为：紫外光区±1nm，500nm附近±2nm。
5.1.2. 吸光度的准确度：可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。
取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定 ，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。
紫外分光光度法操作规程
页数：1/5起草：日期：审核：日期：批准：日期：生效日期：签字：拷贝号：制定（变更）原因及目的：变更记载：修订号批准日期生效日期000102生产部[ ]份计划供应室[ ]份质量部QA [ ]份分发部门生产车间[ ]份仓储管理室[ ]份质量部QC [ ]份(档案存档1份)设备部[ ]份销售管理室[ ]份办公室[ ]份紫外分光光度法操作规程1.适用范围：适用于本厂品种紫外分光光度法检验。
2.职责QC检验员：严格按照操作规程进行检验。
QC主管：监督检查操作规程执行情况。
3.内容紫外分光光度法是通过被测物质在在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内的吸收度，对该物质进行定性分析和定量分析的方法。
本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查、含量测定。
3.1 紫外分光光度计的检定3.1 波长准确度3.1.1 波长准确度的允差范围双光束光栅型紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差为±0.5nm。
单光束棱镜型350nm处±0.7nm，500nm处±2.0nm，700处±4.8nm。
3.1.2 波长准确度检定方法用氧化钬玻璃检定将氧化钬玻璃放入样品光路,参比光路为空气，按测定吸收光谱图方法测定。
校正自动记录仪器时，应考虑记录仪的时间常数，测定样品与校正时取同一扫描速度。
氧化钬玻璃在279.4,287.5,333.7,360.9,418.7,460.0,484.5,536.2及637.5nm波长处有尖锐的吸收峰,可供波长检定用。
氧化钬玻璃因制造的原因，每片氧化钬的吸收峰波长有差异，应使用经计量部门校验过的。
3.2 吸收度准确度精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约600mg ，置1000ml 量瓶中，用硫酸液（0.005mol/L ）溶解并稀释至1000ml,用配对的1cm 石英池,以硫酸液(0.005mol/l)为空白,在235,257,313,350nm 分别测定吸收度,然后换算成，测得值应符合下表中%11cm E 规定的允差范围（±1%）。
紫外-可见分光光度计操作规程
紫外-可见分光光度计操作规程(TU1810)1．目的：制订本标准的目的是为规范检验人员在质量检验过程中的操作，保证检验结果的正确性。
2．适用范围：本标准适用于二厂检验员对产品质量的检验。
3．职责：QC检验员对本标准的实施负责。
4．程序：4.1简述紫外-可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。
这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。
朗伯—比耳定律（Lambert—Beer）是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。
当入射光波长一定时，溶液的吸光度是吸光物质的浓度及吸收介质厚度（吸收光程）的函数。
其常用表达式为，式中为系数：A=ε·ι·C式中A为吸光度；ε为吸收系数；C为溶液浓度；ι为光路长度。
如溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸光度即为吸收系数以E cm%11表示。
如溶液的浓度（C）的摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。
4.2 仪器紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法的原理工作的常规分析仪器。
根据光路设计的不同，紫外可见分光光度计可以分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。
4.2.1 仪器测量条件选择1.测量波长的选择通常都是选择最强吸收带的最大吸收波长λmax作为测量波长，称为最大吸收原则，以获得最高的分析灵敏度。
而且在λmax附近，吸光度随波长的变化一般较小，波长的稍许偏移引起吸光度的测量偏差较小，可得到较好的测定精密度。
但在测量高浓度组分时，宁可选用灵敏度低一些的吸收峰波长（ε较小）作为测量波长，以保证校正曲线有足够的线性范围。
如果λmax所处吸收峰太尖锐，则在满足分析灵敏度前提下，可选用灵敏度低一些的波长进行测量，以减少比耳定律的偏差。
紫外分光操作规程
紫外分光操作规程
《紫外分光操作规程》
一、目的
本操作规程旨在规范紫外分光操作流程，确保实验数据的准确性和可靠性。
二、仪器准备
1. 打开紫外分光仪电源，保证仪器处于工作状态。
2. 检查仪器光路和光源是否正常，如有异常情况及时进行维护和调整。
三、样品准备
1. 根据实验要求准备样品溶液，确保溶液浓度适当。
2. 过滤样品溶液，避免杂质影响测量结果。
四、操作步骤
1. 将样品溶液注入样品池中，确保样品池干净并无气泡。
2. 选择合适的波长范围和扫描速度，进行基线调整。
3. 点击开始测量，记录实验数据。
五、实验数据处理
1. 绘制样品吸光度曲线，分析吸光峰和波长。
2. 根据实验要求计算样品的吸光度和浓度。
六、仪器维护
1. 实验结束后，清洗样品池和光路，保持仪器清洁。
2. 关闭仪器电源，注意安全操作。
七、注意事项
1. 避免直接接触紫外光线，使用紫外透明眼镜和手套。
2. 严格按照操作规程进行操作，避免误操作导致仪器损坏或实验数据失真。
通过严格按照《紫外分光操作规程》进行操作，可以确保紫外分光实验的顺利进行，得到准确可靠的实验数据。
紫外分光光度计操作规程
UV-2550型紫外分光光度计使用说明1开机预热1.1先打开电脑显示器和主机，再打开仪器的电源，打开桌面上软件UVProbe2.21,单击，出现如下对话框（UV-2550PC Series-Rev.A(FD 00)）：仪器进入初始化状态。
1.2初始化大约需要5min，进行一系列的机械和光路的检查和初置，当所有项目初始化完毕后，单击1.3初始化完成后，需预热15min，即可往下操作。
2基线校正2.1选择中的（photometric光度），打开光度模块。
2.2单击光度计键条中的（baseline基线），启动基线校正操作。
2.3当基线参数对话框（baseline Parameters）弹出时：在开始波长和结束波长中分别输入实验所需的波长范围内进行基线校正,点击在Start中输入700，在End700nm开始扫描。
2.4待扫描结束后，点击输出窗口校正信息。
注意在基线校正过程中光度计状态窗口的读数变化，读数变化≤3nm可接受。
当完成基线校正后，可进行以下操作。
3光度测定3.1首先选择测定方式，在主菜单的所示的各键中，选择（photometric 光度）。
3.2 参数的设置（以硝酸盐为例说明）：点击菜单栏中的键，出现图（photometric Method Wizard-[Wavelengths]：在)中可供选择在538，WL538.0，点击加入，点下一步，出现图（photometric Method Wizard-[Calibration]）：Multi Point,Single Point，K-Factor，wavelength，Ratio，Different）中选择步添加过的波长，例如的单位。
单击下一步；出现下图（标准表）：一般选择默认状态，其中表示在重复测定之前进行提示。
再单击下一步；出现下图（样品表）：和上面类似，用默认设置即可。
再单击下一步，出现下图（Photometric metricWizard-[File Properties]）：在下，单击完成。
紫外_可见分光光度计操作规程完整
紫外-可见分光光度计操作规程(TU1810)1．目的：制订本标准的目的是为规检验人员在质量检验过程中的操作，保证检验结果的正确性。
2．适用围：本标准适用于二厂检验员对产品质量的检验。
3．职责：QC检验员对本标准的实施负责。
4．程序：4.1简述紫外-可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。
这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。
朗伯—比耳定律（Lambert—Beer）是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。
当入射光波长一定时，溶液的吸光度是吸光物质的浓度及吸收介质厚度（吸收光程）的函数。
其常用表达式为，式中为系数：A=ε·ι·C式中A为吸光度；ε为吸收系数；C为溶液浓度；ι为光路长度。
如溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸光度即为吸收系数以E cm%11表示。
如溶液的浓度（C）的摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。
4.2 仪器紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法的原理工作的常规分析仪器。
根据光路设计的不同，紫外可见分光光度计可以分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。
4.2.1 仪器测量条件选择1.测量波长的选择通常都是选择最强吸收带的最大吸收波长λmax作为测量波长，称为最大吸收原则，以获得最高的分析灵敏度。
而且在λmax附近，吸光度随波长的变化一般较小，波长的稍许偏移引起吸光度的测量偏差较小，可得到较好的测定精密度。
但在测量高浓度组分时，宁可选用灵敏度低一些的吸收峰波长（ε较小）作为测量波长，以保证校正曲线有足够的线性围。
如果λmax所处吸收峰太尖锐，则在满足分析灵敏度前提下，可选用灵敏度低一些的波长进行测量，以减少比耳定律的偏差。
紫外分光光度法检测标准操作规程完整
1. 目的：建立用紫外分光光度法检测药品质量的标准操作规程，保证标准操作。
2. 引用标准：《中华人民国药典》（2015年版四部）通则。
3. 围：本标准适用于用紫外分光光度法进行的检测。
4. 责任人： QC检验员对本标准的实施负责，QC主管负责检查监督。
5. 容：5.1定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长围光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数计算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处该化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
5.2 原理：物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200~400nm）或可见光区（400~760nm）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长围为190~900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert-Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：A=lg 1=ECL T式中：A 为吸光度T 为透光率E 为吸收系数C 为溶液浓度L 为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E１％表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，１ｃｍ则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
5.3. 仪器：5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
紫外分光光度法检测标准操作规程
1. 目的：建立用紫外分光光度法检测药品质量的标准操作规程，保证标准操作。
2. 引用标准：《中华人民共和国药典》（2015年版四部）通则。
3. 范围：本标准适用于用紫外分光光度法进行的检测。
4. 责任人： QC 检验员对本标准的实施负责，QC 主管负责检查监督。
5. 内容：定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数计算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处该化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
原理：物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200~400nm ）或可见光区（400~760nm ）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190~900nm ，因此又称紫外-可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert-Beer ）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：A=lg 1 =ECL式中：A 为吸光度T 为透光率E 为吸收系数C 为溶液浓度L 为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
. 仪器：5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
紫外-可见分光光度法标准操作规程
1.目的：规范紫外-可见分光光度法检验操作，保证检验的质量。
2.范围：适于本公司紫外-可见分光光度法操作。
3.责任：质量管理科、中心化验室、检验员。
4.检验依据：《中国药典》2015年版四部紫外-可见分光光度法操作方法。
5.内容:5.1 简述◆分光光度法是通过被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。
◆定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
◆物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在紫外光区（200-400nm）或可见光区（400-760nm）产生吸收。
通常使用的紫外-可见分光光度计的工作波长范围为190-900nm，因此又称紫外一可见分光光度计。
◆紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯-比尔（Lambert－Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外-可见分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：1A = lg = ECLT式中A为吸收度；T为透光率；E为吸收系数；C为溶液浓度；L为光路长度。
◆如溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E 1%1CM表示。
如溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。
5.2 仪器◆紫外-可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
◆为了满足紫外一可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。
紫外可见分光光度计操作规程 (2)
紫外可见分光光度计操作规程1 编制目的为了规范UV-1800PC型紫外可见分光光度计的操作规程，正确使用仪器，保证检测工作顺利进行，确保操作人员人身安全和设备安全，特编制本操作规程。
2 适用范围本操作规程适用于本公司UV-1800PC型紫外可见分光光度计。
3 引用文件《UV-1800PC紫外可见分光光度计说明书》使用说明书。
4 操作步骤4.1 技术要求4.1.1型号：UV-1800PC型紫外可见分光光度计4.1.2主要技术参数（1）波长范围：190-1100nm（2）光谱带宽：2nm（3）波长准确度：±0.5nm（4）波长重复性：≤0.2nm（5）光度显示范围：0～200%T，-0.3～3A（6）稳定性：±0.001A/h(500nm处)4.2 操作要求4.2.1环境要求：应避开高温高湿环境，避免受到外界磁场干扰。
4.2.2职责要求（1）检验人员按本规程操作使用仪器，并对仪器进行日常卫生清洁。
（2）设备维护人员负责按照本规程进行仪器的例行维护保养工作。
（3）设备管理员负责仪器的综合管理。
4.3 工作原理分光光度法分析的原理是利用物质对不同波长光的选择吸收现象来进行物质的定性和定量分析，通过对吸收光谱的分析，判断物质的结构及化学组成。
本仪器是根据相对测量原理工作的，即选定某一溶剂(蒸馏水、空气或试样)作为参比溶液，并设定它的透射比(即透过率T)为100%，而被测试样的透射比是相对于该参比溶液而得到的，透射比(透过率T)的变化和被测物质的浓度有一定函数关系，在一定的范围内，它符合朗伯比尔定律。
4.4 操作方法4.4.1实验准备4.4.1.1开机自检：确认仪器光路中无阻挡物，关上样品室盖，打开仪器电源开始自检。
4.4.1.2预热：仪器自检完成后进入预热状态，若要精确测量，预热时间需在30min 以上。
4.4.1.3确认比色皿：在将样品移入比色皿前确认比色皿是干净、无残留物的，若测试样品波长小于400nm,请使用石英比色皿。
紫外分光光度法检验标准操作规程
依据：《GMP》与药品生产质量检验的要求目的：建立紫外分光度法检验标准操作规程范围：用于成品、原辅料鉴别、检查和含量测定1．仪器：紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
为了满足紫外可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区2．检定2.1波长准确定2.1.1波长准确度的允差范围：双光束光栅型紫外一可见分光光度计波长准确度允许误差为±0.5mm。
单元束棱镜型350mm处±0.7nm，500nm处±2.0nm，700nm±4.8nm2.2吸收度准确度：精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，置1000ml量瓶中，用硫酸液（0.005mol/l）为空白，在235、257、313、350nm分别测定吸收度，然后换算成E1%1cm，测得值应符合下表中规定的允差范围（±1%），国际药典规定的允差亦为±1%。
分光光度法允差范围波长（nm）吸收强度吸收系数（E1%/1cm）允差范围235最小124.5123.3－125.7257最大144.0142.6－145.4313最小48.6248.3－49.11350最大106.6105.5－107.7分辨率、杂散光、基线平直度、稳定度、绝缘电阻等项检定，按中华人民共和国国家计量检定规程JJ6682～90(双光束紫外可见分光光度计检定规程)执行，并应符合有关项下的规定。
日常常规测定主要是对以上两项时常检查。
3．样品测定操作法3.1 吸收系数测定(性状项下)按各该品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长(参见4.8项)测定其吸收度，并计算吸收系数，应符合规定的范围。
3,2鉴别及检查：按各该品种项下的规定，测定供试品溶液在有关波长处的最小及最大吸收，有的并须测定其各最大吸收峰值或最大吸收与最小吸收的比值，均应符合规定。
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1. 目的：建立用紫外分光光度法检测药品质量的标准操作规程，保证标准操作。
2. 引用标准：《中华人民国药典》（2015年版四部）通则。
3. 围：本标准适用于用紫外分光光度法进行的检测。
4. 责任人： QC检验员对本标准的实施负责，QC主管负责检查监督。
5. 容：5.1定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长围光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数计算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处该化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
5.2 原理：物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200~400nm）或可见光区（400~760nm）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长围为190~900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert-Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：A=lg 1=ECL T式中：A 为吸光度T 为透光率E 为吸收系数C 为溶液浓度L 为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E１％表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，１ｃｍ则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
5.3. 仪器：5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
5.3.2.为了满足紫外—可见光区全波长围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。
5.3.3.单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成，色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200~400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。
光栅系将反射或透射光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。
5.3.4.检测器有光电管和光电倍增管二种。
5.3.5.紫外分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同，可分为单光束和双光束分光光度计二类。
单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸收度，操作比较费时，用于绘制吸收光谱图时很不方便，但适用于单波长的含量测定。
双光束分光光度计藉扇形镜交替切换光路，使光分成样品（S）和参比（R）两光束，并先后到达检测器，检测器信号经调制分离成两光路对应信号，信号的比值直接用记录仪记录，双光束分光光度计操作简单，测量快速，自动化程度高，但作含量测定时，为求准确起见，仍宜用固定波长测量方式。
5.4. 紫外分光光度计的检定：5.4.1.1.波长准确度的允差围：双光束光栅型紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差为±0.5nm。
单光束棱镜型350nm处±0.7nm，500nm处±2.0nm，700nm处±4.8nm。
5.4.1.2.波长准确度检定方法：5.4.1.2.1. 用低压汞灯检定，关闭光源，将汞灯（用笔式汞灯最方便）直接对准进光狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，采用波长扫描方式，扫描速度“慢”（如15nm/min），响应“快”，最小狭缝宽度（如0.1nm）量程0-100%，在200~800nm 围单方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值（若仪器无“峰检测”功能，必要时可对指定波长进行“单峰”扫描）。
单光束仪器以751G型为例，可将选择开关放在×0.1位置，透光率读数放在100（或选择开关放在×1，透光率放在10），关小狭缝，打开光闸门，缓缓转动波长盘，寻找汞灯546.07nm峰出现的位置，若与波长读数不符，应调节仪器左侧准直镜的波长调整螺丝。
如波长向短波长方向移动，应顺时针方向旋转波长调整螺丝，如向长波长方向移动，则应反时针方向旋转波长调整螺丝，调整好后，再按汞灯的下列谱线测试，记录每条谱线与仪器波长读数的误差。
用于检定紫外-可见分光光度计的汞灯谱线波长：237.83、253.65、275.28、296.73、302.15、313.16、334.15、365.02、365.48、366.33 、404.66 （紫色）、435.83（蓝色）、546.07（绿色）、576.96（黄色）、579.07nm。
5.4.1.2.2用仪器固有的氘灯检定：本法主要用于日常工作中波长准确度的核对，取单光束能量测定方式，测量条件同上述低压汞灯的方法，对486.02及656.10nm二单峰进行单方向重复扫描3次。
5.4.1.2.3用氧化钬玻璃检定：将氧化钬玻璃放入样品光路，参比光路为空气，按测定吸收光谱图方法测定。
校正自动记录仪器时，应考虑记录仪的时间常数，测定样品与校正时取同一扫描速度。
氧化钬玻璃在279.4、287.5、333.7、360.9、418.7、460.0、484.5、536.2、637.5nm波长处有尖锐的吸收峰，可供波长检定用。
氧化钬玻璃因制造的原因，每片氧化钬的吸收峰波长有差异，应使用经计量部门校验过的。
5.4.1.2.4用高氯酸钬溶液检定：本法可供没有单光束测定功能的双光束紫外分光光度计波长准确度检定用。
高氯酸钬溶液的配制方法：取10%高氯酸为溶剂，加入氧化钬（HO2O3），配成4%溶液即得。
高氯酸钬溶液较强的吸收峰波长为241.13、278.10、287.18、333.44、345.47、361.31、416.28、451.30、485.29、536.64、640.52nm。
如果是双光束扫描仪器，但不是数据贮存型的，记录的波长可能因记录笔滞后而非真实波长，为了准确测定，建议采用定点检定而不用扫描方式。
5.4.2. 吸光度准确度：精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，置1000ml量瓶中，用硫酸液（0.005mol/L）溶解并稀释至1000ml，用配对的1cm石英池，以硫酸液（0.005mol/L）为空白，在235、257、313、350nm分别测定吸光度，然后换算成E１％１ｃｍ，测得值应符合下表中规定的允差围（±1%）。
分光光度法允差围分辨率、杂散光、基线平直度、稳定度、绝缘电阻等项检定，按中华人民国国家计量检定规程JJG682-90《双光束紫外可见分光光度计检定规程》执行，并符合有关项下的规定。
日常常规测定主要是对以上两项时常检查。
5.5. 样品测定操作方法：5.5.1. 吸收系数测定（性状项下）：按各该品种项下规定的方法，配制供试品溶液，在规定的波长处测吸收度，并计算吸收系数，应符合规定围。
5.5.2. 鉴别及检查：按各该品种项下规定的方法，测定供试品溶液在有关波长处的最大及最小吸收，有的并须测定其各最大吸收峰值，或最大吸收与最小吸收的比值，均应符合规定。
5.5.3. 含量测定：5.5.3.1. 对照品比较法：按各该品种项下规定的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的（100±10）%以，用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度。
5.5.3.2. 吸收系数法：按各该品种项下配制供试品溶液，在规定的波长及该波长±1nm处测定其吸收度，按各该品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。
采用吸收系数法，应对仪器进行校正后测定，如测定新品种的吸收系数，需按“吸收系数测定法”的规定进行。
5.5.3.3. 计算分光光度法：采用该法的品种，应严格按该品种项下规定的方法进行，用本法时应注意：有一些吸收度是在供试品或其成分吸收曲线的上升或下降陡坡部测定，影响精度的因素较多，故应仔细操作，尽量使测定供试品和对照品的条件一致；若该品种不用对照品，则应在测定前对仪器作仔细的校正和检定。
5.6. 注意事项：5.6.1. 试验中所用的量瓶、移液管均应经检定校正、洗净后使用。
5.6.2. 使用的石英吸收池必须洁净。
用于盛装样品、参比及空白溶液的吸收池，当装入同一溶剂时，在规定波长处测定吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配对使用，否则必须加以校正。
取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。
装盛样品溶液，以池体积的4/5为度，测定挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用醮有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。
吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。
5.6.3使用后用溶剂及水冲洗干净，晾干防尘保存。
吸收池如污染不易洗净时，可用硫酸，发烟硝酸（3：1V/V）混合液稍加浸泡后，洗净备用。
如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。
5.6.4. 测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求，可用1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白，测定其吸收度，应符合下表规定。
以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸收度的规定波长围（nm） 220—240 241—250 251—300 300以上吸收度 <0.4 <0.2 <0.1 <0.05每次测定时应采用同一厂牌批号，混合均匀的一批溶剂。
5.6.5. 称量应按药典规定要求。
配制测定溶液时，稀释转移次数应尽可能少；转移稀释时，所取容积一般应不少于5ml。
含量测定供试品应取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应称取2份。
吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以。
作鉴别或检查可取样品1份。
5.6.6. 供试品测试液的浓度，除各该品种项下已有注明外，供试品溶液的吸收度以在0.3~0.7之间为宜，吸收度在此围误差较小，并应结合所用仪器吸收度线性围，配制合适的读数浓度。
5.6.7. 选用仪器的狭缝宽度应小于供试品的吸收带的半宽度，否则测得的吸收度会偏低，狭缝宽度的选择应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于中国药典紫外测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但对某些品种如青霉素钾及钠的吸收度检查则用1nm缝宽或更窄，否则其264nm的吸收度会偏低。