GFP标签融合蛋白亲和凝胶使用说明书

Anti-GFP亲和凝胶

Cat#：IP0057

（本品仅用于科学研究，不可用于诊断及治疗）

1.背景信息

GFP，绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein)，来源于维多利亚多管发光水母，由约238个氨基酸组成，从蓝光到紫外线都能使其激发出绿色萤光。GFP常用于真核蛋白质重组表达标记。Anti -GFP亲和凝胶，由高品质的GFP鼠单克隆抗体与Sepharose 4B琼脂糖颗粒共价偶联制成，具有高载量（至少为1.2mg protein/ml凝胶），高特异性，性质稳定，可反复使用的特点，可用于GFP标签融合蛋白的免疫（共）沉淀检测。

2.性能指标

应用范围：可用于N端GFP融合蛋白（GFP–Protein）和C端GFP融合蛋白

（Protein-GFP）的免疫（共）沉淀。

载量：1ml Sepharose 4B琼脂糖颗粒，共价偶联800μg Anti-GFP 鼠单克隆

抗体，可沉淀至少1.2mg GFP融合蛋白。

成分：共价偶联Anti-GFP 鼠单克隆抗体的Sepharose 4B琼脂糖颗粒, 1ml

溶于2ml PBS+50%甘油中。

保存方法：在加入了50%甘油和0.2‰叠氮钠的PBS保存液中，-20℃可保存1年。

3.使用方法

3.1细胞裂解液制备

3.1.1悬浮细胞和半贴壁细胞从细胞培养瓶上吹下来后放入离心管中，

1000rpm离心5分钟。贴壁细胞用细胞刮子轻轻从瓶壁上刮下来，放入离

心管中1000rpm离心5分钟。

3.1.2预冷的PBS(pH7.2)重悬细胞，1000rpm离心3min，弃上清。重复一次。

3.1.3根据细胞的量加入相应体积的细胞裂解液（推荐配方见5.3），反复吹打

后冰上放置10-20min，让细胞充分裂解。

3.1.4用超声破碎仪将细胞裂解液超声，直至细胞裂解液透明，不再粘稠。冰上

放置30min之后，12000rpm，4℃离心10min。取上清，冷冻保存。

3.2装柱及孵育

3.2.1根据使用目的选用重力柱或离心管，移入适量亲和凝胶。

3.2.210倍柱体积PBS清洗Anti-GFP亲和柱。

3.2.3加入含有目标蛋白的真核细胞裂解液，室温孵育或者4℃孵育过夜。

3.3免疫（共）沉淀

3.3.15倍柱体积PBS洗柱三次。

3.3.2加入足量1×蛋白上样缓冲液，煮沸5 min，冷却至室温。

3.3.3取上清进行SDS-PAGE及Western Blotting检测。

4.推荐缓冲液配方

以下配方仅为本公司推荐，客户应根据具体情况进行调整。

5.使用中的常见问题

来源出处：武汉戴安生物技术有限公司