新鲜大蒜中蒜氨酸酶的分离纯化及性质
大蒜植株中蒜氨酸酶的纯化方法
大蒜中大蒜素的提取及含量测定
大蒜中大蒜素的提取及含量测定摘要：大蒜素是大蒜中的主要活性成分，是大蒜破碎后，蒜氨酸在蒜酶催化作用下产生的一种具有生物活性的有机硫化物，具有抗菌消炎、降血压、降血脂、防癌等作用，可用于多种疾病的防治，在临床上的应用也越来越广泛，作为药物或保健品开发具有广阔前景[1]。
大蒜素的提取方法可以分为三类：水蒸气蒸馏法、溶剂萃取及超临界流体萃取[2-3]，但是采用水蒸气蒸馏得到的提取物中大蒜素含量很低，导致提取物的活性很低。
超临界萃取法提取率高、品质好，但生产成本高、设备复杂、操作技术难度大[4]。
综合考虑在有机溶剂萃取法的基础上，以乙醇为提取剂萃取大蒜素，研究确定了其最佳工艺参数。
用硫酸钡沉淀法测定大蒜素的含量。
关键词：大蒜素、提取、含量测定Extraction and Determination of allicin in garlic(Yunnan Agricultural University College of Basic Science andInformation Engineer,Kunming 650201)ABSTRACT：Allicin is the main active ingredient in garlic,crushed garlic alliin in the garlic enzyme catalysis of a biologically active organic sulfides,With antibacterial anti-inflammatory role in lowering blood pressure, lowering blood pressure, anti-cancer,Can be used for the prevention and treatment of many diseases,Clinical application is more and more widely, and has broad prospects for development as drugs or health products .Allicin extraction methods can be divided into three categories:Steam distillation, solvent extraction and supercritical fluid extraction method,However, the extract obtained by steam distillation and the allicin content is low, resulting in low activity of the extracts.Supercritical extraction extraction rate, the quality is good, but the high cost of production, complex equipment operation prehensive consideration on the basis of the organic solvent extraction, ethanol extraction solvent extraction of allicin, research to determine the optimum parameters. Determination of allicin content of barium sulfate precipitation method.Key words: Allicin;Extract ;Content ;determination大蒜中大蒜素的提取含量及测定1 引言研究意义：通过以大蒜为原料来提取大蒜素，大蒜素的提取方法可以分为三类：水蒸气蒸馏法、溶剂萃取及超临界流体萃取[2-3]，但是采用水蒸气蒸馏得到的提取物中大蒜素含量很低，导致提取物的活性很低。
《大蒜中蒜氨酸的提取分离工艺及重结晶研究》
《大蒜中蒜氨酸的提取分离工艺及重结晶研究》一、引言大蒜作为一种常见的调味品和药用植物，其含有丰富的生物活性成分，其中蒜氨酸是一种重要的化合物。
蒜氨酸具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种生物活性，因此其提取分离工艺及重结晶研究具有重要的理论和实践意义。
本文旨在研究大蒜中蒜氨酸的提取分离工艺及重结晶过程，以期为蒜氨酸的进一步应用提供理论依据和技术支持。
二、材料与方法1. 材料大蒜：选取新鲜、无病虫害的大蒜作为原料。
试剂：乙醇、乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂，以及硫酸、氢氧化钠等化学试剂。
2. 方法（1）提取分离工艺①原料准备：将大蒜清洗干净，去除表皮和须根，切碎后进行干燥。
②提取：将干燥后的大蒜用乙醇浸泡，进行索氏提取或超声波辅助提取，得到蒜氨酸的提取液。
③分离：采用柱层析、薄层扫描等技术对提取液进行分离，得到纯度较高的蒜氨酸。
（2）重结晶工艺①将分离得到的蒜氨酸溶液进行浓缩，使其达到重结晶的要求。
②在一定温度下，向浓缩液中加入适量的溶剂（如丙酮、乙醇等），进行重结晶。
③过滤、干燥，得到纯度更高的蒜氨酸晶体。
三、结果与分析1. 提取分离工艺结果通过索氏提取和柱层析等技术，成功地从大蒜中提取并分离出蒜氨酸。
在实验过程中，我们发现不同的提取方法和条件对蒜氨酸的提取效率和纯度有不同的影响。
其中，超声波辅助提取法具有较高的提取效率，而柱层析法能够有效地提高蒜氨酸的纯度。
通过优化提取和分离条件，我们得到了纯度较高的蒜氨酸。
2. 重结晶工艺结果在重结晶过程中，我们发现不同的溶剂对蒜氨酸的结晶效果和纯度有不同的影响。
通过对比实验，我们发现丙酮和乙醇是较为适宜的溶剂。
在一定的温度和浓度条件下，加入适量的溶剂进行重结晶，可以得到纯度更高的蒜氨酸晶体。
此外，我们还发现重结晶过程中需要控制好温度和溶剂的比例，以避免蒜氨酸的损失和晶体质量的不稳定。
四、讨论与展望大蒜中蒜氨酸的提取分离及重结晶研究具有重要的应用价值。
通过优化提取和分离条件，我们可以提高蒜氨酸的纯度和产量，为其进一步的应用提供更好的原料。
天然产物化学论文
天然产物化学论文题目：蒜氨酸及蒜氨酸酶的研究姓名：学号：专业班级：时间：蒜氨酸及蒜氨酸酶的研究摘要：近年大蒜及大蒜制品风靡全球，被誉为天然“药用植物黄金”。
大量的研究表明，大蒜有消炎杀菌、抗病毒、降血压，抗氧化、抗血栓、抗肿瘤、调节机体免疫力等多种功效。
大蒜中具有药理作用的成分主要是一类含硫的有机化合物——蒜素(allicin主要成分是二烷基硫代亚磺酸脂和烷基-2-丙烯基硫代亚磺酸脂)，被认为有重要的抗微生物活性。
蒜氮酸酶催化反应生成的风味化合物，其医药和保健作用的独特魅力已被广泛认可。
这一领域内产品的研究与开发，也越来越受到重视。
但由于这类物质有令人不快的味道，在程度上限制了新鲜大蒜产品的开发和应用。
洋葱精油是风味前体物质与蒜氨酸酶发生酶促水解反应后，由其一级产物进行非酶促重组生成二硫、三硫和多硫化合物的混合体。
通过酶和前体的最适配比及适宜的反应条件，可得到最佳的风味物质提取率。
对于洋葱中蒜氨酸酶的研究，国内还处于起步阶段，通过对该酶的研究与分析，掌握其与风味前体之间的关系及各影响因子与酶促反应之间的关系，对于提高精油产率有极大的帮助。
如果将蒜氨酸酶制备成商品酶，且在进行催化反应之前将洋葱中原有的蒜氮酸酶灭活，对于风味前体的不完全水解即可抑制，通过对反应条件和酶浓度的调节后，加入商品酶就可对风味前体进行规模性的生物催化，可大大提高精油产率，而且商品酶可以多次重复利用，降低了生产成本。
关键词：蒜氨酸，蒜氨酸酶，洋葱，酶膜生物反应器，药学机理1、蒜氨酸酶的应用背景心脑血管病具有“发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高,并发症多”即“四高一多”的特点，目前，我国心脑血管疾病患者已经超过2.7亿人！我国每年死于心脑血管疾病近300万人，占我国每年总死亡病因的51%。
如今，各种心脑血管疾病危害着人们的身体健康，血管的老化、硬化使这些疾病的主要原因，要预防这些疾病就要保持血管年轻，以维持人体血液运输线畅通无阻，避免心脑血管病的发生。
新鲜大蒜中蒜氨酸酶的分离纯化及性质
植物学通报 2005, 22 (5): 579￣583Chinese Bulletin of Botany①通讯作者。
Author for correspondence. E-mail: ly433@收稿日期: 2004-01-07 接受日期: 2004-04-19 责任编辑: 崔郁英,于昕新鲜大蒜中蒜氨酸酶的分离纯化及性质李 燕 王 荣 李 冠 苟 萍①(新疆大学生命科学与技术学院 乌鲁木齐 830046)摘要 用葡聚糖凝胶G-200层析柱分离纯化了新鲜大蒜(Allium sativum )中的蒜氨酸酶, SDS-PAGE 结果为单一条带, 分子量为53 kD 在35 ℃下以蒜氨酸为底物, K m 为 0.693 mmol .L －1, V max 为0.353 mmol .min －1, 最适反应温度为30 ℃, 热稳定的温度在50 ℃以下。
Zn 2+对酶有抑制作用, Mn 2+使酶活力增加。
关键词 大蒜, 蒜氨酸酶, 分离纯化, 性质Purification and Properties of Alliinase from Fresh Garlic(Allium sativum )LI Yan WANG Rong LI Guan GOU Ping(College of Life Science and Technology , Xinjiang University , Urumqi 830046)Abstract Alliinase (EC.4.4.1.4) of fresh garlic (Allium sativum ) was purified 14-fold by gel filtration on a SephadexG-200 system. SDS-PAGE revealed a molecular weight of 53 kD, with Km and Vmax values of 0.693 mmol .L －1 and 0.353 mol .L －1, respectively. The optimal temperature for activity was 30 ℃, with stable activity below 50 ℃. The activity was inhibited by Zn 2+ stimulated by0.1 mol Mn 2+.Key words Garlic, Alliinase, Purification, Property大蒜为百合科葱属植物, 有丰富的营养成分和药用价值。
新鲜大蒜中蒜氨酸酶的分离纯化及性质
新鲜大蒜中蒜氨酸酶的分离纯化及性质
李燕;王荣;李冠;苟萍
【期刊名称】《植物学报》
【年(卷),期】2005(022)005
【摘要】用葡聚糖凝胶G-200层析柱分离纯化了新鲜大蒜(Allium sativum)中的蒜氨酸酶,SDS-PAGE结果为单一条带,分子量为53 kD在35℃下以蒜氨酸为底物,Km为0.693 mmol·L-1,Vmax为0.353 mmol·min-1,最适反应温度为30℃,热稳定的温度在50℃以下.Zn2+对酶有抑制作用,Mn2+使酶活力增加.
【总页数】5页(P579-583)
【作者】李燕;王荣;李冠;苟萍
【作者单位】新疆大学生命科学与技术学院,乌鲁木齐,830046;新疆大学生命科学与技术学院,乌鲁木齐,830046;新疆大学生命科学与技术学院,乌鲁木齐,830046;新疆大学生命科学与技术学院,乌鲁木齐,830046
【正文语种】中文
【中图分类】Q94
【相关文献】
1.香葱中蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质 [J], 付一帆;周宇;李星鑫;刘莹;王鲁峰;潘思轶
2.蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质测定 [J], 曾哲灵;徐仁华;熊涛
3.大蒜中蒜氨酸酶的分离纯化及纯度测定 [J], 李瑜;许时婴
4.RP-HPLC法测定新鲜大蒜中蒜氨酸含量 [J], 景文娟;杨春梅;韩博;唐辉
5.蒜粉中蒜氨酸酶的分离纯化及性质测定 [J], 苟萍;李燕;王荣;陈坚
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蒜氨酸酶的研究
FUH 分 子 重 组 技 术 构 建 蒜 氨 酸 酶 表 达 系 统 生 产 蒜 氨
酸 和 蒜 氨 酸 酶 (以 及 利 用 定 点 突 变 提 高 酶 活 性 和 稳 定 性 "这 些 方 面 的 研 究 是 提 高 蒜 类 药 品 药 效 的 行 之 有 效 的 途 径 "并 将 为 蒜 类 药 品 和 保 健 品 的 开 发 与 应 用 提 供 更广阔的空间! 参考文献
#
展望 蒜素在医药和保健方面的作用已得到普遍的认 可 "因 而 蒜 氨 酸 酶 的 作 用 就 显 得 尤 为 重 要 ! 目 前 国 内
外 生 产 的 大 蒜 片 剂 和 胶 囊 达 到 了 %" 种 以 上 " 以 现 有 的 加 工 生 产 方 法 "不 稳 定 的 蒜 氨 酸 酶 活 性 几 乎 完 全 丧 失 "药 物 有 效 成 分 也 会 大 大 降 低 ! 对 蒜 氨 酸 酶 的 性 质 % 作用机理及动力学特 性 进 行 研 究 "是 解 决 上 述 问 题 的 关键! 从大蒜中中分别提取蒜氨酸和蒜氨酸酶"利用 蒜氨酸和蒜氨酸酶生产复合胶囊或注射针剂( 通过
, FG &
!"
生
物
学
通
报
#""$ 年 第 %& 卷 第 ’ 期
亲和层析 ! 不同的纯化方法得到蒜氨酸酶的纯度不同 " 比 活 力 在 %"(#"" !)*+,-)./)012 之 间 3#4%5! 678+9*+*):;< 等 #$$ 从 鲜 蒜 分 离 纯 化 得 到 比 活 力 为 ==" !)*+,>).4)012 高 纯 度 的 蒜 氨 酸 酶 及 酶 的 晶 体4 用 同 样 的 分 离 纯 化 方 法 4 从不同产地鲜蒜中纯化得到的蒜氨酸酶其比活力各 不相同 4 可见不同产地蒜中蒜氨酸酶的含量是不同的 ! 分 离 纯 化 蒜 氨 酸 酶 的 提 取 缓 冲 液 大 多 为 ?@=AB !CAB 的 钠钾磷酸缓冲液 " 缓冲液常添加酶的辅因子 B" D 磷酸吡 哆醛以及使酶稳定的甘油%蔗糖%氯化钠%巯基乙醇% EFGH 等试剂 ! 硫酸胺沉淀时硫酸胺饱和度大多为 %B# 或 $B# ! ! 蒜氨酸酶的性质 蒜氨酸酶是有两个相同 亚 基 构 成 的 糖 蛋 白 " 含 糖 量 BABI 或 =# " 辅因子为 B" D 磷酸吡哆醛 ! 蒜氨酸酶有 多 种 底 物 "JD 甲 基 %JD 乙 基 %JD 丙 基 %JD 丁 基 和 JD 烯 丙 基 半 胱 氨 酸 亚 砜 都 可 作 该 酶 的 底 物 "JD 烯 丙 基 半 胱 氨 酸亚砜即蒜氨酸是天然底物 ! 从鲜蒜中提取得 到 的 蒜 氨酸酶以 KD 蒜氨酸为底物 " 酶的 L) 在 !A! != ))*+ 之 间 " 最 适 ?@=AB " 每 个 亚 基 的 分 子 量 在 $A# $!"$ %BA$ &!"$ 之间 ##%B$! 从蒜粉中提取的蒜氨酸酶 " 因蒜粉在干燥过程 中引起酶的性质发生改变 "JFJDMHNE 显示出 # 个分子 量略有不同的亚基 "! 个亚基分子量为 BA$&!"$4 另一亚 基则为 BA%&!"$4 以 KD &’ ’D 蒜氨酸和 KD>( OD 蒜氨酸为底 物 测 的 L) 分 别 为 !AB= ))*+ 和 #A’" ))*+4P) 分 别 为 #B# !)*+ ) &). ")01 ’ 和 B$ !)*+ ) &). ")01 ’4 最 适 温 度 和 最适 ?@ 分别为 %=* %?@C 和 %%* %?@=AB "?@ 稳定范围 B!!" #=$! 硫 酸 羟 铵 抑 制 蒜 氨 酸 酶 活 性 接 近 &" # " 鱼 藤 酮 有 类 似 的 作 用 " 半 胱 氨 酸 是 酶 的 竞 争 性 抑 制 剂 #C $ ! EF+
大蒜植株中蒜氨酸酶的提取及酶学特性研究
大蒜植株中蒜氨酸酶的提取及酶学特性研究张民，董家美，宋秀欢，张志刚，张丽丽，吴娜，王芳（天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457)摘要：本文以大蒜植株中蒜氨酸酶为对象，研究其提取条件及酶学特性。
以酶活性为指标，考察了大蒜植株中蒜氨酸酶的提取条件，并通过K m值的测定、热稳定性和pH稳定性等实验研究了蒜氨酸酶的酶学特性。
结果表明，提取条件为料液比1:3 (g/mL)，打浆，离心，提取三次，收集滤液；蒜氨酸酶最大反应速度V max=1.05 μmol/min，米氏常数K m=2.38 mmol/L。
蒜氨酸酶在30 ℃、pH为6.88条件下比较稳定。
关键词：蒜氨酸酶；提取；酶学特性文章篇号：1673-9078(2012)12-1693-1695Extraction and Enzymatic Characteristics of Alliinase from Garlic PlantZHANG Min, DONG Jia-mei, SONG Xiu-huan, ZHANG Zhi-gang, ZHANG Li-li, WU Na, W ANG Fang (College of Food Engineering and Biotechnology, Tianjin University of Science & Technology, Tianjin 300457, China) Abstract: In this paper, a method for extracting alliinase from garlic plant was established and the enzymatic characteristics of alliinase were studied. The extracting method was determined by single factor and orthogonal experiments. The results indicated that the best extracting conditions were as follows: solid/liquid ratio 1:3 (g/mL) and extracting 3 times, under which the V max and K m were 1.05 μmol/min and 2.38 mmol/L, respectively. The alliinase was constant under the conditions of 30 ℃ and pH 6.88.Key words: allinase; extract; enzymatic characteristics大蒜为百合科葱属植物，有丰富的营养成分和药用价值。
亲和层析法分离纯化蒜氨酸酶
亲和层析法分离纯化蒜氨酸酶吴熙然;胡红华;张相年;赵树进【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2009(030)019【摘要】目的:以蒜氨酸酶竞争性抑制剂S-烷基-L-半胱氨酸为配基,制备亲和层析胶分离纯化蒜氨酸酶.方法:以1,4-丁二醇二缩水甘油醚为活化剂,在碱性条件下,活化载体Sepharose CL-4B,偶联半胱氨酸,作为蒜氨酸酶的亲和层析胶.低温粉碎大蒜所得的大蒜液,经25%PEG-5000沉淀,得到粗酶.用制得的亲和胶分离纯化,并利用SDS-PAGE对酶纯度进行检验.结果:大蒜液用25%PEG-5000沉淀可以较简便地分离出粗酶,经制得的亲和胶层析,活力回收达到68.42%,比活力为9.493U/mg,纯化倍数达到22.17倍.提纯的蒜氨酸酶为电泳纯,亚基约为52kD.纯酶的最适温度为35℃,最适pH值为6.23,Km=9.845mmol/L,Vmax=24.93 U/mg.结论:以S-烷基-L-半胱氨酸为配基制得了,适合于蒜氨酸酶分离纯化的亲和载体.【总页数】4页(P244-247)【作者】吴熙然;胡红华;张相年;赵树进【作者单位】华南理工大学生物科学与工程学院,广东,广州,510641;广州军区广州总医院,广东,广州,510010;华南理工大学生物科学与工程学院,广东,广州,510641;广州军区广州总医院,广东,广州,510010;广州军区广州总医院,广东,广州,510010;广州军区广州总医院,广东,广州,510010【正文语种】中文【中图分类】TS201.2【相关文献】1.用Protein A亲和层析法快速分离纯化鲫血清IgM方法的建立和应用 [J], 吴光辉;王庆;巩华;石存斌;李华;吴淑勤2.亲和层析法分离纯化纳豆激酶 [J], 刘柳;李南薇;郭勇3.亲和层析法分离纯化油茶籽多糖Ⅰ的研究 [J], 王海林;王春艳;谢长林;文汉4.用亲和层析法分离纯化降纤酶 [J], 黄寓;金星光;侯庆华5.金属亲和层析法分离纯化醇脱氢酶 [J], 柳畅先;覃建军;翁其敏;吴士筠;汪燕玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
从鲜蒜中提取蒜氨酸生产工艺[发明专利]
![从鲜蒜中提取蒜氨酸生产工艺[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/b95ea8e285254b35eefdc8d376eeaeaad1f316d5.png)
[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公开说明书[11]公开号CN 1425650A [43]公开日2003年6月25日[21]申请号03100420.2[21]申请号03100420.2[22]申请日2003.01.13[71]申请人新疆保利达科工贸有限责任公司地址830026新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市经济开发区上海路8号608室[72]发明人陈坚 李新霞 常军民 王晓明 [74]专利代理机构乌鲁木齐合纵专利事务所代理人汤建武[51]Int.CI 7C07C 323/65C07C 319/28C07C 317/28权利要求书 2 页 说明书 6 页 附图 2 页[54]发明名称从鲜蒜中提取蒜氨酸生产工艺[57]摘要一种从鲜蒜中提取蒜氨酸生产工艺，按以下步骤进行：第一步进行预处理：将蒜瓣进行微波杀酶处理；第二步进行有机物提取：将蒜瓣磨成蒜浆，并加入乙醇或酒精，分离得到提取液，并减压浓缩提取液；第三步用阳离子交换树脂吸附浓缩提取液中的蒜氨酸；第四步用氨水解吸蒜氨酸；第五步得到结晶的蒜氨酸。
本发明适宜于以鲜蒜为原料批量化生产药用蒜氨酸。
用本发明所得产品经熔点测定、与标准对照品作紫外光谱与红外光谱对照，各项指标确认产品为蒜氨酸。
经高效液相色谱分析，本发明所得产品收率为1.0‰±10％，含蒜氨酸为91.2±2％。
03100420.2权 利 要 求 书第1/2页 1、一种从鲜蒜中提取蒜氨酸生产工艺，其特征在于按以下步骤进行： 第一步进行预处理：将蒜瓣进行微波杀酶处理，使蒜瓣从白色变成半透明状为止；第二步进行有机物提取：将微波处理后的蒜瓣磨成100至200目的蒜浆，并加入乙醇，用乙醇比重计控制蒜浆的乙醇浓度为40％至70％，搅拌2至5小时，分离得到提取液，薄膜减压浓缩提取液并加入澄清剂除固型物杂质； 第三步用阳离子交换树脂吸附浓缩提取液中的蒜氨酸：将浓缩提取液通过阳离子交换树脂吸附柱；第四步用氨水解吸蒜氨酸：用2.0至0.4摩尔氨水洗脱阳离子交换树脂吸附柱，收集pH值为5.0至9.0范围内的洗脱液；第五步得到结晶的蒜氨酸：减压浓缩洗脱液，按浓缩洗脱液体积的20％至35％加入乙醇，并用盐酸或氨水调节pH值为5.5至6.5范围内，室温静置24至60小时，析出结晶的蒜氨酸。
蒜氨酸酶与凝集素的分离纯化及质谱鉴定分析
蒜氨酸酶与凝集素的分离纯化及质谱鉴定分析王威;谢岩黎【摘要】In this study,alliinase and lectin were extracted and purified from garlic and their mass spectrometry identification was also investigated.Garlic alliinase and lectin was isolated by Sepharose Fast Flow ion exchange chromatography,and the target proteins were identified by SDS-PAGE and MALDI-TOF/MS.The results indicated that the purity of alliinase and lectin reached 90％ and 95％ respectively and was qualified for electrophoresis analysis by DEAE-Sepharose Fast Flow column purification using Tris-HC1 (50 mmol/L,pH7.2) as an extract.The results of mass spectrometry showed that the target substances were alliinase and lectin with molecular weight of 54.147 ku and 12.152 ku respectively.%对大蒜中的蒜氨酸酶和凝集素分离纯化并进行质谱分析.首次采用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析法对大蒜中蒜氨酸酶和凝集素进行了分离纯化,并采用SDS-PAGE电泳、MALDI-TOF/MS质谱法对目标蛋白进行了鉴定.结果表明:以Tris-HC1作为浸提液,经DEAE-Sepharose Fast Flow柱纯化的蒜氨酸酶和凝集素可达到电泳纯,质谱结果表明,所分离目标物质为蒜氨酸酶和大蒜凝集素,其分子质量分别为54.147 ku和12.152 ku.【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(038)004【总页数】4页(P20-23)【关键词】蒜氨酸酶;大蒜凝集素;分离纯化;质谱分析【作者】王威;谢岩黎【作者单位】河南工业大学粮油食品学院,河南郑州450001;河南工业大学粮油食品学院,河南郑州450001【正文语种】中文【中图分类】TS201.2大蒜原产于西亚、中亚，与洋葱、葱、韭菜等属于百合科葱属植物（Allium tuberosum）。
大蒜中大蒜素的提取及含量测定
大蒜中大蒜素的提取及含量测定摘要：大蒜素是大蒜中的主要活性成分，是大蒜破碎后，蒜氨酸在蒜酶催化作用下产生的一种具有生物活性的有机硫化物，具有抗菌消炎、降血压、降血脂、防癌等作用，可用于多种疾病的防治，在临床上的应用也越来越广泛，作为药物或保健品开发具有广阔前景[1]。
大蒜素的提取方法可以分为三类：水蒸气蒸馏法、溶剂萃取及超临界流体萃取[2-3]，但是采用水蒸气蒸馏得到的提取物中大蒜素含量很低，导致提取物的活性很低。
超临界萃取法提取率高、品质好，但生产成本高、设备复杂、操作技术难度大[4]。
综合考虑在有机溶剂萃取法的基础上，以乙醇为提取剂萃取大蒜素，研究确定了其最佳工艺参数。
用硫酸钡沉淀法测定大蒜素的含量。
关键词：大蒜素、提取、含量测定Extraction and Determination of allicin in garlic(Yunnan Agricultural University College of Basic Science andInformation Engineer,Kunming 650201)ABSTRACT：Allicin is the main active ingredient in garlic,crushed garlic alliin in the garlic enzyme catalysis of a biologically active organic sulfides,With antibacterial anti-inflammatory role in lowering blood pressure, lowering blood pressure, anti-cancer,Can be used for the prevention and treatment of many diseases,Clinical application is more and more widely, and has broad prospects for development as drugs or health products .Allicin extraction methods can be divided into three categories:Steam distillation, solvent extraction and supercritical fluid extraction method,However, the extract obtained by steam distillation and the allicin content is low, resulting in low activity of the extracts.Supercritical extraction extraction rate, the quality is good, but the high cost of production, complex equipment operation prehensive consideration on the basis of the organic solvent extraction, ethanol extraction solvent extraction of allicin, research to determine the optimum parameters. Determination of allicin content of barium sulfate precipitation method.Key words: Allicin;Extract ;Content ;determination大蒜中大蒜素的提取含量及测定1 引言研究意义：通过以大蒜为原料来提取大蒜素，大蒜素的提取方法可以分为三类：水蒸气蒸馏法、溶剂萃取及超临界流体萃取[2-3]，但是采用水蒸气蒸馏得到的提取物中大蒜素含量很低，导致提取物的活性很低。
大蒜蒜酶提取纯化及临床应用研究
维普资讯
临床 医 药 实 践 杂 志 ２ ０ 年 ２月 第 １ 第 ２ ０８ ７卷 期
・８ ・ ３
文章 编 号 ：６ １ １ ７
大 蒜 蒜 酶提 取 纯 化及 临床 应 用研 究 ¨
曹 红 ， 坚 陈
（． 疆 医药大学药学院， 疆 鸟鲁木 齐 １新 新 ８ ０ ５ ；． 河 子 大 学化 学化 工 学 院 ， 疆 石 河子 ３０４２石 新 ８ ２０ ） ３ ０ ３
采 用 考 马 斯 亮 兰 Ｇ一５ ２ ０法 测 定 蛋 白质 浓 度 。结 果 ； 鲜 蒜 中 提 取 纯 化 蒜 酶 ， 粗 酶 浸 提 液 的 最 佳 组 成 为 Ｎ Ｏ， 从 其 ａＨＰ 一 ｚ Ｋ Ｐ ） 缓 冲溶 液 ； 酸 铵 沉 淀 酶 蛋 白 的最 适 饱 和 度 范 围 为 ０ ～ ３ ； 用 超 滤 技 术 脱 盐 ； 酶 最 佳 调 节 等 电 点 为 Ｈ。 （， 硫 ５ 选 蒜 ４９ ． 。在 ｌ 常 用 溶 剂 中 ， 氯 化 钠 的注 射 液 （ 含 葡 萄 糖 ） 蒜 酶 活力 有 显 著 的 激 活 作 用 ， 含 葡 萄 糖 的 注 射 液 则 较 临床 含 不 对 而
一种双水相分离纯化蒜氨酸酶的方法[发明专利]
![一种双水相分离纯化蒜氨酸酶的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/df2a96a7be1e650e53ea9915.png)
专利名称：一种双水相分离纯化蒜氨酸酶的方法专利类型：发明专利
发明人：崔波,姜秀敏,檀琮萍,卢艳敏
申请号：CN201410298149.2
申请日：20140627
公开号：CN104073479A
公开日：
20141001
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于大蒜精深加工领域，特别公开了一种双水相分离纯化蒜氨酸酶的方法。
该方法包括如下步骤：（1）将大蒜鳞茎去皮预冷，加入预冷提取液浸泡，匀浆、离心，弃去蒜渣，上清液即为粗酶液；（2）将硫酸铵、磷酸二氢钠或柠檬酸三钠溶于伯瑞坦-罗宾森缓冲液中，震荡完全溶解后，再加入PEG溶液，震荡混匀，静置分相，得到双水相提取剂；（3）将粗酶液置于双水相提取剂中，震荡后，离心静置分相；（4）对富集蒜氨酸酶的下相超滤，对截留液真空冷冻干燥，得到蒜氨酸酶固体。
本发明操作简单，仪器简单，时间上节约，成本低廉，蒜氨酸酶纯化倍数和酶活回收率都比现有技术高，易于放大规模生产。
申请人：齐鲁工业大学
地址：250353 山东省济南市长清区大学路3501号
国籍：CN
代理机构：济南泉城专利商标事务所
代理人：张贵宾
更多信息请下载全文后查看。
蒜氨酸提取工艺
蒜氨酸提取工艺
蒜氨酸（Alliin）是一种含硫氨基酸，主要存在于大蒜中。
提取蒜氨酸的工艺涉及多个步骤，旨在从大蒜中分离和纯化这种化合物。
以下是一个简化的蒜氨酸提取工艺流程：
1. 原料准备：选择新鲜、无病虫害的大蒜作为原料。
2. 清洗与剥皮：将大蒜清洗干净，去除表面的污物，然后剥去外皮。
3. 切碎或研磨：将剥皮后的大蒜切碎或研磨成泥状，以便于后续的提取过程。
4. 酶解反应：蒜氨酸在大蒜中主要以无活性的前体形式存在，需要通过酶解反应转化为活性形式。
这通常通过添加特定的酶（如蒜氨酸酶）并在适宜的温度和pH条件下进行。
5. 溶剂提取：酶解后，使用适当的溶剂（如乙醇、甲醇等）对蒜氨酸进行提取。
这一步骤可能涉及到多次提取以提高提取效率。
6. 过滤与浓缩：将溶剂提取液过滤以去除固体残渣，然后通过蒸发或其他方法浓缩提取液。
7. 净化与分离：使用色谱技术（如离子交换色谱、凝胶渗透色谱或高效液相色谱）进一步净化和分离蒜氨酸。
8. 结晶或干燥：将净化后的蒜氨酸溶液进行结晶或喷雾干燥，得到蒜氨酸的粉末或晶体。
9. 检测与质量控制：通过光谱分析（如紫外-可见光谱、质谱等）和生化分析方法对提取的蒜氨酸进行定性和定量分析，确保其纯度和活
性。
10. 包装与储存：将提取的蒜氨酸按照适当的规格进行包装，并在适宜的条件下储存以保持其稳定性。
蒜氨酸酶的分离纯化条件分析
蒜氨酸酶的分离纯化条件分析摘要:采用(NH4)2SO4盐析､Sephadex G-200凝胶过滤对蒜氨酸酶进行了部分纯化。
结果表明，蒜氨酸酶的含量和酶活性在(NH4)2SO4为30%~50%时较高，40%时蒜氨酸酶活性最高;经Sephadex G-200凝胶过滤获得的酶液纯化倍数为34.45，回收率为1.72%。
关键词:蒜氨酸酶;大蒜;分离;纯化大蒜(Allium sativum)为百合科葱属､多年生草本植物。
大蒜所具有的独特风味及药用价值主要是由于大蒜能产生一种叫做蒜素(allicin)的物质。
当大蒜受外力作用，如碰伤或切片､捣碎后，原来与蒜氨酸存在于不同部位的蒜氨酸酶得以与之接触，该酶被溶解的微量氧所激活，这样蒜氨酸在蒜氨酸酶的催化作用下，发生酶促生物化学反应，水解生成有刺鼻气味的大蒜素[1]。
蒜氨酸酶(alliinase)又称蒜酶､烷基半胱氨酸亚砜酶。
在完整的细胞内，蒜氨酸酶和底物是分隔存在的，蒜氨酸及其亚砜类化合物存在于细胞溶胶中，而蒜氨酸酶存在于液泡中。
当细胞受伤时，蒜氨酸酶就会和蒜氨酸相遇发生反应，产生丙酮酸､氨以及包括蒜素在内的含硫化合物[2]。
1949年Stoll和Seeback首次从大蒜中分离得到蒜氨酸酶，其后很多人通过用大蒜匀浆离心､硫酸铵分级沉淀､透析､葡聚糖凝胶柱层析等方法分离纯化蒜氨酸酶，并对其性质进行了多方面的研究[3-7]。
目前研究表明，蒜氨酸酶含量不高，对环境较为敏感，活性不稳定，加之目前的生产条件常会导致该酶活性的破坏，使得蒜类产品的药理作用不显著[5]。
本试验对蒜氨酸酶的纯化条件进行摸索，得到了活性较高且相对稳定的酶，为其理化性质的进一步研究奠定基础。
1 材料与方法1.1 材料天津红皮新鲜大蒜。
蒜氨酸酶纯化方法研究进展及影响因素
等 系列含硫 化合 物 ， 形 成 大蒜 辣 素起 重 要作 用 对 研 究 ， 开发利 用 大蒜类 药 品、 健 品有 十分 重 要 的 对 保
意 义。
分 离后新 鲜 大 蒜 的蒜 酶 和 Ｍ ／ Ｄ大蒜 的蒜 酶 的纯 ＶＶ
的蒜 氨酸酶 的分 离纯化 方法 、 性质 、 结构 及功 能进 行 度 ， 结果 表 明， Ｓ ｐ ａｒｌ一０ 经 ｅ ｈ ｃ Ｓ２ ０凝 胶 柱 一 步分 离 的 ｙ
由于研 究者们 选 用 原料 的 品种和 来 源 不 同， 提 液 用 盐析 、 滤、 冻 干 燥 等 方 法提 取 纯 化 蒜 酶 ， Ｄ － 浸 超 冷 Ｓ Ｓ
采 用 ０ ～７ ％ 硫 酸 铵 沉 淀 、 Ａ、 离 子 交换 色谱 ６ ％ ， 酶催 化 裂 解 蒜 氨酸 的 最适 温度 为 ３℃ ， ％ ０ Ｈ 阴 ０ 蒜 ５ 最 法 、 电点聚焦 的纯化 方法得 到 了最 高纯 化倍 数７ ５ 适 ｐ 为 ７ ０ ； 着 温度 的 升 高 ， 等 ． Ｈ ．０ 随 蒜酶 的 稳 定 性 下 倍， 电泳后 的蒜酶 产 率为 ０ ３ ， 终 的 均质 蒜 酶经 ．％ 最 单纯 聚丙烯 酰胺凝 胶 电泳及 Ｓ Ｓ 聚丙烯 酰胺凝 胶 电 Ｄ． 泳测定 ， 电点聚焦分析和 电泳滴定 曲线分 析， 有结 等 所 果 显示通过银染法后得到 １ 条蛋 白带。Ｋ ｅｎｒ等 ｕｔ ｅ ｔ
（ Ｈ ） Ｓ 分 级 沉 淀 、 ｅｈ ｃ ｌ．０ Ｈ 柱 层 析、 Ｎ Ｏ Ｓ ｐ ａｒ Ｓ２ ０ Ｒ ｙ
１ 蒜 氨酸 酶 （ 酶 ） 蒜 的纯 化方 法探究
目前 蒜酶纯 化 主要采用 一 系列 的蛋 白质分 离纯
化技 术 ， 如盐析 ， 亲和色 谱及凝 胶 过滤 等技 术 。基本 步骤 为 ： 鲜蒜 去皮 ， 提 ， 浆 ， 心 ； 上 清 液 ， 浸 匀 离 取 盐
从大蒜中提取蒜氨酸的方法[发明专利]
![从大蒜中提取蒜氨酸的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/062762cf0722192e4436f61c.png)
专利名称：从大蒜中提取蒜氨酸的方法专利类型：发明专利
发明人：邵会吉
申请号：CN200910242303.3
申请日：20091211
公开号：CN102094051A
公开日：
20110615
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本项目在国内首次采用隧道式微波技术灭活蒜氨酸酶，结合多酶反应体降解大蒜当中的蛋白质、果胶、纤维素等粘稠物质，并集成了离子交换等生化分离技术对大蒜中的蒜氨酸进行提取纯化，使蒜氨酸的纯度达96％以上，该技术的应用解决了长期困扰蒜氨酸的分离提取不能在常温常压下进行操作的技术难题，由于上述三项技术的集成使用与本项目试制的集成设备相结合，也有效的解决了蒜氨酸大规模工业化生产问题，对比国外普遍采用的超低温真空破碎分离提取，冷冻干燥等工艺，设备投资小，工艺过程简单，便于人员操作，对生产人员知识和技术要求不高等特点，蒜氨酸可以作为医药原料、食品添加剂，因此以蒜氨酸为主要功效成份可开发出口服药物制剂、药品针剂、药物胶囊以及片剂。
申请人：北京科力斯生物科技有限公司
地址：100085 北京市海淀区上地信息路26号8层817室
国籍：CN
更多信息请下载全文后查看。
蒜氨酸的提取及纯化工艺研究
蒜氨酸的提取及纯化工艺研究一、蒜氨酸：谁说大蒜只能用来下饭？大蒜，咳咳，是我们厨房里的常客，不管是用来炝锅、拌菜，还是涮火锅，几乎每顿饭都能看到它的身影。
可你知道吗？大蒜可不止会调味，它还有一个超级隐秘的身份——那就是蒜氨酸的来源！蒜氨酸是从大蒜里提取出来的一种天然物质，它不仅能增强免疫力，甚至在一些实验中还显示出抗癌的潜力。
听起来是不是很神奇？它就像是大蒜的“隐形超能力”，你我都没太注意到。
那问题来了，既然这么厉害，我们是不是应该把蒜氨酸提取出来，搞清楚它怎么用，怎么提纯？嗯，答案当然是“是”啦！二、蒜氨酸的提取方法：手到擒来？提取蒜氨酸，可不是随随便便就能做到的事儿。
虽然大蒜这东西看着简单，放在菜刀下轻松搞定，但要从它身上“榨”出这么神奇的成分，还得有点技术含量。
蒜氨酸可不止存在于大蒜的表面，它隐藏在大蒜的细胞里，要提取出它，就得先打破大蒜细胞的壁。
怎么做呢？其实就像打破坚硬的外壳，拿锤子砸一下，不对，是通过某些物理方法，比如用超声波、加热，甚至高压，让大蒜细胞裂开。
这样一来，蒜氨酸就能从细胞内流出来，咱们就能收集到它了。
说到提取，大部分人可能第一时间想到的就是溶剂法。
这就像你从大蒜里挤果汁一样，把大蒜切碎后放进溶剂里，溶剂就会把蒜氨酸溶解出来。
等到蒜汁提取完了，你还得把溶剂给除掉，确保蒜氨酸纯净。
可问题也来了，溶剂的选择得小心，不能选那些对人体有害的。
就好比你喝牛奶时，千万别喝到加了化学成分的“牛奶”，这可不是咱们想要的。
三、蒜氨酸的纯化：细致如画提取是第一步，可蒜氨酸的纯化才是大功夫。
提取出来的东西，里面不光有蒜氨酸，还有一大堆杂质。
咱们要把这些杂质给去掉，才能让蒜氨酸焕发光彩。
纯化工作其实就像是在做一道精致的菜肴，得一刀刀细心刮去不需要的部分。
一般来说，纯化的方法也有几种，比如溶剂萃取法、离子交换法、柱层析法等。
这些方法就像不同的厨具，有的像刀，有的像锅，有的像蒸笼，各有各的优点。
选哪个，得看你要得到多纯的蒜氨酸，选合适的工具，才能事半功倍。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
植物学通报 2005, 22 (5): 579￣583Chinese Bulletin of Botany①通讯作者。
Author for correspondence. E-mail: ly433@收稿日期: 2004-01-07 接受日期: 2004-04-19 责任编辑: 崔郁英,于昕新鲜大蒜中蒜氨酸酶的分离纯化及性质李 燕 王 荣 李 冠 苟 萍①(新疆大学生命科学与技术学院 乌鲁木齐 830046)摘要 用葡聚糖凝胶G-200层析柱分离纯化了新鲜大蒜(Allium sativum )中的蒜氨酸酶, SDS-PAGE 结果为单一条带, 分子量为53 kD 在35 ℃下以蒜氨酸为底物, K m 为 0.693 mmol .L －1, V max 为0.353 mmol .min －1, 最适反应温度为30 ℃, 热稳定的温度在50 ℃以下。
Zn 2+对酶有抑制作用, Mn 2+使酶活力增加。
关键词 大蒜, 蒜氨酸酶, 分离纯化, 性质Purification and Properties of Alliinase from Fresh Garlic(Allium sativum )LI Yan WANG Rong LI Guan GOU Ping(College of Life Science and Technology , Xinjiang University , Urumqi 830046)Abstract Alliinase (EC.4.4.1.4) of fresh garlic (Allium sativum ) was purified 14-fold by gel filtration on a SephadexG-200 system. SDS-PAGE revealed a molecular weight of 53 kD, with Km and Vmax values of 0.693 mmol .L －1 and 0.353 mol .L －1, respectively. The optimal temperature for activity was 30 ℃, with stable activity below 50 ℃. The activity was inhibited by Zn 2+ stimulated by0.1 mol Mn 2+.Key words Garlic, Alliinase, Purification, Property大蒜为百合科葱属植物, 有丰富的营养成分和药用价值。
在民间传统医术中常用于治疗传染病, 预防中风和心血管疾病。
医学证明大蒜在杀菌、抗血栓、防治动脉硬化、预治中风和高血压等有显著的疗效, 近年来又发现在防治肿瘤中也有独特的作用(于红霞和赫连玉良, 1995)。
大蒜原产地在新疆, 药用成分含量高, 有广阔的开发利用前景(江苏中医学院,1993)。
已知大蒜中的药用成分主要是含硫化合物, 即蒜氨酸酶(alliinase,EC4.4.1.4)催化蒜氨酸(alliin, 烯丙基硫代半胱氨酸亚砜)生成的大蒜辣素(allicin)及阿霍烯(ajoene)等成分。
目前国内外的大蒜制品多为蒜粉和大蒜提取物, 由于蒜氨酸酶含量及活性低造成这些产品的药理作用及疗效不显著, 因此对蒜氨酸酶的分离纯化及性质的研究是开发应用蒜类药用产品的关键。
本文对生长在新疆吉木萨尔县的新鲜大蒜鳞茎中蒜氨酸酶进行了分离纯化，并对其性质进行了初步研究,为新疆大蒜进一步的开发利用提供理论参考。
58021(5)1 材料和方法1.1 材料生长在新疆吉木萨尔且的新鲜大蒜 (Allium sativum)鳞茎。
1.2 底物20 mmol.L－1蒜氨酸。
1.3 酶活性测定以20 mmol.L－1的蒜氨酸为底物, 用丙酮酸法测定酶活性(王秀奇等, 1999)。
在35 ℃条件下, 每分钟产生1 mmol丙酮酸定义为1个活力单位(U)。
1.0 mL酶液加2.0 mL底物在35 ℃下反应5分钟后, 加3 mL10%三氯乙酸终止反应,吸取2.0 mL反应物与0.5 mL 2,4-二硝基苯肼充分反应后, 加入5 mL 0.5 mol.L－1 NaOH摇匀显色, 用752紫外分光光度计在波长520 nm处测定光吸收(OD)值。
1.4 蛋白质浓度测定蛋白质浓度测定采用Bradford (1976)方法。
1.5 Sephadex G-200柱层析将SephadexG-200(Pharmacia)处理后，装入层析柱 (2.0 cm ×40 cm) (层析试验冷柜(0~10℃)中固定)(张龙翔等, 1982), 用50 mmol.L－1 pH 7.0的Na/K磷酸洗脱缓冲液平衡(参照Nock and Mazelis, 1987方法), 将透析后的酶液上清液适当浓缩后凝胶过滤,洗脱,流速0.5 mL.min－1, 每管收集5 mL, 测定洗脱液中蛋白质含量和蒜氨酸酶活力。
1.6 SDS-聚丙烯酰胺电泳采用12 %的分离胶, 5 %的浓缩胶进行电泳分析。
2 结果2.1 酶的分离纯化称取100 g新鲜大蒜鳞茎, 加入100 mL 4 ℃预冷的Na/K磷酸缓冲液(20 mmol.L－1，pH 7.0 )(参照Nock and Mazelis, 1986方法)。
用组织破碎仪破碎细胞后 4 ℃ 3 000 g离心15 分钟,上清液用25%~75%间隔10%的饱和度硫酸铵沉淀, 4 ℃ 20 000 g离心20 分钟, 测定沉淀中的酶活性。
图1 结果表明, 30%~55%饱和硫酸铵沉淀的酶活性较高。
30%~55%分级沉淀得到的蒜氨酸酶用Na/ K磷酸缓冲液溶解后用含10 %甘油, pH 7.0的蒸馏水透析, 浓缩后酶液上葡聚糖G-200柱(2.0 cm ×40 cm), 用50 mmol.L－1 pH 7.0 Na/K磷酸洗脱液洗脱, 分步收集, 将集中洗脱的蒜氨酸酶测定酶活性。
浓缩后酶液, 经SDS-PAGE凝胶电泳检测, 显示单一条带，分子量为53 kD (图2)。
蒜氨酸酶纯化步骤见表1，由表1可看出新鲜大蒜经硫酸铵沉淀、SephadexG-200柱层析得到纯化的14倍较纯蒜氨酸酶，但其得率不高。
2.2 温度对酶活性及热稳定性的影响将纯化后的酶液和底物在不同温度下保温5 分钟后测定酶活性, 结果表明, 酶的最适反应温度为30 ℃(图3)。
将酶在不同温度下保温30分钟后冷却, 再在30 ℃下测定酶活性, 以保温的酶活性测定为100%, 结果表明酶的热稳定性不好，在50 ℃以下较稳定(图4)。
2.3 米氏常数测定在不同底物浓度下测定酶活性, 用双倒数图1硫酸铵分级沉淀蒜氨酸酶Fig.1 Isolation of alliinase by saturated (NH4)2SO4fraction5812004李燕 等: 新鲜大蒜中蒜氨酸酶的分离纯化及性质作图法(Lineweaver-Burk)作图(图5)表明, 酶的K m =0.693 mmol .L －1, V max = 0.353 mmol .min －1, 回归方程为Y =1.964x +2.8338, r = 0.999。
2.4 金属离子对酶活性的影响将2.0 mmol .L －1的金属离子和酶液1:1混合,使金属离子的终浓度为1 mmol .L －1。
测定酶的活性, 以不加任何金属离子测定为对照。
结果表明: Ca 2+、Co 2+、Cu 2+、Mg 2+和Fe 2+离子对酶活力影响不显著, Zn 2+对酶有抑制作用,Mn 2+能增加酶活力(图6)。
3 讨论新鲜大蒜的提取液经(NH 4)2SO 4沉淀后透析, 再经SephadexG-200层析可分离得到14倍纯化的蒜氨酸酶。
Nock 和Mazelis(1986)以及Krest 和Keusgen(1999)采用羟基磷灰石柱和伴刀豆蛋白A 亲合柱两步层析, 分别得到纯化6倍和11倍的蒜氨酸酶。
我们的方法较之而言简便且纯度高。
本实验从新鲜大蒜中提取的蒜氨酸酶以外消旋蒜氨酸为底物测得图2 蒜氨酸酶SDS-PAGE 电泳图谱1.葡聚糖凝胶层析洗脱液;2.低分子量蛋白标准;3.30%~55% 饱和(NH 4)2SO 4 沉淀的酶蛋白Fig.2 SDS-PAGE of alliinase1.Purified alliinase;2. Low-molecular weight protein marker;3. Dialysate of 30%－55% (NH 4)2SO 4fraction图3 温度对蒜氨酸酶活性的影响Fig.3 Effect of temperture on alliinase activity图4 蒜氨酸酶热稳定性曲线Fig.4Curve thermal stability of alliinase图5 蒜氨酸酶K m 值测定Fig.5 K massay of alliinase58221(5)即蒜酶的最适底物(Stoll and Seebeck,1951), 而我们采用的底物是从新鲜大蒜中提取的外消旋蒜氨酸(S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜)。
此酶最适温度为30 ℃, 比文献报道(Stoll and Seebeck,1947)蒜氨酸酶最适反应温度为37℃低。
通过测定金属离子对蒜氨酸酶活性的影响发现: Z n 2+离子对酶有抑制作用,Mn 2+对酶有一定的激活作用, 而Mazelis 和Crews (1968)以S-烷基-L-半胱氨酸亚砜为底物, 通过乳酸脱氢酶法测定酶活性, 结果认为Fe 2+、Mg 2+、Mn 2+和Co 2+离子能增加酶活性, Cu 2+离子对酶有抑制作用, 这可能是由于底物不同, 活性测定方法不同造成。
蒜氨酸酶极其不稳定, 提取过程中若温度较高,在空气中放置时间长, 均会导致酶活性完全丧失，加入甘油、PVP 和NaCl 等能提高酶的稳定性。
表1 蒜氨酸酶的纯化Table 1 Summary of garlic alliinase purificationVolume Total Total Specific Purification RecoveryFraction(mL)protein activity activity -fold (%)(mg)(mmol)(mmol·mg －1)Homogenate10035706919.3 1.0010030%－55% (NH 4)2SO 4 fraction 20829.427.232.79 1.7023.23Dialysis5068128.842.29 1.8519.08Sephadex G-2001026471.93272.3914.117.39图6 金属离子对蒜氨酸酶活性的影响Fig.6 Effect of cations on the alliinase activity于红霞, 赫连玉良 (1995) 大蒜及其制剂抗癌防病机理的研究进展. 卫生研究, 6: 365-358王秀奇, 秦淑媛, 高天慧, 颜卉君 (1999) 基础生物化学实验. 高等教育出版社, 北京, pp. 219-222江苏中医学院 (1993) 中药大辞典. 上海科学出版社, 上海， pp. 110-115张龙翔, 张庭芳, 李令媛 (1982) 生化实验方法和技术.人民教育出版社, 北京, pp. 123-132Bradford M (1976) A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utiliz-参 考 文 献ing the principle of protein-dye binging. Analytical Biochemistry , 72: 248-254Kazaryan RA, Goryzchenkova (1978) Alliinase: purifi-cation and characterization. Biochemistry English Translation , 43: 1502-1508Krest I, Keusgen M (1999) Quality of herbal remedies from Allium sativum : differences between alliinase from garlic powder and fresh garlic. Planta Medica , 2: 139-143Mazelis M, Crews L (1968) Purification of Alliin LyaseV max =0.353 µmol .min －1, K m =0.693 µmol .L －1, 与Kazaryan 和Goryzchenkova(1978)曾测得该酶K m 为0.5 µmol .L －1结果不一致, 原因可能是由于他们使用天然的(+)-S-烷基-L-半胱氨酸亚砜,583 2004李燕等: 新鲜大蒜中蒜氨酸酶的分离纯化及性质of Garlic, Allium Sativum L. Biochemistry, 108: 725-730Nock LP, Mazelis M (1986) The C-S lyases of higher plant: preparation and properties of homogeneous al-liin lyase from garlic. Archives of Biochemistry and Biophysics, 249: 27-33Nock LP, Mazelis M (1987) The C-S lyases of higher plants-direct comparison of the physical properties of homogeneous alliin lyase of garlic (Allium Sativum)and anion (Allium Cepa). Plant Physiology, 85: 1079-1083Stoll A, Seebeck E (1947) The decomposition of alliinase and the properties of alliinase. Helvetica Chimica Acta, 32: 197-205Stoll A, Seebeck E (1951) Chemical investigations of alliin, the specific principle of garlic. Advances in Enzymology,Ⅶ: 377-400拟南芥学术研讨会2005Workshop on Arabidopsis Research 2005为促进我国拟南芥科研人员的交流与合作, 第四届“拟南芥学术研讨会/Workshop on Arabidopsis Research 2005”定于2005年11月30日在北京举行。