金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A、简称SPA)

金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A、简称SPA)

SPA是细胞壁抗原的主要成分，几乎90%以上的菌株均含有这种成分，但不同的菌株含量差别十分悬殊。SPA占整个细胞壁蛋白成分的6.7%，通过胞壁肽聚糖以共价键与之结合。其它葡萄球菌如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌不含SPA。

该的重组金黄色葡萄球菌蛋白A是大肠杆菌生产的基因工程产品，具有极高Fc段结合活性,性能稳定，易于纯化等优点。重组蛋白A还可与多种报告分子（荧光染料、酶标记、生物素、胶体金、放射性标记等）偶联并不影响其与抗体结合的活性。这些偶联反应可用于组织化学、Western杂交、ELISA试验等的抗体检测。另外，重组蛋白A还可固定于固体支持物上用于单克隆抗体或多克隆抗体的纯化。

SPA的免疫学性质(见表1. 对Protein A和Protein G的相对结合强度)

金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)能与人及多种哺乳动物血清IgG分子中的Fc片段结合，结合的亲和性次序依次是猪、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛；对大白鼠、绵羊的亲和力差；对马、犊牛、山羊等无亲和力；对所有的鱼类、两栖类、爬行类、鸟类（除少数例外）均不能与之结合。鸡的IgG必须与相应的抗原形成复合物才能与SPA结合，原因可能是Ag－Ab复合物改变了IgG的Fc片段的构象。SPA与IgG结合的亚类主要是IgG1、IgG2和IgG4。 SPA除与IgG结合外，还能与血清中少量的IgM和IgA结合，SPA菌对各类免疫球蛋白的吸附率：IgG为90%～98%，IgM为2%～30%，IgA为1.5%～20%。出现共沉反应的SPA与IgG必须有两个结合部位，它们分别在Fc和Fab段上,缺一虽能与SPA结合，但不出现共沉反应，这种Fab的参与并非SPA－抗体反应。现已研究表明，IgG与SPA的结合部位是CH2和CH3的交界处。

SPA的理化性质

SPA是一种蛋白质,由亮、缬、脯、丙、苏、甘、丝、谷丙、天门冬及赖氨酸等十种氨基酸组成。由于不含有胱氨酸及半胱氨酸，所以无二硫键。紫外光谱和吸收系数为A275nm %=1.65，等电点为pH5.1。SPA十分稳定，用4mol/L尿素、硫氰盐酸、6mol/L的盐酸胍和pH2.5的酸性条件，以及加热煮沸均不影响其活性。其分子量因测定方法不同而有所差异

SPA的生物学特性

1．免疫原性与过敏原性 SPA做为免疫原能刺激免疫活性细胞合成Ig，又能与其相应抗体的Fab 段结合呈现抗原抗体的特异性反应。SPA－IgG注射家兔皮下可引起Arthus样反应，还可引起豚鼠的迟发性超敏反应。SPA体外试验，能刺激豚鼠离体回肠收缩。

2．抗吞噬作用由于IgG的Fc段结合点既是lgG调理活性结合点，又是SPA反应点。因此，SPA 可与吞噬细胞竞争，结果抑制了多形核白细胞的吞噬作用，也可能是SPA阻断调理素与吞噬细胞作用的结果。

3．固定补体 SPA－IgG和免疫复合物一样可以固定人和某些动物(如豚鼠、猪、狗等)血清中的补体，主要是通过补体传统激活途径。

4．促有丝分裂因子 SPA是一种B细胞激活剂，固相SPA作用明显，并不需要T细胞辅助,可容性SPA作用微弱，必须有T细胞参与。5．去封闭作用固相SPA能部分去除肿瘤病人和带瘤动物血清中的封闭活性，从而降低了血清对淋巴细胞介导的细胞毒的封闭作用。

SPA的应用

SPA应用很广，但所有应用的原理都离不开SPA具有与IgG的Fc段的结合能力，主要应用方面如下：

1．SPA菌的协同凝集作用

用已知的标准血清，吸附到SPA菌的表面,使之成为吸附抗体的载体,再以此去诊断相应的未知抗原而产生肉眼可见的凝集颗粒,诊断的抗原可以是颗粒性的,也可以是可溶性的。此种凝集相当于反向间接血凝,但省去间接血凝中的抗体纯化,红血球鞣化等复杂手续,而只需要 SPA菌体及粗制免疫血清即可。所以此法简单、快速,特异性敏感性均较满意。目前已用于许多细胞和病毒的检测及分型。协同凝集只适用于检测抗原，未见应用于检测抗体的报道。

2．作为广谱第二抗体用SPA代替抗体IgG的第二抗体，有如下优点：①SPA制备容易，性质稳定，易纯化，对人和多种哺乳动物的IgG都能应用,不受种属限制。而第二抗体的制备比较麻烦，且需多次免疫动物，在应用上要受同种属的限制；②SPA的结合力强，相当于游离抗体与抗原的结合力，对人和兔的亲和常数均为103 L/克分子，结合后对IgG的活性无影响。无论在0℃、37℃、44℃及56℃几乎均能立即结合而无需长时间的孵育，因此可以缩短试验时间，第二抗体在较长的孵育中，出现抗原分解的问题也可以得到解决；③SPA容易标上125 I、荧光素、辣根过氧化物酶、铁蛋白等，因此可与多种技术相结合；④在检查细胞上的病毒抗原时，第二抗体往往特异性不强，会非特异性地与细胞膜上的Fc受体结合。SPA分子高度均一，它不是免疫球蛋白，不受Fc受体影响，所以有较高的抗IgG特异性；⑤用第二抗体做免疫沉淀试验时，必须将抗免疫球蛋白的浓度调整至等价，才能产生最佳的沉淀作用。而用SPA菌沉淀，不受此限制，能保证彻底的沉淀；⑥SPA与lgG结合是可逆的，用4mol/L尿素、4mol/L硫氰酸、盐酸(pH2.5)或鸟嘌呤盐酸盐等都可以使之重新解离。

3．用于提取纯化IgG 利用SPA与IgG的结合特性提取IgG，比常规采用硫酸铵、Sephadex柱，DEAE柱或免疫梯度离心等法要简便得多，而且纯度好。

4．检测和提纯IgM IgM在病毒的早期诊断中具有重要意义，为了检测特异性IgM抗体，必须首先在血清中除去IgG。采用SPA菌吸附IgG是目前快速而又理想的办法，利用此法也为IgM的提纯开辟了道路。

5．其它方面用于免疫复合物的检测、体外激活补体功能试验、细胞表面标记以及肿瘤表面抗原的检测等。

表1. 对Protein A和Protein G的相对结合强度

++++ =强结合，++ =中等结合，- =弱或不结

物种物种 亚类亚类 protein A protein G 结合结合 结合结合 人 lgA 可变 - lgD - - lgD - - lgG1 ++++ ++++ lgG2 ++++ ++++ lgG3 - ++++ lgG4 ++++ ++++ lgM 可变 - 鸡蛋黄 lgY - - 牛 ++ ++++ 狗 ++ + 山羊 - ++ 豚鼠 lgG1 +++ ++ lgG2 +++ ++ 仓鼠 + ++ 马 ++ ++++ 考拉 - + 骆驼 - + 猴(恒河) ++++ ++++ 小鼠 lgG1 + ++++ lgG2a ++++ ++++ lgG2b +++ +++ lgG3 ++ +++ lgM 可变 - 猪 +++ +++ 兔 ++++ +++ 大鼠 lgG1 - + lgG2a - ++++ lgG2b - ++ lgG3 - ++ 绵羊

+/-

++

Staphylococcal Protein A

————重组金黄色葡萄球菌A 蛋白

货号

产品名称 规格 备注

Cat ：SA40011mg Cat ：SA400110mg Cat ：SA4001重组金黄色葡萄球菌A 蛋白

100mg

磷酸盐缓冲液，冻干粉，

贮存条件：

低温运输，4℃或-20℃贮存，有效期3年。 生产日期：见包装