超敏反应性疾病及其免疫检测

II 型超敏反应
靶细胞：正常组织细胞、改变的自身组织细 胞、修饰的自身组织细胞 抗原：同种异型抗原、共同抗原、变性自身 抗原、外来抗原 抗体：IgG和IgM类抗体 参与细胞损伤的物质：补体 、吞噬细胞、NK 细胞
变应原
Type II Hypersensitivity Reactions: Examples of Diseases
III 型超敏反应
临床常见的III型超敏反应性疾病
Arthus反应及类Arthus反应 (局部免疫复合物病)
血清病（serum sickness）
链球菌感染后肾小球肾炎
类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis）
系统性红斑狼疮（SLE）等
RA 患者手指关节实质性损伤
III型超敏反应免疫学检测项目
• Ⅱ型超敏反应 (细胞溶解型或细胞毒型)
• Ⅲ型超敏反应 (免疫复合物型或血管炎型)
• Ⅳ型超敏反应 (迟发型超敏反应)
Ⅰ型超敏反应
特点：
1.发生快，恢复快； 2.常引起生理功能紊乱，一般无组织损伤； 3.由IgE介导，肥大细胞和嗜碱性粒细胞参与 4.有明显的个体差异和遗传背景。
Ⅰ型超敏反应
• 一.参与Ⅰ型超敏反应的成分
临床意义
间接Coombs试验用于检测患者游离血清中的不完 全抗体。此实验多用于检测母体Rh（D）抗体，以便及 早发现和避免新生儿溶血症的发生，亦可对红细胞不相 容的输血所产生的血型抗体进行检测。
III 型超敏反应
定义：
III型超敏反应是指由可溶性免疫复合物沉积于 局部或全身多处毛细血管基底膜，通过激活补体, 并在血小板、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞等的参 与下，引起的以充血水肿、局部坏死和中性粒细 胞浸润为主要特征的炎症反应和组织损伤。
接触性皮炎
Ⅳ型超敏反应免疫学检测
过敏原皮肤试验
1.斑贴试验--寻找变应原 2.结核菌素试验
Ⅳ型超敏反应免疫学检测
临床应用
1）寻找变应原：斑贴试验主要用于寻找接触性 皮炎变应原。 2）结核菌素皮试目的：①了解机体是否对结核 杆菌有免疫力；②接种卡介苗后的免疫效果观察； ③排除结核杆菌感染；④了解机体细胞免疫功能 状况。 3）传染病的诊断
结果分析
反应格局及判断标准
100%的红细胞沉在微管的底部 +/- 100%的红细胞沉在微管的下端1/3之内 1+ 80%的红细胞沉在微管的下端2/3之内 2+ 80%的红细胞沉在微管的上端2/3之内 3+ 80%的红细胞沉在微管的上端1/3之内 4+ 凝集的细胞全部处于微管的顶部 d.p. 双群 Hemo. 溶血
超敏反应/变态反应
Hypersensitivity/Allergy
定义：机体接触到某种抗原并且致敏后，再次受到 相同抗原刺激时，出现生理功能紊乱或组织细胞损 伤的异常适应性免疫应答。 变应原(Allergen):引起超敏反应的抗原
超敏反应分为四型
（依发生机制和临床特点）：
• Ⅰ型超敏反应 (速发型超敏反应)
定义：
II型超敏反应又称细胞毒型（cytotoxic type） 或细胞溶解型（cytolytic type）超敏反应，它 是由靶细胞表面的抗原与相应IgG或IgM类抗体结 合后，在补体、巨噬细胞和NK细胞参与下，引起 的以细胞溶解或组织损伤为主的病理性免疫反应。
II 型超敏反应
特点： • 1. 直接或间接与细胞有关 • 2. IgG 或 IgM 介导 • 3. 补体、吞噬细胞、NK细胞参与 • 4. 造成细胞溶解或功能紊乱
操作步骤
稀释好的洗液将检测条要充分浸透，放在摇床上摇10分钟
倒掉洗液，加入稀释好的测试者血清，放于摇床室温反应1.5小时 倒掉小槽中的血清，依次加入洗液，震荡10分钟，重复三次
每槽加入碱性磷酸酶标记的抗人IgE，放于摇床上室温反应30分钟
将碱性磷酸酶标记的抗人IgE倒掉，用洗液洗三次，每次10分钟 加入碱性磷酸酶底物，放于摇床，避光反应约10分钟 去掉底物溶液，用纯水洗三次，每次5分钟 将检测条放在干燥纸上，等检测条完全干燥后判定检测结果
间接Coombs试验
患者血清
靶红细胞 致敏红细胞
Coombs试剂
检测血清中的抗红细胞抗体
微柱法操作步骤
撕开微柱凝胶卡密封纸，标记
加1%筛选红细胞50μl及受检者血清25μl 37℃孵育15min 离心机离心10min，1000r/min 观察结果，如红细胞悬浮在反应管顶部或凝胶中，则为阳 性结果；反之，如红细胞沉于凝胶底部（管底尖部），则为 阴性结果。
（一）过敏性休克 药物过敏性休克 血清过敏性休克 （二）呼吸道过敏反应 过敏性鼻炎(枯草热)、支气管哮喘 （三）消化道过敏反应 （四）皮肤过敏反应 荨麻疹、湿疹、血管神经性水肿。
荨麻疹
湿ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
疹
结膜炎
哮喘病
I型超敏反应免疫学检测项目
皮肤试验
实验原理：
变应原
皮肤挑刺、划痕
致敏者皮肤
Ag+IgE （M、B)
结果分析
生理盐水对照不应发生凝集，为均匀浑浊的乳状液。 在红细胞悬液中，如红细胞凝集成片状，边缘皱褶如花 边状或边缘松散为阳性。如与对照相同，为阴性。
临床意义
直接Coombs试验用于检测患者红细胞上不完全抗体， Coombs试验阳性可见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素 综合征、药物诱发的免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫性 溶血病、某些高球蛋白血症患者，如系统性红斑狼疮、类风 湿、恶性肿瘤等。
假阴性原因
Ⅰ型超敏反应
临床意义
• 寻找变应原 • 预防药物或疫苗过敏
应用评价
• 过敏原有限 • 食物过敏与皮肤试验相关性较差 • 选择过敏原应结合实际情况
Ⅰ型超敏反应
• 血清总IgE检测
常用方法：免疫比浊法 临床实验室常用 化学发光免疫法 酶联免疫吸附法---适用于中小实验室 临床意义：升高见于Ⅰ型超敏反应性疾病， 寄生虫感染， IgE型多发性骨髓瘤 应用评价：应建立当地人群IgE水平的参考区间
I 型超敏反应发生的机制
组织胺(histamine) 预先存在的介质 （脱颗粒）
趋化因子
激肽原酶 蛋白水解酶 白三烯（Leucotrienes，LTs）
即 刻 早 期 \ 晚 期
新合成的介质
前列腺素（PGD2） 血小板活化因子 （Platelet activity factor，PAF）
Ⅰ型超敏反应的常见疾病
输血反应（transfusion reaction） 新生儿溶血（hemolytic of the newborn） 自身免疫性溶血性贫血（autoimmune hemolytic anemia） 药物过敏性血细胞减少 甲状腺机能亢进（Graves disease） 链球菌感染后肾小球肾炎
甲状腺机能亢进(Grave’s病)
PEG比浊法实验原理
本试验是检测抗原非特异性循环免疫复合物的一种方
法。PEG是环氧乙烷和水的多聚物，为一种不带电荷的直
链大分子多糖。终浓度为3%～4%的PEG能相对选择性地
沉淀CIC。用分光光度计测定浊度，反应沉淀物含量。
临床意义
循环免疫复合物（Circulationimmunecomplex，CIC）又称可溶 性免疫复合物，分子量为50万～100万，沉降系数8.8～19S，它不易被 吞噬细胞吞噬，又不能经肾小球排出，可较长时间在血液中循环，一 旦大量循环免疫复合物沉积于组织中，则引起组织损伤及相关的免疫 复合物病。 CIC阳性常见于： 1. 部分自身免疫性疾病，如SLE，类风湿关节炎等； 2. 膜增殖性肾炎，链球菌感染后肾炎； 3. 传染病，如慢性乙型肝炎，疟疾，麻风等； 4. 恶性肿瘤。
• • • •
III 型超敏反应
免疫复合物易于形成与沉积的因素
1.抗原成分在体内长期滞留
2.血管通透性增强 3.组织的解剖学及血流动力学
免疫复合物易沉积于静脉压较高及形成涡流的毛细血管迂回处， 如肾小球基底膜及关节滑膜、肝、脾、血管等部位。
4.免疫复合物的性质
中等大小，可溶性免疫复合物 组织内沉积。
结果分析
通过显色区带确定血清中含有哪种sIgE，进而判断 待检者对哪种过敏原过敏。
临床意义
slgE测定是体外检测变应原的重要手段，主要用于Ⅰ 型超敏反应的诊断。该检测条包被有多种特异性过敏原，通 过检测血浆（血清）中过敏原slgE，筛查待检者对何种过敏
原过敏，为临床进行脱敏治疗奠定基础。
II 型超敏反应
GRAVES DISEASE
•
BEFORE AND AFTER RX
5
II型超敏反应免疫学检测项目
直接Coombs试验
＋
患者红细胞 Coombs试剂
检测红细胞上不完全抗体
试管法操作步骤
用生理盐水配5%红细胞悬液
取洁净小试管2支，1管加1滴5%红细胞悬液，另一管加生理盐 水作对照
在生理盐水和5%红细胞悬液中分别加入诊断试剂一滴，使其 混匀，室温稍待片刻 1000r离心1 min或3000r离心15s。 取出试管先以肉眼观察有无溶血，再轻轻摇动试管，如有凝集， 则为阳性结果；如无凝集，应在室温延长15~30 min的反应时 间，再离心看结果。
药物过敏性血细胞减少
Blood cell antigen
Antibody to drug
complement Adsorbed drug or Drug metabolite
Lysis
III 型超敏反应
特点： 1. 形成中等大小（106 Da）、可溶性（19s）复 合物（IC)， IC沉积在血管基底膜上 2. IgG,IgM 或 IgA介导 3. 补体、中性粒细胞参与 4. 造成血管及周围组织炎症
IV 型超敏反应
• 主要以T细胞介导-- CD4＋Th1(主要)和 CD8＋CTL细胞 • 以单个核细胞浸润为主的炎症反应； • 迟发，常在再次接触抗原后24－72小时发 生
IV 型超敏反应
临床常见迟发型超敏反应疾病
1、传染性迟发型超敏反应性疾病：如结 核、麻风及某些原虫感染等。 2、接触性皮炎
皮内注射
20-30m局部皮肤出 现红晕、红斑、风团
释放生物活性介质
阳性
皮肤试验
皮内试验方法
皮肤消毒→变应原提取液注入前臂内侧皮内（0.010.02ml）→2-3mm的皮丘→两种间距2.2-5.0cm →15-25分钟观察结果 阴性对照--生理盐水 阳性对照--盐酸组胺
皮肤试验
假阳性原因
• • • • • • • • 变应原稀释液偏酸或偏碱 患者有皮肤划痕症 抗原不纯和被污染 抗原量注射过多 变应原抗原性丧失或浓度过低 患者皮肤反应较低 受试者正使用抗组胺类药或激素类药 注射部位过深或注射量太少
Ⅰ型超敏反应
• 特异性IgE检测（sIgE）
• 放射变应原吸附试验 • 免疫印迹测定法
斑点酶免疫印迹法实验原理
用 NC 膜作为固相支持物，检测区的不同区域包被有特 异性的过敏原。检测时将稀释的病人血清加入反应槽内， 血清中的 sIgE 与 NC 膜上的相应过敏原结合，再加入酶标记 的抗人IgE抗体，此抗体会与检测区NC膜上的sIgE结合，然 后加入底物显色。通过显色区带确定血清中含有哪种 sIgE ，进而判断待检者对哪种过敏原过敏。
思考题
• 1、Ⅰ型超敏反应的发生机制 • 2、新生儿溶血症发生的机制是什么？
• (一)变应原
• • • •
真菌的孢子等
★ 药物或化学物质 --- 青霉素、磺胺等 ★ 吸入性变应原 --- 花粉、屋尘(尘螨、皮屑、 ★ 食物变应原 --- 鱼、虾、肉、蛋、牛奶等 ★ 接触性变应原---工业产品及合成物
Ⅰ型超敏反应
(二)抗体 IgE (三)细胞 肥大细胞和嗜碱性粒细胞 IgE Fc受体 嗜酸性粒细胞