简单实用的核蛋白提取方法
植物核蛋白提取(蛋白组实验,质谱适用)
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邮箱：bestbio@ 电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如 果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
产品说明书
植物核蛋白提取试剂盒
（蛋白质组学实验适用）
货号：BB-319906
V1.7.0
试剂盒储存条件： 2-8℃保存。
开盖后组份按要求条件保存。
试剂盒组成：
产品组成
BB-319906-1
BB-319906-2
组份编号
规格
50 assays
100 assays
试剂 A：植物核蛋白提取液 A
100ml
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邮箱：bestbio@ 电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在 1 小时内完成，而且绝少 交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法较低。酶法提取制备的蛋白，回收率稍有提高，蛋白纯 度高，保持天然活性，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的 提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒（相关产品 BB-319910）。 请根据实际需要选择试剂盒。
产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3104 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3126 BB-3105 BB-3702 BB-3181 BB-3183 BB-3187
核蛋白提取试剂盒说明书
核蛋白提取试剂盒说明书货号：R0050规格：50T/100T 产品内容：保存：核/浆蛋白抽提试剂2-8℃保存，PMSF 于-20℃保存。
产品简介：本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。
整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。
得到的蛋白可以用于Western blot 等实验。
本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。
然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约2×106个Hela 细胞或40mg 组织）。
操作方法（仅供参考）：*裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
一、对于体外培养细胞：1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM 。
PMSF 需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT 至终浓度0.5mM 。
2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS 洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA 消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。
500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
3．对于悬浮细胞：用PBS 洗一遍，500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4．每20μL 细胞沉淀加入200μL 浆蛋白抽提试剂（2×106个细胞沉淀的体积约20μL 或40mg ）。
5．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。
细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。
6．冰浴10分钟。
7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃12000～16000g 离心10分钟。
8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE 、Western 等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。
蛋白-细胞核蛋白提取方法
提取细胞核蛋白的步骤：1.向培养细胞的平皿中加入少量（保证在1.5ml TUBE内能放下）冷PBS(或1*D-Hanks)2.，用细胞刮刀尽可能多的刮下细胞，收集到1.5ml的离心管中。
在预冷的离心机中，４度，1000rcf，1－3分钟，沉降细胞。
为尽可能多的获得细胞，可将一次离心后的上清再重复刮细胞一次；2. 将细胞重悬于cell lysis buffer中（加入体积106细胞/200uL，体积估计方法还是没确定,should be sufficient; 一般就是一个10cm平皿加1ml cell lysis buffer）,添加蛋白酶抑制剂；先破细胞膜，得到细胞核（没有用B DOUNCE）；冰上放置（不震荡，可偶尔用枪轻吹）30分钟至1小时（此时核膜没有破，有核染色为证），充分裂解；cell lysis buffer：5mM PIPES pH 8.0 85mM KCL, 0.5% NP40, 1% protein inhibitor;3. ４度，1000rcf，20分钟，上清为胞质蛋白（蛋白浓度比较低，如需要检测，建议先浓缩一下），沉淀为细胞核；此时可以将沉淀冻存于－70℃；4. 将沉淀重悬于100-200 ul nucleai lysis buffer（体积视目的蛋白表达丰度而定，一般50-100ul）中，添加蛋白酶抑制剂，冰上放置30分钟至1小时（每5分钟震荡一次），充分裂解；可以观察到沉淀慢慢消失，溶液变澄清；nucleai lysis buffer：成分同SDS lysis buffer；50mM Tris-Cl pH 8.1, 10mM EDTA, 1% SDS, 1% protein inhibitor;5. 四度，最大转速离心，10分钟以上（尽可能沉淀完全），上清即为细胞核蛋白；。
核与胞质蛋白提取方法
细胞质与细胞核蛋白提取方法
注意：红色斜体字成分可用蛋白酶抑制剂混合物代替，使用前加入
方法如下：
1.将细胞收集到EP管中，离心（4000r/min，5min，4度)。
2.用PBS洗三次，离心同上，弃上清。
3.加入100微升缓冲液A，冰上孵育10min，离心（14000r/min，1min），弃上清。
4.将沉淀重悬于60微升缓冲液B中，混匀，冰上30min，离心（14000r/min，15min，0度),收集上清，弃沉淀。
（核蛋白提取后可用裂解液A透析2h，合并用于IP；或用其他溶液稀释后用浓缩离心管替换溶液后用于IP或其他实验）
裂解液A的作用主要用于释放胞浆蛋白和膜蛋白，裂解液B用于释放核蛋白，NP-40既是一种表面活性剂又是一种去垢剂，它的作用是既可破坏细胞膜（较温和），又可结合释出的蛋白防止沉淀，所以通过第一步离心去上清后大部分胞浆蛋白和膜蛋白可去掉。
细胞核蛋白提取技巧
细胞核蛋白提取技巧1. 选择合适的细胞裂解液：细胞裂解液的选择对于细胞核蛋白的提取至关重要。
通常使用含有低浓度盐、洗涤剂和蛋白酶抑制剂的缓冲液。
一些常用的细胞裂解液包括 RIPA 缓冲液、NP-40 缓冲液等。
根据不同的细胞类型和实验需求，可以尝试不同的细胞裂解液。
2. 控制裂解条件：在细胞裂解过程中，需要控制适当的条件，以确保细胞核的完整性。
避免过度裂解，以免破坏细胞核结构。
可以通过调整裂解液的组成、裂解时间和温度等参数来优化裂解条件。
3. 使用适当的离心方法：离心是分离细胞核和细胞质的常用方法。
在细胞核蛋白提取过程中，可以使用低速离心去除细胞碎片和细胞质，然后使用高速离心沉淀细胞核。
选择合适的离心速度和时间，以确保细胞核的沉淀和细胞质的去除。
4. 添加核蛋白提取试剂：为了提高细胞核蛋白的提取效率，可以添加一些核蛋白提取试剂。
这些试剂可以帮助溶解细胞核膜和核内蛋白质，从而提高提取产量和质量。
常用的核蛋白提取试剂包括 SDS、NaCl 等。
5. 注意蛋白酶抑制剂的使用：在细胞核蛋白提取过程中，蛋白酶的活性可能会导致蛋白质的降解。
为了保护细胞核蛋白的完整性，需要添加适当的蛋白酶抑制剂。
常用的蛋白酶抑制剂包括 PMSF、AEBSF 等。
6. 控制温度和时间：在细胞核蛋白提取过程中，温度和时间的控制也很重要。
避免高温和长时间处理，以免引起蛋白质的变性和降解。
通常，细胞核蛋白提取可以在 4°C 下进行，以保持蛋白质的稳定性。
7. 离心清洗：在细胞核蛋白提取后，为了去除残留的杂质和洗涤剂，可以进行离心清洗步骤。
使用适当的缓冲液进行离心清洗，以确保细胞核蛋白的纯度。
8. 储存和保存：提取的细胞核蛋白应尽快进行下游分析。
如果需要储存，应将细胞核蛋白保存在适当的缓冲液中，并在-80°C 或更低温度下保存。
避免反复冻融，以免影响蛋白质的稳定性。
以上是一些细胞核蛋白提取的技巧。
在实际操作中，需要根据具体的实验需求和细胞类型进行适当的调整和优化。
细胞核蛋白提取技巧
细胞核蛋白提取技巧
细胞核蛋白提取是一项重要的实验技术，用于研究细胞内的核蛋白结构和功能。
以下是一种常用的细胞核蛋白提取技巧：
1.细胞培养和收获：首先，将所需细胞培养至适当的密度，
并在培养基中加入适当的培养条件。
接下来，使用适当的
方法（例如离心或胶原酶消化）将细胞收获。
2.细胞裂解：将收获的细胞用适当的细胞裂解缓冲液（例如
低盐缓冲液）裂解。
可以通过机械方法（如均质器或声波
处理器）或化学方法（如洗涤剂或酶）来裂解细胞。
3.细胞核分离：通过离心，将裂解的细胞分为上清液和沉淀。
上清液中含有细胞质蛋白，而沉淀中主要包含细胞核。
4.细胞核裂解：将细胞核沉淀用适当的细胞核裂解缓冲液
（例如高盐缓冲液）进行裂解。
同样，可以使用机械或化
学方法来裂解细胞核。
5.清除细胞核残渣：通过离心等方法，去除裂解细胞核残渣，
以获得纯净的细胞核蛋白上清液。
6.蛋白浓缩：将获得的细胞核蛋白上清液进行浓缩，以获得
足够的蛋白量。
常用的方法包括酒精沉淀、有机溶剂沉淀、离心滤膜等。
7.蛋白质定量：使用合适的蛋白质定量方法（如Lowry法、
Bradford法或BCA法）对细胞核蛋白进行定量。
8.蛋白存储：将浓缩的细胞核蛋白分装并冻存于-80°C的冰
箱中，以备后续实验使用。
以上是一种常用的细胞核蛋白提取技巧，具体的实验流程和步骤会因实验目的和细胞类型的不同而略有差异。
015-细胞核蛋白提取
细胞核蛋白分离提取方法
1．将培养皿内的培养基倒去，用预冷的1xPBS洗两遍后，每盘加入
2.5ml1xPBS，放在冰上；
2．用细胞刮讲细胞刮下，移至15ml离心管，再用2.5ml1xPBS清洗培养皿一次，共5ml；
3．1500g离心5min，倒去上清，移入1.5ml离心管中，再每管加入800ul1xPBS清洗一次；
4．每管加入低渗bufferA（1M HEPES,1M KCL,100mMEDTA,100mM EGTA）（buffer：蛋白酶抑制剂：1M DTT=1000:10:1）200ul（原500ul）,冰上静置15min裂解；
5．每管加入25ul 10%NP-40，涡旋10s；
6．1500g4℃离心10min，上清为细胞质蛋白，收集至新的离心管中；
7．每管加入500ul bufferA清洗沉淀，离心速度约2000g；
8．每管加入RIPA buffer（buffer：蛋白酶抑制剂：1M DTT=1000:10:1）50ul，吹散沉淀颗粒，4℃震荡15min，其间每隔5min重新吹散一次，使其充分裂解；
9．14000rpm4℃离心15min，上清为细胞核蛋白，收集至新离心管中。
胞质蛋白或核蛋白提取方法
胞质蛋白或核蛋白提取方法实验目的从细胞和动物组织制备核蛋白和胞浆蛋白。
实验试剂核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒。
实验步骤（一）细胞蛋白提取（1）取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3 min，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
（2）用冷PBS洗涤细胞2次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
（3）每20 μL冷的Buffer A，2 μL蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15 s，置冰上10 min。
（4）再次高速涡旋振荡5 s，然后在4℃，16000×g条件下离心5 min。
（5）快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
（6）在沉淀中加入200 μL冷的Buffer B，2 μL蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15 s。
（7）置冰上40 min，每隔10 min高速涡旋振荡15 s。
（8）在4℃，16000×g条件下离心10 min。
（9）快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
（二）组织蛋白提取（1）取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），置冰上5 min，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
（2）在4℃，500×g条件下离心2-3 min，弃上清。
（3）按照细胞蛋白的提取方法的第三步骤往下操作即可。
（4）上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
注意事项（1）实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。
（2）整个过程须保持样品处于低温状态。
核蛋白提取方法
核蛋白提取方法
以下是 8 条关于核蛋白提取方法的内容：
1. 嘿，你知道吗？核蛋白提取就像是一场精细的寻宝游戏！比如说，你要从一堆复杂的细胞混合物中准确找到那个珍贵的核蛋白。
想象一下，拿着小工具一点点去探索、挖掘，那可真是个挑战呢！
2. 哇塞，核蛋白提取可得小心谨慎呀！就如同在小心翼翼地构建一座精美的城堡，稍有不慎可能就全塌了。
就像那次我和小伙伴一起做实验，一点小疏忽，哎呀，前功尽弃啦！
3. 核蛋白提取这事儿啊，真不是随随便便就能搞定的！这就好比登山，爬得越高越难，但到达山顶看到的风景也越美呀！当成功提取出核蛋白的那一刻，那种成就感，简直无与伦比！
4. 嘿呀，核蛋白提取可不能马虎哦！这简直跟解一道超级复杂的谜题一样，每一个步骤都要仔细思考。
有次我们做到一半才发现之前有个地方弄错了，这不是让人哭笑不得嘛！
5. 核蛋白提取啊，就像是在茫茫大海中寻找那根特定的针！困难重重但又让人充满斗志。
我曾经看到别人做成功后开心的样子，哇，我也发誓一定要搞定！
6. 啊哟喂，核蛋白提取这工作可不容易啊！它就像一场激烈的比赛，和那些复杂因素竞争。
有次朋友在提取时遇到难题，那着急上火的样子，我现在都还记得呢！
7. 核蛋白提取呀，这可是个技术活！好比雕琢一件艺术品，得精心打磨每一个细节。
我们一起做实验时都会互相提醒，生怕出一点纰漏呢！
8. 核蛋白提取绝对不是轻松的事儿，但只要掌握方法，也就没那么难啦！就像划船过河，一开始觉得很难，等熟练了就能轻松到达对岸啦。
所以，大家别害怕，大胆去尝试呀！
我的观点结论：核蛋白提取虽然有难度，但只要我们认真对待，仔细钻研，就一定能够成功提取出核蛋白！。
酵母核蛋白提取方法
核蛋白提取试剂盒
BB-3102
膜蛋白提取试剂盒
BB-3103
Bradford 蛋白定量试剂盒
BB-3411
BCA 蛋白定量试剂盒
BB-3401
ECL 化学发光检测试剂盒
BB-3501
蛋白 Marker
BB-3721
细胞蛋白提取试剂盒
BB-3121
细菌膜蛋白提取试剂盒
BB-3151
组织蛋白提取试剂盒
BB-3122
BB-3703
植物总蛋白提取试剂盒
BB-3124
细菌蛋白提取试剂盒
BB-3123
植物膜蛋白提取试剂盒
BB-3152
酵母蛋白提取试剂盒
BB-3125
蛋白酶抑制剂混合物
BB-3301
磷酸化蛋白提取试剂盒
BB-3105
磷酸酶抑制剂混合物
BB-3311
SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒
BB-3702
SDS-PAGE 上样 Buffer
14. 在 4℃，16000×g 条件下离心 10 分钟。 15. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母核蛋白。 16. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。 相关产品盒
BB-3101
磷酸化蛋白富集试剂盒
BB-3108
储存条件： 蛋白提取液 2-8℃保存； 蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期： 一年。
产品简介： 贝博酵母核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母中提取核蛋白。提取过
程简单方便。制备的核蛋白纯度高，保持天然活性，绝少交叉污染。提取的蛋白可用于 Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
核蛋白提取以及凝胶阻滞
提取核蛋白方法:1 称取适量材料(约10克)于25毫升研磨缓冲液A中研磨至匀浆, 六层纱布过滤,2300g离心10分钟,弃上清.注意: 过滤得时候不要用手挤压.让它自然流出即可.2用重旋缓冲液B (1.5毫升)重旋,加入260微升饱和硫酸铵,于4度轻摇30分钟,(可以将离心管放在冰盒里,然后把冰盒放在摇床里摇,转速设置为100转每分钟即可)312000g离心10分钟,取上清至一新管,加入3倍体积的饱和硫酸铵,冰上放置1小时,每隔20分钟颠倒混匀一次, 这时可以看见一些絮状的蛋白漂浮在管中.412000g 离心,去上清,沉淀用1ml重旋缓冲液C重旋.取20微升蛋白电泳观察.考染后可以看到一片蛋白带,各种大小都有.5将蛋白过夜透析,透析液为蛋白-DNA结合缓冲液D6将透析后的蛋白分装,液氮速冻后零下70度保存.研磨缓冲液ATris-Cl(pH7.8) 50mMMgCl2 5mMKCl 15mM蔗糖0.3MEDTA 0.1mMDTT 1mMPMSF 0.5mM重旋缓冲液BHEPES-KOH (PH 8.0) 20mM甘油25%(体积比)EDTA 0.4mMPMSF 0.5mMDTT 1mM重旋缓冲液CHEPES-KOH (PH 8.0) 20mM甘油25%(体积比)EDTA 0.4mMPMSF 0.5mMDTT 1mMNaCl 0.1MDNA-蛋白结合缓冲液DTris-Cl ph7.8 10mMNaCl 50mMDTT 0.5mMEDTA 1mM甘油5%体积比注意:上述缓冲液后面的浓度均为工作浓度,可以配置合适浓度的母液,在配置的时候加入母液即可.EMSA1 片段的标记在感兴趣的片段两端设计含有合适酶切位点的引物,用高保真酶进行扩增,将PCR产物沉淀后酶切,然后回收.利用末端补平酶进行补平.进行标记.反应体系如下10* BUFFER 1DNA Fragment 210mMdA/T/GTP 1P32-dCTP 4Klenow Fragment o.5水 1.5其他物质先加好,然后加同位素,最后加酶.37度标记一个小时.2 做蛋白和DNA结合结合体系为20微升标记的启动子片段5微升蛋白5微升Poly dI-dC 2微升xxxxxxxx 8微升25度反应1小时根据不同的实验需要,可以设置不同的XXXXXXX1 全部加水只检测二者之间的结合2 加未标记的启动子片断,可以检测结合的特异性3 如果你标记的片断比较长,比如是500bp,那么可以把这500分成5个100,然后分别加入不同反应体系,根据结合的抑制情况,可以分析结合的具体位点.跑胶制作非变性聚丙烯酰胺凝胶,根据片断大小设置合适的浓度,跑胶.跑完之后铺一层滤纸,小心揭下,晾干,压片.(这个飞哥肯定比我熟练,呵呵).第二天洗片子,观察结果.此外,张老师没有给我订购Poly dI-Dc,我用的鳜精DNA替代,效果不好,非特异性结合很多,你们最好订购.我的实验结果没有扫描,就和你们说一下,就是下面有一条比较淡的DNA条带,上面有一条很粗大的结合滞后带,其他的没有了.。
细胞和动物组织核蛋白的提取方法
细胞和动物组织核蛋白的提取方法产品组成 310001 310002规格 50 assays 100 assaysBuffer A (Cytoplasmic Extraction Reagent) 10ml 20mlBuffer B (Nuclear Extraction Reagent) 10ml 20ml蛋白酶抑制剂混合物 250ul 500ul使用方法：A．细胞蛋白提取1. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的Buffer A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上10分钟。
4. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，16000×g条件下离心5分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
6. 在沉淀中加入200μl冷的Buffer B，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒。
7. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
8. 在4℃，16000×g条件下离心10分钟。
9. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
B．组织蛋白提取1. 取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，弃上清。
3. 按照细胞蛋白的提取方法的第3步骤往下操作即可。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
注意事项：1. 实验过程中的所有BestBio-贝博生物试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。
2. 整个过程须保持样品处于低温状态。
储存条件：-20℃保存。
有效期：一年。
蛋白提取系列最后一节：核蛋白提取
蛋白提取系列最后一节：核蛋白提取不知不觉年算是过完了，这次离开家不知下次归期又是何时，每每羡慕本地人家，可以随时随地回家，可以不用太长时间的奔波，可以在父母身边。
回家，一说起来就让人很开心，虽然回家这星期特别忙碌，但是心情却是无比放松，挨家挨户的串亲戚，哥哥，婶婶，姐姐，姐夫，东奔西跑的认长辈，舅舅，舅妈，大爷，大娘，觥筹交错的瞎聊天，来来往往，热热闹闹，甚是开心。
一年不见，小侄子竟会跑了，去年见还是抱在怀里，不顺心就哇哇地哭，小侄女要上一年级了，还会背英语了，大侄女都要上初中了，好像会打扮自己了。
现在小孩子都坐满一桌了，正如我们小时候，四五个哥哥姐姐在前面跑着玩，五六岁的我在后面开心的跟着，刚会跑的妹妹在后面喊着，姐，等等我，啪唧，又摔了一跤。
正如我们小时候，一大院子的人打牌，2定主，升级，拱猪，争上游，你应该先出3，xx拿错牌了，还是xx打的好。
正如我们小时候，初中以后学习压力还是来了。
正如我们小时候，那时候所有的家人都还在。
仿佛看到了当时的父母，是不是也像我们现在一样年轻，是不是也在努力拼搏，为我们撑起一片天，是不是也曾想过多陪陪自己的父母。
以后的自己不知道能不能做到像父母一样那么优秀，但是一定会多回家陪陪父母，父母在，人生尚有来处。
提蛋白的系列到现在就差不多结束了核蛋白的提取也如之前一样，自己配制和试剂盒提取都有提及。
•A液：5mM PIPES pH 8.0，85mM KCL，0.5%NP40，1%cocktail•B液：50mM Tris-Cl pH 8.1，10mM EDTA，1% SDS，1% cocktail细胞样品•1.如提取总蛋白一样，弃去培养基，在培养皿中加入1ml冷的PBS，洗三次，再加入PBS。
•2.用细胞刮尽可能刮下细胞，收集到1.5mlEP管中。
预冷离心机，4℃，1,000g，离心4分钟（为尽可能多的获得细胞，可将离心后的上清再重复刮细胞一次）。
•3.弃掉上清，将细胞重悬于A液中（加入的体积按10^6/200ul，10cm dish加1ml）。
植物核蛋白提取方法
植物核蛋白提取方法植物核蛋白提取方法植物核蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成规格植物核提取液A 植物核提取液B 蛋白酶抑制剂混合物说明书BB-3154-1 50 assays 25ml 10ml 250ul 一份BB-3154-2 100 assays50ml 20ml 500ul 一份储存条件：蛋白提取液，磷酸酶抑制剂2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期：一年。
产品简介：贝博植物核蛋白提取试剂盒提供配套试剂，适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白。
提取过程简单方便，可在1小时内完成。
制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。
提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
使用方法：1. 提取液制备：每500ul预冷的.核蛋白提取液A和200ul提取液B中分别加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg植物组织样本剪碎，采用以下一种方法处理：i. 加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器匀浆。
ii. 置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μl冷的提取液 A。
iii. 加入500ul提取液A直接置冰上研磨。
3. 高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，100×g力条件下离心1分钟。
4. 收集上清，弃沉淀。
5. 将上清在4℃，800×g力条件下离心1分钟。
6. 弃上清，收集沉淀。
7. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。
8. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
9. 在4℃，16000×g条件下离心10分钟。
10. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
①②11. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
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核蛋白提取
核蛋白提取实验准备：1 4℃离心机2 根据标本数计算所需I，II，III，IV总体积，取出液体，并加入蛋白酶抑制剂，（III由加蛋白酶抑制剂I与加蛋白酶抑制剂II混合物）实验操作：1 收集细胞。
10ml 对照细胞（1-2*105/ml ）培养48h后，15ml 离心管收集，300g（1370 rpm）* 5min。
弃上清，加1ml 1*PBS轻轻涡旋混匀后转移至1.5ml EP管。
2 4℃，300g * 5min，弃上清。
3 重悬细胞于120μl缓冲液I。
4 重悬细胞于120μl缓冲液II，4℃轻微旋转混匀，15min。
5 4℃ 2500 rpm * 1min。
6 转移上清（胞浆蛋白）至新管。
7 在沉淀中缓慢加120μl缓冲液III，轻微颠倒混匀，离心：4℃，2500 rpm * 1min。
8 弃上清，加130μl缓冲液IV（+蛋白酶抑制剂），4℃旋转混匀1h。
9 离心4℃，13000g * 10 min。
10 转移上清（核蛋白）至一新管，定量。
核提取缓冲液I（15ml）25mM HEPES 375μl HEPES5mM KCl 75μl 1M KCl0.5mM MgCl2 7.5μl 1M MgCl2DDH2O 14.54 ml核提取缓冲液II（15ml）25mM HEPES 375μl HEPES5mM KCl 75μl 1M KCl0.5mM MgCl2 7.5μl 1M MgCl21% NP-40 150μl NP-40DDH2O 14.39 ml核提取缓冲液III（15ml）25mM HEPES 250μl HEPES10% Sucrose 1g Sucrose350mM NaCl 700μl 5M NaCl0.01% NP40 1μl NP-40DDH2O 9.1 ml5M NaCl：14.61g/50 ml H2O注：1在提取浆蛋白后，吸去上清时，如第一次用100μl枪洗不干净，再离心，然后用10μl枪吸尽液体。