肠道杆菌实验
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培养基成分：基础培养基营养物 乳糖 伊红、美兰：抑菌；酸性条件下结合染色
菌种：大肠杆菌 伤寒杆菌
E. Coli EMB
伤寒杆菌 大肠杆菌
EMB 平板
无色菌落 深紫色，带金属光泽
E. Coli SS
S.S 琼脂平板
无色菌落 红色菌落
4.肠道杆菌在鉴别培养基上的生化现象观察---双糖含铁培养基（Double Sugar Iron Agar）
上层 (固体)
观察内容
乳糖发酵 试验
H2S试验
大肠杆菌 痢疾杆菌 伤寒杆菌
+
-
-
-
-
-
乙型副伤 寒杆菌
-
+
下层
葡萄糖发
+
+
+
+
(半固体) 酵试验
动力实验
+
-
+
+
大肠杆菌
伤寒杆菌
痢疾杆菌 乙型副伤寒杆菌
5.药敏试验（纸片法）
▪ 原理：在有抗生素的培养基中，抗生素能够抑制细 菌生长或者杀灭细菌。
▪ 方法：纸片法——定性（了解对那种抗生素敏感） 试管法——定量
▪ 培养基成分：
▪ 上层：蛋白胨、氯化钠、
乳糖、硫酸亚铁、硫代硫
酸钠、琼脂和酚红指示剂.
固体斜面培养基划线接种
▪ 下层：蛋白胨、氯化钠、 葡萄糖、琼脂和酚红指示 剂. 半固体培养基，穿刺
接种。
观察内容： ➢ 上层颜色 ➢上下层交界颜色 ➢下层颜色 ➢下层气泡/气柱 ➢下层接种线
肠道杆菌的生化反应
培养基
液体培养基连续稀释法测定药物的MIC MIC:指能抑制微生物生长所需的最低浓度。
48 清
16 32 64 128 256 ug/ml 混
抗生素倍比稀释，种菌105CFU/ml，16-20h，判读结 果
金黄色葡 萄球菌
青霉素 链霉素
How to do?
抑菌环 （抑菌圈）1.平板划分为两部分，分别用于涂大
肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
2.用无菌棉签吸取两种细菌分别涂于 相应位置。注意不要交叉。
大肠杆菌
3.用镊子夹起含青霉素和链霉素的纸 片分别放于图中所示位置。注意 不要挪动药片。
4.在 37’C孵育 24h.
5.观察/测量抑菌圈的直径大小。
6.根据表格判断细菌的药敏情况—— 耐药或敏感。
药物 青霉素
大肠杆菌
注意: 不要打开培养皿!!!
实验四 肠道杆菌
实验目的：
➢ 了解常见肠道杆菌的生物学特性及分离鉴定程序. ➢ 掌握肠道杆菌在选择、鉴别培养基上生长/选择/鉴
别的原理和现象 . ➢ 掌握药敏试验的原理的方法
实验内容
➢ 肠道杆菌的生物学特性、致病与检测（录像）. ➢ 肠道杆菌的分离鉴定程序介绍. ➢ 肠道杆菌在选择/鉴别培养基上生长现象观察. ➢ 药敏试验（纸片法）.
生化反应最终鉴定 药敏试验
EMBபைடு நூலகம்
3.肠道杆菌在选择培养基上的菌落观察：
（1）S.S琼脂平板（ Salmonella & Shigella agar plate）
培养基成分：基础培养基营养物
乳糖
红黄
中性红（酸碱指示剂—pH6.8-8.0，）
煌绿、胆盐、枸橼酸钠等：抑菌
菌种：大肠杆菌 伤寒杆菌
（2）EMB（Eosin-methylene blue agar plate）
1.肠道杆菌的生物学特性、致病与检测（录像） 2.肠道杆菌的分离鉴定程序介绍：
粪便
临
床
症
状
增 血液、尿液、 菌
脑脊液
接种选择培养基（中国兰、ss琼 脂平板、伊红美兰平板…）
挑选无色菌落
接种鉴别培养基（双 糖含铁培养基）
乳糖发酵试验可以用来初步鉴别肠道致病 菌还是非致病菌：能发酵乳糖产酸的为非 致病菌；不能发酵乳糖的为致病菌。
抑菌圈直径 （mm）
敏感度
葡萄球菌
抑菌圈直径 （mm）
敏感度
链霉素
实验报告内容 1、S.S、伊红美蓝培养基上菌落观察结果。 2、双糖铁培养基生化反应观察结果。 3、细菌药物敏感试验结果
THANKS
菌种：大肠杆菌 伤寒杆菌
E. Coli EMB
伤寒杆菌 大肠杆菌
EMB 平板
无色菌落 深紫色，带金属光泽
E. Coli SS
S.S 琼脂平板
无色菌落 红色菌落
4.肠道杆菌在鉴别培养基上的生化现象观察---双糖含铁培养基（Double Sugar Iron Agar）
上层 (固体)
观察内容
乳糖发酵 试验
H2S试验
大肠杆菌 痢疾杆菌 伤寒杆菌
+
-
-
-
-
-
乙型副伤 寒杆菌
-
+
下层
葡萄糖发
+
+
+
+
(半固体) 酵试验
动力实验
+
-
+
+
大肠杆菌
伤寒杆菌
痢疾杆菌 乙型副伤寒杆菌
5.药敏试验（纸片法）
▪ 原理：在有抗生素的培养基中，抗生素能够抑制细 菌生长或者杀灭细菌。
▪ 方法：纸片法——定性（了解对那种抗生素敏感） 试管法——定量
▪ 培养基成分：
▪ 上层：蛋白胨、氯化钠、
乳糖、硫酸亚铁、硫代硫
酸钠、琼脂和酚红指示剂.
固体斜面培养基划线接种
▪ 下层：蛋白胨、氯化钠、 葡萄糖、琼脂和酚红指示 剂. 半固体培养基，穿刺
接种。
观察内容： ➢ 上层颜色 ➢上下层交界颜色 ➢下层颜色 ➢下层气泡/气柱 ➢下层接种线
肠道杆菌的生化反应
培养基
液体培养基连续稀释法测定药物的MIC MIC:指能抑制微生物生长所需的最低浓度。
48 清
16 32 64 128 256 ug/ml 混
抗生素倍比稀释，种菌105CFU/ml，16-20h，判读结 果
金黄色葡 萄球菌
青霉素 链霉素
How to do?
抑菌环 （抑菌圈）1.平板划分为两部分，分别用于涂大
肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
2.用无菌棉签吸取两种细菌分别涂于 相应位置。注意不要交叉。
大肠杆菌
3.用镊子夹起含青霉素和链霉素的纸 片分别放于图中所示位置。注意 不要挪动药片。
4.在 37’C孵育 24h.
5.观察/测量抑菌圈的直径大小。
6.根据表格判断细菌的药敏情况—— 耐药或敏感。
药物 青霉素
大肠杆菌
注意: 不要打开培养皿!!!
实验四 肠道杆菌
实验目的：
➢ 了解常见肠道杆菌的生物学特性及分离鉴定程序. ➢ 掌握肠道杆菌在选择、鉴别培养基上生长/选择/鉴
别的原理和现象 . ➢ 掌握药敏试验的原理的方法
实验内容
➢ 肠道杆菌的生物学特性、致病与检测（录像）. ➢ 肠道杆菌的分离鉴定程序介绍. ➢ 肠道杆菌在选择/鉴别培养基上生长现象观察. ➢ 药敏试验（纸片法）.
生化反应最终鉴定 药敏试验
EMBபைடு நூலகம்
3.肠道杆菌在选择培养基上的菌落观察：
（1）S.S琼脂平板（ Salmonella & Shigella agar plate）
培养基成分：基础培养基营养物
乳糖
红黄
中性红（酸碱指示剂—pH6.8-8.0，）
煌绿、胆盐、枸橼酸钠等：抑菌
菌种：大肠杆菌 伤寒杆菌
（2）EMB（Eosin-methylene blue agar plate）
1.肠道杆菌的生物学特性、致病与检测（录像） 2.肠道杆菌的分离鉴定程序介绍：
粪便
临
床
症
状
增 血液、尿液、 菌
脑脊液
接种选择培养基（中国兰、ss琼 脂平板、伊红美兰平板…）
挑选无色菌落
接种鉴别培养基（双 糖含铁培养基）
乳糖发酵试验可以用来初步鉴别肠道致病 菌还是非致病菌：能发酵乳糖产酸的为非 致病菌；不能发酵乳糖的为致病菌。
抑菌圈直径 （mm）
敏感度
葡萄球菌
抑菌圈直径 （mm）
敏感度
链霉素
实验报告内容 1、S.S、伊红美蓝培养基上菌落观察结果。 2、双糖铁培养基生化反应观察结果。 3、细菌药物敏感试验结果
THANKS