微生物实习--_肠杆菌科_1_

兽医微生物学实习

-- 肠杆菌科（ Enterobacteriaceae ）

肠杆菌科的细菌为革兰氏阴性、中等大小的杆菌，运动者周身鞭毛；在普通培养基上生长好；发酵葡萄糖和碳水化合物者产酸或产酸产气；在麦康凯琼脂上生长；细胞色素氧化酶阴性；还原硝酸盐为亚硝酸盐等。碳水化合物的利用和其它生化试验是肠杆菌科细菌鉴定的重要试验。

大肠埃希氏菌（E.coli ）简称大肠杆菌，作为原发和继发病原可引起多种动物疾病：犊牛的肠道感染和水泻；幼猪的水泻和腹泻，二月龄以上猪的出血性肠炎和水肿病；狗的尿道感染；鸡的气囊炎和大肠杆菌肉芽肿

（ Coligranuloma ）。

沙门氏菌（Salmonella ），虽然沙门氏菌血清型超过 2200 个，但承认的种为数不多，在 O 抗原的基础上，沙门氏菌血清组（群）用字母 A 、 B 、C …表示，然后根据它的 H 抗原（鞭毛抗原）再分，用阿拉伯数字 1 、 2 、3 …等表示，沙门氏菌可引起多种动物和人的疾病，是肠杆菌科重要的致病菌，如鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimurium ）可引起动物流产，胃肠炎和败血症。

其它肠杆菌科成员：肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae ）可引起牛乳房炎、肺炎、母马的宫颈炎和子宫炎，这个菌常形成厚的荚膜。变形杆菌（proteus ）引起动物的尿道和胃肠道疾病。耶尔森氏菌（yersinia ）引起鼠疫、胃肠炎等。

生化试验和血清群的鉴定和定型在肠杆菌科细菌的鉴定中占很重要的位置。

一、目的要求

1 ．了解大肠杆菌、变形杆菌、产气肠杆菌和沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性；

2 ．熟悉大肠杆菌、变形杆菌、产气肠杆菌和沙门氏菌常规微生物学诊断法；

3 ．掌握大肠杆菌、变形杆菌、产气肠杆菌和沙门氏菌生化试验的方法和原理；

4 ．熟悉大肠杆菌、变形杆菌、产气肠杆菌和沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现；

二、实验材料

每 6 人一组，每组所需材料：

1 ．菌种：大肠杆菌和沙门氏菌混合菌液；产气肠杆菌和变形杆菌混合菌液

2 ．半固体、S.S平板、麦康凯平板、三糖铁高层斜面、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水

3 ．生化管：葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、枸椽酸盐发酵试验管

4 ．各种生化试验试剂：吲哚试剂， M ． R 试剂， V ． P 试剂

三、操作程序（实验前 24 小时进行预接种）

第一天：配培养基：

1、普通肉汤：牛肉膏10g 蛋白胨20g 氯化钠10g 磷酸氢二钾2g 蒸馏水2000ml 加热溶解，调PH7.4－7.6，过滤

半固体：普通肉汤200ml+1g琼脂粉，煮沸溶解，分装短试管40根，高压

2、麦康凯培养基：52g麦康凯琼脂+1000ml蒸馏水+2g琼脂粉，煮沸溶解，高压浇平板

3、S．S培养基：50g S.S琼脂+1000ml蒸馏水煮沸溶化浇平板，无需高压

4、三糖铁琼脂：30.5g三糖铁琼脂+500ml蒸馏水，煮沸溶化，装40根长试管，高压，斜面

5、蛋白胨水：蛋白胨2g 氯化钠1g 蒸馏水200ml，加热后调PH

为7.6，再煮沸加热30分钟，过滤，分装短试管40根2－3ml/管

6、葡萄糖蛋白胨水：蛋白胨2.5g 葡萄糖2.5g 磷酸氢二钾2.5g 水500ml 加热后调PH为7.6，再煮沸加热30分钟，过滤，分装短试管40根5－6ml/管

第二天接种

在S.S、麦康凯平板上接种待检材料（大肠杆菌、沙门氏菌混合菌液；产气肠杆菌、变形杆菌混合菌液）

第三天观察结果，接种三糖铁

观察麦康凯、S.S平板上细菌生长情况．可看到几种菌落，是否圆形光滑凸起透明的菌落，挑取单个的细小透明菌落或者红色菌落的一半作革兰氏染色，镜检，另一半菌落接种三糖铁培养基（接种时，先涂

布斜面，后穿刺底层）、接种蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水

第四天观察结果，做生化试验

观察细菌在三糖铁琼脂斜面 / 底部的生长情况，是否产酸产气，培养基是否变红。

每人一份微量发酵管，挑取三糖铁斜面上的细菌分别接种半固体、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素及枸椽酸盐培养基， 37℃培养24小时，观察结果，记录。

第五天看生化结果判定

本实验中大肠杆菌与沙门氏菌的区别

本实验中大肠杆菌与沙门氏菌的区别

肠杆菌科细菌检验程序示意图

四、要求回答的问题

•比较大肠杆菌与沙门氏菌形态、染色特征以及在普通肉汤和普通琼脂培养基上的生长表现。•大肠杆菌与沙门氏菌主要生化性质有哪些不同？

•对本试验中的几种生化实验的原理？

•血清型的分群和定型在肠杆菌科细菌鉴定上有何重要性？

•大肠杆菌与沙门氏菌在三糖铁琼脂斜面与底部生长表现有何不同？简述原理。

五、实验菌种的描述