Atlantis 色谱柱
Waters高效液相色谱柱简单介绍与选择
Waters高效液相色谱柱简单介绍与选择2016-04-25 Bruce Lee生产高效液相色谱柱的厂家有很多，如Waters，Agilent，Phenomenex，Shimadzu，Thermo等，每家供应商又生产多个系列，导致市场上的液相色谱柱的可选择性极强。
目前实验室以及公司，企业使用最多的是Waters以及Agilent所生产的RP液相色谱柱。
Waters主要有Symmetry，Sunfire，XTerra，XBridge，XSelect，CORTECS以及Atlantis系列等，其详细分类以及键合相如下。
Figure 1 Waters Symmetry column familyFigure 2 Waters Sunfire column familySymmetry与Sunfire系列色谱柱使用高纯度硅胶（B型）作为固定相基质，摒除金属离子杂质对固定相Si-O键的促进水解作用，此外由于金属离子含量特别低，在对其表面键合选择性烃基或内嵌极性官能团烃基时，可通过配体添加量控制硅胶表面键合相的多少，因此其最大特点在于批次之间的重现性。
两个系列均采用封端技术，Sunfire C8与C18表面载碳量分别为12%和16%；SymmetryC8与C18载碳量均为12%，因此两个系列的C8色谱柱对于分析物的保留能力上没有本质的区别，而Sunfire C18色谱柱则相比Symmetry C18色谱柱，对于非极性比较大的分析物具有更强一些的保留能力，当然对于有机相的最低比例也相对比较高一些。
Symmetry C8 Prep与C18 Prep色谱柱的填料粒径为7 um，其设计用途为制备；Symmetry300 C18（孔径300埃，载碳量8.5%）与Symmetry300 C4（孔径300埃，载碳量2.8%）则是为生物大分子多肽以及蛋白质的分离，分析而设计。
Symmetry Shield RP 18内嵌极性官能团色谱柱，由于在靠近硅胶表面的极性官能团的存在，增加了硅胶表面的水分子浓度，改善了与水之间的浸润状况;因此可以允许使用极高水相作为分离，分析条件，而不会出现孔隙内去湿现象，对于分析碱性等大极性分析物而言，减少其保留能力，改善峰形，具有很高的方法重现性。
生活饮用水呋喃丹、草甘膦、灭草松和2,4-D标准检验方法——液相色谱质谱法 及编制说明
生活饮用水呋喃丹、草甘膦、灭草松和2,4-D标准检验方法——液相色谱质谱法1范围本方法规定了用水样直接过滤膜后，用液相色谱分离，质谱检测生活饮用水及其水源水中呋喃丹、草甘膦、灭草松和2，4－D四种农药含量的测定。
本方法适用于生活饮用水及其水源水中呋喃丹、草甘膦、灭草松和2，4－D四种农药的测定。
本方法最低检测质量浓度分别是：呋喃丹0.10ng/mL；草甘膦0.04µg/mL；灭草松0.10ng/mL和2，4－D 0.40ng/mL。
在选定的分析条件下，干扰物质被液相色谱分离，再加上质谱的选择质量离子，其他物质不干扰测定。
2原理水样直接过0.22µm滤膜，用液相色谱分离，用保留时间和质谱的选择质量离子进行定性定量分析。
3 试剂3.1农药标样呋喃丹、草甘膦和灭草松（固体）。
取10.0mg标样草甘膦定容10mL, 得草甘膦储备液1.0 mg/mL；取20.0mg标样呋喃丹定容50mL, 得呋喃丹储备液0.4 mg/mL；灭草松2.37mg 定容10mL,得灭草松储备液237µg/mL；2，4-D标准溶液（100mg/L）直接由计量院标物中心购得。
3.2 乙腈：色谱纯。
3.3 超纯水：电阻率大于18.2MΩ。
4 仪器高效液相色谱质谱仪，所配置的质谱是三重四极杆串联质谱。
5 分析步骤5.1 色谱质谱条件5.1.1 质谱条件（该条件仅作参考，需要根据各个不同型号仪器的不同进行适当调整和设置）电喷雾三重四极杆串联质谱呋喃丹：正离子ESI ，离子源温度：500℃，离子喷雾电压：5000V草甘膦、灭草松和2，4－D：负离子ESI。
离子源温度：500℃，离子喷雾电压：－4500V 采集方式：MRM，具体的离子对和所设定的去簇电压(DP)和碰撞能量（CE）见表1表1 MS/MS检测化合物DP (V) 1.MRM CE (V) 2.MRM CE (V)呋喃丹43 221.1/165.2 18 221.1/123.1 31草甘膦-31 167.9/149.8 -15 167.9/62.8 -34灭草松-50 239.0/132.0 -37 239.0/175.0 -292,4-D -27 219.0/160.8 -22 219.0/124.9 -355.1.2 色谱条件（该条件仅作参考，根据各个不同型号仪器的不同进行适当调整和设置）色谱柱：Atlantis C182.1mm×50 mm，粒经5µm，或者相当性能的色谱柱；流速：0.6mL/min；进样量：20µL。
液相色谱-串联质谱法同时检测糕点中31种食品添加剂
液相色谱-串联质谱法同时检测糕点中31种食品添加剂郑娟梅，莫紫梅，王警，陈宁周，王海波*（广西-东盟食品检验检测中心，南宁 530022）摘要：建立糕点中31种食品添加剂的液相色谱-串联质谱分析方法。
样品经70%甲醇振荡提取15min，WAX固相萃取柱净化，在电喷雾电离模式下采用多反应监测模式进行测定。
结果表明，31种添加剂在各自质量浓度范围内线性良好，线性相关系数大于0.992。
空白样品在2.0、4.0、8.0mg/kg添加水平下的平均回收率在71.3%～103.1%之间，相对标准偏差为0.49%～7.62%。
将该方法应用于市售样品的检测，方法简便、快速、灵敏，可作为糕点食品中添加剂的快速筛查。
关键词：食品添加剂；糕点；液相色谱-串联四极杆质谱；同时检测中图分类号：O657.7+2/TS202.3 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2021）04-0070-11doi：10.19804/j.issn1006-2513.2021.04.012Simultaneous determination of 31 food additives in pastries with liquid performance chromatography-tandem mass spectrometry ZHENG Juan-mei，MO Zi-mei，WANG Jing，CHEN Ning-zhou，WANG Hai-bo*（Guangxi-ASEAN Center for Food Control，Nanning 530022）Abstract：A liquid chromatography-tandem mass spectrometry（HPLC-MS/MS）method for the analysis of31 food additives in pastries was developed. Samples were extracted by 70% methanol oscillation for 10 min，then purified with WAX，Mass spectral data were acquired in electro spray ion（ESI）mode using multiple reaction monitoring（MRM）scan function. Results showed that an excellent linear relationship in their respective concentration ranges was observed for all the analytes with a correlation coefficient larger than 0.992. The average recoveries of blank samples at the levels of 2.0，4.0 and 8.0 mg/kg were between71.3% and 103.1%，with relative standard deviation between 0.49% and 7.62%. The method is simple，rapid and sensitive，and can be used for quick screening of additives in pastries.Key words：food additives；pastry；high performance liquid；chromatography-tandem mass spectrometry；simultaneous detection收稿日期：2020-11-16基金项目：广西-东盟食品药品安全检验检测中心2019科研项目（KY201904）。
3-HPLC 色谱柱介绍
色谱柱使用保养知识
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内容
色谱柱应用基础 HPLC色谱柱介绍
色谱柱使用保知识
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高效液相色谱柱简介
色谱柱是一根填满填料的管子
柱管的材料(塑料,玻璃,不锈钢…)和尺寸(内径,长短)不尽相同
Waters HPLC色谱柱
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Waters 色谱柱发展历史
ACQUITY UPLC® BEH Amide ACQUITY UPLC® BEH Glycan XBridge Amide XSelect HSS HPLC Columns ACQUITY UPLC® HSS Cyano & PFP columns XSelectTM HSS Cyano & PFP columns XP 2.5 µm Columns
管内的填料更是种类繁多,主要分为三大类 – 硅胶基质 – 聚合物基质 – 无机和有机硅胶杂化基质 色谱柱的性能主要取决于填料的性质和填充技术
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硅胶颗粒的形状
不规则形状 (Irregular)
– 大硅胶颗粒研磨，筛分
– 不粒尺寸和表面积限制
有机基质 (高聚物)
杂化颗粒技术(具硅-碳键机制)
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第一代杂化颗粒的合成过程
Waters 专利技术 荣获2000年全球 R&D 100 大奖
硅甲基嵌入型聚乙氧基 硅烷 (MPEOS)
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QuEChERS-超高效液相色谱-质谱联用法测定酱卤肉中5种罂粟壳生物碱
QuEChERS-超高效液相色谱-质谱联用法测定酱卤肉中5种罂粟壳生物碱吴义春，孙丽*，苏晶，刘洋，吴旭，邢海艳（淮安市食品药品检验所，淮安 223001）摘要：目的：建立QuEChERS-超高效液相色谱-质谱联用法，测定酱卤肉中的吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱、那可丁5种生物碱含量。
方法酱卤肉经QuEChERS法处理后，选择Waters Atlantis HILIC色谱柱，以10mmol/L甲酸铵溶液（含0.1%甲酸）和乙腈（含0.1%甲酸）作为流动相，以多反应监测（MRM）扫描模式检测，吗啡和可待因以内标法定量，蒂巴因、罂粟碱、那可丁以外标法定量。
结果：吗啡和可待因的线性范围为1.0～100ng/mL，罂粟碱、蒂巴因和那可丁的线性范围为0.2～20ng/mL。
5种生物碱的平均回收率为69.2%～113.8%，相对标准偏差（RSD）为1.0%～7.8%。
结论：该方法准确、快速、简单，适用于酱卤肉中罂粟壳生物碱的检测。
关键词：QuEChERS ；超高效液相色谱-质谱联用法；酱卤肉；罂粟壳生物碱中图分类号：TS251.6+1/TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2021）04-0103-04doi：10.19804/j.issn1006-2513.2021.04.017Determination of 5 kinds of Poppy husk alkaloids in sauced meat products by QuEChERS-ultra performance liquid chromatographymass spectrometryWU Yi-chun，SUN Li*，SU Jing，LIU Yang，WU Xu，XING Hai-yan（Huaian Institute for Food and Drug Control，Huaian 223001）Abstract：Objective：To establish a method for the determination of morphine，codeine，thebaine，papaverine and narcotine in sauced meat products by QuEChERS-ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry.Methods：After the sample was processed by QuEChERS method，the Waters Atlantis HILIC column was selected，and 10mmol/L ammonium formate solution（containing 0.1% formic acid）and acetonitrile（containing 0.1% formic acid）were used as mobile phases for gradient elution. Then，the detection was carried out in the multiple selection reaction monitoring（MRM）scanning mode，morphine and codeine were quantified by internal standard method，and thebaine，papaverine，and narcotine were quantified by external standard method. Results：The linear range of morphine and codeine was 1.0～100ng/mL，and the linear range of papaverine，thebaine and narcotine was0.2～20ng/mL. The average recovery rate of the five alkaloids was 69.2%～113.8%，and the relative standard收稿日期：2021-01-05基金项目：江苏省市场监督管理局科技计划资助（KJ196037）。
高效液相色谱在食品农兽药残留中的检测应用
食品科技高效液相色谱在食品农兽药残留中的检测应用刘 姝（江苏省生产力促进中心理化测试服务中心，江苏南京 210042）摘 要：近年来，我国食品安全问题日益突出，食品农兽药残留检测作为保证食品安全的重要手段，具有十分重要的作用。
高效液相色谱法是一种迅速、灵敏、选择性高的检测方法，因操作简便、分离效率高等特点，在食品农兽药残留分析中得到广泛应用。
本文综述了高效液相色谱法在农药兽药残留分析中的应用，主要介绍了高效液相色谱在食品中农兽药残留检测中的作用和检测方法，以供相关人员参考。
关键词：高效液相色谱；食品；农兽药残留；检测Application of High Performance Liquid Chromatography in the Detection of Agricultural and Veterinary Drug Residuesin FoodLIU Shu(Jiangsu Provincial Productivity Promotion Center Physical and Chemical Testing Service Center,Nanjing 210042, China)Abstract: In recent years, China’s food safety issues have become increasingly prominent, the detection of residues of agricultural and veterinary drugs in food plays a very important role as an important means to ensure food safety. High performance liquid chromatography is a rapid, sensitive and selective detection method. It is widely used in the analysis of agricultural and veterinary drug residues in food because of its simple operation and high separation efficiency. This paper reviewed the application of high performance liquid chromatography in the analysis of pesticide and veterinary drug residues, mainly introduced the role and detection methods of high performance liquid chromatography in the detection of agricultural and veterinary drug residues in food, for the reference of relevant personnel.Keywords: high performance liquid chromatography; food; residues of agricultural and veterinary drugs; detection近年来，随着人们对食品安全关注度的不断提高，食品中农兽药残留问题成为公众关注的焦点。
先进的T3键合技术同样用于Atlantis® T3 高效液相色谱柱,
ACQUITY UPLC® HSS T3 色谱柱使用沃特世公司创新的专有T3键合技术，先进的T3键合技术同样用于Atlantis® T3 高效液相色谱柱，是色谱行业内领先的极性化合物保留解决方案，它完全兼容纯水相流动相，具有极低的键合相流失，LC-MS本底信号极低。
T3键合技术采用三键C18烷基键合，配基密度低，可以提高极性化合物的保留并与水相流动相“兼容”；同时，T3技术还包括比传统三甲基氯硅烷(TMS) 更有效的端基封尾过程。
独特的键合与封尾技术确保T3色谱柱对极性化合物有很好的保留，和纯水相流动相兼容，并同时提高了柱效、柱寿命、改善了峰形和稳定性。
ACQUITY UPLC BEH 颗粒有很宽的pH 范围和极好的峰形，然而由于填料的疏水特性，不能够提高亲水极性化合物的保留，ACQUITY UPLC HSS T3 色谱柱设计用于在反相UPLC®条件下保留和分离极性有机化合物，与ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱相比，大多数化合物在ACQUITY UPLC HSS T3 色谱柱上的保留更强。
卓越的极性化合物保留能力。
色谱柱分类与选择-内部培训资料
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25 Minutes
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如何解决碱性化合物和螯合物的峰形问题?
• 从修饰流动相着手改善峰形(例如使用竞争性 碱TEA或离子对色谱) – 1970-1980年代策略 • 从改善反相填料着手降低硅醇基活性 – 自1990年代起至今
现代色谱柱三大技术平台
纯硅胶柱
ECOSIL ODS-SH Purospher STAR RP18e
7.00
8.00
硅胶晶格中杂质铝对硅醇基酸度的影响
质子酸
O O Si HO O Si
O Si Si O OH O Si O
+ _ HO
Al
金属嵌入硅胶晶格中，使硅醇基的酸性大大增强
硅胶中金属杂质含量对螯合性化合物Hinokitiol 峰形的影响
流动相:20 mM Phosphate Buffer pH 3.6 （含 0.05% EDTA): Acetonitrile (50:50)
极性封尾，增加极性保留
由于空间位阻的存在，键合反应最多 只能覆盖50%的硅羟基，超过一半硅 羟基是活性硅羟基，与碱性基团会发 生离子交换作用，增加了保留，导致 峰形拖尾，用短链氯硅烷（如三甲基 氯硅烷）键合活性的硅羟基，可以减 小这种影响，这种操作被称为封尾， 封端，封口。
Hypersil ODS即没有封尾 Hypersil ODS-2有封尾
常见品牌C18柱在pH3下的性能比较
Toluamide k' 1.4 1.4 Chlorph/Toluam Chlorpheniramine 拖尾因子(美国药典法) a 3.4 1.2 0.71 1.4
柱品牌
ECOSIL C18SH Purospher RP18
常用色谱柱比较
一、高性能色谱柱特点：柱效高，价格高，通用性好，使用寿命长，pH范围宽，一般这类色谱柱可用于解决一些疑难杂症，并不是平时经常使用的色谱柱。
1、waters公司Xbridge 色谱柱:2005年推出，应用杂化颗粒技术。
优点：pH 1-12, 在高pH状态下，没有能与此色谱柱匹敌的，目前市场的宽pH色谱柱在高pH的状态下（9-12）普遍寿命很短，如Gemini，资生堂公司Capcell，YMC Pro-C18，包括waters的第一代杂化柱Xterra都是寿命不长，Zorbax Extend更是不堪。
柱效与一流的硅胶柱相当，甚至有过之无不及，杂化颗粒柱和聚合物色谱柱的问题在于柱效，Xterra和常见的PSDVB的色谱柱都有不错的pH范围，但是柱效低的问题无法解决，这是聚合物填料一般比较软且不耐压的原因造成。
在如此宽的pH范围，最大的好处是可以在化合物的保留平台区去开发方法（pH1-3, pH9-12），这样能得到更稳定更容易重现的方法，对酸性，中性，尤其是碱性化合物都能得到理想的峰形。
缺点：价格高，不是大多数中国客户可以接受的，大多数客户的色谱柱报废了主要是盐或者样品堵了色谱柱，因为这个原因，昂贵的Xbridge很有可能2-3个月就被客户报废掉了。
点评：Waters公司的色谱柱，基本上都是属于高端的产品，质优价高，不能作为日常实验用色谱柱也在常理之中。
因其自身拥有色谱填料的生产能力，所以其色谱柱的重现性较好。
2、Phenomenex公司的Gemini 色谱柱：采用硅胶球聚合物包被技术。
优点：pH1-12，因为聚合物涂层抑制了碱性溶液水解硅胶，所以可以承受一定的碱性条件，由于是硅胶球颗粒，所以柱效不错，比Xterra或者PSDVB这类色谱柱柱效好。
单价不低，￥3200。
缺点：聚合物涂层稳定性比较差，所以当涂层损失时，色谱柱会很坏被碱性溶液溶解，这也是其寿命远不及Xbridge的原因。
另外涂层损失也会影响结果重现性。
atlantis t3、dc18和hilic硅基色谱柱使用手册
atlantis t3、dc18和hilic硅基色谱柱使用手册摘要：1.引言2.atlantis t3 硅基色谱柱a.产品概述b.技术参数c.应用领域3.dc18 硅基色谱柱a.产品概述b.技术参数c.应用领域4.hilic 硅基色谱柱a.产品概述b.技术参数c.应用领域5.使用注意事项6.结论正文：atlantis t3、dc18 和hilic 硅基色谱柱是实验室中常用的色谱柱产品。
在本文中，我们将详细介绍这三种色谱柱的使用手册。
1.atlantis t3 硅基色谱柱atlantis t3 硅基色谱柱是一款具有高效分离性能的色谱柱。
其技术参数包括：粒径为3um，长度为150mm，内径为4.6mm。
该色谱柱广泛应用于药物分析、生物制品分析以及食品分析等领域。
2.dc18 硅基色谱柱dc18 硅基色谱柱是一款十八烷基硅烷基键合色谱柱。
其技术参数包括：粒径为5um，长度为250mm，内径为4.6mm。
该色谱柱在生物制品分析、食品分析以及环境分析等领域有着广泛的应用。
3.hilic 硅基色谱柱hilic 硅基色谱柱是一款具有亲水性的硅基键合色谱柱。
其技术参数包括：粒径为3um，长度为150mm，内径为4.6mm。
该色谱柱在药物分析、生物制品分析以及食品分析等领域有着广泛的应用。
在使用色谱柱时，需要注意以下几点：- 避免高温和阳光直射，以免影响色谱柱的使用寿命。
- 避免使用强酸和强碱，以免损坏色谱柱。
- 在使用过程中，应根据实验需要选择合适的色谱柱。
总的来说，atlantis t3、dc18 和hilic 硅基色谱柱是实验室中必不可少的色谱柱产品。
Waters HPLC色谱柱介绍
如何选择理想的 HPLC分析柱 HPLC分析柱©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation1如何看待色谱柱？色谱柱是液相色谱工作的最重要又最常使用的工具对工具了解越多，越有可能尽早选对合适的工具，使工作开展的更顺 利工欲善其事，必先利其器！©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation2沃特世价值所在： 技术能力+品质保障+专业服务Better traceability & control of the entire processWaters©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011• Manufactures under cGMP, ISO 9001 and ISO 13485 guidelines • Registered with FDA as a medical device manufacturer©2011 Waters Corporation 3概要如何认识色谱柱？ 如何认识色谱柱？ 沃特世色谱柱： 沃特世色谱柱：为色谱工作者的任务而设计 XBridge Atlantis SunFire XSelect UPLC—HPLC方法转换 HPLC—OBD 制备柱无优放大©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation4沃特世色谱柱： 专为色谱分析工作者所需而设计宽pH范围、耐受性最强、最通用的色谱柱增强极性化合物保留的专用硅胶色谱柱高容量、峰形柱效最优化的通用硅胶色谱柱宽选择性覆盖、LCMS方法开发的首选色谱柱©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation5应对耐受性、通用性的需求色谱工作者的需求： 工作者的需求：方法在高pH条件下！！ 方法在较高温度条件下！！ 耐受性？！ 通用性？！2.5, 3.5, 5, 10 µm柱效？！ 样品复杂难以分离？！ 需要各种键合相？ 需要各种柱规格？©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation6高pH耐受性对碱性化合物的分析特别有利 —分离选择性、方法耐受性与柱使用寿命©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation7XBridge： 基于第二代杂化颗粒技术BEH (Bridged Ethylene Hybrid)硅氧骨架中嵌入亚乙基桥- pH范围耐受更宽 - 机械强度更高 - 柱效佳U.S. Patent No. 6,686,035 B2©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011Anal. Chem. 2003, 75, 6781-6788©2011 Waters Corporation8增加化合物的保留并提高灵敏度： High pH Mobile phase2HIGH pH0.1% NH4OH3 6 1 4Morphine Morphine-3ß–o-glucuronide 10-hydroxymorphine5% 00.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80LOW pH0.1% HCOOHCompounds 1. % 10-hydroxymorphineMorphine-6ß–o-glucuronide6 4,5 2 1 32. 3.Morphine-3β-D-glucuronide Morphine-6β-D-glucuronide4. 5. 6. Morphine Morphine N-oxide 6-acetylmorphineMorphine N-oxide0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©20116-acetylmorphineMinutes©2011 Waters Corporation9XBridge —耐受性最强、最为广泛适用2.5, 3.5, 5, 10 µm 1.7 µm耐受性最强、最为广泛适 广泛适用的色谱柱第二代杂化颗粒技术 无以伦比的流动相pH、温度和压力的耐受范围 达到前所未有的柱效、峰形和稳定性水平 广泛的键合相选择，配合各种分析物所需 齐全的柱规格供应，满足各种规模需要©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation103NH 3CH +17通过极性嵌入基团保留水 可完全兼容100%水相屏蔽硅醇基，对碱性化合物峰形更佳 提供与C18不同的选择性pH 7.0痢特灵(Furazolidone)原料药的杂质分析实例Ligand type:Trifunctional AmideParticle size:1.7, 3.5 µm Ligand density:7.5 µmol/m 2Carbon load:12% Endcap style:NonepH range:2-11Ligand type:UnbondedParticle size:1.7, 2.5, 3.5, 5 µm Ligand density:— Carbon load:— Endcap style:— pH range:1-9Minutes123321=0.26=0.25Reversed-PhaseXBridge C 18HILICXBridge HILIC1. 6-acetyl morphineHILIC 可以提供和反相不同的分离选择性应用于生物医药行业的：—肽的反相分析与分离纯化—小蛋白药物的反相分析—寡核苷酸的离子对反相分析与分离纯化杂化颗粒，无以伦比的流动相pH与温度的耐受性完整的方法与应用资料，整体方案专用柱，经肽谱、蛋白混标或寡核苷酸阶梯混标质控确保批次重现性工作者的需求：：解决色谱工作者的需求2.5,3.5, 5, 10 µm 适用于高pH方法！！耐受较高温度条件！！耐受性极佳！通用性好！柱效高！多种键合相、多种柱规格适应各种项目需要！色谱工作者的需求和问题：越来越多的极性化合物项目！ 极性化合物的保留难？！离子对试剂应用不便！峰形？！柱耐受性？！1. Thiourea2. 5-Fluorocytosine (B)3. Adenine (B)4. Guanosine-5'-monophosphate5. Thymine注：所示色谱柱性能比较情况，与具体操作条件相关，并不代表所有应用情况（法律申明）增强极性化合物保留的专用色谱柱—首选Atlantis T3反相保留反相保留极性化合物首选：提高保留，避免使用离子对试剂 提供pH 2-8全范围的完美峰形 低pH 条件下的耐受性强，柱寿命好积极应对色谱工作者的问题：增强对极性化合物的保留！ 简便的反相条件！ 峰形佳！ 柱耐受性好！ 广受认可与赞誉！色谱工作者的需求和问题：柱效？！柱容量？！载样量高？！中-低pH条件下碱性化合物拖尾严重？！ 样品杂质或相关物质分析及分离？！51V o 234Symmetry ®C 185 µm USP T f = 1.69N = 696151V o234以Amitriptyline （峰5）计算拖尾因子USP T f pH7条件下SunFire™C 185 µm USP T f = 1.26N = 8203MinutesZorbax®SB C18Luna®C18(2)SunFire™C 18Time (minutes)246810Conditions : 3 µm, 3.0 x 150 mm 28:72 乙腈/ 20 mM 甲酸; 0.7 mL/min; 30 °CSN NNOHCl在方法开发过程中，峰拖尾会对任何特定含量方法影响其分离度与灵敏度。
Waters 液相色谱化学品
2004 Waters Corporation
常用规格选择参考
药物分析 环境科学 食品安全
血浆样品：去除杂质
水体：富集痕量污染物 土壤、沉积物： 去除杂质和富集痕量污染物
动物、饲料及植物样品： 去除杂质
1cc/30mg(WAT094225) 1cc/10mg(186000383) 3cc/60mg(WAT094226)
6cc/200mg(WAT106202) 6cc/500mg(186000115) 3cc/60mg(WAT094226)
6cc/200mg (WAT106202) 6cc/500mg (186000115) 3cc/60mg (WAT094226)
2004 Waters Corporation
Oasis 阳离子交换吸附剂： 阳离子交换吸附剂：
Oasis HLB 填料
物理特性
比表面积： 比表面积：810m2/g 平均孔径： 平均孔径：80 总孔体积： 总孔体积：1.3cm3/g 平均粒径： 或者60 平均粒径：30m或者 m 或者
2004 Waters Corporation
Oasis HLB 填料
特征一： 特征一：水浸润性
优势 即使小柱在固相提取过程中干涸，也能够吸附分析物质 即使小柱在固相提取过程中干涸， 益处 – 获得一致性极好的高回收率 – 操作简单、快速 操作简单、
正 压
2004 Waters Corporation
固相提取技术操作方式
负压（真空提取装置） 负压（真空提取装置） Vacuum Manifolds
2004 Waters Corporation
20孔真空提取装置的配置 孔真空提取装置的配置
带试管架的提取装置 – 每套装置包含20个needle tips, 25个plugs及1个injector tool。用
Atlantis?T3色谱柱检测保健酒中西地那非和他达拉非的含量
Atlantis?T3色谱柱检测保健酒中西地那非和他达拉非的含量作者：张建炀，杨坤，唐国芳来源：《现代食品》 2018年第7期张建炀，杨坤，唐国芳（贵州省黔东南州食品药品检验检测中心，贵州凯里556000）摘要：目的：建立Waters Atlantis? T3色谱柱检测保健酒中西地那非和他达拉非含量的液相色谱法。
方法：保健酒样品经乙腈涡旋混合提取，Atlantis? T3色谱柱分离，以甲醇-10 mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，进样量为10 μL，波长为230 nm，采用DAD光谱图进行定性，外标法定量。
结果：西地那非和他达拉非在0.2～20μg/mL范围内线性关系良好，线性相关系数R均大于0.999；西地那非的检出限为0.82 mg/kg，他达拉非的检出限为0.94 mg/kg；西地那非在0.1、0.3和0.5 mg/kg水平上的加标回收率为96.0%～102.0%，他达拉非在0.1、0.3和0.5 mg/kg水平上的加标回收率为90.0%～96.6%，西地那非的相对标准偏差为0.11%～0.41%，他达拉非的相对标准偏差为0.11%～0.37%。
结论：本方法操作简便、快速、灵敏度高、重复性好，可用于保健酒中西地那非和他达拉非的含量测定。
关键词：保健酒；西地那非；他达拉非中图分类号：R286.0作者简介：张建炀（1982—），男，工程师；专业方向为食品安全检测分析。
随着社会经济的不断发展和人民生活水平的不断提高，人们对于保健品的需求不断增长，特别是保健酒的需求也不断上升。
为了使保健酒的功效显著，一些不法商贩人为地添加西药成分以达到宣称的具有纯中药成分的保健酒[1]。
由于制造工艺、含量均匀性差和配料表里未标注其添加成分含量，给消费者的健康带来巨大的安全危害[2-3]，如过量服用这些非法添加的保健酒，轻者会引起头痛、消化不良、颜色分辨下降等不良反应，对于心血管患者，严重者可能导致突然死亡[4-5]。
沃特斯液相色谱柱型号
沃特斯液相色谱柱型号沃特斯（Waters）公司是世界领先的分析测试仪器和化学试剂供应商，其液相色谱（HPLC）柱广泛应用于生命科学、化学、医药等领域的研究和生产中，具有高效、高精度、高灵敏度、高重复性等优点，成为现代科学技术的重要组成部分。
沃特斯液相色谱柱型号是指沃特斯公司生产的液相色谱柱产品的唯一标识符，它包含了柱直径、柱长度、填充材料、填充粒径和填充密度等信息，可以为用户量身定制和推荐最适宜的柱型，满足不同实验需求和分析目的。
沃特斯公司的液相色谱柱型号分为以下几类：1. Symmetry列：Symmetry列是沃特斯公司最早推出的柱系列之一，其特点是高效、高灵敏度、高可重复性和高选择性。
Symmetry列包括Symmetry C18、SymmetryC8、Symmetry Shield RP18等柱型。
2. XBridge列：XBridge列是沃特斯公司全新推出的柱系列，其特点是高效、高分辨率、高选择性、高稳定性和低背景噪声。
XBridge列包括XBridge C18、XBridge C8、XBridge Shield RP18等柱型。
3. Atlantis列：Atlantis列是沃特斯公司推出的一系列针对生命科学应用的柱系列，其特点是适用于多种样品类型和复杂样品基质，并具有高效、高灵敏度、高选择性等优点。
Atlantis列包括Atlantis dC18、AtlantisT3、Atlantis HILIC等柱型。
4. Acquity UPLC BEH列：Acquity UPLC BEH列是沃特斯公司研发的一系列超高效液相色谱柱，其互相作用特性高度统一，电荷配属一致，优化了固定相的表面性质，让分析分离更加可靠。
Acquity UPLC BEH列包括BEHC18、BEH Phenyl、BEH Shield RP18等柱型。
5. Nova-Pak列：Nova-Pak列是沃特斯公司历史上推出的一系列柱，可用于分离小分子化合物和大分子生物分子。
硝基咪唑类药物测定方法——液相色谱
硝基咪唑类药物测定方法——液相色谱(6)液相色谱-质谱法(liquid chromatography mass spectrometry，LC-MS) 随着LC与MS接口瓶颈解决，采纳LC-MS技术测定硝基咪唑类药物的讨论报道不断增多，主要有热喷雾电离源(TSI)、大气压化学电离源(APCI)和电喷雾电离源(ESI)三种离子化方式。
LC-MS可分析GC-MS 所不能分析的强极性、难挥发、热不稳定性的化合物，但在测定中内源性基质引起的离子抑制效应较为常见，通过转变质谱条件、提高色谱分别效能、应用合适的内标物可克服基质效应。
1)热喷雾电离源(TSI) TSI是最早应用的LC-MS接口，但存在重复性差、定量效果差的缺点，现在已很少应用。
Cannavan等建立了禽组织和蛋中DMZ的LC-MS测定办法。
色谱柱为ODS3(250mm×4mmi.d.)，流淌相为甲醇-0.05mol/L(1+1，v/v)，质谱采纳TSI离子源接口，离子源和四极杆温度分离为250℃和100℃，SIM模式检测。
办法LOD小于1ng/g，回收率为93%～102%。
2)大气压化学电离源(APCI) APCI借助电晕放电启动气相离子化，形成单电荷的准分子离子，适合测定极性较小的化合物。
Sams等讨论了液相色谱-大气压化学电离-质谱(LC-APCI-MS)办法检测禽肉和蛋中DMZ、RNZ及其共同代谢物MNZOH。
色谱柱为Prodigy ODS3柱(250mm×3.2mmid，5μm)，流淌相为-0.05mol/L乙酸铵(13+87，v/v)，流速0.5mL/min，电晕放电电压3.22kV，高压透射电压(lensvoltage)0.0V，锥孔电压10V，锥孔电压偏移距5V，源温140℃，APCI探针温度500℃，正离子、SIM模式检测，每种物质检测2个离子。
办法LOD为0.1μg/kg(DMZ、RNZ)和0.5μg/kg(MNZOH)；平均回收率为65%(DMZ)、87%(RNZ)和75%(MNZOH)，RSD分离为22%、11%和14%。
HILIC色谱柱介绍
部件号 176001963 176001964 176001965 176001966
ACQUITY UPLC方法验证包（3根/包，来自不同填料批次）
键合相
BEH HILIC BEH HILIC BEH Amide BEH Amide
颗粒度
1.7µm 1.7µm 1.7µm 1.7µm
柱长
50mm 100mm 50mm 100mm
ACQUITY UPLC BEH色谱柱
键合相
粒径
柱规格
部件号1根/包 部件号3根/包
BEH HILIC
1.7µm
1.0 x 50 mm
186003457
176001089
BEH HILIC
1.7µm
1.0 x 100 mm 186003458
176001090
BEH HILIC
1.7µm
1.0 x 150 mm 186003459
XBridge HILIC
186004455 186004456 186004457 186004458 1860044592 186004460 186004461 186004429 1860044301 186004431 186004432 186004433 186004434
—
186004435 186004436 1860044372 186004438 186004439 186004440 186004441
部件号 2.1mm内径 186004053 186004054 186004807 186004808
部件号 3.0mm 内径 186004699 186004700 186004809 186004810
ACQUITY UPLC方法转换包
色谱柱分类与选择-内部培训讲义资料
当流动相pH值小 于3时, 硅醇基呈 中性(未解离)
+ HN (CH 3 )
2
电性(大部解离)
Base Base 对碱性化合 物的保留及 严重拖尾
两实验使用相同的传统C8硅胶柱
既然pH< 3时硅醇基离解受抑制，为何不在所有 情况下采用酸性条件进行分离?
低pH可导致分离选择性的完全丧失!
0.04
AU
C18 硅胶
湿润的孔
未湿润的孔
注意：保留时间与填料表面积与配体有关。然而，如果硅胶表面未湿润， 那么有效的色谱表面积会减少 95%，因此，减少被分析物的保留 时间即等于“疏水塌陷”，记住：几乎所有的表面积都在孔内！
疏水塌陷
流动相：0.1% 醋酸水溶液
— stationary phase: base-deactivated octadecylsilyl silica gel for chromatography R (3 μm). — stationary phase: octylsilyl base-deactivated silica gel for chromatography R (4 μm) with a pore size of 6 nm,
极性封尾，增加极性保留
由于空间位阻的存在，键合反应最多 只能覆盖50%的硅羟基，超过一半硅 羟基是活性硅羟基，与碱性基团会发 生离子交换作用，增加了保留，导致 峰形拖尾，用短链氯硅烷（如三甲基 氯硅烷）键合活性的硅羟基，可以减 小这种影响，这种操作被称为封尾， 封端，封口。
Hypersil ODS即没有封尾 Hypersil ODS-2有封尾
C18键合并端基封尾后 还能看见什么？硅羟基!—即使进行高密度 键合，硅胶表面仍将残留约50%硅羟基 (SiOH)!
色谱柱的选择与维护
用极低pH和高温 (pH=0.8, Temp=100oC);可匹配100%水作 为流动相。
Venusil HILIC: 对亲水性化合物有最好的保留，比氨基柱
和硅胶柱有更好的稳定性和重现性
Venusil MP C18 色谱柱：通用型色谱柱
350 300 250 200 150 100 50
295
312
占89.6%
4
0
3
3
1
1
1
4
10
2
2
11
合理选择色谱柱
1、根据目标化合物的理化性质（化学结构式
，酸碱性，pKa值，极性，分子量，熔点，沸 点，挥发性，旋光性，手性，稳定性等等） 2、根据填料选择色谱柱
12
如何查化合物的LogP和Pka值
色谱柱A，硅羟基pH=3.5
流动相pH=3.5，未能抑制硅羟基的活性 二次保留严重
Venusil MP C18，硅羟基pH=5.2
流动相pH=3.5，能充分抑制硅羟基的活性 抑制了二次保留效应
色谱柱：C18，5μm，4.6×250mm， 样品：吗啡、可待因，脱氢吗啡的分离，流动相:乙腈-25 mM乙酸钠缓冲液（ pH 3.5）= 10：90 27
14
Halo(2.7 μm) 薄壳型色谱填料
- 超高柱效，低柱压
2.7 μm 粒径 1.7 μm 实心硅胶核 0.5-μm-全多孔薄壳层 90Å孔径 B型高纯硅胶 比表面积 ~150 m2/g 耐压范围 ：600bar 柱效：N>20000
15
Halo(2.7 μm) 薄壳型色谱填料
Atlantis 色谱柱
Waters Atlantis系列色谱柱专门为解决极性化合物的分离问题而设计的。
分为dC18和HILIC(亲水)硅胶两类。
（1）AtlantisTM dC18色谱柱对极性化合物表现出优异的保留，但并不对疏水性化合物表现出过强的保留。
它与LC/MS兼容，还能与100%水溶液流动相兼容。
（2）AtlantisTMHILIC硅胶是一种亲水性相互作用色谱柱，能保留和分离极性的水水溶液碱性化合物，例如活性剂、代谢产物以及多肽类化合物。
此外AtlantisTMHILIC硅胶柱还具有寿命长，色谱柱间重现性好的特点。
（3）新型的Waters Atlantis® T3 色谱柱是基于超纯硅胶基质的反相C18 色谱柱，用于保留和分离强极性化合物，并且在很宽的pH值范围内保持卓越性能。
Waters Atlantis T3 色谱柱采用沃特世专有的T3 键合技术来增强极性化合物保留，同时延长了色谱柱在低pH值条件下的寿命，并改善了含胺的碱性化合物在pH7时的色谱峰形。
而且T3键合技术同样应用在ACQUITY UPLC® HSS T3 色谱柱，为UPLC分离极性化合物提供了完美的解决方案。
如果您使用反相色谱技术来开发极性化合物或者含有极性化合物的混合物的分离方法时，应该首选Atlantis T3色谱柱。
产品货号产品名称产品规格优惠价186001346 Waters Atlantis dC18液相色谱柱 250×4.6mm,5µm 6460186001344 Waters Atlantis dC18液相色谱柱 150×4.6mm,5µm 6120186002033 Waters Atlantis HILIC Silica液相色谱柱 250×4.6mm,5µm 6460186002032 Waters Atlantis HILIC Silica液相色谱柱 150×4.6mm,5µm 6120186003747 Waters Atlantis T3液相色谱柱 150×4.6mm,5µm 6122186003748 Waters Atlantis T3液相色谱柱 150×4.6mm,5µm 6460。
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Waters Atlantis系列色谱柱专门为解决极性化合物的分离问题而设计的。
分为dC18和HILIC(亲水)硅胶两类。
（1）AtlantisTM dC18色谱柱对极性化合物表现出优异的保留，但并不对疏水性化合物表现出过强的保留。
它与LC/MS兼容，还能与100%水溶液流动相兼容。
（2）AtlantisTMHILIC硅胶是一种亲水性相互作用色谱柱，能保留和分离极性的水水溶液碱性化合物，例如活性剂、代谢产物以及多肽类化合物。
此外AtlantisTMHILIC硅胶柱还具有寿命长，色谱柱间重现性好的特点。
（3）新型的Waters Atlantis® T3 色谱柱是基于超纯硅胶基质的反相C18 色谱柱，用于保留和分离强极性化合物，并且在很宽的pH值范围内保持卓越性能。
Waters Atlantis T3 色谱柱采用沃特世专有的T3 键合技术来增强极性化合物保留，同时延长了色谱柱在低pH值条件下的寿命，并改善了含胺的碱性化合物在pH7时的色谱峰形。
而且T3键合技术同样应用在ACQUITY UPLC® HSS T3 色谱柱，为UPLC分离极性化合物提供了完美的解决方案。
如果您使用反相色谱技术来开发极性化合物或者含有极性化合物的混合物的分离方法时，应该首选Atlantis T3色谱柱。
产品货号产品名称产品规格优惠价
186001346 Waters Atlantis dC18液相色谱柱 250×4.6mm,5µm 6460
186001344 Waters Atlantis dC18液相色谱柱 150×4.6mm,5µm 6120
186002033 Waters Atlantis HILIC Silica液相色谱柱 250×4.6mm,5µm 6460
186002032 Waters Atlantis HILIC Silica液相色谱柱 150×4.6mm,5µm 6120
186003747 Waters Atlantis T3液相色谱柱 150×4.6mm,5µm 6122
186003748 Waters Atlantis T3液相色谱柱 150×4.6mm,5µm 6460。