核酸与核苷类药物汇总.

一、RNA的提取与制备
工业用RNA的提取
（ 1） RNA及其工业来源：从微生物中提取 RNA 是工业上最实际和有效的方法。一些最常见 的菌体含有丰富的核酸资源，如酵母、白地 霉、多种抗菌素的菌丝体 —— 青霉素，制霉 菌素等菌体。 通常在细菌中 RNA 占 5 ％～ 25 ％，在酵母 中占2.7％～15％，在霉菌中占0.7%～28％。
稀碱法：是用氢氧化钠溶液（1%），使细胞壁变性，使核 酸从细胞内释放出来。需用酸中和PH7。然后除去菌体，将pH 调至RNA的等电点（pH2.5），使RNA沉淀出来。上法的缺点是 制得的 RNA Mr 较低 ,( 磷酸单脂酶、磷酸二脂酶降解 RNA ， 90 ℃保持3－4h破坏酶)。
浓盐法：是用高浓度盐溶液（ 6% － 8% ）处理，同时加热， 以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。 要避免分子降解，可采用苯酚法制备RNA。用苯酚处理生 物材料，使蛋白质变性，然后离心，上层水溶液内含有全部 RNA ，可 用 乙 醇 沉 淀 出来 。脱 氧 核 糖 核 蛋 白 溶于浓 盐 溶 液 1mol/L, 不溶于 0.14mol/L, 而核糖核蛋白溶于 0.14mol/L 盐溶 液。
பைடு நூலகம்
生物活性DNA的制备
[提取] [洗涤3次] 5%SDS
动物内脏 沉淀 （肝、脾）生理盐水
在菌体内RNA含量的变化受培养基组成影响，其中关键是
铵离子浓度和磷酸盐浓度。培养酵母菌体收率高，易于提取 RNA。 很显然在许多酵母中，早期细胞中的RNA含量高，其确切 数值取决于碳、氮比例和培养基组成等。
（2）高RNA含量酵母菌株的筛选
可以从自然界筛选到RNA含量高的酵母菌株，也可用诱变 育种的方法提高酵母菌的RNA含量。
RNA提取实例：
[提取] [中和] HCl [酸化、沉淀]HCl
酵母
提取液
上清液
pH 7、离心 pH 2.5、离心
RNA
NaOH、水
二、DNA的提取与制备
工业用DNA的提取
取新鲜冷冻鱼精 20kg，用绞肉机粉碎2次成浆状，加入等
体积水，搅拌均匀，倾入反应锅内，缓慢搅拌，升温至 100℃， 保温15分钟，迅速冷却至20～25℃，离心除去鱼精蛋白等沉淀 物，获得 35L 含热变性 DNA 的溶液，经精确测定 DNA 含量后直接 可用于酶法降解生产脱氧核苷酸。如要制成固体状 DNA ，在热
DNA和RNA是存在于细胞中的正常成分。 DNA主要存在于细胞核中，少量（2%）存在于线粒体和叶绿体中； RNA主要存在于细胞质中，少量（10%）存在于核仁、核浆和染色体中。 核酸的含量与细胞大小无关，以生长旺盛的组织细胞中含量较多，如 动物胰脏、脾脏、胸腺，植物的茎尖、根尖及各种分生组织等。
第二节 制备的一般过程与原理
变性 DNA 溶液中逐渐加入等体积 95 ％乙醇，离心可获得纤维状
DNA，沉淀用乙醇、丙酮洗涤，减压低温干燥得DNA粗品，产品 含热变性DNA50％～60％。
工业用DNA的提取
[提取] [热变性] [沉淀]乙醇
鱼精
水、100℃ 15min 干燥
提取液
冷却、离心
纤维状DNA
70%--80% （无生物活性）
第 12 章 核酸与核苷类药物
第一节 概述
一、核酸与核苷类药物 核酸与核苷类药物是指具有药用价值的核酸、核 苷酸、核苷或者碱基 天然的、类似物、衍生物及其聚合物 作用：
影响生物的蛋白质合成和脂肪、糖类的代谢 恢复正常代谢或干扰某些异常代谢
•
用途：放射病、血小板减少症、白细胞减少症、 急慢性肝炎、心血管疾病和肌肉萎缩、肿瘤、病 毒病


后一类药物是治疗病毒感染性疾病、肿瘤的 重要手段，也是产生干扰素、免疫抑制的临 床药物。 正式用于临床的抗病毒核苷类药物有三氮唑 核苷、叠氮胸苷、阿糖腺苷等。
珍奥核酸
DNA药物
核苷类药物
恩替卡韦
二、核酸与核苷的一般理化性质
核苷 核酸 核苷酸 （DNA、RNA） 磷酸

核糖（核糖 脱氧核糖） 嘌呤（腺嘌呤、鸟嘌呤） 碱基 嘧啶（胞、尿、胸腺嘧啶）

核酸类物质药物一般可分为两大类： 一类具天然结构的核酸类物质， 另一类是自然结构碱基、核苷、核苷酸的结 构类似物或聚合物。
前者是生物体合成原料或蛋白质、脂肪、糖生物合成 与降解以及能量代谢的辅酶，这一类药物有助于改善机体 的物质代谢和能量平衡，加速受损组织的修复，促使缺氧 组织恢复正常生理机能，临床上已广泛使用于放射病、血 小板减少症、白细胞减少症、急慢性肝炎、心血管疾病、 肌肉萎缩等病症的治疗，包括肌苷、辅酶A、GTP、CTP、 UTP、ATP、腺苷、辅酶I、辅酶Ⅱ等，多数是生物体自 身能够合成的物质，具有一定临床功能，毒副作用小，基 本都可经微生物发酵或从生物资源中提取。
粗品DNA（热变性后无活性）
具有生物活性DNA的制备
动物内脏（肝、脾、胸腺）加4倍重量生理盐水经组织捣 碎机捣碎1分钟，匀浆于2500r／pm离心30分钟，沉淀用同样体 积的生理盐水洗涤3次，每次洗后离心，将沉淀悬浮于20倍重 量的冷生理盐水中，再捣碎3分钟，加入2倍量5％的（用45%乙 醇作溶剂）十二烷基磺酸钠，并搅拌2～3小时，在0℃2500r／ pm离心，在上层液中加入等体积的冷95％乙醇，离心即可得到 纤维状DNA，再用冷乙醇和丙酮洗涤，减压低温干燥得粗品DNA。 粗品DNA溶于适量蒸馏水，加入5％十二烷基磺酸钠达1／10体 积，搅拌1小时，经5000r／pm离心1小时，清液中加入 NaCl达 1mol／L，再缓慢加入冷95% 乙醇，DNA析出，经乙醇、丙酮洗 涤，真空干燥得具有生物活性的DNA（活性DNA制备需在0～3℃ 操作）。
（3）RNA的提取实例：
啤酒酵母是提取RNA的很好的资源。取100g压榨啤酒
酵母（含水份 70%），加入 230ml含NaOH 3g的水，20℃以
下缓慢搅拌30分钟。用6mol／L HCl调至pH7，搅拌15分钟， 离心得清液 255m1。冷至10℃以下， 6mol ／L HCl 调 pH2.5 ， 置冷过夜，离心得RNA l.8g（纯度80％）。