03-水的细菌学检查(简)概要
实验11水的细菌学检查
（1）将水样稀释成Байду номын сангаас0-1。 （2）分别吸取10-1的稀释水样1ml和原水样1ml，分 别加入装有10ml乳糖蛋白胨发酵管中。另取10ml
2．细菌总数测定
自来水 （1）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做两 个平皿。 （2）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白 胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养 基充分混匀。 （3）另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基 15ml，作空白对照。 （4）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进 行菌落计数。
二、实验原理
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌 种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不 可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能 生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落， 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用 普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
和100ml原水样，分别注入装有 5 ml和50ml三倍
浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。混匀后 置37℃培养24h。 以下步骤同生活饮用水的试验方法。
三、实验器材
1、实验仪器：培养箱
2、微生物材料：水样 3、培养基：乳糖蛋白胨液体培养基（内有倒置的杜 氏小管），3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基（内有 倒置的杜氏小管），伊红美蓝琼脂平板培养基。
四、实验步骤
1．水样的采取 同水中细菌总数测定实验。
自来水检查
（1）初发酵试验 在2个含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养 液的烧瓶中，各加入水样10ml；在10支含有3ml三倍浓缩 乳糖蛋白胨发酵管中，各加入水样10ml。混匀后置37℃培 养24h。
本科生实验-水的细菌学检查
2
大肠菌群的测定
大肠菌群是指：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的 杆状细菌，并在乳糖培养基中37℃培养24~48 h能产酸产气。水 中大肠菌群的数目可以说明水源是否被粪便污染，并间接推测 水源受肠道病原菌污染的可能性。标准：1000 ml自来水中大 肠菌群数不超过3个。
一 水中细菌总数的测定 目的要求
器
材
1 培养基：煌绿乳糖胆盐肉汁培养基发酵管（内 有倒置德氏小管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌 水 2 实验用具：灭菌三角烧瓶，灭菌吸管，灭菌试 管
操作步骤
1 采集水样
采用细菌总数测定实验中的池水样品，取其原水样、10–1稀释水 样、10–2 稀释水样。
2. 初发酵试验
吸取上述三种水样各1 ml，分别注入装有10 ml普通浓度煌绿乳 糖胆盐肉汁发酵管中。另取10 ml原水样注入装有5 ml三倍浓缩 煌绿胆盐乳糖肉汁的试管中。混匀后，37℃培养24 h。
3. 平板分离
经24 h培养后，将产酸产气的发酵管分别划线接种于伊红美蓝琼 脂平板上，于37℃培养24 h，将符合下列特征的菌落的一小部分， 进行革兰氏染色，镜检。 a. 深紫黑色、有金属光泽。 b. 紫黑色、不带或略带金属光泽。 c. 淡紫红色、中心颜色较深。
4. 复发酵试验
经镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，则挑取该菌落的另一部分，重 新接种于普通浓度的煌绿胆盐乳糖肉汁发酵管中，每管可接种来自 同一初发酵管的同类型菌落1~3个，37℃培养24h，结果若产酸又产 气，即证实有大肠菌群存在。 证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性结果，结合大肠 菌群检数表(接种水样总量为11.11 ml，10、1、0.1、0.01 ml各1份， “+”发酵阳性；“-”发酵阴性 )得到大肠菌群数。
水细菌学检测
实验目的
1）学习水的细菌学检查方法及原理
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2) 学习水样的采集方法，了解大肠菌群的数量在饮 用水中的平板计数原则及其在饮用水中的重要性。 3）整个实验操作要求学生自己独立完成，培养学生 的实验设计及动手能力。
பைடு நூலகம் 实验原理
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饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总数和 大肠菌群数来确定。细菌总数是指1毫升水样在 普通琼脂培养基中，37℃24小时培养后所生长 的菌落数。一般规定，1毫升自来水的总菌数不 得超过100个。
总大肠菌群mpn100ml或cfu100ml不得检出耐热大肠菌群mpn100ml或cfu100ml不得检出大肠埃希氏菌mpn100ml或cfu100ml不得检出菌落总数cfuml100logowww1pptcom实验原理如果水源被粪便污染则有可能也被肠道病原菌污染而引起伤寒痢疾霍乱等肠道病的流行但肠道病原菌在水中数量较少又易变异与死亡故从水中特别是自来水中分离出病原菌常常有困难
杜氏小管：装满乳糖发酵液后倒置于发酵试管中，不能有气泡。
小试管：装满乳糖发酵液后倒置于三角瓶发酵管中，不能有气泡。
本节需准备的材料
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A
B
C
50mL三倍浓缩的三角瓶发酵管2个；5mL 三倍乳糖蛋白胨发酵管10支；25毫升移液 管1支（包扎、塞棉花）；无菌三角瓶1个 （塞棉塞） 50mL三倍浓缩的三角瓶发酵管2个；5mL 三倍乳糖蛋白胨发酵管10支；25毫升移液 管1支（包扎、塞棉花）；无菌三角瓶1个 （塞棉塞） 50mL三倍浓缩的三角瓶发酵管1个；5mL 三倍乳糖蛋白胨发酵管1支；10mL乳糖发 酵管3支；25毫升移液管1支（包扎、塞棉 花）；无菌三角瓶1个（塞棉塞）；1mL无 菌枪头2支；4.5mL无菌水2支
医学：水的细菌学检查-细菌总数的测定
[请在此处插入参考文献1]
01
03 02
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
培养基
普通肉汤培养基
用于一般细菌的培养，含有适合细菌 生长的营养成分。
选择性培养基
根据需要选择适合特定细菌的选择性 培养基，以筛选和鉴别特定细菌。
实验设备
灭菌锅
恒温培养箱
显微镜
移液器
用于培养基和实验器具 的灭菌，确保无菌状态。
用于细菌的培养，保持 恒定的温度和湿度。
观察细菌形态和染色情 况，进行细菌鉴定。
取适量水样，加入培养基中， 在恒温培养箱中培养24小时， 观察并记录菌落数。
实验日期
XXXX年XX月XX日
实验材料
水样、培养基、无菌吸管、培 养皿
实验结果
菌落数分别为XX、XX、XX、 XX、XX。
结果解读
根据实验结果，可以 得出水样中细菌总数 的数量。
分析细菌总数高的可 能原因，如环境污染、 水质处理不当等。
将细菌总数与国家标 准进行比较，判断水 样的卫生质量。
误差分析
误差来源
取样过程中可能存在的污 染、培养基的质量问题、 操作过程中的失误等。
误差控制
采用无菌操作技术，确保 培养基的质量，提高实验 人员的操作技能和责任心。
误差消除
重复实验，取多次测量的 平均值作为最终结果，以 提高实验的准确性和可靠 性。
根据细菌的生长速度和培养基的特性，确定培养时间，一般为18-48小时。
结果观察
观察内容
在培养期间，观察细菌的生长情况， 记录菌落的数量、形态等信息。
结果判定
根据菌落的数量和分布情况，判断水 样中细菌总数的多少，并评估水质的 安全性。
水的细菌学检查
24h和48h产酸产气的初发酵菌落均需在 伊红美蓝琼脂或复红亚硫酸钠培养基上， 进行平板划线，分离出阳性菌落。
3．复发酵试验 阳性菌落经涂片染色鉴别为G-，无芽 孢杆菌者，再经过乳糖蛋白胨液体培养 基进行复发酵试验，经24h培养产酸产气 者，可确认为大肠菌群阳性结果。
三．实验用品
培养基： （一）牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 （二） 乳糖蛋白胨液体培养基 3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基 红美蓝琼脂培养基（制成平板）
（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释 倍数进行报告。 （6）若所有稀释度的平均菌落数均不在 30～300之间，则以最接近300或30的平 均菌落数乘以稀释倍数进行报告。
四、实验操作
（二）多管发酵法测定水中的大肠菌群 1. 水样采集 2. 自来水检查 （1）初（步）发酵试验 （2）平板分离 （3）复发酵试验
2.细菌总数的测定 (1)自来水 (2)池塘水、河水或湖水 ①水样稀释 ②吸取稀释后水样加入平板 ③向平皿内倾注培养基(15～20mL) ④37℃温箱，倒置培养24h，进行菌落计数
水样稀释 取1ml水样加入到9ml无菌水的试管，振 1 荡混匀，得稀释度为10－1； 从10－1管中取水样1ml加到第二支9ml无 菌水的管中，振荡混匀，得10－2……
大肠菌群的测定 若水源被粪便污染，则有可能也被肠 道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容 易死亡与变异，因此数量较少，要从中特 别是自来水中分离出病原菌常较困难与费 时，这样就要找到一个合适的指示菌，此 指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原 菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。
若指示菌在水中不存在或数量很少，则 大多数情况也保证没有病原菌。最广泛 应用的指示菌是大肠菌群(coliform group)。 大肠菌群的定义是：一群好氧和兼性厌氧、 革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖 培养基中，经37℃，24～48 h培养能产酸产气。 根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被 粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌 污染的可能性。
水体细菌检验报告
水体细菌检验报告1. 引言本文档旨在对水体样本进行细菌检验，并提供相关结果、分析与建议。
水体细菌检验是一项重要的环境监测工作，通过检验水体中的细菌种类和数量，可以评估水体的卫生状况，为水质管理、环境保护和健康风险评估提供依据。
2. 方法2.1 样本收集与处理本次检验使用了来自不同水源的样本，包括自来水、河流水和湖泊水。
收集样本时，使用无菌容器，并遵循标准的采样方法。
样本在采集后尽快送至实验室并进行处理。
2.2 细菌培养和筛查在实验室中，我们采用了常规的培养方法来筛查水体中的细菌。
主要步骤如下：1.样本制备：将样本进行适当的稀释，并制备培养基。
2.培养操作：将样本接种于含有适宜培养基的琼脂平板上，并在适宜的温度下培养一定时间。
3.观察和计数：观察培养基上是否有细菌生长，并进行计数。
4.分离和鉴定：对培养基上生长的细菌进行分离，并进行鉴定。
2.3 数据分析在细菌数量方面，我们采用了常规的计数方法，以CFU/mL（菌落形成单位/毫升）为单位进行报告。
3. 检验结果水源总菌落计数（CFU/mL）大肠菌群计数（CFU/mL）自来水1500 0河流水2800 3湖泊水3500 5注：CFU/mL表示菌落形成单位/毫升。
大肠菌群是一类对水体卫生有指示意义的细菌。
4. 结果分析与建议根据以上检验结果，我们对水体细菌的情况进行分析与评估，并提出以下建议：1.自来水样本中的总菌落计数为1500 CFU/mL，大肠菌群未检出。
这符合卫生标准要求，说明自来水的卫生状况良好，适合直接饮用。
2.河流水样本中的总菌落计数为2800 CFU/mL，大肠菌群检出数量为3 CFU/mL。
虽然总菌落数超过了自来水的水质标准，但大肠菌群的检出数量较低。
建议在使用河流水进行饮用或生活用水时，进行必要的消毒处理。
3.湖泊水样本中的总菌落计数为3500 CFU/mL，大肠菌群检出数量为5 CFU/mL。
该水样的细菌污染程度相对较高，不适合直接饮用或生活用水。
(七)水的细菌学检查---细菌总数的测定(开放)概要
大肠菌群（coliform group）：一群 好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的 杆状细菌，并在乳糖培养基中经37℃，24 －48h培养能产酸产气。
检查大肠菌群的方法： 多管发酵法、滤膜法。 我国规定每升自来水中大肠菌群 不超过3个。
• 独立设计试验放案
• 1 实验材料与用具－根据实验室现有条件选择 • 2 实验方法与步骤－自行拟定
如何测定水样是否合乎饮用标准？
1、水中细菌总数的测定 水中的细菌总数越多，说明水中有机物的含 量就越高，水体被有机物污染的程度越重。 水中细菌的种属繁多，以一定的培养基平板 上生长出来的菌落，计算出来的水中的细菌的总 数实际上是一种近似值。
肠道中的绝大多数腐生性和致病性的细菌， 可在牛肉膏蛋白胨培养基上进行生长。因此应用 平板菌落计数技术来测定水样中的细菌总数基本 上能代表水样中细菌的数量。
实验报告及思考题
• 一 . 实验报告以论文形式提交 • 二思考题
• 1、从自来水水样细菌总数检测的结果判断是否符合饮用 水的卫生标准？ • 2、你所测的池塘水、河水、湖水的污秽度如何？通过实 验你对保护水资源有何认识？ • 3、试与其他同学的实验结果进行比较，从中判断你的实 验结果误差如何？原因是什么？
水中细菌总数的测定和计算
• 在牛肉膏蛋白胨培养基上，1ml水样， 经37℃，24h 培养后所生长出来的总 菌数。 • 我国饮用水的卫生学指标：在1ml自 来水中细菌总数不得超过100个。
2、水中大肠菌群的测定
根据指示菌大肠菌群的数目来判断水 源是否被污染，并间接推测水源受肠道病 原菌污染的可能性。
（七）水的细菌学检查--细菌总数的测定（开放）
(实验18)
• 目的要求
1、培养学生自行设计实验流程，判断实验结 果的能力。 2、对所学习过的实验方法进行综合技能训练。 3、通过实验掌握水样的采集和水样中细菌总 数测定的方法。
医学：水中的细菌学测定
条件致病菌
条件致病菌
是指在特定条件下能够引起疾病的细菌，如大肠杆菌、绿 脓杆菌、变形杆菌等。
条件致病菌的特性
通常为人体肠道或呼吸道正常菌群，但在特定条件下，如 机体免疫力降低或细菌数量增多时，可以引起疾病。
条件致病菌的测定
在水中条件致病菌的测定中，通常采用同样方法进行增菌、 分离培养、鉴定等，以了解水中是否存在条件致病菌，并 评估其对人群健康的潜在威胁。
体情况制定限量标准。
03
其他常见致病菌数量
根据具体情况制定其他常见致病菌的数量限量标准。
06 水中的细菌学测定在实际 应用中的问题与挑战
测定方法的局限性
培养基选择性
01
培养基的成分和培养条件可能对某些细菌的生长产生限制，导
致某些细菌无法被检测到。
培养时间
02
培养时间较长，需要一定时间才能得到结果，可能影响细菌的
背景
随着工业化和城市化的快速发展，水 污染问题日益严重，水中的细菌学测 定对于保障人类健康和生态平衡具有 重要意义。
重要性
健康保障
政策制定
通过水中的细菌学测定，可以及时发 现并控制水体中的有害细菌，防止水 源性疾病的传播，保障公众健康。
基于水中的细菌学测定结果，政府可 以制定和调整相关政策，加强水质监 管，提高水质标准。
细菌种类的鉴别挑战
形态学相似
有些细菌在形态上相似，可能难以区分，导致鉴定不准确。
基因测序技术
基因测序技术是更准确的方法，但需要较高的技术和设备支持，且 成本较高。
抗原性差异
不同细菌的抗原性存在差异，但抗原性检测需要特定的试剂和设备， 且结果可能存在主观性。
THANKS FOR WATCHING
水质的细菌学检查
水质的细菌学检查一、目的要求(一)学习水质的细菌学检查法(二)了解水质状况同细菌数量的关系及大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、基本原理检测水中的细菌数量是评价水质状况的重要指标之一。
饮水是否合乎卫生标准，需要进行水中细菌数量及大肠菌群数量的测定。
大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌，由于大肠菌群是一群能发酵乳糖的革兰氏阴性、无芽孢杆菌，它们在乳糖培养基中经37℃培养24小时即能产酸、产气，所以常将其作为粪便污染的标志。
饮用水一般规定：1毫升自来水中总菌数不得超过100个；1000毫升自来水肠菌群数不得超过3个。
三、实验材料培养基及器皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳糖蛋白胨发酵管（倒置小管）、三倍乳糖蛋白胨发酵管（倒置小管）、伊红美蓝琼脂培养基、无菌空瓶、无菌水、无菌培养皿、移液管、试管。
四、实验客(一)采取水样1、自来水：从学校各生活区取样。
先将自来水龙头用火焰灭菌,再开放水龙头使水流1—2分钟后，用无菌空瓶接取水样。
2、池水、湖水或河水：用无菌空瓶取距水面 10—15厘米深层水样。
水样采取后应立即检验，不得超过4小时。
(二）水中细菌总数测定l、自来水：稀释水样：原水样和10-1 水样，用无菌移液管分别吸取l毫升原水样和10-1水样，分别注入二个无菌培养皿中。
每皿各加13--15毫升已融化并冷却到4 5-- 50℃的牛肉膏蛋白胨培养基，轻轻旋转，使培养基与水样充分混匀，待凝固后，将平板倒置于37℃恒温箱，培养24小时进行菌落计数。
制作培养基方法、消毒灭菌、接种、计数皆参照参微生物学实验指导，具体如下：培养基制作：实验五、培养基的制备培养基配方：附录二、常用培养基之一培养基灭菌：实验六、灭菌与消毒水样接种：实验七、土壤微生物的分离与测数细菌总数测定：实验七、土壤微生物的分离与测数2、池水、湖水或河水等。
稀释水样：稀释倍数视水样污浊程度而定，使水样培养后每个平板中的菌落数在30--300之间的的稀释度最为合适。
水中检测细菌的实验原理
水中检测细菌的实验原理实验所需材料及设备：1.水样：待检测的水样（例如自来水、河水、湖水等）；2.培养基：含有营养物质的液体或固体培养基；3.培养皿：用于培养细菌的平板状容器；4.培养箱：提供合适的温度和湿度条件，促进细菌生长；5.显微镜：用于观察细菌的形态和结构；6.毛细管或塑料平板：用于从水样中吸取适量的样品。
实验步骤：1.样品采集：首先需要采集待检测的水样。
可以从水源中直接取样或者从自来水龙头中采集。
2.稀释：取一定量的水样，进行适当的稀释。
这是因为水样中的细菌数量通常非常庞大，稀释可以使细菌数量降低到可以计数的范围内。
3.培养：将稀释后的水样均匀地分布在培养基的表面上。
对于液体培养基，可以用毛细管从水样中吸取适量的样品滴入培养基中。
对于固体培养基，可以使用塑料平板，将样品均匀地涂抹在培养基表面上。
4.培养条件：将培养基置于培养箱中，在适当的温度和湿度下培养一定的时间。
细菌通常在合适的温度和湿度下生长得更快。
5.观察：将培养后的培养皿置于显微镜下观察细菌的形态和结构。
通过观察细菌的形态可以初步判断细菌的种类。
6.计数：使用显微镜、计数盘或其他适当的方法统计培养皿上的细菌数量。
这可以帮助测定水样中细菌的浓度。
7.标识：根据初步的形态观察和计数结果，可以将不同形状、颜色等特征的细菌标记出来。
实验原理解释：在实验中，将采样的水样分布在含有营养物质的培养基上，并提供适当的温度和湿度条件，以促进细菌的生长。
培养基中的营养物质为细菌提供生长所需的营养元素。
根据细菌的不同需求，可以选择不同的培养基。
经过一段时间后，细菌会在培养基上生长形成可见的菌落。
根据菌落数量的多少，可以初步判断水样中的细菌浓度。
在观察菌落后，可以通过显微镜观察细菌的形态和结构，并进一步确定细菌的种类。
值得注意的是，细菌只占水样中微生物的一小部分，仍然存在许多其他的微生物如真菌和病毒等。
因此，细菌检测只是微生物检测的其中一种方法。
为了全面评估水质，常常需要采用更多的方法和技术。
水 中 细 菌 总 数 的 检 测
水中细菌总数的检测之吉白夕凡创作一、二、实验的目的要求1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性.二、实验原理细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中, 于37℃经24h培养后, 所生长的细菌菌落的总数. 细菌总数是评价水质污染水平的主要卫生指标.我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数.所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染, 但不能说明污染的来源.因此必需结合总年夜肠菌群数来判断水污染的来源和平安水平.本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数.由于水中细菌种类繁多, 它们对营养和其他生长条件的要求分歧很年夜, 不成能找到一种培养基在一种条件下, 使水中所有的细菌均能生长繁殖, 因此, 以一定的培养基平板上生长出来的菌落, 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值.目前一般是采纳普通牛肉膏卵白胨琼脂培养基.平板菌落计数法的优点：能测出样品中的活菌数.此法经常使用于某些制品和生物制品检定以及食品、水源的污染水平的检定等.缺点：手续较繁, 而且测定值常受各种因素的影响.生活饮用水细菌卫生标准我国饮用水卫生标准：≤ 3个年夜肠菌群/1L饮水 , ≤ 100个细菌总数/1ml饮水三、实验仪器和资料1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间.2、消鸩酒精、消毒水.3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处置好备用）4、培养基卵白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂10~20g蒸馏水1000ml制备方法：依照实际的需要量, 按上述配方称取各成份混合后, 加热溶解, 调整pH为, , 分装于玻璃容器中, 用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min, 倒制成平板后贮存于冷处备用.5、水样：自来水、中水.四、实验内容：（一）、培养基的制备：实验前事先准备好培养基平板（方法见上）, 每小组2-4个平板.（二）、取水样：1、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭, 再用酒精灯火焰灭菌, 翻开龙头放水1-2分钟, 用无菌空三角瓶接取水样200毫升.2、纯洁水取样：用消鸩酒精棉擦拭纯水机出口后, 先放走部份水, 再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.3、池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样, 先将灭菌的带玻璃塞瓶, 瓶口向下浸入水中, 然后翻转过来,除去玻璃塞, 水即流入瓶中, 盛满后, 将瓶塞盖好, 再从水中取出, 最好立即检查, 否则需放入冰箱中保管.（三）、接种培养：（要求无菌把持）用无菌吸管吸取1毫升水样, 加入平板中（每个水样平行做两个平板）, 用无菌涂布器涂抹均匀, 在培养皿正面标注清楚后, 置于37℃恒温箱内经24h-48小时培养后, 统计细菌菌落的总数.（四）、菌落记数：菌落计数及陈说方法作平皿菌落计数时, 可用眼睛直接观察, 需要时用放年夜镜检查以防遗漏.在记下各平皿的菌落数后, 应求出同稀释度的平均菌落数, 供下一步计算时应用.在求同稀释度的平均数时, 若其中一个平皿有较年夜片状菌落发生时, 则不宜采纳, 而应以无片状菌落发生的平皿作为该稀释度的平均菌落数.若片状菌落不到平皿的一半, 而其余一半中菌落数分布又很均匀, 则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数.然后再求该稀释度的平均菌落数.五、实验注意事项六、实验陈说内容；1、记录实验方法和步伐.2、列表说明检测结果.（1）自来水（2）饮用水3、思考题：（1）从自来水的细菌总数结果来看, 是否合乎饮用水的标准？（2）你所测的水样污秽水平。
水质的细菌学检测
水质的细菌学检测一、实验目的学习水中细菌总数及大肠菌群数测定的原理，并掌握其操作方法。
二、实验原理1、细菌总数的测定：水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。
由于重金属及其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。
本实验采用标准平皿法对水样中细菌做计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度。
由此法所得的菌落数实际上要低于水样中实际活菌的数目。
一般规定，1ml饮用水中总菌数不得超过100个。
2、大肠菌群数测定：采用多管发酵法，以最近似数的方法来记载。
此一数字是根据概率公式来计算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减小偏差。
三、实验器材培养基：营养琼脂培养基材料：无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿、盛有90ml及9ml灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管、杜氏小管、革兰氏染液四、实验步骤（一）细菌总数的测定1、样品稀释液的制备采集水样，吸取10ml水样，注入盛有90ml无菌水或生理盐水与三角瓶中，混匀成10-1稀释液，按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3，每个稀释度分别注入两个培养皿中，每皿1ml。
2、平板接种培养采用混合平板培养法计数，每一稀释度设置2个重复，然后在6个培养皿中分别倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷凝后倒置，适温培养，至长出菌落即可计数。
3、结果报告与计算计算结果时，每个稀释度使用两个平板，取其平均值，达到规定培养时间，应立即计数，应将平板放置于0~4℃，但不得超过24h，不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比。
（二）大肠菌群检验1、乳糖发酵试验样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管，并留一管作为空白对照，36±1℃培养24±2h，观察是否产气。
2、报告根据观察到的产气管数，即大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml （g）大肠菌群的MPN值。
水和饮料的细菌学检验
四、操作步骤
（一）细菌总数的测定 1. 取水样：先将自来水龙头用火焰灼烧 取水样：先将自来水龙头用火焰灼烧3 min灭菌，再打开水龙头放水 min ，用无菌 灭菌， 灭菌 再打开水龙头放水5 三角瓶接取水样，将瓶塞盖好。 三角瓶接取水样，将瓶塞盖好。 池水、河水或湖水应取离岸边较远（ 池水、河水或湖水应取离岸边较远（5 m） ） 距水面10- 15 cm的深层水样。先将灭菌的带 的深层水样。 距水面 的深层水样 塞玻璃瓶，瓶口向下浸入水中， 塞玻璃瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过 除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后， 来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后， 将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检测， 将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检测， 否则需放入冰箱中保存。 否则需放入冰箱中保存。
滤膜法测定示意图
五、实验结果
（一）实验结果 1. 报告水样、饮料细菌总数测定结果。 报告水样、饮料细菌总数测定结果。 2. 根据有大肠菌群的阳性管数查表计算。 根据有大肠菌群的阳性管数查表计算。 （二）思考题 1. 国家对自来水的细菌总数有一标准，各 国家对自来水的细菌总数有一标准， 地能否自行设计其测定条件（如培养温度、 地能否自行设计其测定条件（如培养温度、时 间等）来测定水样中细菌总数？为什么？ 间等）来测定水样中细菌总数？为什么？ 2. 伊红美兰培养基含有那几种主要成分？ 伊红美兰培养基含有那几种主要成分？ 在检查大肠菌群时，各起什么作用？ 在检查大肠菌群时，各起什么作用？ 3. 所测水样、饮料是否合乎饮用标准？ 所测水样、饮料是否合乎饮用标准？ 实验目的
1. 学习水和饮料中细菌总数及大肠菌群 的测定原理、意义。 的测定原理、意义。 2. 掌握水和饮料中细菌总数及大肠菌群 的检测方法。 的检测方法。
二、实验原理
水的卫生细菌学检查汇总
一、伤寒沙门氏菌
• 病症：伤寒或副伤寒。
• 乙级传染病（不用隔 离） • 表现：持续发烧，牵 涉到淋巴组织，脾脏
肿大，躯干上出现红
斑，胃肠壁溃疡产生 腹泻。
伤寒沙门氏菌
（一）、生理生态
• 种类：伤寒沙门氏菌、副 伤寒沙门氏菌和乙型副伤 寒沙门氏菌。 • 大小： • 0．5~0．8×1~3．5um • 特征：周生鞭毛，革兰氏 阴性反应，无芽孢和荚膜 在地面普通水中可生存1～3周，井水中可生存约１周，在粪
大肠菌群为何作为水的卫生细菌学指标：
１.大肠菌群的生理习性与肠道病原 菌的生理习性较为相似，在外界生 存时间也基本一致； ２.大肠菌群在粪便中数量较多， 5000万个/克；3万个/毫升生活污水 ３.大肠菌群的检验技术简单。
二、大肠菌群的形态和生理特性
二、指示微生物的选择
选择原则：数量大、易于检出，方法简单。 指示微生物的种类： 反映微生物综合污染：细菌、霉菌和酵母菌落总数
反映微生物污染来源：
粪便污染指示菌（大肠菌群、粪大肠菌群）; 空气污染指示菌（溶血性链球菌等）
消毒效果指示菌：嗜热脂肪芽孢杆菌（压力蒸汽灭菌）；
短小芽孢杆菌（电离辐射灭菌）；枯草杆菌黑色变种芽孢 （环氧乙烷灭菌）
（二）、蠕虫
• 引起人体疾病的后生动物又叫蠕虫，通过饮水引起疾
病的蠕虫见下表
名称 寄生部位 肠道 吸虫类 血管 虫名 姜片虫 血吸虫 病症 消化不良 腹泻、高烧 水中传染方式
绦虫类
线虫类
肝脏的胆 肝吸虫 肝硬化 道 病人粪便中虫 猪 肉 绦 消化不良 卵 肠道 虫 牛 肉 绦 癫痫 脑 虫 营养不良、急性阑 肠道 蛔虫 尾炎、肠梗阻
• 间接病原菌测定 ： 测定水中是否有肠
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三、实验用品
培养基： 单倍乳糖蛋白胨液体培养基 3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基 伊红美蓝琼脂培养基（制成平板）
四、实验操作
多管发酵法测定水中的大肠菌群 1. 水样采集 自来水 将自来水龙头用火焰烧灼3 min灭菌，再拧开水龙头 流水5 min，以排除管道内积存的死水，随后用已灭 菌的三角瓶接取水样，以供检测。 池水、河水或湖水 将无菌的带玻塞的小口瓶浸入距水面10～15 cm深的 水层中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中装满 后，盖好瓶塞，取出后立即进行检测，或临时存于 冰箱，但不能超过24 h。
如有下列情况的出现，其结果判断需谨慎 （1）个别其他类型的细菌在上述条件下也可 能产气，需进行下述试验（即平板分离和 复发酵试验）才能进一步确证。
（2）培养24h后产酸，但未见产气者，不能 立即判断为阴性结果，由于菌量少，也可 能延迟至48h后才产气，应视为可疑结果， 也需进行下述试验（即平板分离和复发酵 试验）进一步确证，48h后仍不产气，可判 断为阴性结果。
1．初发酵试验
液体培养基含有乳糖、蛋白胨和溴甲酚紫。 乳糖起选择性碳源的作用，大肠菌群可发酵乳 糖产酸（有机酸），产气（CO2+H2）。 溴甲酚紫是 pH 指示剂（碱性条件：紫蓝色；酸 性条件：黄色，变色点pH=6.7）。
将水样接种在具倒置杜汉氏小管的发酵管内， 于37℃下培养，24h后杜汉氏小管的顶端出现气泡， 表明有气体产生，培养基混浊，颜色变黄，说明水 中存在大肠菌群，视为阳性结果。
大肠菌群的测定 若水源被粪便污染，则有可能也被肠 道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容 易死亡与变异，因此数量较少，要从中特 别是自来水中分离出病原菌常较困难与费 时，这样就要找到一个合适的指示菌，此 指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原 菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。
若指示菌在水中不存在或数量很少，则大 多数情况也保证没有病原菌。最广泛应用 的指示菌是大肠菌群(coliform group)。 大肠菌群的定义：一群好氧和兼性厌氧、 革兰氏阴性、无芽孢的杆状细菌，并在乳 糖培养基中，经37℃ 24～48 h培养能产酸产 气。
①深紫黑色、有金属光泽。 ②紫黑色、不带或略带金属光泽。 ③淡紫红色、中心颜色较深。
在伊红美蓝这种鉴别性培养基上，大肠菌 群呈现特征性菌落，因此，凡是出现这种 菌落可确认为是大肠菌群。
24h和48h产酸产气的初发酵菌落均需在上述 培养基中的一种，进行平板划线，分离出 阳性菌落。
3．复发酵试验 阳性菌落经涂片染色鉴别为G-，无芽孢者， 再经过乳糖蛋白胨液体培养基进行复发酵 试验，经24h培养产酸产气者，可确认为大 肠菌群阳性结果。
五、实验结果
池水、河水或湖水阳性结果记“+”；阴性 结果记“-”。 查表2-14得每升水样中大肠菌群数是多少？
六、思考题
你所测的池塘水、河水或湖水的污秽程度 如何?通过实验你对保护水源水有何看法？ 大肠菌群的定义是什么？ 假如水中有大量的致病菌 —— 霍乱弧菌， 用多管发酵技术检查大肠菌群，能否得到 阴性结果？为什么？ EMB 培养基含有哪几种主要成分？在检查 大肠菌群时，各起什么作用？ 经检查，水样是否合乎饮用标准？
检查大肠菌群的方法有多管发酵法与滤膜 法两种。
多管发酵法使用历史较久，又称水的标准 分析方法，为我国大多数卫生单位与水厂 所采用；
滤膜法是一种快速的替代方法，而且结果 重复性好，又能测定大体积的水样，目前 国内已有很多大城市的水厂采用此法。
多管发酵法测定水中大肠菌群的原理
多管发酵法包括：初发酵试验、平板分离 和复发酵试验三部分。
四、实验操作
2. 初（步）发酵试验
用细口瓶取池塘水、河水或湖水的水样 （1）将1 ml 原水样直接加入10 ml 单倍乳糖培养基试管1支。 （2）用蒸馏水稀释原水样成10-1 ，取1 ml 直接加入10 ml 单 倍乳糖培养基试管1支。 （3）将10 ml 原水样直接加入含5 ml 3倍乳糖培养基大试管 1支。 （4）将100 ml 原水样直接加入含50 ml 3倍乳糖培养基三角 瓶1个。
根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否 被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病 原菌污染的可能性。
我国规定每升自来水中大肠菌群不超过 3个； 若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水 源水，大肠菌群数平均每升不得超过 1,000 个；
经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用 水的水源水，其大肠菌群数平均每升不得 超过10,000 个
◇细菌总数测定
◇大肠菌群的测定
二、实验原理
பைடு நூலகம்
细菌总数测定
水中细菌总数可说明被有机物污染的程度。细 菌数越多，有机物质含量越大。肠道中的绝大多数 腐生性和致病性的细菌，可在营养丰富的牛肉膏蛋 白胨培养基上进行生长，出现肉眼可见的菌落。 细菌总数是指1 ml水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养 基中，经37℃、24小时培养后，所生长的菌落数。 我国规定 1 ml 自来水中的总菌数不得超过 100 个。
微生物学实验
水的细菌学检查
一、实验目的 1 ．掌握多管发酵法测水中大肠菌群的方法。 2．了解水样细菌总数的测定方法。 3．了解大肠菌群的数量与生活饮用水的
重要性。
生活用水的水源常被生活污水或工业废水或人与动 物的粪便所污染，可能含有不同类型的微生物，有 腐生性的和病原性的。 腐生性微生物对人无害，而病原性微生物则能引起 传染病的发生。 必须对生活用水及其水源进行严格的细菌学检查。 测定水样是否合乎饮用标准，通常包括下列两个项 目：
2．平板分离 平板分离用培养基通常为：伊红美蓝琼脂 （eosin methylene blue agar， EMB agar）， 复红亚硫酸钠琼脂（亦称远藤氏培养基 Endo’s medium）。
（1）伊红美蓝琼脂培养基中含有伊红与美蓝 这两种苯胺类染料，它们不但可以抑制G+ 菌和一些难培养的G-菌，而且在低酸度时， 两种染料结合形成沉淀，起着产酸指示剂 的作用。大肠菌群因其强烈发酵乳糖而产 生大量的混合酸，使菌体表面带上正电荷， 可染上伊红染料，伊红与美蓝结合，菌体 被着上深紫色，在含有两种染料呈紫色的 培养基上，形成带核心、具金属光泽的菌 落。