实验11水的细菌学检查

2．细菌总数测定
自来水 （1）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做两 个平皿。 （2）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白 胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养 基充分混匀。 （3）另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基 15ml，作空白对照。 （4）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进 行菌落计数。
经镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，
则挑取相同的菌落，重新接种于普通浓度的乳糖蛋 白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同
类型菌落1-3个,置37℃培养24h，有产酸产气者，即
证实有大肠菌群存在。
根据证实有大肠菌群存在的阳性管数查表12-1，报 告每升水样中的大肠菌群数。 污染水：用于培养的水量，应根据污染程度选择下 列不同量做培养。
轻度污染：100ml、10ml、1ml、0.1ml各一份。 中度污染：10ml、1ml、0.1ml、0.01ml各一份 重度污染：1ml、0.1ml、0.01ml、0.001ml各一份
（1）将水样稀释成10-1。 （2）分别吸取10-1的稀释水样1ml和原水样1ml，分 别加入装有10ml乳糖蛋白胨发酵管中。另取10ml
（3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则按稀释度最
高的平均菌落数乘以稀释倍数。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则按稀释度最 低的平均菌落数乘以稀释倍数。
大肠菌群的检查
一、实验目的
1、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
2、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、实验原理
大肠菌群（coliform group）指一群好氧和兼性
三、实验器材
1、实验仪器：培养箱
2、微生物材料：水样 3、培养基：乳糖蛋白胨液体培养基（内有倒置的杜 氏小管），3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基（内有 倒置的杜氏小管），伊红美蓝琼脂平板培养基。
四、实验步骤
1．水样的采取 同水中细菌总数测定实验。
自来水检查
（1）初发酵试验 在2个含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养 液的烧瓶中，各加入水样10ml；在10支含有3ml三倍浓缩 乳糖蛋白胨发酵管中，各加入水样10ml。混匀后置37℃培 养24h。
实验十一、水中细菌总数及大肠菌群的测定
来自百度文库
细菌总数测定
水中细菌总数可说明被有机物污染的程度。 细菌数越多，有机物质含量越大。 细菌总数是指1ml水样在普通琼脂培养基中， 37℃经24小时培养后，所生长的菌落数。 我国规定自来水1ml的总菌数不得超过100个。
一、实验目的
1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。 2．了解水源水的平板菌落计数的原则。
释或减小稀释倍数。一般中等污秽水样，取10-1、
10-2、10-3 3个连续稀释度，污秽严重的取10-2、 10-3、10-4 3个连续稀释度。
（2）自最后3个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入
空的灭菌培养皿中，每一稀释度做2个培养皿。 （3）各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的肉膏蛋 白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。 （4）凝固后倒置于37℃培养箱中培养24小时。
厌氧、革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，在乳糖
培养基中，经37℃24h培养能产酸产气。根据水中 大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染， 并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。我 国规定每升自来水中大肠菌群不超过3个；若只经
过加氯消毒即作生活饮用水的水源水，大肠菌群
数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加 氯消毒后供作生活饮用水的水源水，其大肠菌群 数平均每升不得超过10000个。
和100ml原水样，分别注入装有 5 ml和50ml三倍
浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。混匀后 置37℃培养24h。 以下步骤同生活饮用水的试验方法。
二、实验原理
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌 种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不 可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能 生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落， 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用 普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
三、实验器材
1、实验仪器：培养箱
2、微生物材料：水样 3、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂固体培养基
四、实验步骤
1．水样的采取 （1）自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌， 再开放水龙头使水流5分钟后，以灭菌三角烧瓶接 取水样，备用。 （2）池水、河水应取距水面10—15cm的深层水样， 先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后 翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后， 将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则 需放入冰箱中保存。
（2）平板分离 培养24h后，将产酸产气及只产酸的发酵管 （瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，置37℃培
养24h，挑取符合下列特征的菌落，进行涂片，革兰氏染
色镜检。
（3）伊红美蓝琼脂平板上的菌落
（a）深紫黑色、有金属光泽。
（b）紫黑色、不带或略带金属光泽。 （c）淡紫红色、中心颜色较深。
（4）复发酵试验
菌落计数方法
（1）选择平均菌落数在30-300之间的，当只有1个稀释度的
平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍 数即为该水样的细菌总数。
（2）若有2个稀释度的平均菌落数均在30-300之间，则按两
者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者 的平均数；若大于2，则取其中较小的菌落总数。
• 两个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌总数。
池水、河水
（1）稀释水样 以无菌操作方法吸取0.5ml充分混匀 的水样，注入盛有4.5ml无菌水的试管中混匀成
10-1的稀释液。按上法依次进行倍比稀释，稀释
度分别为10-1、10-2、10-3 、10-4。稀释倍数看水 样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30300个之间的稀释度最为合适，若3个稀释度的菌 数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀