单克隆抗体的制备及应用教学提纲
高中生物单克隆抗体教案
高中生物单克隆抗体教案一、教学目标：1. 了解单克隆抗体的定义和原理。
2. 掌握单克隆抗体的制备方法。
3. 了解单克隆抗体在医学领域的应用。
二、教学重点和难点：1. 单克隆抗体的定义和原理。
2. 单克隆抗体的制备方法。
三、教学内容：1. 什么是单克隆抗体？单克隆抗体是通过克隆技术从单一免疫细胞中获得的一种抗体，具有针对单一抗原的高度特异性。
2. 单克隆抗体的原理：单克隆抗体主要是通过以下几个步骤实现的：1）从免疫细胞中选择单一细胞。
2）通过融合技术获得单克隆抗体的DNA序列。
3）在合适的宿主中转染获得大量的单克隆抗体。
3. 单克隆抗体的制备方法：1）形成克隆之前的免疫工作：包括抗原注射、制备细胞悬液等准备工作。
2）细胞融合技术：将B细胞与癌细胞融合，形成杂交瘤细胞。
3）单克隆抗体的筛选和生产：通过ELISA等方法对杂交瘤细胞进行筛选，获得单克隆抗体。
四、教学方法：1. 理论讲解：通过PPT或实物示范，介绍单克隆抗体的定义、原理和制备方法。
2. 实验演示：可进行单克隆抗体的制备实验，让学生亲自操作并体验整个制备过程。
3. 讨论交流：鼓励学生针对单克隆抗体在医学领域的应用展开讨论，提高学生的思维能力和问题解决能力。
五、教学评价：1. 单选题：什么是单克隆抗体的定义？A. 通过克隆技术获得的一种抗体B. 通过激素技术获得的一种抗体C. 通过杂交技术获得的一种抗体D. 通过转基因技术获得的一种抗体2. 判断题：以下哪个步骤不是单克隆抗体制备的关键步骤？A. 形成克隆之前的免疫工作B. 细胞融合技术C. 单克隆抗体的筛选和生产D. 抗原注射六、教学延伸：1. 邀请专业人员进行讲解：邀请生物专家或医生到讲堂上分享单克隆抗体在医学领域的应用。
2. 实地考察：组织学生参观实验室或医疗机构，让学生近距离感受单克隆抗体的制备和应用过程。
以上为高中生物单克隆抗体教案范本，希朓对您有所帮助。
抗cd19单克隆抗体及其制备方法与应用
抗cd19单克隆抗体及其制备方法与应用抗CD19单克隆抗体及其制备方法与应用导言抗CD19单克隆抗体是一种生物医学领域中重要的药物，它被广泛应用于白血病、淋巴瘤等血液系统恶性肿瘤的治疗。
本文将以从简到繁、由浅入深的方式，探讨抗CD19单克隆抗体的制备方法和应用，并对其意义进行深入的阐述。
1. 抗CD19单克隆抗体的概念及意义1.1 CD19及其在肿瘤中的表达CD19是一种胞内成熟B细胞特异性膜表达抗原，广泛存在于人体的B淋巴细胞表面。
CD19的过表达与多种恶性肿瘤的形成和发展相关，因此成为药物研发领域的重点关注对象。
1.2 抗CD19单克隆抗体的定义和作用机制抗CD19单克隆抗体是针对CD19抗原的高亲和力和特异性单克隆抗体。
其作用机制主要包括直接抗肿瘤细胞杀伤、细胞依赖性细胞毒性和抗体依赖性细胞吞噬等。
由于其选择性作用于CD19阳性的恶性肿瘤细胞，抗CD19单克隆抗体被广泛应用于白血病、淋巴瘤等血液系统恶性肿瘤的治疗，并展现了显著的临床疗效。
2. 抗CD19单克隆抗体的制备方法2.1 免疫原的选择和制备制备抗CD19单克隆抗体的第一步是选择合适的免疫原。
在这里，我们选择具有高亲和力和特异性的CD19蛋白作为免疫原。
该蛋白可以通过表达系统的构建和纯化获得。
2.2 动物模型的制备在制备抗CD19单克隆抗体的过程中，需要将免疫原注射到合适的动物模型中，以激发其免疫系统产生特异性抗体。
常见的动物模型包括小鼠、大鼠和兔子等。
2.3 单克隆抗体的制备和筛选将免疫小鼠的脾细胞与癌细胞融合，形成杂交瘤细胞。
利用杂交瘤细胞进行单克隆抗体的产生和筛选。
对单克隆抗体的产生和筛选过程要求严格，以确保单克隆抗体的特异性和亲和力。
3. 抗CD19单克隆抗体的应用3.1 白血病和淋巴瘤的治疗抗CD19单克隆抗体在白血病和淋巴瘤的治疗中表现出非常显著的疗效。
它可以选择性地杀伤CD19阳性的恶性肿瘤细胞，同时保留正常细胞的功能，减少了传统放化疗给患者带来的副作用。
单克隆抗体的制备方法与应用
单克隆抗体的制备方法与应用一、前言单克隆抗体是指一种具有高度特异性和亲和力的抗体，其来源于单个B细胞克隆。
相比多克隆抗体，单克隆抗体更加纯净、稳定和可靠，因此在生物医学研究、诊断和治疗等方面有着广泛的应用。
本文将介绍单克隆抗体的制备方法与应用。
二、单克隆抗体的制备方法1. 免疫动物首先需要选取适当的动物进行免疫，通常选择小鼠或大鼠。
在进行免疫前需要对动物进行预处理，例如注射低剂量的抗生素来消除潜在的感染。
2. 免疫原选择选择合适的免疫原是制备单克隆抗体的关键步骤。
常见的选择包括蛋白质、多肽、细胞表面分子等。
在选择时需要考虑到其特异性、稳定性和可重复性等因素。
3. 免疫程序在进行免疫前需要对动物进行预处理，例如注射低剂量的抗生素来消除潜在的感染。
接着，将免疫原注射到动物体内，通常需要多次免疫以增强免疫效果。
在免疫过程中需要对动物进行监测，例如采集血样检测抗体水平。
4. 融合细胞的制备在获得足够的抗体后，需要从动物体内采集B细胞并与骨髓瘤细胞进行融合。
常用的骨髓瘤细胞包括SP2/0和NS0等。
5. 单克隆抗体筛选通过限稀法或单一细胞分离法等方法将融合细胞分离为单个克隆，并通过ELISA、免疫印迹等方法筛选出特异性较高的单克隆抗体。
接着对筛选出的单克隆抗体进行扩增和纯化等处理。
三、单克隆抗体的应用1. 生物医学研究单克隆抗体在生物医学研究中有着广泛的应用，例如作为特定蛋白质或分子的检测工具、用于药物开发和治疗等。
2. 诊断单克隆抗体在诊断方面也有着重要的应用，例如用于肿瘤标志物的检测、病原体的检测等。
3. 治疗单克隆抗体在治疗方面也有着广泛的应用，例如用于治疗癌症、自身免疫性疾病等。
其中一些单克隆抗体已经被批准为药物并用于临床治疗。
四、总结单克隆抗体是一种具有高度特异性和亲和力的抗体，在生物医学领域中有着广泛的应用。
其制备方法包括适当动物选择、合适免疫原选择、多次免疫程序、融合细胞制备和单克隆抗体筛选等步骤。
单抗的课程设计
单抗的课程设计一、课程目标知识目标：1. 让学生理解单克隆抗体的概念、结构及功能，掌握其制备的基本原理。
2. 使学生了解单克隆抗体在医学、生物学研究及临床应用中的重要性。
3. 帮助学生掌握单克隆抗体的应用领域，如疾病诊断、治疗及生物技术。
技能目标：1. 培养学生通过查阅资料、进行实验设计，提高科学研究和解决问题的能力。
2. 培养学生动手操作能力，能够独立完成单克隆抗体制备的实验操作。
3. 提高学生的团队合作能力和实验数据分析能力。
情感态度价值观目标：1. 培养学生对生物学科学的兴趣，激发其探索生命奥秘的欲望。
2. 培养学生严谨的科学态度，使其遵循实验操作规范，注重实验安全。
3. 增强学生的环保意识，使其在实验过程中关注生物伦理问题，遵循可持续发展原则。
课程性质：本课程为生物学科选修课程，针对具有一定生物学基础的高中生。
学生特点：学生具备一定的生物学知识，具有较强的学习能力和动手能力，对实验课程有较高的兴趣。
教学要求：结合学生特点，注重理论与实践相结合，通过启发式教学和实验操作，使学生能够全面掌握单克隆抗体的相关知识，提高其科学素养。
在教学过程中，关注学生的学习进度，及时调整教学策略，确保课程目标的实现。
将课程目标分解为具体的学习成果，以便后续教学设计和评估。
二、教学内容1. 单克隆抗体的概念与特性- 单克隆抗体的定义- 单克隆抗体与多克隆抗体的区别- 单克隆抗体的结构及功能特点2. 单克隆抗体的制备原理及方法- 制备原理：杂交瘤技术- 制备流程：细胞融合、筛选、克隆化培养、抗体检测- 常用制备方法：小鼠腹腔注射法、体外培养法3. 单克隆抗体的应用- 医学诊断：病原体检测、疾病诊断- 生物技术：重组蛋白制备、免疫组化- 临床治疗：靶向治疗、免疫调节4. 实验操作技能培训- 杂交瘤细胞的制备与筛选- 克隆化培养与抗体检测- 单克隆抗体制备实验操作注意事项5. 教学内容的安排与进度- 第1课时：单克隆抗体的概念与特性- 第2课时：单克隆抗体的制备原理及方法- 第3课时：单克隆抗体的应用- 第4课时：实验操作技能培训教材章节：《生物》选修3 第7章 免疫学原理及其应用教学内容依据课程目标，结合教材章节进行选择和组织，保证科学性和系统性。
7单克隆抗体制备教案.doc
单克隆抗体的制备一、教学目标知识目标: 1、单克隆抗体的概念2、单克隆抗体的制备过程，以及过程中涉及的具体筛选过程。
3、单克降抗体的应用，和普通抗体相比的优点。
能力目标: 1、学会从复杂的制备过程）11找出简单的流程图2、注意前后知识点的对比学习。
情感态度价值观：从牛•物导弹的应用了解单克隆抗体目前在抗癌方而的贡献，并努力掌握更多的相关知识。
二、教学的重点难点：单克隆抗体的制备过程，以及过程屮涉及的具体筛选过程。
三、教学课时：1课时四、教学过程：【一】锚式问题：从“生物导弹” 一个新颖而又陌生的画面入手。
引发学生的探究热情。
具体结合材料和图片來介绍生物导弹。
资料：“生物导弹”是免疫导向药物的形象称呼，它由单克隆抗体与药物或放射性同位素配合而成，因带有单克隆抗体而能自动导向，在生物体内与特定目标细胞或组织结合，并由其携带的药物产生治疗作用。
问题：生物导弹中的关键成分是什么？什么是单克隆抗体？【二】自主探究（4分钟，学生看课本完成）1、长期人们怎样获得抗体？这样的抗体有什么缺（给动物反复注射抗原，然后在动物的血清中提取抗体。
抗体产量低、纯度低、特异性差）2、B淋巴细胞在分泌抗体时有什么特点？B淋巴细胞实际指的是什么细胞？（一个或是-•种B淋巴细胞只能分泌--种抗体；效应B细胞或是浆细胞）分析：这两个问题比较简单，而且在课本中能直接找到答案，学生迅速阅读课本就能完成。
【三】继续探究（10分钟，学生看课本，查阅资料，讨论合作完成）1、写出单克隆抗体制备的过程简图（略，见课件）2、怎么获得免疫小鼠，FI的是什么？（给小鼠注射特定的抗原，使小鼠发生特定的体液免疫，产生相应的B淋巴细胞）3、为何选择B淋巴细胞和骨髓瘤细胞？（B淋巴细胞能产仝特定的抗体，单不能无限增殖；骨髓瘤细胞能无限增荊）4、过程中大致需耍几次筛选？怎么筛选？H的是什么？（主要是2次。
笫一次为了筛选出杂交瘤细胞；第二次筛选出能大量产生特定抗体的杂交瘤细胞。
单克隆抗体的制备原理及应用
单克隆抗体的制备原理及应用概述单克隆抗体是由单一克隆细胞分泌的抗体，具有单一的抗原结合特异性，在生物医学研究和临床诊疗中具有重要的应用价值。
本文将介绍单克隆抗体的制备原理及其在医学领域的主要应用。
制备原理单克隆抗体的制备包括如下几个步骤：1.抗原免疫：选择目标抗原，根据需要选择适当的动物作为免疫宿主，并注射抗原以激发免疫反应。
2.B细胞分离：从免疫宿主的脾脏或淋巴结中分离出B细胞，这些细胞具有产生抗体的能力。
3.融合：将B细胞与癌细胞（常用的是骨髓瘤细胞）进行融合，生成一种称为杂交瘤细胞的细胞系。
4.筛选：通过筛选，选择出产生特定抗原结合特异性的单个细胞。
常用的筛选方法包括ELISA和流式细胞术。
5.扩增和提取：将筛选出的单克隆细胞进行扩增，然后提取单克隆抗体。
应用领域单克隆抗体在医学领域具有广泛的应用，主要包括以下几个方面：1.肿瘤治疗：单克隆抗体可以用于肿瘤治疗，通过特异性结合肿瘤细胞表面的抗原，识别并杀灭肿瘤细胞。
例如，CD20单克隆抗体在非霍奇金淋巴瘤治疗中被广泛使用。
2.自身免疫性疾病治疗：单克隆抗体可以用于治疗自身免疫性疾病，如风湿性关节炎、狼疮等。
它们可以通过抑制免疫反应的关键分子，降低炎症反应和组织损伤。
3.诊断试剂：单克隆抗体可以用作诊断试剂，帮助检测疾病标志物或特定细胞表面受体。
例如，嗜酸性粒细胞抗体可以用来识别嗜酸性粒细胞，从而辅助诊断哮喘和过敏性疾病。
4.病原体检测：单克隆抗体可以用于检测病原体，如病毒、细菌等。
它们可以特异性地结合病原体表面的蛋白质，从而帮助诊断和监测感染性疾病。
5.药物研发：单克隆抗体可以用于药物研发，如生物制剂和抗体药物。
它们可以作为靶向药物的组成部分，具有高度的特异性和选择性。
通过上述应用领域的介绍，可以看出单克隆抗体在医学领域的广泛应用，为疾病的诊断和治疗提供了有效的手段。
总结单克隆抗体的制备原理简单明了，包括抗原免疫、B细胞分离、融合、筛选、扩增和提取等步骤。
单克隆抗体的制备及其应用
单克隆抗体的制备及其应用单克隆抗体是一种能够识别特定抗原并结合于它的单一克隆抗体分子。
相对于传统的混合抗体，单克隆抗体具有更加精准的特异性和较高的亲和力，因此在现代医学中应用广泛，尤其在疾病的诊断、治疗和预防方面发挥着重要的作用。
制备单克隆抗体的过程可以分为四个主要步骤：免疫原的制备、小鼠的免疫、脾细胞的融合和单克隆抗体的筛选和鉴定。
免疫原制备免疫原是指能够引起免疫反应并且激发机体产生抗体的物质。
制备免疫原主要有两种方法：一是纯化目标分子，二是化学合成人工抗原。
纯化目标分子是指从生物体内提取目标蛋白质，包括人类血清、细胞培养上清液或从组织中分离的蛋白质，通过高效液相层析或离子交换层析等技术达到纯度要求。
化学合成人工抗原需要建立三级结构，并且通过光谱分析等技术进行鉴定。
小鼠的免疫制作单克隆抗体时，一般使用小鼠进行免疫。
将免疫原注射到小鼠体内，通过免疫系统的识别和选择，产生能够与目标分子特异性结合的抗体，这些抗体被称为多克隆抗体。
免疫时间和免疫剂量都是需要精细控制的参数，以确保得到的多克隆抗体可以覆盖免疫原的所有表位。
脾细胞的融合脾细胞是一个重要的免疫细胞，当它遇到免疫原时，会产生抗体。
将免疫小鼠的脾脏取出，制成单细胞悬液，然后与能够维持无限增殖的癌细胞融合。
融合细胞将产生能够继承小鼠脾细胞产生的抗体特异性和癌细胞的无限增殖能力的“嵌合抗体细胞”。
单克隆抗体的筛选和鉴定通过将“嵌合抗体细胞”进行单细胞分离和分层培养，筛选出特异性结合目标分子的单抗，并经过多重鉴定，包括酶联免疫吸附实验、亲和力检测试验、特异性试验、同工酶分析、生物学鉴定和单克隆抗体的特性鉴定等多项检测，确保得到的单克隆抗体具有较高的特异性、亲和力和稳定性。
单克隆抗体的应用单克隆抗体可应用于医学、生物技术及科学研究等领域，例如基因工程药物、免疫诊断、癌症治疗、疫苗研发、食品安全检验、环境检测和生物学研究等方面。
在基因工程药物开发中，单克隆抗体能够定位特定的蛋白质，从而研制出精确治疗某种疾病的药物，例如格拉西米布是一种单克隆抗体，用于治疗类风湿性关节炎和肠炎。
单克隆抗体的制备与应用
单克隆抗体的制备与应用单克隆抗体是一种高度特异性的生物分子，能够识别并结合特定的抗原，对于现代生命科学研究和临床医学诊治具有重要意义。
一、单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备主要包括以下几个步骤：（1）选择合适的免疫原：免疫原应具有较好的生物学活性、易于纯化，并且可以诱导动物产生足够的免疫反应。
常用的免疫原包括蛋白质、多肽、糖类、DNA等。
（2）免疫动物：将免疫原注射到小鼠、大鼠、兔子等动物身上，诱导其产生免疫反应。
此过程需要严格控制免疫剂量及免疫间隔时间，以保证动物身体内产生充分的免疫反应。
（3）筛选克隆：从免疫动物获得脾细胞，与骨髓瘤细胞进行融合，生成杂交瘤细胞。
将杂交瘤细胞进行分离、克隆和筛选，最终获得单克隆细胞系。
（4）制备单克隆抗体：将单克隆细胞系进行扩增，并通过细胞培养和大规模发酵获得充足的单克隆抗体产物。
二、单克隆抗体的应用（1）免疫诊断：通过单克隆抗体对特定分子的识别和结合能力，可以用于免疫诊断。
例如，通过检测患者体液中特定抗原的单克隆抗体结合情况，可以诊断疾病，并对病情进行判断。
（2）药物研发：单克隆抗体在药物研发中具有广泛的应用前景。
例如，在抗肿瘤药物的开发中，单克隆抗体可以针对肿瘤细胞特异性抗原，实现有选择性地杀伤肿瘤细胞。
（3）免疫治疗：单克隆抗体可以作为一种抗体治疗手段，对病原体或某些癌细胞进行特异性杀伤。
例如，在肿瘤治疗中，单克隆抗体能够选择性地结合癌细胞表面的受体，阻断其信号传递，从而抑制肿瘤细胞的生长和扩散。
（4）生物学研究：单克隆抗体可以用于生物学研究中的诸多方面。
例如，通过单克隆抗体对特定蛋白的结构和功能进行研究，可以深入了解其生物学特性和作用机制。
三、单克隆抗体的前景与挑战单克隆抗体拥有广泛的应用前景，近年来，其在医学、生命科学研究领域得到了广泛的应用。
然而，单克隆抗体的研发仍面临着一些挑战。
（1）制备难度：单克隆抗体的制备要求高度的技术和设备支持，需要在动物免疫、细胞融合、细胞培养等环节中严格把控。
抗cd19单克隆抗体及其制备方法与应用
抗CD19单克隆抗体及其制备方法与应用1. 抗CD19单克隆抗体概述在免疫疗法领域，抗CD19单克隆抗体被广泛应用于治疗B细胞相关的疾病，尤其是B细胞恶性肿瘤和自身免疫疾病。
CD19是B细胞表面的一种标志性蛋白，它在B细胞的发育、激活和功能中扮演重要角色。
抗CD19单克隆抗体可以选择性地杀伤CD19阳性的B细胞，而对其他细胞几乎没有影响，从而成为治疗B细胞相关疾病的有效手段。
2. 抗CD19单克隆抗体的制备方法抗CD19单克隆抗体的制备主要通过以下步骤实现：1.免疫原：首先需要获得CD19的免疫原，常见的方法包括从CD19表达的细胞中提取膜蛋白或人工合成片段。
2.免疫动物：将免疫原注射到小鼠或大鼠等实验动物体内，触发其免疫系统产生抗CD19抗体。
3.融合细胞：从免疫动物中获取B细胞，并将其与瘤细胞或其它细胞融合，形成杂交瘤细胞，这些细胞能够不断产生具有特异性的抗CD19抗体。
4.提取与纯化：从培养基中提取并纯化目标抗体，经过一系列的纯化步骤，最终得到高纯度的抗CD19单克隆抗体。
3. 抗CD19单克隆抗体的临床应用抗CD19单克隆抗体作为治疗B细胞相关疾病的新战略，已在临床上取得了显著的成果。
以CAR-T细胞疗法为代表的治疗手段，就是通过将患者自身的T细胞进行基因改造，使其表达抗CD19单克隆抗体，从而实现对恶性B细胞的杀伤。
在自身免疫疾病的治疗中，抗CD19单克隆抗体也展现出了良好的疗效。
通过选择性地清除异常活化的B细胞，可以有效地控制自身免疫疾病的发作和进展。
4. 个人观点和理解抗CD19单克隆抗体作为一种新型的免疫治疗药物，不仅在临床上展现出了显著的疗效，而且为免疫疗法领域带来了新的活力和希望。
在未来，随着对其作用机制和临床应用的进一步深入研究，相信抗CD19单克隆抗体会在更多疾病的治疗中发挥重要作用，并为患者带来更好的治疗效果。
结语通过对抗CD19单克隆抗体的概述、制备方法和临床应用的全面探讨，我们对其在治疗B细胞相关疾病中的重要作用有了更深入的理解。
人教版高中生物选修三《单克隆抗体的制备及应用》教学课件
阳性细胞
二、单克隆抗体的应用
（1）作为诊断试剂——最广泛应用
准确、高效、简易、快速
（如利用同位素标记的 单克隆抗体，可定位诊 断肿瘤、心血管畸形等）
二、单克隆抗体的应用
（2）运载药物
ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成。
ADC的抗体和药物各具有什么作用？ 抗体主要发挥靶向运输作用；药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。
一个极富创造力的方案： B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
（能产生抗体）（能大量增殖）
融合细胞
（既能产生抗体，又能大量增殖）
米尔斯坦
科勒
一、单克隆抗体的制备
探究一
小组合作利用太空泥模拟细胞融合的过程（只考虑两个细胞融合）
随机融合后培养基中细胞的类 型有哪些？
一、单克隆抗体的制备
探究二
已知细胞分裂过程中，合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋 呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖，其本 身也不能在体外长期存活。 鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但 可以在体外无限增殖，如果它的D途径被阻断的话，它会因为不能合成 DNA而死亡。
二、单克隆抗体的应用
（3）直接用于治疗疾病
实例：利妥昔单抗(美罗华)是一种针对 CD20抗原的人鼠嵌合型单克隆抗体，是第 一个被FDA批准用于临床治疗的单抗。进 入人体后能通过介导抗体依赖的细胞毒性 作用、补体依赖的细胞毒性作用和抗体与 CD20分子结合引起的直接效应，抑制细胞 生长，改变细胞周期以及凋亡等方式杀死 淋巴瘤细胞。
一、单克隆抗体的制备
1.传统抗体制备方法及缺陷 （1）方法： 向动物体内反复注射某种抗原
从动物血清中分离所需抗体 （2）缺点： 产量低、纯度低、特异性差
单克隆抗体的制备及其应用
4、 第二次免疫 用弗式不完全佐剂和红细胞按照 1:1 的比例进行混合，混合后同样进行磨合。磨合方法及程 度和第一次相同。 取 2mL 佐剂抗原，对兔子进行皮内注射和肌肉注射，肌肉注射 1mL，皮下注射 1mL。在肌 肉注射时不需要多点注射。而在皮下注射时要多点注射。 注射完成后把兔子养 1 周左右。 5、 第三次免疫 用抗原液 2mL 对兔子进行多点皮下注射和肌肉注射。肌肉注射 1mL，皮下注射 1mL。要求 和前几次免疫相同。 注射完成后把兔子养 1 周左右。 6、 第四次免疫 用抗原液 2mL 对兔子进行多点皮下注射和肌肉注射。肌肉注射 1mL，皮下注射 1mL。要求 和第三次注射相同。 注射完成后把兔子养 1 周左右。 7、 采血 此时的兔子体内已经产生了大量针对 A 型血液的抗体。兔子的采血采用心脏采血的方法。 用手固定兔子的后腿和前肢，使兔子侧卧，露出左侧部分。用手找到兔子的心跳最厉害的部 位，再用针头快速扎入即可，如果扎对了位置，是很容易抽出血液的。但不要在动脉或者静 脉采血，这些部位的采血难以保证无菌。 8、 梯度离心 其实兔子血内含有抗 A 型血的抗体和大量产生抗体的浆细胞，通过梯度离心分离出少量的 抗 A 型血的抗体和一些浆细胞。而所产生的抗体由于量过少不具有使用价值。可以通过梯 度离心将兔血清分离出来，用它与 A 型血红细胞相反应，来鉴定抗体的质量。 9、 细胞培养 将从兔子体内分离的浆细胞进行体外培养。在 37°C 条件下、95%的空气加 5%的二氧化碳 的条件下，使用血清培养基，放在三角瓶中培养让细胞贴壁生长。这个过程中一定要注意无 菌，否则就要重新做。 10、 细胞融合
抗 A 型红细胞单克隆抗体的制备及应用 一、什么是单克隆抗体 单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）是指由一个 B 细胞克隆分化增值的子代细胞（浆 细胞）产生的针对单一抗原的抗体。单克隆抗体只针对一种抗原决定簇，也就是只针对一种 抗原具有特异性结合的特性。具有高效性，往往能够迅速结合并清除侵入体内的抗原。 制备单克隆抗体的基本原理： 我们可以把分离到的 A 型血液纯化，获得大量红细胞，这些红细胞在 A 血型的人体内是不 会产生特异性免疫的， 所以这里不能把纯化的红细胞注入体内进行制备单克隆抗体。 这样我 们可以把这些打入异源动物如兔子的体内， 这样兔子就能产生针对这一红细胞的特异性抗体， 然后经过分离、酶切等就可以获得抗 A 型的单克隆抗体了。要想获得大量的单克隆抗体， 可以将兔体内的浆细胞提取出来与肿瘤细胞杂交， 这样， 杂交的细胞就获得了无限增值的特 性，并且能够分泌特定的单克隆抗体。 二、如何制备具有抗 A 型红细胞的单克隆抗体？ 1、 获得大量 A 型红细胞 从 A 血型的人体内抽取一定量的血液，加入抗凝血剂，在进行梯度离心，分离出纯净的红 细胞。低温保存。离心速度不宜过快或者过久，否则红细胞易破裂发生溶血现象。 2、 免疫前的准备 佐剂是非特异性免疫增强剂， 与抗原一起注射或预先注射入机体内时， 可增强机体对抗原的 免疫应答。目前使用的佐剂有很多种，这里选用弗氏佐剂。弗氏佐剂分为弗氏完全佐剂和弗 式不完全佐剂。 弗式完全佐剂的制备： 在油相中加入死分枝杆菌 （终浓度为 0.25mg/mL） 。 弗式不完全佐剂： 液体石蜡与羊毛脂混合而成，通常为 4:1，配置好后要高压灭菌。 3、 第一次免疫 用弗氏完全佐剂和红细胞按照 1:1 的比例进行混合，混合后进行磨合。磨合可以使用玻璃针 管反复推拉，至佐剂抗原滴入水中既不会产生大面积油花，也不会分层。 取 1mL 佐剂抗原， 对兔子进行多点皮下与皮内注射。 再注射的时候要小心， 不要感染兔子。 在皮下注射应提起兔子的表皮，将针扎入表皮下的空隙内。而皮内注射不需要提起表皮，并 且注射完后会鼓起一个小包。 注射完成后把兔子养 2 周左右。
单克隆抗体的制备和应用
抗体种类
第一代抗体 多克隆抗体〔polyclonal antibody)
其次代抗体 单克隆抗体〔monoclonal antibody)
第三代抗体 基因工程抗体〔genetic engineering antibody)
淋巴细胞
用于肿瘤的导向治疗
肿瘤的影像分布
基因治疗
细胞内抗体： 在细胞内表达 特异性识别某一基因产物 可干扰该基因产物的生物活性 争论基因构造与功能的关系
抗体融合蛋白
➢肿瘤的体内显像诊断 ➢ 单链抗体排解速度快，穿透力强，在肿瘤组织中的分布指 数较完整抗体分子高 ➢ 放射显像时，放射性核素排解较快，对身体危害程度小， 显像的本底较低 ➢ 抱负的显像定位诊断载体
流程
培养液
➢RPM1640培育液 ➢DMEM培育液
细胞融合剂
➢PEG:分子量4000 的PEG是最常用的细胞融合剂 ➢ 作用机理：诱导细胞膜上脂类物质构造重排，使 细胞膜易翻开而有助于细胞融合 ➢ 作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、分子 量的PEG，其纯度与毒性有所不同
HGPRT酶与TK酶
杂交瘤细胞
➢ 长期生长生殖。 ➢ 利用淋巴细胞的HGPRT，将H合成为嘌呤碱并最 终与T一起合成DNA， ➢ 从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信息 ➢ 从骨髓瘤细胞获得不断生殖的力量
克隆化
➢有限稀释法 ➢显微操作法 ➢FACS法 ➢半固体琼脂糖法
有限稀释法
特点： 不需任何特殊设备
克隆消失效率高
➢肝炎病毒:HAV,HBV,HCV,HDV,HEV ➢TORCH：弓形虫,风疹病毒,巨细胞病毒 ， 单纯疱疹病毒
细胞外表CD测定
➢CD4/CD8:Th/Tc ➢白血病的分型
单克隆抗体制备教学设计
单克隆抗体制备教学设计动物细胞融合与单克隆抗体制备长清一中刘菲菲【教学目标】1、动物细胞融合的过程2、单克隆抗体制备的过程【教学重点和难点】1、教学重点（1）动物细胞融合（2）单克隆抗体的制备过程2、教学难点单克隆抗体的制备过程【课时】1课时一、动物细胞的融合【导入新课】设计思路及意图：已有知识是学生学习新课的前提。
学生的学习一定是建立在已有经验的基础上建构性学习。
学生基于植物体细胞杂交迁移的基础上猜想动物细胞融合的实现，并猜想融合后的效果。
即融合细胞具有产生抗体和无限增殖的双重特点。
由于前面有细胞融合的学习基础，可以弱化处理。
可以简单的通过图片和动画组织动物细胞融合的学习。
通过动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较实现有关的学习。
组织学生进行细胞融合对象、作用和意义的自我习得。
复习导入：复习克隆的概念并举出在分子、细胞、个体水平克隆的实例，同时找学生板图或默写植物体细胞杂交的过程，并标注涉及的原理、技术手段。
动物细胞能否进行融合呢？和植物体细胞杂交技术相比有什么相同点和不同点呢？动物细胞融合过程是怎样的呢？有什么样的用途呢？请同学们自主学习【自主学习】（阅读课本30页完成相关内容）（1）概念：指一个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称为细胞杂交。
（2）原理: _细胞膜的流动性_不足。
在认知冲突后猜想问题解决。
学生基于植物体细胞杂交迁移的基础上猜想动物细胞融合的实现，并猜想融合后的效果。
即融合细胞有产生抗体和无限增殖的双重特点。
因此在设计这堂课时，安排学生课前预习，阅读本节课的相关内容，以问题的形式找出本节的核心知识点，训练学生的自主探究能力及分析解决问题的能力。
在课堂教学过程中，首先安排5分钟时间，让学生交流在预习课文的过程中已经掌握的知识以及自己还不能解决的问题。
这些核心问题可以是小组已经解决的问题，也可以是还未能找到答案的问题。
通过小组内的各成员之间交流预习的成果，实现生—生互动，把一些简单的问题，通过小组内的讨论加以解决。
单克隆抗体的应用和原理
单克隆抗体的应用和原理单克隆抗体是一种由单一克隆细胞所产生的具有同一免疫原特异性的抗体。
相比于多克隆抗体，单克隆抗体具有更高的特异性和亲和力，因此在医学、生物学、生物技术等领域得到了广泛的应用。
本文将介绍单克隆抗体的应用和原理。
一、单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备主要包括以下几个步骤：1. 免疫原制备：免疫原是指能够引起机体免疫反应的物质，如蛋白质、多肽、糖类等。
免疫原的制备需要根据具体的实验目的进行选择，通常采用纯化、重组、化学合成等方法制备。
2. 免疫动物的免疫：将免疫原注射到小鼠等动物体内，激发机体产生抗体。
为了增强免疫效果，通常需要多次免疫。
3. 脾细胞的制备：在免疫动物免疫一定次数后，取出其脾脏，制备脾细胞悬液。
4. 杂交瘤的制备：将脾细胞与肿瘤细胞进行杂交，形成杂交瘤。
由于肿瘤细胞具有无限增殖能力，因此杂交瘤可以持续产生单克隆抗体。
5. 单克隆抗体的筛选和纯化：通过ELISA、免疫印迹、流式细胞术等方法筛选出具有特异性的单克隆抗体，并进行纯化。
二、单克隆抗体的应用1. 诊断单克隆抗体可以用于诊断疾病。
例如，针对肿瘤标志物的单克隆抗体可以用于肿瘤的早期检测和诊断。
另外，单克隆抗体还可以用于检测病毒、细菌等微生物，以及药物、毒素等物质。
2. 治疗单克隆抗体还可以用于治疗疾病。
例如，针对肿瘤细胞表面的特异性抗体可以选择性地杀死肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的效果。
另外，单克隆抗体还可以用于治疗自身免疫性疾病、炎症等疾病。
3. 生物技术单克隆抗体在生物技术领域也有广泛的应用。
例如，可以用于免疫印迹、ELISA、流式细胞术等实验中，用于检测特定蛋白质的表达和定量。
另外，单克隆抗体还可以用于纯化蛋白质、分离细胞等。
三、单克隆抗体的原理单克隆抗体的原理是基于机体的免疫反应。
当机体遇到免疫原时，会产生多种不同的抗体，这些抗体具有不同的特异性和亲和力。
其中，具有特异性和亲和力最高的抗体被称为单克隆抗体。
单克隆抗体的制备需要经过多个步骤，其中最核心的是杂交瘤的制备。
单克隆抗体的制备-教学设计
单克隆抗体的制备-教学设计
一、教材分析
教材在植物体细胞杂交技术、动物细胞培养的基础上，迁移至动物细胞融合与单克隆抗体的知识。
内容上环环相扣，层次递进。
教材上先用灭活的病毒诱导动物细胞融合的过程，动物细胞融合意义和应用，再过渡到单克隆抗体的制备。
内容上渗透生命观念、科学思维及社会责任学科核心素养。
在学习过程中，培养学生大胆地想象，创造性地解决问题。
二、学情分析
学生已经学习了植物体细胞杂交技术、动物细胞培养及抗体等相关知识，即可结合教材，知识迁移至本节内容。
在教学的过程中，教师只需要引导学生进行知识迁移和知识归纳，在单克隆抗体制备的过程中借助于物理模型和点拨难点，利于学生突破本节内容的难点。
三、教学目标
1、阐明动物细胞融合的手段与过程。
2、培养学生大胆地想象，创造性地解决问题，并学会构建流程图，渗透生命观念、科学思维及
社会责任学科核心素养。
四、教学重难点
1、教学重点
（1）动物细胞融合技术的方法及过程。
（2）单克隆抗体制备的过程。
2、教学难点
单克隆抗体的制备过程。
五、教学设计思路：设置问题，结合书本的过程图，总结归纳。
六、教学过程
七、板书设计：
单克隆抗体技术：动物细胞培养、动物细胞融合
原理：细胞的增殖、细胞膜的流动性
过程：。
生物制药技术中的单克隆抗体制备与应用
生物制药技术中的单克隆抗体制备与应用单克隆抗体制备与应用在生物制药技术中发挥着重要的作用。
单克隆抗体是一类能够特异性地识别抗原并与之结合的抗体，具有高度的单一性和亲和力。
其制备和应用广泛涉及到生物学、免疫学、生物化学等多个学科领域。
本文将从制备和应用两个方面介绍单克隆抗体在生物制药技术中的重要性和应用前景。
在生物制药技术中，单克隆抗体的制备是一个复杂而关键的步骤。
制备单克隆抗体的第一步是选择合适的抗原。
抗原是指与特定抗体结合的分子或细胞。
常见的抗原包括蛋白质、多肽、细胞膜表面分子等。
选择抗原需要考虑其在疾病诊断或治疗中的重要性，并确保抗原具有较高的纯度和活性。
制备单克隆抗体的第二步是免疫动物。
常用的免疫动物包括小鼠、鸡和兔子等。
免疫动物在接种抗原后，会产生特异性的抗体。
接种后的抗体可以从免疫动物中分离出来，并与细胞融合以形成杂交瘤细胞。
这些杂交瘤细胞具有免疫动物的抗体产生能力和无限增殖的能力。
制备单克隆抗体的第三步是筛选和鉴定杂交瘤细胞。
筛选和鉴定杂交瘤细胞的目的是确保杂交瘤细胞产生的抗体是特异性的，并且具有较高的亲和力。
常见的筛选方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组化方法。
通过这些方法，可以筛选出特异性和高亲和力的杂交瘤细胞。
制备单克隆抗体的最后一步是制备和纯化单克隆抗体。
制备和纯化单克隆抗体的目的是获得大量的单克隆抗体，并去除杂质。
常见的制备和纯化方法包括离心、超滤和亲和层析法。
这些方法可以帮助提高单克隆抗体的纯度和活性，从而提高其在生物制药技术中的应用效果。
单克隆抗体在生物制药技术中有广泛的应用前景。
首先，单克隆抗体可用于疾病的诊断。
由于单克隆抗体具有高度的特异性和亲和力，它们可以用于检测特定疾病标志物的存在和水平，从而实现疾病的早期诊断和定量检测。
其次，单克隆抗体可用于疾病的治疗。
通过结合疾病相关的靶点，单克隆抗体可以抑制疾病进展、促进免疫反应或直接杀死病原体。
例如，单克隆抗体治疗癌症的药物已经被广泛应用于临床实践中，显示出显著的疗效。
高中生物《单克隆抗体的制备》
高中生物《单克隆抗体的制备》单克隆抗体是一种专一性极强的抗体，是由一种单一的淋巴细胞或细胞群体产生的，仅能特异性的识别和结合一种抗原。
在医学、生物科学、免疫学等领域中得到了广泛的应用。
本文将介绍单克隆抗体的制备方法。
单克隆抗体制备方法：一、免疫原制备制备单克隆抗体的关键是选取质量优良的免疫原，一般来说，免疫原应是纯化、特异性强和含有多个抗原表位的物质。
二、小鼠免疫将经充分清洗的免疫原，加入无菌纯水中混合悬浮后，与适量的氢氧化铝混合，制成疫苗。
将经过筛选的小鼠作为进行免疫的实验动物，并用疫苗进行免疫，使小鼠产生多克隆抗体。
免疫期一般在5-8周之间，不宜过短或过长，以免影响产生的抗体的质量。
三、脾细胞制备在小鼠免疫期结束后，将小鼠的脾脏取出，用PBS缓冲液冲洗，得到脾细胞。
脾细胞是制备单克隆抗体时的重要材料，需要在取出脾脏后尽快处理，以保证细胞数量和活性的充足。
四、瘤细胞融合将脾细胞与瘤细胞进行混合，经过某些药物的刺激，使两种细胞融合成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞的特点是生长速度快，细胞寿命长，抗体分泌能力强，是单克隆抗体的制备过程中不可或缺的一环。
五、分选单克隆细胞将杂交瘤细胞进行分离和筛选，筛选出能够产生特异性单克隆抗体的细胞。
六、培养细胞产生抗体将分选出来的单克隆细胞培养在含有特定物质的培养基中，经过数次分离和筛选，获取产生大量单克隆抗体的细胞系。
七、提取单克隆抗体将细胞培养物通过旋转离心等方法，将单克隆抗体从培养液中提取出来，并进行进一步的纯化和检测。
对提取出来的单克隆抗体进行检测，包括其特异性、纯度、抗原特异性等指标的检测，确保单克隆抗体的质量。
总结：单克隆抗体制备的流程繁琐，但制备出的单克隆抗体优异的特异性和高度的纯度，尤其在生物医学和免疫学领域中得到广泛的应用。
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单克隆抗体的制备及应用单克隆抗体的制备及应用单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇。
单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique)：一种免疫学技术，将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体。
是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。
1 单克隆抗体的优点与局限性：1.1 单克隆抗体的优点：(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。
(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。
(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。
(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。
总体来说，即：高特异性、高纯度、重复性好、敏感性强、成本低和可大量生产等。
1.2 单克隆抗体的局限性：(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。
由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。
(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。
(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。
2 单克隆抗体的制备：单克隆抗体的制备原理：应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。
这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。
单克隆抗体的制备过程：抗原准备、动物的选择与免疫、细胞融合、选择杂交瘤细胞及抗体检测、杂交瘤的克隆化、杂交瘤细胞的冻存与复苏、单克隆抗体的纯化等步骤。
2.1 抗原准备抗原，是指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。
抗原的基本特性有两种，一是诱导免疫应答的能力，也就是免疫原性，二是与免疫应答的产物发生反应，也就是抗原性。
很多物质都可以成为抗原，抗原的具体分类可以参见抗原，在进行单克隆抗体制备过程中，很多物质都可以成为抗原，在常规的科研实验中，科研者经常选用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug 重组蛋白、偶联多肽、偶联小分子等作为抗原产生特异性的单克隆抗体。
2.2动物的选择与免疫2.2.1 动物的选择纯BALB/c小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活目开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/c小鼠。
2.2.2免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb 至关重要。
一般在融合前两月左右根据确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
（1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。
常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。
初次免疫抗原1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般0.8～1ml，0.2ml/点），3周后第二次免疫，剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip（腹腔内注射）（ip剂量不宜超过0.5ml），3周后第三次免疫，剂量同一，不加佐剂，ip（5～7天后采血测其效价），2～3周加强免疫，剂量50～500μg宜，ip或iv（静脉内注射)，3天后取脾融合。
（2）颗粒抗原免疫性强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。
以细胞性抗原为例，免疫时要求抗原量为1～2×107个细胞。
初次免疫 1×107/0.5ml ip，2～3周后，第二次免疫1×107/0.5ml ip，3周后加强免疫（融合前三天）1×107/0.5ml ip或iv，取脾融合。
2.3 细胞融合2.3.1细胞融合前准备（1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生量McAb。
骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液，如DMEM培养基。
小牛血清的浓度一般在10%～20%，细胞浓度以104～5×105/ml为宜，最大浓度不得超过106/ml。
当细胞处于对1：3～1：10的比例传代。
每3～5天传代一次。
细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，应定期用8-氮鸟嘌呤进行处理，使生存的细胞对HAT呈均一的敏感性。
（2）饲养细胞：在组织培养中，单个或少数分散的细胞不易生长繁殖，若加入其它活细胞，则可促进这些细胞生长繁殖，所加入的这种细胞数被称为饲养细胞。
在制备McAb 的过程中，许多环节需要加饲养细胞，如在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中，加入饲养细胞是十分必要的。
常用的饲养细胞有：小鼠腹腔巨噬细胞（较为常用）、小鼠脾脏细胞或胸腺细胞。
饲养细胞的量为一般为2×104或105细胞/孔。
2.3.2 细胞融合的步骤①将骨髓瘤细胞与脾细胞按1：10或1：5的比例混合在一起，在50ml离心管中用无血清不完全培养液洗1次，离心，1200rpm，8min；弃上清，用吸管吸净残留液体，以免影响聚乙二醇（PEG）浓度。
轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略松动。
②90s内加入37℃预温的1ml 45%PEG（分子量4000）溶液，边加边轻微摇动。
37℃水浴作用90s。
③加37。
C预温的不完全培养液以终止PEG作用，每隔2min分别加入1ml、2ml、3ml、4ml、5ml和6ml。
④离心，800rpm, 6min。
⑤充上清，用含20%小牛血清HAT选择培养液重悬。
⑥将上述细胞，加到已有饲养细胞层的96孔板内，每孔加100μl。
一般一个免疫脾脏可接种4块96孔板。
⑦将培养板置37℃、5%CO2培养箱中培养。
2.4 选择杂交瘤细胞及抗体检测2.4.1 HAT选择杂交瘤细胞脾细胞和骨髓瘤细胞经PEG处理后，形成多种细胞的混合体，只有脾细胞与骨髓细胞形成的杂交瘤细胞才有意义。
在HAT选择培养液中培养时，由于骨髓瘤细胞缺乏胸苷激酶或次黄嘌呤鸟嘌呤核糖转移酶，故不能生长繁殖，而杂交瘤细胞具有上述两种酶，在HAT选择培养液可以生长繁殖。
在用HAT选择培养1～2天内，将有大量瘤细胞死亡，3～4天后瘤细胞消失，杂交细胞形成小集落，HAT选择培养液维持7～10天后应换用HT培养液，再维持2周，改用一般培养液。
在上述选择培养期间，杂交瘤细胞布满孔底1/10面积时，即可开始检测特异性抗体，筛选出所需要的杂交瘤细胞系。
在选择培养期间，一般每2～3天换一半培养液。
2.4.2 抗体的检测检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同，选择不同的筛选方法，一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。
常用的方法有：（1）放射免疫测定（RIA）可用于可溶性抗原、细胞McAb的检测。
（2）酶联免疫吸附试验（ELISA）可用于可溶性抗原、细胞和病毒等McAb的检测。
（3）免疫荧光试验适合于细胞表面抗原的McAb的检测。
（4）其它如间接血凝试验、细胞毒性试验、旋转粘附双层吸附试验等。
2.5杂交瘤克隆化杂交瘤克隆化一般是指将抗体阳性孔进行克隆化。
因为经过HAT筛选后的杂交瘤克隆不能保证一个孔内只有一个克隆。
在实际工作中，可能会有数个甚至更多的克隆，可能包括抗体分泌细胞、抗体非分泌细胞、所需要的抗体（特异性抗体）分泌细胞和其它无关抗体的分泌细胞。
要想将这些细胞彼此分开就需要克隆化。
克隆化的原则是，对于检测抗体阳性的杂交克隆尽早进行克隆化，否则抗体分泌的细胞会被抗体非分泌的细胞所抑制，因为抗体非分泌细胞的生长速度比抗体分泌的细胞生长速度快，二者竞争的结果会使抗体分泌的细胞丢失。
即使克隆化过的杂交瘤细胞也需要定期的再克隆，以防止杂交瘤细胞的突变或染色体丢失，从而丧失产生抗体的能力。
克隆化的方法很多，最常用的是有限稀释法和软琼脂平板法。
2.6 杂交瘤细胞的冻存与复苏2.6.1 杂交瘤细胞的冻存及时冻存原始孔的杂交瘤细胞每次克隆化得到的亚克隆细胞是十分重要的。
因为在没有建立一个稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能发生细胞的污染、分泌抗体能力的丧失等等。
如果没有原始细胞的冻存，则可因上述意外而前功尽弃。
细胞冻存液：50%小牛血清；40%不完全培养液；10%DMSO（二甲基亚砜）。
冻存液最好预冷，操作动作轻柔、迅速。
冻存时从室温可立即降至0℃后放入-70℃超低温冰箱，次日转入液氮中。
也可用细胞冻存装置进行冻存。
冻存细胞要定期复苏，检查细胞的活性和分泌抗体的稳定性，在液氮中细胞可保存数年或更长时间。
2.6.2 细胞复苏方法将玻璃安瓿自液氮中小心取出，放37℃水浴中，在1min内使冻存的细胞解冻，将细胞用完全培养液洗涤两次，然后移入头天已制备好的饲养层细胞的培养瓶内，置37℃、5%CO2孵箱中培养，当细胞形成集落时，检测抗体活性。
2.7 单克隆抗体的大量制备大量生产单克隆抗体的方法主要有两种：一种是杂交瘤细胞体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。
该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。
如果大量生产，费用较高。
另一种方法是最普遍采用小鼠腹腔接种法。
选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。
通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。
该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。
此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。
2.8 单克隆抗体的鉴定对制备的McAb进行系统的鉴定是十分必要的，应做下述几个方面的鉴定：2.8.1 抗体特异性的鉴定除用免疫原（抗原）进行抗体的检测外，还应该用与其抗原成分相关的其它抗原进行交叉试验，方法可用ELISA、IFA法。
例如：①制备抗黑色素瘤细胞的McAb，除用黑色素瘤细胞反应外，还应该用其它脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应，以便挑选肿瘤特异性或肿瘤相关抗原的单克隆抗体。
②制备抗重组的细胞因子的单克隆抗体，应首先考虑是否与表达菌株的蛋白有交叉反应，其次是与其它细胞因子间有无交叉。
2.8.2 McAb的Ig类与亚类的鉴定一般在用酶标或荧光素标记的第二抗体进行筛选时已经基本上确定了抗体的Ig类型。
如果用的是酶标或荧光素标记的兔抗鼠IgG或IgM，则检测出来的抗体一般是IgG类或IgM类。
至于亚类则需要用标准抗亚类血清系统作双扩或夹心ELISA来确定。
在作双扩试验时，如加入适量的PEG（3%），更有利于沉淀线的形成。